NK细胞对非小细胞肺癌细胞NCI-H292的杀伤作用及对其β-catenin蛋白表达的影响

目的探讨自然杀伤(NK)细胞对肺癌细胞系NCI-H292的杀伤作用及对癌细胞中β-catenin蛋白表达的影响。方法无菌采集健康人外周血,培养NK细胞(NK组),取培养14 d后的NK细胞,调整细胞浓度为5×106/m L,按1∶5的比例接种到NCI-H292细胞(NK+NCI-H292组)培养板共培养24 h,单独培养NCI-H292细胞(NCIH292组)24 h。采用CCK-8法测算NK细胞对肺癌细胞系NCI-H292的杀伤活性,采用Western blotting法检测NCIH292细胞中β-catenin蛋白的表达。结果 NK细胞对NCI-H292细胞的杀伤率为96.720%±1.081%,与NK及NCI-H292组比较,NK+NCI-H292组β-catenin表达降低(P均<0.01)。结论 NK细胞对NCI-H292细胞具有杀伤力,同时能够抑制NCI-H292细胞中β-catenin蛋白的表达。

绿脓菌素通过PKC-NF-κB信号传导通路诱导人NCI-H292细胞表达IL-8

目的探讨绿脓菌素（PCN）对人气道上皮细胞株（NCI-H292细胞）表达IL-8的诱导作用及通过蛋白激酶C（PKC）和核因子κB（NF-κB）的调控机制。方法采用ELISA法对PCN诱导NCI-H292细胞分泌IL_8进行分析，应用Western blot检测NF-κB的蛋白表达，观察PKC和NF-κB阻断剂对IL-8表达的影响。结果PCN可促进NCI-H292细胞IL-8的分泌，而且具有明显的量效关系。PKC阻断剂钙感光蛋白（Cal C）及NF-κB阻断剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）均能抑制IL-8的表达（P〈0．01）。PCN能直接诱导并迅速活化NF-κB，60～90min表达明显。结论PCN可能通过PKC信号通路促进NF-κB的活化，从而启动IL-8的高效表达。

LPS协同PLA经JNK信号通路诱导NCI-H292细胞分泌IL-6、IL-8

目的:研究多聚左旋精氨酸(PLA)和脂多糖(LPS)协同诱导气道上皮细胞NCI-H292分泌白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)的信号通路机制。方法:将NCI-H292细胞分为空白组、PLA组、LPS组、PLA+LPS组,采用Western Blot检测各组JNK的磷酸化水平,并比较SP-600125作用与否对JNK磷酸化和IL-6、IL-8表达量的影响。结果 :PLA、LPS诱导NCI-H292 JNK磷酸化水平增加(P<0.05),两者有协同作用(P<0.01);LPS协同PLA诱导NCI-H292分泌IL-6、IL-8(P<0.05);SP-600125抑制PLA、LPS、PLA+LPS诱导的JNK磷酸化(P<0.05)和IL-6、IL-8分泌(P<0.05)。结论:JNK信号通路参与LPS协同PLA诱导NCIH292分泌IL-6和IL-8的过程。

多聚左旋精氨酸诱导NCI-H292细胞凋亡及其可能机制的分析

目的观察多聚左旋精氨酸(poly-L-arginine,PLA)诱导气道上皮细胞NCI-H292凋亡以及对细胞内BCL-2/Bax、Caspase 3表达的影响,从而揭示PLA参与哮喘气道损伤的机制。方法按PLA浓度不同分为对照组、10 mg/L组、20 mg/L组、40 mg/L组、60 mg/L组,流式细胞仪检测各组PLA作用24 h后NCI-H292细胞凋亡率;电镜下观察60 mg/L组PLA作用24 h后NCIH292细胞凋亡形态学改变;Western blot法检测各组PLA作用24 h后NCI-H292细胞内Bax、BCL-2及活性Caspase 3的表达。结果各组NCI-H292细胞凋亡率分别为(4.97±0.17)%、(7.82±0.21)%、(11.99±0.21)%、(29.52±0.55)%、(55.23±0.67)%(P<0.05);电镜下PLA作用后NCI-H292细胞呈明显凋亡改变;Western blot检测出细胞中BCL-2/Bax表达降低(P<0.05),活性Caspase 3表达增加(P<0.05)。结论 PLA能引起气道上皮细胞凋亡,并下调BCL-2/Bax表达,上调活性Caspase3表达。

苏复宁洗液对人肺癌细胞株NCI-H292的抑制作用研究

苏复宁洗液是基于我们新发现的一种抗癌有效成分巴西木素[1],针对膀胱癌术后高复发率而研制的中药制剂。与常用的化疗药物相比较,具有毒副作用小、安全高效的特点。近年来研究结果表明,巴西木素对多种肿瘤细胞具有显著的抑制作用[2],本研究以人肺癌细胞株NCI-H292为靶细胞,观察离体条件下苏复宁洗液在不同浓度下对靶细胞的抑制活性,以探讨苏复宁洗液的抗肿瘤活性。

低氧对人气道上皮细胞NCI-H292黏液合成的影响

目的探讨人气道上皮细胞NCI-H292对低氧的应答及低氧对NCI-H292黏液合成的影响。方法体外培养人气道上皮细胞NCI-H292,对照组在常氧条件下培养,低氧组细胞设置不同氧浓度及不同培养时间,提取细胞总RNA及蛋白。采用AB-PAS染色检测细胞黏液合成情况;实时定量PCR检测muc5AC基因转录情况;Western blot检测低氧诱导因子HIF-1α、muc5AC的表达情况及相关信号通路蛋白的磷酸化水平。结果随氧浓度降低,H292细胞中HIF-1α表达增加,1%氧刺激4小时,HIF-1α表达与对照相比差异极显著。低氧诱导H292细胞内黏液合成增加,干预HIF-1α表达后抑制低氧诱导的黏液。低氧时间依赖性提高muc5AC转录水平,与常氧对照组相比在6h即差异显著(P<0.05),12小时时差异极显著(P<0.01),至24小时muc5AC mRNA表达量达到峰值。AKT、ERK、STAT3(Tyr705)磷酸化活化都参与NCI-H292细胞对低氧的应答。ERK信号通路阻断剂U0126能抑制HIF-1a表达及黏液合成,而AKT信号通路阻断剂LY294002和STAT3信号通路阻断剂AG490不影响HIF-1α的表达量。结论人气道上皮细胞系NCI-H292对1%低氧环境能迅速作出应答。低氧通过磷酸化活化ERK信号通路诱导HIF-1α表达,促进MUC5AC上调表达,进而促进NCI-H292细胞黏液异常合成,为体外深入研究低氧诱导的气道黏液异常合成相关机制奠定了基础。

全硫代反义寡核苷酸对肺癌细胞生长及端粒酶活性的影响

目的将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸（PS-ASODN）作用于肺癌细胞NCI-H292，探讨其对肺癌的治疗价值。方法PS-ASODN经lipotap脂质体转染作用于NCI-H292细胞，采用MTF法、ELISA法和流式细胞术检测NCI-H292细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果①MTT法检测，1．0μmol／LPS-ASODN处理后24h细胞生长抑制率为12．86％，且随着时间的延长，抑制作用逐渐增强。②ELISA法检测结果，0．5～1．5μmoL／L的PS-ASODN对NCI-H292细胞作用72h后端粒酶皆为阴性，对照组阳性。③流式细胞仪检测结果：端粒酶PS-ASODN转染NCI-H292细胞培养72h后，检测到细胞早期凋亡率增加，凋亡率为15．3％，与对照组相比有极显著意义（P〈0．01）。PI染色结果细胞被阻止在G1／G0期，S期比率有所降低，降为14．5％。结论①端粒酶PS-ASODN对NCI-H292细胞增殖有明显的抑制作用，其抑制作用具有浓度、时间依赖性。②端粒酶PS-ASODN能明显地抑制NCI-H292的端粒酶活性。

基于TLR4-NF-κB信号通路的槐果碱改善人支气管上皮细胞炎症和黏液高分泌的机制

目的基于TLR4-NF-κB信号通路探讨槐果碱(SC)体外抗炎作用及其抗哮喘的潜在效应机制。方法采用脂多糖(LPS)刺激人支气管上皮细胞NCI-H292诱导体外炎症模型,给予不同浓度SC进行治疗。采用MTT法筛选LPS和SC对NCI-H292细胞的安全浓度;设Control组、LPS组(10μg/mL LPS)、SC组(10μg/mL LPS+不同浓度SC),ELISA法检测细胞中黏蛋白5AC(MUC5AC)的表达和上清液中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的分泌情况;RT-PCR法检测细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8、髓样分化因子(MyD88)和核因子-κB(NF-κB p65)mRNA的表达;Western blot方法检测细胞中Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)、磷酸化p38(p-p38)和磷酸化p65(p-p65)以及细胞核内NF-κB p65的蛋白表达。结果MTT结果显示,LPS和SC分别在0~10μg/mL、0~40μg/mL浓度范围内对细胞活力无影响;ELISA结果表明,与Control组相比,LPS组细胞中MUC5AC含量极显著升高(P<0.01),细胞上清液中IL-6、IL-8也极显著升高(P<0.01);与LPS组相比,SC组细胞中MUC5AC含量极显著降低(P<0.01),细胞上清液中IL-6、IL-8也极显著降低(P<0.01);RT-PCR结果显示,与Control组相比,LPS组细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8、MyD88和NF-κB p65 mRNA表达均极显著升高(P<0.01),而SC组细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8 mRNA的表达显著降低(P<0.05),MyD88和NF-κB p65 mRNA的表达极显著降低(P<0.01)。Western blotting结果表明,SC可极显著降低LPS诱导的NCI-H292细胞中TRAF6、TLR4、p-p38和p-p65以及细胞核内NF-κB p65蛋白表达(P<0.01)。结论SC可能通过抑制TLR4-NF-κB信号通路,改善气道炎症和黏液高分泌,进而发挥抗哮喘的作用。

NF-κB信号通路在绿脓菌素诱导气道上皮表达IL-8的作用

探讨绿脓菌素对人气道上皮细胞株(NCI-H292细胞)表达IL-8的诱导作用及通过NF-κB信号传导通路。采用ELISA法对PCN诱导NCI-H292细胞分泌IL-8进行分析,应用western blotting检测NF-κB的蛋白表达,观察NF-κB阻断剂对IL-8表达的影响。PCN可促进NCI-H292细胞IL-8分泌。NF-κB的阻断剂PDTC能显著抑制IL-8表达(P<0.01)。PCN可能通过NF-κB信号通路诱导呼吸道上皮细胞IL-8表达。

苯并[a]芘的细胞毒性及诱导IL-1β和IL-8表达作用研究

目的探讨不同浓度苯并[a]芘(BaP)对人肺癌(淋巴结转移)NCI-H292的细胞毒性及其对NCI-H292细胞炎性因子分泌的影响。方法取对数期生长的NCI-H292细胞,分别以不同剂量BaP(0、4、8、16和32μmol/L)染毒24、48和72 h后,采用实时无标记细胞分析系统(RTCA)法检测细胞存活率,ELISA法检测细胞内白介素-1β(IL-1β)和白介素-8(IL-8)水平。本实验按照5×3析因设计。结果与对照组相比,各剂量BaP染毒组在24、48和72 h时间点细胞存活率均显著降低(P<0.001),细胞存活率与染毒剂量之间呈高度负相关关系(r;=-0.986、-0.974和-0.993,P<0.01);与同剂量组24 h时比较,各实验组在染毒48 h和72 h细胞存活率均显著升高(P<0.001),细胞存活率与染毒时间之间呈高度正相关关系(r;=0.958、0.996、0.994、0.999和1.000,P<0.01)。NCI-H292细胞内IL-1β水平在染毒剂量和染毒时间上有交互效应(P<0.001),在48 h和72 h时BaP高剂量(8~32μmol/L)染毒组IL-1β水平均呈随着染毒剂量升高而降低(P<0.01),72 h时低剂量BaP染毒组IL-1β水平则呈随着染毒剂量升高而升高的剂量-效应关系(P<0.01);同时,各实验组细胞IL-1β水平在24、48和72 h均呈随着染毒时间增加而上升的时间-效应关系(P<0.01)。NCI-H292细胞内IL-8水平在染毒剂量和染毒时间上有交互效应(P<0.01):在染毒72 h,BaP染毒剂量为0~16μmol/L时IL-8水平呈随着染毒剂量升高而升高的剂量-效应关系(P<0.01);4、8μmol/L染毒组细胞IL-8水平在24、48和72 h呈随着染毒时间增加而上升的时间-效应关系(P<0.01)。结论BaP染毒可引起NCI-H292细胞的存活率下降,且随着染毒剂量增加毒性作用增强;BaP可刺激NCI-H292细胞分泌IL-1β和IL-8,其可能在BaP致肺肿瘤炎症过程中发挥重要作用。