鸡新城疫病毒ND-xx08株HN基因的克隆及分析

为克隆并分析新城疫病毒ND-xx08株HN基因,将其分离、纯化、培养,提取其病毒的基因组RNA,RT-PCR扩增获得与HN基因预期大小一致的DNA片段,克隆到pMD18-T载体,经EcoR I和Hind Ⅲ进行双酶切鉴定和测序鉴定.ND-xx08 HN基因的序列长度为1 716 bp,共编码571个氨基酸.与已发表的24株NDV HN序列的同源性分析表明,其核苷酸序列的同源性在80.0%~98.4%,氨基酸同源性在87.2%~98.2%.研究结果表明,ND-xx08具有强毒株的特性.

鸡新城疫病毒ND-xx08株F基因的克隆及分析

新城疫病毒（NDV）ND-xx08毒株经10 d龄SPF鸡胚增殖后,提取其基因组RNA并反转录成cDNA,用NDV F基因特异性引物,经PCR扩增后获得与F基因预期大小一致的DNA片段。将NDV F基因片段克隆到pMD18-T载体上,并进行EcoR I和Hind III双酶切鉴定和测序鉴定。结果显示,ND-xx08毒株F基因片段的长度为1 662 bp,共编码554个氨基酸,F蛋白的裂解位点为112R-R-Q-K-R-F117,是典型强毒株氨基酸序列结构。将NDV ND-xx08株F基因的47 bp到420 bp序列与新城疫病毒基因型I至基因型Ⅸ毒株的相同序列绘制病毒基因进化树,显示ND-xx08分离株属于基因Ⅶe型。将NDV ND-xx08株F全基因与国内外发表的23株NDV F基因核苷酸序列和氨基酸序列的同源性比较分析,结果表明,其核苷酸序列的同源性在82.7%~97.8%之间,氨基酸同源性在87.5%~97.7%之间。

水貂源伪狂犬病毒DL14/08株的分离鉴定及生物学特性研究

为了明确2014—2016年我国东北地区,尤其是大连各地区养殖场爆发的大规模水貂伪狂犬病的病原情况,试验对各地区收集的病料进行病毒分离鉴定,通过PCR鉴定、克隆测序、电镜观察、IFA试验、动物回归试验和全基因组测序等进行验证。结果表明：电镜观察病毒粒子形态与细胞病理变化符合伪狂犬病毒形态特征与病变特征;克隆测序和PCR鉴定显示,水貂源伪狂犬病毒与猪源伪狂犬病毒有一定差异;IFA试验与动物回归试验结果符合伪狂犬病患病动物的发病特征;全基因组测序显示该毒株为水貂源伪狂犬病毒,将其命名为DL14/08株。说明此次毛皮动物疫情的爆发主要与伪狂犬病毒的传播扩散有直接关系。