NDGA对移植入损伤脊髓后的化学去细胞肌肉支架中的羊膜上皮细胞存活的影响

目的:观察NDGA对植入大鼠脊髓损伤处的化学去细胞肌肉支架中的羊膜上皮细胞(AECs)存活的影响,为NDGA在脊髓损伤中的进一步应用提供实验依据。方法:制备化学去细胞肌肉支架并联合Dil标记的6只孕鼠AECs用于大鼠脊髓半横断损伤。将72只模型鼠随机分成生理盐水组(n=18)、20mg·kg-1 NDGA组(n=18)、30mg·kg-1 NDGA组(n=18)和40mg·kg-1 NDGA组(n=18),各组大鼠分别于术后1周每天注射生理盐水和20、30、40mg·kg-1 NDGA,并分别于术后1、2和4周取材,荧光显微镜下观察并比较各组大鼠AECs存活的数量;采用免疫组织化学方法观察各组大鼠损伤脊髓新生血管阳性面积百分比和NG2阳性内源性神经干细胞的数量。结果:各组大鼠支架中AECs的数量随着时间的延长均不断减少,移植后1、2和4周各时间点,30mg·kg-1 NDGA组和40mg·kg-1 NDGA组大鼠支架中AECs的存活数量明显高于生理盐水组和20mg·kg-1 NDGA组(P<0.05);移植1周后,30mg·kg-1 NDGA组和40mg·kg-1 NDGA组大鼠新生血管阳性面积百分比明显低于生理盐水组和20mg·kg-1 NDGA组(P<0.05);移植1周后,各组大鼠间NG2阳性细胞数量差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NDGA能够明显增加大鼠脊髓损伤后的化学去细胞肌肉支架中移植AECs的存活数量,对损伤脊髓新生血管具有抑制作用,而对于内源性神经干细胞无影响。

NDGA诱导人胶质瘤细胞株分化过程中基因组甲基化及甲基转移酶的变化及意义

目的 了解去甲二氢愈创木酸 (Nordihydroguaiareticacid ,NDGA)处理前后两种人胶质瘤细胞系CHG 5、SHG 4 4甲基转移酶 (DNAmethyltransferase ,DNMT)活性、DNMTmRNA表达和基因组甲基化程度的改变。方法 以NDGA处理人恶性胶质瘤细胞系CHG 5及SHG 4 4,观察两种细胞增殖和分化状态 ;采用同位素微量示踪法测定甲基转移酶活性和基因组DNA甲基化程度 ;应用RT PCR法测定DNMTmRNA表达水平。结果 NDGA处理后两种细胞增殖速度明显减缓 ,分化水平升高 ;DNMT活性显著降低、基因组甲基化程度明显升高 ;而DNMTmRNA改变不明显。结论 NDGA能抑制甲基转移酶的活性 ,升高基因组甲基化水平 ,这些作用可能与其诱导恶性胶质细胞瘤分化的机制有关。

SHG－44细胞显微注射NDGA诱导分化的初步观察

采用显微注射系统对ＳＨＧ－４４细胞进行单细胞微量注射技术的探讨，并观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）注射后的作用。结果显示，体积较小的肿瘤细胞显微注射成功的关键在于注射参数的正确设定、细胞标记、注射针下限值的确定、注射过程中防污染以及操作细致、迅速；ＮＤＧＡ注射ＳＨＧ－４４细胞后的诱导分化作用较其在细胞外培养基中的作用更直接、迅速和显著，亦更持久。

NDGA对HT-29结肠癌细胞生长抑制及对端粒酶表达影响的研究

目的：探讨脂氧合酶抑制剂NDGA在体外对结肠癌HT-29细胞株生长抑制、诱导凋亡,并对端粒酶表达的影响进行研究。方法：应用MTT法绘制生长曲线,倒置相差显微镜观察细胞形态变化；扫描电镜观察细胞超微结构变化,观察凋亡小体；RT-PCR检测端粒酶催化活性亚单位(hTERT)表达水平变化。结果：不同浓度NDGA处理HT-29结肠癌细胞,随着药物浓度加大,细胞形态变圆,体积缩小,从瓶壁上逐步脱落,肿瘤细胞生长抑制。应用扫描电镜可见凋亡小体形成。对照组结肠癌H7-29细胞hTERT mRNA呈阳性表达,随着药物浓度上升,hTERT mRNA表达水平逐步下降。结论：NDGA对结肠癌HT-29细胞具有抑制生长、诱导凋亡作用,并且具有剂量依赖效应。端粒酶参与其诱导凋亡的过程。

NDGA对红颜草莓脱落酸及其关键调控基因表达的影响

采用不同浓度的ABA合成抑制剂NDGA处理红颜草莓果实,通过测定草莓果实不同时期脱落酸及成熟着色相关生理指标以及ABA代谢相关基因的变化,以了解NDGA对脱落酸及其关键调控基因表达的影响。结果表明,NDGA能有效抑制可溶性糖和天竺葵素葡萄糖苷的合成,且在一定范围内浓度越高,抑制作用越明显。一定浓度的NDGA处理可以抑制Fa NCED的表达,并促进Fa CYP707A、Fa BG1和Fa CHLH在草莓果实褪绿期的表达。该结果为进一步揭示NDGA抑制脱落酸代谢的机制提供了研究基础。

脂氧合酶抑制剂NDGA对胰腺癌细胞PCNA-1增殖和凋亡的影响

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对人胰腺癌细胞株PCNA-1生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2、bax表达的影响。方法:采用MTT法检测NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1增殖活性的影响,流式细胞术检测NDGA处理的胰腺癌细胞株PCNA-1的细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达。结果:NDGA抑制胰腺癌细胞株PCNA-1的增殖活性,呈剂量依赖效应关系;细胞经100μmol/L的NDGA处理后G0/G1期细胞减少(P<0.05)、S期细胞增多(P<0.05),G2/M期细胞无明显变化;细胞经100μmol/L的NDGA处理48h后bcl-2蛋白与对照组相比表达下调(P<0.01)、bax蛋白与对照组相比表达上调(P<0.01)。结论:NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1有抑制增殖、诱导其凋亡作用,诱导细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调、bax表达上调有关。

NDGA对内皮细胞增殖抑制的作用研究

目的 :探讨去甲二氢愈创木酸 (NDGA)对内皮细胞增殖活性的影响及特点。方法 :采用形态学观察、细胞计数、流式细胞仪分析、免疫组织化学等技术方法观测不同浓度NDGA作用下人脐静脉内皮细胞ECV 3 0 4细胞增殖活性的变化。结果 :①不同浓度 ( 5 0～ 2 0 0 μmol/L)的NDGA处理ECV 3 0 4细胞 2 4～ 72h后或一定浓度 ( 10 0 μmol/L)的NDGA处理ECV 3 0 4细胞不同时间 ( 1～ 8d)后 ,均出现NDGA抑制细胞增殖的作用 ,且这种作用与NDGA的浓度和作用时间有关。②NDGA处理细胞后出现细胞增殖活性降低 ,主要表现为有丝分裂计数和细胞增殖指数降低 ,细胞的生长抑制率增加 ,细胞生长减慢 ,免疫组化显示PCNA、BrdU标记指数下降等。结论 :NDGA对内皮细胞增殖有明显抑制作用 ,此抑制作用可能是其影响血管生成的主要原因之一。

5-LOX抑制剂NDGA对人肝癌HepG-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制的探讨

目的观察5-lox抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对裸鼠人肝癌HepG-2细胞移植瘤的作用,并探讨其抗肿瘤的可能机制。方法以人肝癌细胞HepG-2制备裸鼠人肝癌移植瘤模型共18只,将18只荷瘤裸鼠随机分为三组:1、正常对照组(接种正常肝癌HepG2细胞)。2、药物组(接种正常肝癌HepG2细胞同时皮下注入5-lox抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA),剂量:10μml/L NDGA 0.1ml/10g一天一次,连续5天)。3、溶媒组(接种正常HepG-2细胞后皮下注射溶质二甲亚酚)。密切观察移植瘤生长及裸鼠生存情况21天,记录各组移植瘤肿瘤体积V(V=长径×短径2×0.5),计算衰退率:肿瘤衰退率=1-干预组平均肿瘤体积比/空白对照组平均肿瘤体积比(V/Vo)。通过RT-PCR及Western-blot法检测裸鼠移植瘤组织中bcl-2、caspase3凋亡调节因子以及通路信号蛋白MEK1/2、ERK1/2等的表达。结果实验期间各组荷瘤鼠活动较好,成瘤率100%,且实验过程中无不良繁衍及裸鼠死亡;试验后分别测得各组荷瘤鼠皮下移植瘤体积及肿瘤衰退率,利用单因素方差分析及t检验可以发现:药物组荷瘤鼠较对照组及溶媒组移植瘤体积明显缩小,肿瘤衰退率明显较高,且存在统计学差异(P<0.01);利用RT-PCR及Western-blot法检测发现药物组caspase3表达量较对照组及溶媒组明显增强,差异存在统计学意义(P<0.01),bcl-2、ERK1/2、MEK1/2等表达量较对照组及溶媒组明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 NDGA对于裸鼠人肝癌移植瘤具有明显的抑制效果。NDGA可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制肿瘤生长,其作用机制与抑制MEK/ERK信号通路有关。

NDGA上调宫颈癌SiHa细胞p27和p53的表达

去甲二氢愈创木酸（nordihydroguaiaretic acid，NDGA）是脂氧合酶非特异性抑制剂，近年来发现NDGA及其衍生物具有抗病毒和抗肿瘤作用。我们先前发现NDGA能通过促进组蛋白H3乙酰化上调p21表达的方式将宫颈癌SiHa细胞抑制于G1期。在此基础上，我们进一步探索了NDGA对其他调节G1／S期转换关键因素：p27和p53的影响。

NDGA ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis via the regulation of IL-6,IL-17 and TGF-b

Objective To investigate the effets of nordihydroguaiaretic acid(NDGA)on the expression of IL-6,IL-17and TGF-βin mice with experimental autoimmune encephalomyelitis(EAE).Methods C57BL/6 mice were immunized with MOG35-55 to induce EAE.The 54 mice were randomly and equally divided into control group,model group and treatment group.Mice in treatment

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞增殖和分化的影响

目的：观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）对人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞增殖和分化的影响。方法：细胞培养、免疫组化、光镜和电镜观察及流式细胞仪检测。结果：①在２００μｍｏｌ／Ｌ浓度范围内，ＮＤＧＡ对ＳＨＧ－４４细胞有增殖抑制和诱导分化作用，且这种作用与浓度呈正相关；②在ＮＤＧＡ处理９６ｈ内，ＮＤＧＡ对ＳＨＧ－４４细胞的增殖抑制作用以处理后２４ｈ最明显；③ＮＤＧＡ处理后，ＳＨＧ－４４细胞增殖受阻于Ｇ１→Ｓ期。结论：ＮＤＧＡ对ＳＨＧ－４４细胞有明显的增殖抑制和诱导分化作用，且这种作用有周期特异性。

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞周期的影响

目的 观察去甲二氢愈创木酸 (NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系SHG 4 4细胞周期的影响。方法 采用细胞培养、免疫组化、细胞计数及流式细胞仪检测等技术方法。结果 ①在 2 0 0 μM浓度范围内 ,NDGA对SHG 4 4细胞增殖有抑制作用 ,使细胞增殖受阻于G1→S期 ,且这种作用与浓度呈正相关 ;②在NDGA处理 96小时内 ,NDGA对SHG 4 4细胞的增殖抑制作用以处理后 2 4小时最明显 ;③NDGA处理后 ,SHG 4 4细胞cyclinD1和CDK4 蛋白表达减弱 ,p16蛋白表达增强。结论 NDGA对SHG 4 4细胞周期有明显的增殖抑制作用 ,且这种作用可能与CDK4 蛋白激酶活性降低有关。

去甲二氢愈创木酸的全合成

以香草醛为原料，经甲醚化，氧化和Ｃｌａｉｓｅｎ缩合，合成了相应的β酮酸酯，再经改进的Ｋｎｏｒ反应，实现β酮酸酯的偶联，通过环化、选择性氢化还原等反应，成功地合成了去甲二氢愈创木酸（ｎｏｒｄｉｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃａｃｉｄ）；呋喃愈创木酚二甲醚（ｆｕｒｏｇｕａｉａｃｉｎｄｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ）和二氢愈创木酸二甲醚（ｄｉｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃａｃｉｄｄｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ）。

高效液相色谱法测定去甲二氢愈创木酸的含量及其有关物质

目的建立测定去甲二氢愈创木酸(NDGA)含量和检查有关物质的HPLC方法。方法采用ZorbaxSB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),检测波长为282nm。含量测定以三氟醋酸-水-乙腈(0.05:45:55,pH3.5)为流动相,有关物质检查采用梯度洗脱,以三氟醋酸-水(0.05:100)为流动相A,三氟醋酸-乙腈(0.05:100)为流动相B,洗脱梯度:0～15min,流动相B的比例为40%～70%,15～30min,流动相B的比例为70%。结果NDGA浓度为5.0～100.0μg/ml时,峰面积与其浓度呈良好的线性关系(r=0.9999),检测限为1.2ng(S/n=3),含量测定重复性试验RSD为0.54%(n=6)。有关物质检查重复性试验RSD1.8%(n=6)。结论本法简便、准确、快速、灵敏,可用于NDGA的质量控制。

缺氧抑制脑动脉Kv2.1通道作用机制的研究

目的探讨缺氧对脑动脉Kv通道抑制作用的机制是否由内源性15-羟二十碳四烯酸(15-HETE)介导。方法选取健康Wistar大鼠,通过酶法分离培养脑动脉和颈内动脉平滑肌细胞,分为正常对照组、缺氧组和去甲二氢愈创木酸(NDGA)缺氧组,正常对照组平滑肌细胞常规培养48h、缺氧组在缺氧箱内培养48h、NDGA缺氧组加入50μmol/L的NDGA后在缺氧箱内培养48h,使用RT-PCR和Western blotting技术检测大鼠脑动脉和颈内动脉平滑肌细胞上Kv2.1通道mRNA及蛋白质的表达情况。结果缺氧可以抑制大鼠脑动脉和颈内动脉平滑肌细胞上Kv2.1通道的表达,缺氧组与正常对照组相比,Kv2.1通道mRNA及蛋白质的表达下调(P<0.05);采用NDGA抑制15-脂氧化酶(15-LOX)后,导致脑动脉和颈内动脉平滑肌细胞上Kv2.1通道的表达上调,NDGA可以保护缺氧对于Kv通道的抑制,NDGA缺氧组与缺氧组相比,Kv2.1通道mRNA及蛋白质的表达明显上调(P<0.05)。结论缺氧可能通过内源性15-HETE发挥对Kv通道的抑制作用,15-HETE可能是影响脑动脉张力的重要中介因素。

去甲二氢愈创木酸对大鼠早期胚胎的影响

目的探讨去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiareticacid,NDGA)对大鼠早期胚胎及子宫蜕膜发育的影响。方法在大鼠妊娠第1、7、14天(E1、E7和E14)分别皮下注射NDGA和PBS液,观察在妊娠第6、9天的胚胎种植数、胚胎直径及新生鼠的数目和体质量,检测子宫蜕膜中内皮细胞生长因子VEGF和增殖细胞核抗原PCNA的表达,测量微血管密度(MVD),检测妊娠第9天的血清孕酮值。结果E1给药后,NDGA各组的胚胎种植总数显著减少(P<0.05),胚胎直径显著减小(P<0.05);E7给药后,胚胎直径显著减小(P<0.05);E1和E7给药后新生鼠总数减少(P<0.05),体质量无显著性差异(P>0.05);蜕膜中VEGF和PCNA表达显著减少,MVD减少(P<0.05);血清孕酮值与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。E14组新生鼠数目和体质量在各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论NDGA对大鼠早期胚胎和蜕膜的发育有明显抑制作用,对大鼠的晚孕胚胎无明显影响。

去甲二氢愈创木酸宫腔灌注对大鼠胚胎的影响

目的探讨去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对大鼠早期胚胎及子宫蜕膜发育的影响,为计划生育新药研究奠定基础。方法在大鼠妊娠第1、7天(E1和E7)分别宫腔内插管灌注NDGA,观察第9天的胚胎种植数、血清孕酮值和胚胎直径及足月胎鼠的数目和体质量,检测子宫蜕膜和胎盘中内皮细胞生长因子VEGF和增殖细胞核抗原PCNA的表达,测量微血管密度(MVD)。结果E1给药后,NDGA各组灌注侧的胚胎数较对侧减少(P<0.05),胚胎直径显著减小(P<0.05),足月胎鼠数较对侧减少(P<0.05);E7给药后,胚胎直径减小(P<0.05);E1给药比在E7给药的胚胎直径减小更有显著性(P<0.01);蜕膜和胎盘中VEGF和PCNA表达显著减少,平均光密度值显著减小(P<0.01),MVD显著减少(P<0.01);血清孕酮值与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论宫腔灌注NDGA对大鼠早期胚胎和蜕膜的发育有明显抑制作用,对大鼠血清孕酮值无明显影响。

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的作用

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（Nordihydrognaiareticacid，NDGA）对恶性胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的作用。方法：采用光镜和电镜观察移植瘤细胞的形态变化；用流式细胞仪进行细胞周期分析；用免疫组化检测肿瘤细胞中GFAP、PCNA的蛋白表达情况。结果：①NDGA可明显降低裸鼠移植瘤的成瘤率；②NDGA能抑制移植瘤细胞的生长和诱导其分化，使细胞增殖受阻于G1→S期。结论：NDGA在体内与体外有相同的抗胶质瘤作用。

脂氧合酶抑制剂抑制HepG2细胞增殖的研究

目的探讨脂氧合酶抑制刑对HepG2细胞增殖的影响及其相关机制。方法体外培养HepG2肝癌细胞，应用不同浓度脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)处理HepG2细胞，利用MTT比色法、生长曲线、细胞克隆形成试验观察NDGA对HepG2细胞增殖的影响。结果NDGA对HepG2细胞具有明显的生长抑制作用，不同浓度的NDGA(50、100、150、200μmol/L)处理HepG2细胞72h的抑制率分别为27．34％、41．76％、57．08％和69．17％，其IC50值为109．13μmol／L。细胞克隆形成率分别为21．63％。17．33％，12．53％，7．97％，明显低于对照组的31．70％。结论NDGA对HepG2细胞有较强的细胞毒作用且以剂量、时间依赖方式抑制细胞增殖。

去甲二氢愈创木酸对活体血管生成作用的实验研究

目的 观察去甲二氢愈创木酸 (NDGA)对在体血管生成的影响。方法 采用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)试验 ,检测NDGA对血管生成的影响。结果 2 .5× 1 0 -6mmol以上量的NDGA均对血管生成有抑制作用 ,在实验剂量 ( 0 .5～ 5 0 )× 1 0 -6mmol范围内 ,随给药量的增加 ,其抑制作用愈加明显。采用Bouin’s液原位固定后取膜、DAB染色、普通显微镜下观察或用图像分析方法可使结果更具可信性与可比性。结论 NDGA可抑制血管生成 。