狗脊多糖调控lncRNA NEAT1延缓椎间盘终板软骨细胞衰老的作用研究

目的:探讨狗脊多糖通过调节lncRNA NEAT1延缓椎间盘终板软骨细胞衰老的作用机制。方法:将15只C57BL/6小鼠的椎间盘终板软骨细胞进行体外培养;经10 ng·mL-1白细胞介素-1β(IL-1β)干预24 h诱导软骨细胞;将软骨细胞随机分为空白对照组、模型对照组(10 ng·mL-1IL-1β)和狗脊多糖各剂量组(100,200,400μg·mL-1);Real-time PCR及Western blot分别检测狗脊多糖对IL-1β诱导软骨细胞lncRNA NEAT1、衰老相关通路p53-p21中p53、p21水平及衰老相关分泌表型的基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、CollagenⅡ、Caspase-3蛋白表达情况;流式细胞术检测各组软骨细胞凋亡率情况。结果:Real-time PCR结果显示,经IL-1β诱导的椎间盘终板软骨细胞中lncRNA NEAT1、p21、p53水平显著增高;与模型对照组比较,狗脊多糖各剂量组lncRNA NEAT1、p21、p53水平显著降低;与空白对照组比较,经IL-1β诱导的椎间盘终板软骨细胞中MMP-13、Caspase-3蛋白表达含量显著增高,CollagenⅡ蛋白表达降低;经狗脊多糖干预后,可显著改善MMP-13、CollagenⅡ、Caspase-3蛋白表达;此外,与模型对照组比较,狗脊多糖各剂量组椎间盘终板软骨细胞凋亡率呈现下降趋势。结论:狗脊多糖通过调控lncRNA NEAT1影响p53、p21、MMP-13、CollagenⅡ、Caspase-3表达,降低软骨细胞凋亡率,进而延缓椎间盘终板软骨细胞衰老。

LncRNA NEAT1抑制细胞焦亡促进人骨髓间充质干细胞的成骨分化

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核旁斑组装转录本1(NEAT1)通过调节细胞焦亡调控人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的作用。方法培养hBMSCs 7 d诱导细胞成骨分化,并分为对照组(常规培养)、成骨分化组(成骨分化诱导)、pcD-NEAT1组(转染NEAT1过表达质粒)、pcD-null组(转染NEAT1过表达质粒阴性对照)、成骨分化+CML组[成骨分化诱导联合NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性小体激活剂(Nε)-羧甲基赖氨酸(CML)处理]、成骨分化+CML+pcD-NEAT1组(成骨分化诱导联合pcD-NEAT1与CML处理)。经茜素红染色检测细胞矿化程度;碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒检测ALP活性;CCK-8检测各组细胞存活率,高倍镜下观察细胞形态变化。TUNEL实验检测细胞凋亡率。qRT-PCR检测NEAT1的表达。Western blot检测IL-1β、IL-18、NLRP3、cleaved-caspase 1(cleaved-CASP1)、gasdermin D、Runt-相关转录因子2(RUNX2)、ALP、骨桥蛋白(OPN)的表达。结果与对照组比较,成骨分化组细胞的矿化程度增加,ALP活性升高(P<0.05),NEAT1和RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均上调(P<0.05)。与pcD-null组比较,pcD-NEAT1组细胞的矿化程度增加,ALP活性升高(P<0.05),NEAT1和RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均上调(P<0.05)。与成骨分化组比较,成骨分化+CML组细胞矿化程度减轻,ALP活性降低(P<0.05),细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),细胞膜出现破裂,细胞膨大变形,NLRP3和IL-1β、IL-18、cleaved-CASP1、gasdermin D蛋白表达均显著上调(P<0.05),而RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均显著下调(P<0.05)。与成骨分化+CML组比较,成骨分化+CML+pcD-NEAT1组细胞矿化程度增加,ALP活性升高(P<0.05),RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均显著上调(P<0.05),细胞存活率增加(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞膜较完整且细胞形态正常,NLRP3和IL-1β、IL-18、cleaved-CASP1、gasdermin D蛋白表达均显著下调(P<0.05)。结论NEAT1过表达通过抑制NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡促进hBMSCs的成骨分化。

lncRNA NEAT1通过抑制hsa-miR-450b-5p促进胃癌细胞中EZH2的表达与细胞的增殖和迁移能力

目的:筛选果蝇Zeste基因增强子同源物2(EZH2)基因上游miRNA及lncRNA,分析其在胃癌细胞中的表达并验证其间的靶向关系,探讨它们对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法:通过ENCORI、miRDB和Target Scan数据库查询并分析、筛选EZH2上游miRNA(has-miR-450b-5p),ENCORI数据库和DAINA数据库筛选has-miR-450b-5p上游lncRNA(lncRNA NEAT1),预测hsa-miR-450b-5p、lncRNA NEAT1与EZH2之间的结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证hsa-miR-450b-5p与lncRNA NEAT1的结合关系。采用q PCR和WB法检测lncRNA NEAT1和EZH2在正常胃黏膜细胞(GES-1)与胃癌细胞(MGC-803、SGC-7901和MKN-28)中的表达量。按转染物的不同将MGC-803和SGC-7901细胞分为hsa-miR-450b-5p-mimic组、mimicNC组、si-NEAT1组和si-NC组,转染36~48 h后qPCR法验证过表达及敲减效果;通过qPCR、WB法检测观察过表达hsa-miR-450b-5p对细胞中lncRNANEAT1和EZH2m RNA、蛋白表达的影响,以及敲减lncRNANEAT1对hsa-miR-450b-5p和EZH2mRNA表达的影响;CCK-8法、划痕愈合实验和流式细胞术分别检测敲减EZH2或敲减lncRNA NEAT1对细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响。结果:生物信息学分析筛选获得EZH2上游miRNA和lncRNA为has-miR-450b-5p和lncRNA NEAT1,双荧光素酶报告基因实验验证了两者间存在靶向关系。lncRNA NEAT1和EZH2 mRNA、蛋白在胃癌细胞中均呈高表达(均P<0.05)。与mimic-NC组相比,hsa-miR-450b-5p-mimic组MGC-803、SGC-7901细胞中miR-450b-5p水平均显著升高,而EZH2 mRNA、蛋白和lncRNA NEAT1的表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01);与si-NC组相比,si-NEAT1组MGC-803、SGC-7901细胞中lncRNA NEAT1和EZH2 mRNA的表达量均显著降低(均P<0.01),SGC-7901细胞中hsa-miR-450b-5p表达量显著升高(P<0.05)。敲减EZH2或敲减lncRNA NEAT1后,MGC-803、SGC-7901细胞的增殖、迁移能力均显著降低(均P<0.01)。结论:lncRNA NEAT1和EZH2在胃癌细胞中均呈高表达,lncRNA NEAT1可通过hsa-miR-450b-5p促进EZH2的表达并提高胃癌MGC-803和SGC-7901细胞的增殖和迁移能力。

NEAT1、miR-27a-3p在阿尔茨海默病患者血清和脑脊液中的表达关系

目的:探究长链非编码RNA核富含丰富的转录本1(long chain non-coding RNA nuclear-enriched abundant transcript 1, LncRNA NEAT1)、miR-27a-3p在阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)患者血清和脑脊液中的表达关系及意义。方法:选择2019年10月至2021年9月天津市第五中心医院神经内科收治的AD患者66例作为病例组,根据临床痴呆评定量表(clinical dementia rating, CDR)评分分为轻度组(≤1分,n=41)与中重度组(>1分,n=25);另取同期门诊其他就诊患者血清和脑脊液标本66例志愿者作为对照组。收集所有受试者的一般资料并评估认知程度,采用实时荧光定量PCR检测血清和脑脊液miR-27a-3p、NEAT1表达水平,酶联免疫吸附试验检测脑脊液β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1,BACE1)、β淀粉样蛋白(amyloid β,Aβ)40和Aβ42水平,采用Spearman法分析血清miR-27a-3p、NEAT1水平与简易精神状态检测量表的相关性,采用Pearson法分析血清miR-27a-3p、NEAT1水平与Aβ沉积平均标准摄取值比率(standardized uptake value ratio, SUVR)及脑脊液miR-27a-3p、NEAT1、BACE1、Aβ42、Aβ40水平的相关性。结果:MMSE评分[21 (17,25),9(7,11)vs. 27 (21,34)]、MoCA评分[17 (12,21),10 (7,13)vs. 27 (21,31)]、血清miR-27a-3p水平(0.55±0.13,0.46±0.06 vs. 0.97±0.22)、脑脊液miR-27a-3p(0.48±0.10,0.35±0.10 vs. 1.03±0.31)、Aβ42水平[(303.55±36.77) ng/L,(231.45±34.14) ng/L vs.(499.99±53.63) ng/L]及Aβ42/Aβ40比值(0.030±0.008, 0.022±0.007 vs. 0.048±0.010)轻度组、中重度组AD患者均低于对照组(P均<0.05),且中重度组AD患者较轻度组低(P均<0.05);血清NEAT1水平(2.31±0.64,3.13±0.76 vs. 1.05±0.20)、SUVR(1.50±0.29,1.76±0.52 vs. 0.74±0.15)及脑脊液NEAT1(3.51±1.24,4.30±1.65 vs. 1.01±0.23)、BACE1水平[(55.78±5.98)μg/L,(72.32±16.08)μg/L vs.(21.39±3.73)μg/L]轻度组、中重度组AD患者均高于对照组(P均<0.05),且中重度组AD患者较轻度组高(P均<0.05)。AD患者血清NEAT1水平与SUVR及脑脊液NEAT1、BACE1呈正相关(r=0.350,0.606,0.341,P<0.05),与MMSE评分、MoCA评分呈负相关(r=-0.473,-0.482,P均<0.05);血清miR-27a-3p水平与脑脊液miR-27a-3p水平、MMSE评分、MoCA评分呈正相关(r=0.695,0.424,0.412,P<0.05),与SUVR及脑脊液BACE1水平呈负相关(r=-0.521、-0.447,P均<0.05)。结论:NEAT1、miR-27a-3p在AD患者血清及脑脊液中表达趋势具有一致性,NEAT1水平均升高,miR-27a-3p水平均降低,二者水平呈负相关,与AD患者脑中Aβ沉积程度有关,并参与AD的病情进展。

LncRNA NEAT1/miR-101-3p/RAC1在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及机制研究

目的 探讨lncRNA NEAT1在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用机制。方法 采用RT-qPCR法检测宫颈腺癌细胞系HeLa、宫颈鳞癌细胞系SiHa和人子宫内膜上皮细胞系EM中lncRNA NEAT1的表达;干扰或过表达lncRNA NEAT1后,通过CCK-8和Transwell观察宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化,扫描电镜观察细胞侵袭性伪足的变化;采用双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA NEAT1与miR-101-3p的靶向关系;通过免疫荧光、Transwell、CCK-8等方法检测lncRNA NEAT1/miR-101-3p/RAC1对SiHa和HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 相比于EM细胞(0.99±0.04),宫颈癌SiHa(7.59±0.10,P<0.01)和HeLa(1.50±0.07,P<0.05)细胞中lncRNA NEAT1的表达明显升高。相比于sh-NC组,sh-NEAT1组(加入NEAT1敲低质粒)细胞增殖、迁移、侵袭及侵袭性伪足数量明显减少(P<0.05);相比于OE-NC组,OE-NEAT1组(加入NEAT1过表达质粒)SiHa、HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及侵袭性伪足数量显著增加(P<0.05)。miR-101-3p与突变的NEAT1共转染后,相比于对照组(3.10±0.16)荧光素酶活性无显著变化(2.99±0.11,P>0.05),而与野生型NEAT1共转染后,相比于对照组(2.97±0.13)荧光素酶活性显著降低(1.15±0.05,P<0.01),提示lncRNA NEAT1与miR-101-3p靶向结合。RT-qPCR结果显示,与sh-NC组(SiHa,0.97±0.09;HeLa,1.07±0.06)相比,sh-NEAT1组miR-101-3p mRNA表达明显升高(SiHa,3.86±0.39;HeLa,2.62±0.51,P<0.01);与OE-NC组(SiHa,0.98±0.20;HeLa,1.05±0.18)相比,OE-NEAT1组miR-101-3p mRNA表达显著降低(SiHa,0.35±0.05;HeLa,0.14±0.03,P<0.05),提示lncRNA NEAT1与miR-101-3p的表达呈负相关。CCK-8、Transwell结果显示,siRNA-RAC1、miR-101-3p mimic使SiHa和HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭受到抑制(P<0.05),上调lncRNA NEAT1可部分逆转以上现象,使细胞增殖、迁移和侵袭数目增加(P<0.05)。结论 宫颈癌细胞中lncRNA NEAT1的表达显著升高,它作为miR-101-3p的竞争性内源RNA(ceRNA),通过竞争性结合miR-101-3p并部分控制其对RAC1的调控,进而调节宫颈癌细胞侵袭性伪足的形成并诱导细胞增殖、迁移和侵袭。

长链非编码RNANEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的影响

目的:探讨LncRNA NEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的调控及对HaCaT细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用PCR、Western印迹法检测HaCat细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中LncRNANEAT1、miR-485-5p及STAT3 mRNA和蛋白表达情况。荧光原位杂交技术(FISH)和双荧光素酶报告基因检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p和STAT3之间的靶向调控关系。再通过RNA干扰技术分别沉默HaCat细胞中LncRNANEAT1、STAT3表达,以及转染miR-485-5p模拟剂(mimic)和抑制剂(inhibitor)分别上、下调miR-485-5p,然后应用PCR、Western Blot、流式细胞术、CCK8等实验技术分别检测LncRNANEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。结果:与NHEK细胞组相比,LncRNA NEAT1和STAT3在HaCaT细胞组中高表达,而miR-485-5p在HaCaT细胞中低表达;miR-485-5p与LncRNA NEAT1共定位于HaCaT细胞质,且miR-485-5p与LncRNA NEAT1 3′-UTR、STAT3 3′-UTR之间存在互补结合序列;共转染转野生型psiCHECK-LncRNA NEAT1-3′UTR-WT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-WT重组质粒时,miR-485-5pmimic组相对萤光素酶活性明显低于miR-NC组。而共转染突变型psiCHECK-LncRNANEAT1-3′UTR-MUT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-MUT重组载体质粒时,miR-485-5p mimic组和miR-NC组萤光素酶活性无明显差异;沉默LncRNA NEAT1或STAT3均可抑制HaCaT细胞增殖及促进其凋亡;下调miR-485-5p可促进HaCaT细胞增殖及抑制其凋亡,而上调miR-485-5p则与之相反;下调miR-485-5p可减弱沉默LncRNANEAT1对HaCaT细胞功能的影响。结论:LncRNANEAT1可通过充当竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)吸附miR-485-5p增强STAT3表达来促进HaCaT细胞增殖并抑制其凋亡。

LncRNA NEAT1通过调节miR-124-3p/KLF4轴改善过敏性鼻炎

目的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)已被证明在过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)发展中发挥重要作用。本研究旨在探究lncRNA NEAT1(nuclear enriched abundant transcript 1)在AR中的功能和分子机制。方法构建了卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)诱导的AR小鼠模型和IL-13诱导的人鼻上皮细胞(human nasal epithelial cells,HNECs)模型。结果NEAT1在AR小鼠体内高表达。敲低NEAT1显著抑制了AR小鼠和HNECs中炎性因子的产生,并减少了细胞凋亡。进一步的研究表明,NEAT1的下调能够逆转miR-124-3p的上调和KLF4的下调,进而调节了IL-13诱导的HNECs中的炎性反应和细胞凋亡。此外,miR-124-3p过表达显著提高了HNECs细胞活力,抑制了细胞凋亡、炎症因子的产生和KLF4的表达。而NEAT1过表达显著逆转了这一现象。结论本研究发现NEAT1在AR中的高表达,并揭示了其通过miR-124-3p/KLF4信号通路调控炎性反应和细胞凋亡的机制。这些发现不仅为深入理解AR的分子机制提供了新的视角,还为进一步研究和治疗AR提供了潜在的靶点。

lncRNA NEAT1促进miR-451a表达抑制AngⅡ诱导的高血压致血管重构

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)-核富集丰度转录物1(NEAT1)调控微小RNA-451a(miR-451a)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压致血管重构的影响。方法:将C57BL/6小鼠随机分作control组、model组、shRNA组、sh-NEAT1组、sh-NEAT1+inhibitor NC组、sh-NEAT1+miR-451a inhibitor组,15只/组;除control组外其余小鼠皮下埋入AngⅡ微量泵建立高血压模型,并于2周后尾静脉分别注射相应剂量shRNA、sh-NEAT1、inhibitor NC及miR-451a inhibitor慢病毒液,control组及model组注射等剂量PBS。检测小鼠血压;qRT-PCR检测胸主动脉组织lncRNA NEAT1及miR-451a表达;HE染色及Masson染色分别观察胸主动脉组织病理学及胶原纤维分布情况;免疫组化法观察胸主动脉组织Ki-67的表达;Western blot检测胸主动脉组织I型胶原蛋白(Col1)、Ⅲ型胶原蛋白(Col3)表达;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA NEAT1与miR-451a的靶向关系。结果:与control组比,model组小鼠收缩压(SBP)、胸主动脉组织lncRNA NEAT1表达、中膜厚度(MT)/主动脉管腔内径(LD)、胶原沉积、Ki-67阳性表达、Col1、Col3蛋白表达显著增加,miR-451a表达显著减少(P<0.05);与shRNA组相比,sh-NEAT1组SBP、lncRNA NEAT1表达、MT/LD、胶原沉积、Ki-67阳性表达、Col1、Col3蛋白表达显著降低,miR-451a表达显著增加(P<0.05);与sh-NEAT1+inhibitor NC组相比,sh-NEAT1+miR-451a inhibitor组SBP、MT/LD、胶原沉积、Ki-67阳性表达、Col1、Col3蛋白表达显著增加(P<0.05),miR-451a表达显著减少(P<0.05),lncRNA NEAT1表达无明显变化(P<0.05);lncRNA NEAT1与miR-451a间存在靶向关系。结论:lncRNA NEAT1沉默对AngⅡ所致高血压大鼠血管重构的改善可能与其促进miR-451a表达有关。

lncRNA NEAT1调节miR-424-5p/ELK4轴对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤、Lp-PLA2和CRP水平的影响

目的:探讨长链非编码RNA核旁斑组装转录本1(lncRNA NEAT1)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤中的分子机制和功能。方法:收集健康人和动脉粥样硬化(AS)病人血液标本并通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清中lncRNA NEAT1、微小RNA-424-5p(miR-424-5p)和ETS域蛋白4(ELK4)mRNA表达水平。体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞中lncRNA NEAT1、miR-424-5p和ELK4表达情况;细胞计数试剂盒(CCK-8)法和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)法检测HUVEC细胞增殖活力和凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定HUVEC中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β含量、脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)和C反应蛋白(CRP)水平;采用双荧光素酶报告基因测定lncRNA NEAT1、miR-424-5p和ELK4之间的靶向相互作用。进行动物实验以评估lncRNA NEAT1在体内AS进展中的作用。结果:lncRNA NEAT1在AS病人血清和ox-LDL诱导的HUVEC中显著上调(P<0.05)。lncRNA NEAT1的沉默可削弱ox-LDL引发的细胞毒性,降低Lp-PLA2和CRP水平,并减少ApoE^(-/-)小鼠的脂质异常分泌(P<0.05)。miR-424-5p是lncRNA NEAT1在调节ox-LDL诱导的HUVEC损伤中的功能介质,ELK4是miR-424-5p的直接靶标(P<0.05)。miR-424-5p的抑制或ELK4的过表达逆转了lncRNA NEAT1沉默对ox-LDL诱导的HUVEC细胞损伤的影响(P<0.05)。结论:沉默lncRNA NEAT1可通过调控miR-424-5p/ELK4轴保护HUVEC免受ox-LDL触发的细胞毒性,降低Lp-PLA2和CRP水平。

灯盏花素调节lncRNA NEAT1/miR-9-5p/SLC26A2轴抑制哮喘模型小鼠气道炎症

目的探究灯盏花素通过长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1/microRNA(miR)-9-5p/SLC26A2轴对哮喘模型小鼠气道炎症的抑制作用及分子机制。方法15只6~8周雄性C57BL/6J小鼠,按照随机数字表法分为三组,即对照组、哮喘模型组和灯盏花素组。灯盏花素组小鼠在哮喘模型构建完成后每天1次灌胃10 mg/kg灯盏花素,连续7 d;对照组及哮喘模型组则使用等体积0.9%生理盐水进行灌胃处理。采用苏木素-伊红(HE)染色和过碘酸雪夫(PAS)染色对小鼠肺组织进行组织病理学观察。采用Wright-Giemsa对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行染色及细胞学检测。酶联免疫吸附实验检测BALF及血清中炎性因子的水平。荧光原位杂交检测NEAT1的表达。实时荧光定量PCR检测lncRNA-NEAT1、miR-9-5p和SLC26A2 mRNA的表达。蛋白免疫印迹检测SLC26A2的蛋白表达。结果与对照组比较,哮喘模型组小鼠的BALF炎性细胞总数[(68.32±7.25)×10^(4)/mL比(17.71±3.14)×10^(4)/mL,P<0.01]、中性粒细胞数[(5.50±0.58)×10^(4)/mL比(0.72±0.15)×10^(4)/mL,P<0.01]、巨噬细胞数[(13.02±1.04)×10^(4)/mL比(2.70±0.61)×10^(4)/mL,P<0.01]、淋巴细胞数[(23.07±2.90)×10^(4)/mL比(4.13±0.53)×10^(4)/mL,P<0.01]、嗜酸性粒细胞数[(22.13±2.21)×10^(4)/mL比(1.63±0.22)×10^(4)/mL,P<0.01]增加;肺组织炎性细胞浸润水平增加[(2.49±0.25)分比(0.26±0.04)分,P<0.01],PAS评分升高[(2.24±0.16)分比(0.26±0.08)分,P<0.01];血清IgE[(3.52±0.32)IU/mL比(1.02±0.08)IU/mL,P<0.01]及BALF中白细胞介素-5(IL-5)[(154.48±9.27)pg/mL比(54.56±3.35)pg/mL,P<0.01]、白细胞介素-13(IL-13)[(96.86±6.45)pg/mL比(79.18±3.34)pg/mL,P<0.05]、白细胞介素-17(IL-17)[(185.24±7.24)pg/mL比(73.32±4.15)pg/mL,P<0.01]表达上升,干扰素-γ(INF-γ)表达下降[(48.46±3.81)pg/mL比(84.76±2.91)pg/mL,P<0.01]。与哮喘模型组比较,灯盏花素组小鼠BALF炎性细胞总数[(52.10±7.59)×10^(4)/mL比(68.32±7.25)×10^(4)/mL,P<0.05]、中性粒细胞数[(4.21±0.54)×10^(4)/mL比(5.50±0.58)×10^(4)/mL,P<0.05]、巨噬细胞数[(3.61±0.28)×10^(4)/mL比(13.02±1.04)×10^(4)/mL,P<0.01]、淋巴细胞数[(9.52±1.23)×10^(4)/mL比(23.07±2.90)×10^(4)/mL,P<0.01]、嗜酸性粒细胞数[(8.87±1.33)×10^(4)/mL比(22.13±2.21)×10^(4)/mL,P<0.01]降低;肺组织炎性细胞浸润水平[(1.46±0.15)分比(2.49±0.25)分,P<0.01]及PAS评分降低[(0.58±0.07)分比(2.24±0.16)分,P<0.01];血清IgE[(1.83±0.14)IU/mL比(3.52±0.32)IU/mL,P<0.01]及BALF中IL-5[(78.25±4.44)pg/mL比(154.48±9.27)pg/mL,P<0.01]、IL-13[(59.34±5.32)pg/mL比(96.86±6.45)pg/mL,P<0.01]、IL-17[(125.60±5.88)pg/mL比(185.24±7.24)pg/mL,P<0.01]表达下降,INF-γ[(65.48±4.49)pg/mL比(48.46±3.81)pg/mL,P<0.05]表达上升。与对照组比较,哮喘模型组小鼠肺组织中NEAT1[(3.96±0.32)比(1.00±0.15),P<0.01]、SLC26A2相对表达上升[(3.91±0.32)比(1.00±0.08),P<0.01],miR-9-5p相对表达量显著下降[(0.48±0.07)比(1.00±0.09),P<0.01]。与哮喘模型组比较,灯盏花素组小鼠NEAT1[(1.82±0.28)比(3.96±0.32),P<0.01]、SLC26A2相对表达降低[(2.00±0.23)比(3.91±0.32),P<0.01],miR-9-5p相对表达增加[(0.67±0.06)比(0.48±0.07),P<0.05]。结论灯盏花素可能通过调节lncRNA NEAT1/miR-9-5p/SLC26A2轴抑制哮喘小鼠的气道炎症。

长链非编码RNA NEAT1、miRNA-182-5p与2型糖尿病合并代谢性脂肪性肝病患者肝纤维化风险的相关性研究

背景随着慢性代谢性疾病的发病率逐年增加,已威胁全民健康,目前非编码RNA与内分泌代谢相关疾病的研究已成为国内外研究热点,其中长链非编码RNA核富集转录体(lncRNA NEAT1)及微小RNA(miRNA)-182-5p在2型糖尿病(T2DM)合并代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)中的研究鲜有报道。目的探讨T2DM合并MAFLD患者lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p在肝纤维化发生、发展中的机制及临床意义。方法纳入2021年10月—2022年6月在内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院内分泌科就诊的T2DM患者236例为研究对象,同时纳入49名健康志愿者为健康对照组。收集研究对象一般资料与实验室检测结果。测定内脏脂肪面积(VFA)、皮下脂肪面积(SFA)。采集外周血,测定lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p。将T2DM患者其分为T2DM合并非MAFLD组(n=82)与T2DM合并MAFLD组(n=154)。进一步根据肝纤维化指数(FIB-4)将T2DM合并MAFLD组分为肝纤维化低危亚组(n=55)、肝纤维化中危亚组(n=69)、肝纤维化高危亚组(n=30)。采用Spearman秩相关分析探究肝纤维化高危亚组lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p表达水平的相关性,采用多因素有序Logistic回归分析探究T2DM合并MAFLD患者肝纤维化风险的影响因素。结果健康对照组年龄、颈围(NC)、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)低于T2DM合并MAFLD组、T2DM合并非MAFLD组,白蛋白(Alb)高于T2DM合并MAFLD组、T2DM合并非MAFLD组(P<0.05);T2DM合并MAFLD组BMI、腰围(WC)、VFA、SFA、稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、三酰甘油(TG)、血尿酸(SUA)、lncRNA NEAT1高于健康对照组、T2DM合并非MAFLD组,血小板计数(PLT)低于健康对照组、T2DM合并非MAFLD组,总胆固醇(TC)低于健康对照组(P<0.05);T2DM合并非MAFLD组HOMA-IR、lncRNA NEAT1高于健康对照组,miRNA-182-5p高于健康对照组、T2DM合并MAFLD组,丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)低于健康对照组、T2DM合并MAFLD组(P<0.05)。肝纤维化低危亚组VFA、SFA、AST、lncRNA NEAT1低于肝纤维化中危亚组、肝纤维化高危亚组,PLT、miRNA-182-5p高于肝纤维化中危亚组、肝纤维化高危亚组,BMI、WC、NC低于肝纤维化高危亚组,TC高于肝纤维化高危亚组(P<0.05);肝纤维化中危亚组PLT、miRNA-182-5p高于肝纤维化高危亚组,AST、lncRNA NEAT1低于肝纤维化高危亚组(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示,肝纤维化高危亚组患者lncRNA NEAT1与miRNA-182-5p呈负相关(r_(s)=-0.438,P<0.05)。多因素有序Logistic回归分析结果显示,lncRNA NEAT1(OR=1.326,95%CI=1.087~1.616)、VFA(OR=1.019,95%CI=1.006~1.033)、miRNA-182-5p(OR=0.083,95%CI=0.027~0.257)、PLT(OR=0.956,95%CI=0.942~0.970)、AST(OR=1.048,95%CI=1.022~1.075)是T2DM合并MAFLD患者肝纤维化风险的影响因素。结论外周血lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p与T2DM合并MAFLD患者并发肝纤维化密切相关,为该病的早期预测及诊治提供依据。

外周血TNF-α/NF-κB/NEAT1信号通路与颞下颌关节紊乱患者慢性疼痛的关系

目的探讨外周血肿瘤坏死因子α(TNF-α)/核因子-κB(NF-κB)/长链非编码RNA(lncRNA)核富含丰富的转录本1(NEAT1)信号通路与颞下颌关节紊乱(TMD)患者慢性疼痛的关系。方法回顾性分析,选取2022年10月至2023年10月在解放军陆军第七十三集团军医院口腔科接受治疗的82例TMD患者作为研究组,其中男35例、女47例,年龄(33.69±9.84)岁,根据患者疼痛程度分为轻度疼痛(36例)、中度疼痛(27例)、重度疼痛(19例)。对比不同疼痛程度TMD患者外周血TNF-αmRNA、NF-κB mRNA、NEAT1 mRNA水平,Pearson分析外周血TNF-αmRNA、NF-κB mRNA、NEAT1 mRNA水平与视觉模拟评分法(VAS)评分的相关性。另选取同期口腔科健康体检者51例作为对照组,其中男29例、女22例,年龄(34.25±7.14)岁。对比两组基线资料及外周血TNF-αmRNA、NF-κB mRNA、NEAT1 mRNA水平,并通过多因素logistic回归分析外周血TNF-αmRNA、NF-κB mRNA、NEAT1 mRNA水平与TMD的关系。统计学方法采用t检验、χ^(2)检验及方差分析。结果重度疼痛患者TNF-αmRNA、NF-κB mRNA、NEAT1 mRNA水平均高于中度疼痛、轻度疼痛患者[(0.93±0.11)比(0.76±0.14)比(0.61±0.16)、(0.88±0.12)比(0.64±0.17)比(0.53±0.15)、(3.14±0.57)比(2.63±0.66)比(1.96±0.59)],差异均有统计学意义(F=31.672、33.514、24.976,均P<0.05)。Pearson相关分析显示,TNF-αmRNA、NF-κB mRNA、NEAT1 mRNA水平与VAS评分均呈正相关(r=0.273、0.260、0.245,均P<0.05)。研究组心理问题、睡眠质量占比及TNF-αmRNA、NF-κB mRNA、NEAT1 mRNA水平均高于对照组[47.56%(39/82)比21.57%(11/51)、69.51%(57/82)比39.22%(20/51)、(0.73±0.14)比(0.36±0.08)、(0.65±0.15)比(0.28±0.07)、(2.45±0.61)比(1.17±0.18)],差异均有统计学意义(χ^(2)=9.055、11.840,t=17.193、16.515、14.578;均P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,心理问题、睡眠质量、TNF-αmRNA、NF-κB mRNA、NEAT1 mRNA水平均与TMD有关(均P<0.05)。结论外周血TNF-α/NF-κB/NEAT1信号通路与TMD患者疼痛程度呈正相关,且TNF-α/NF-κB/NEAT1信号通路可能参与TMD的发生与发展。

LncRNA-NEAT1通过调控miR-129-5p/HMGB1轴诱导的肝细胞焦亡在急性肝损伤中的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA核富集转录本1(LncRNA-NEAT1)通过调控miR-129-5p/高迁移率族蛋白1(HMGB1)轴诱导的肝细胞焦亡在急性肝损伤中的作用机制。方法 运用人肝细胞株L02,通过四氯化碳建立肝细胞损伤模型,检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平评估肝细胞损伤程度,采用CCK-8方法检测细胞增殖活性,检测白细胞介素(IL)-1β和IL-18评估细胞焦亡程度,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测LncRNA-NEAT1和miR-129-5p mRNA的表达水平;干扰NEAT1表达,用四氯化碳处理细胞,检测对照组和处理组细胞中ALT、AST、IL-1β、IL-18水平,采用RT-PCR检测LncRNA-NEAT1和miR-129-5p mRNA的表达水平;干扰NEAT1表达后,转染miR129-5p mimics,用四氯化碳处理细胞,检测对照组和处理组细胞中ALT、AST、IL-1β、IL-18水平,采用RT-PCR检测LncRNA-NEAT1和miR-129-5p mRNA的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验分别验证NEAT1与miR-129-5p、miR-129-5p与HMGB1的关系。结果 四氯化碳处理细胞后,肝细胞中ALT和AST水平显著增加,IL-1β和IL-18表达水平升高,细胞活性下降,NEAT1表达升高,miR-129-5p表达抑制,差异均有统计学意义(P<0.05);干扰NEAT1后,肝细胞中ALT、AST、IL-1β、IL-18水平下降,miR-129-5p表达显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);干扰NEAT1再转染miR-129-5p mimic后,抑制了肝细胞中ALT、AST、IL-1β、IL-18水平,减弱了NEAT1表达,增加了miR-129-5p表达,差异均有统计学意义(P<0.05);NEAT1靶向调控miR-129-5p表达,miR-129-5p靶向作用于HMGB1。结论 干扰NEAT1可能靶向调控miR-129-5p/HMGB1轴抑制在四氯化碳诱导的急性肝损伤中肝细胞的焦亡。

外周血lncRNA NEAT1在恶性肿瘤诊断中的研究进展

核富集转录本1(NEAT1)是一种长链非编码RNA(lncRNA),在多种类型肿瘤中表达水平上调。LncRNA NEAT1不仅参与调控肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,还与肿瘤分期、转移复发和不良预后有关。外周血lncRNA NEAT1在肿瘤诊断中也显示出独特的价值。该文对近年来关于外周血lncRNA NEAT1作为恶性肿瘤诊断标志物的研究进展进行综述。

CRISPR/dCas9-KRAB系统沉默猪LncRNA-NEAT1基因

本研究利用RT-PCR检测LncRNA-NEAT1基因表达在细胞中的亚定位,采用5′RACE获得LncRNA-NEAT1基因的转录起始位点;利用CRISPOR软件对-300~0 bp区域的LncRNA-NEAT1启动子序列设计sgRNA并构建到px330载体,通过转染细胞与T7E1酶切验证sgRNA效率;利用酶切和亚克隆方法将dCas9-KRAB-BSD片段替换px330载体的Cas9序列,形成重组px330-dCas9-KRAB载体;将验证有效的sgRNA构建到px330-dCas9-KRAB载体,形成px330-sgRNA-dCas9-KRAB载体。添加不同质量浓度的Blasticidin S处理细胞,以最小致死质量浓度来确定筛选质量浓度。转染px330-sgRNA-dCas9-KRAB载体并用Blasticidin S筛选细胞7 d后进行LncRNA-NEAT1基因的表达检测,同时对sgRNA在LncRNA-NEAT1基因启动子上的结合位点进行Sanger测序,以进一步验证上述结合位点是否发生切割。结果显示LncRNA-NEAT1主要表达于细胞核,而在细胞质中几乎不表达。5′RACE获得了LncRNA-NEAT15′端大约270 bp的序列。qPCR检测结果显示,与对照组相比,sgRNA1和sgRNA2能够显著抑制LncRNA-NEAT1的表达(P<0.05)。Sanger测序结果表明sgRNA1和sgRNA2所在的位点并没有发生碱基缺失和插入。研究结果为后续进一步研究LncRNA-NEAT1在先天性免疫反应中的功能奠定了基础。

脑性瘫痪儿童循环lncRNA NEAT1水平在语言认知康复训练疗效中的评估价值

目的探讨lncRNA NEAT1在脑性瘫痪中的临床意义及其对语言认知康复训练疗效的评估价值。方法研究纳入63例脑性瘫痪儿童及50例健康儿童为对照组。通过实时定量PCR分析患儿及对照组儿童血清中lncRNA NEAT1的表达水平,运用ROC分析评估其对脑性瘫痪的诊断价值。对脑性瘫痪儿童施以语言认知康复训练,通过患儿训练前后定向能力、记忆力、注意力、语言功能、运动发育及智力发育变化评估语言认知康复训练的疗效。并通过χ^(2)检验评估lncRNA NEAT1对语言认知康复训练疗效的评估价值。结果脑性瘫痪患儿血清中lncRNA NEAT1的表达水平显著低于对照组儿童血清中的lncRNA NEAT1水平(P<0.001),且对脑性瘫痪具有显著的诊断价值(AUC=0.867)。语言认知康复训练显著提高了患儿的定向能力、记忆力、注意力、语言功能及运动与智力发育(P<0.05),且康复训练后患儿血清中lncRNA NEAT1表达水平显著升高(P<0.01)。lncRNA NEAT1升高的表达水平与患儿康复训练后提高的定向能力、记忆力、注意力、语言功能及运动与智力发育密切相关(P<0.05)。结论lncRNA NEAT1可作为脑性瘫痪的早期诊断生物标志物,且可有效评估语言认知康复训练疗效。

LncRNA NEAT1调控miR-22-3p对脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞生物学活性影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)核富集转录本1(nuclear-enriched abundant transcript 1,Neat1)调控微小RNA miR-22-3p对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)生物学活性的影响。方法取对数生长期的HGFs细胞分为对照组、LPS组、si-NC组、si-Neat1组、si-Neat1+inhibitor NC组、si-Neat1+miR-22-3p inhibitor组。RT-qPCR检测Neat1、miR-22-3p表达水平;双荧光素酶验证Neat1、miR-22-3p的靶向关系;流式细胞仪、CCK-8、ELISA法分别检测细胞凋亡、细胞活力及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;蛋白质印迹检测Caspase-3、磷酸化核转录因子-κB(phosphorylated nuclear factor-κB,p-NF-κB)P65/NF-κB P65水平。结果与对照组比较,LPS组细胞活力、miR-22-3p表达显著降低,TNF-α、IL-1β、细胞凋亡率、p-NF-κB P65/NF-κB P65、Neat1、Caspase-3表达显著增加(P<0.05);与LPS组、si-NC组比较,si-Neat1组细胞活力、miR-22-3p表达显著增加,TNF-α、IL-1β、细胞凋亡率、p-NF-κB P65/NF-κB P65、Neat1、Caspase-3表达显著降低(P<0.05);下调miR-22-3p表达逆转了沉默Neat1对LPS诱导HGFs生物学活性的影响(P<0.05)。结论沉默Neat1可以抑制LPS诱导HGFs的细胞凋亡、炎症反应,可能与上调miR-22-3p表达有关。

lncRNA NEAT1/SFPQ/RUNX2轴研究P-15对软骨损伤的保护作用

目的探究P-15对人骨关节炎软骨细胞(HC-OA)的保护作用及与lncRNA NEAT1/SFPQ/RUNX2轴的关系。方法分离HC-OA胞核、胞质RNA,RT-qPCR检测lncRNA NEAT1在细胞中的分布;P-15处理HC-OA细胞,转染siRNA NC和siRNA SFPQ后,RT-qPCR检测lncRNA NEAT1表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测RUNX2、SFPQ、Beclin-1、LC3B和P62表达水平。结果lncRNA NEAT1同时存在于HC-OA胞质和胞核,且更多分布于细胞核;P-15可降低胞内lncRNA NEAT1水平(P<0.05),抑制骨关节炎软骨细胞凋亡(P<0.05);P-15可通过调控lncRNA NEAT1/SFPQ/RUNX2轴上调SFPQ表达和抑制RUNX2表达(P<0.01);P-15调控lncRNA NEAT1/SFPQ/RUNX2轴促进软骨细胞发生自噬(P<0.05)。结论P-15可调控lncRNA NEAT1/SFPQ/RUNX2轴抑制HC-OA凋亡并促进自噬,保护软骨细胞免受损伤。

LncRNA NEAT1通过调节miR-506-5p/CFL2轴对人胃癌细胞增殖凋亡和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA核富集转录子1(lncRNA NEAT1),对miR-506-5p/丝切蛋白2(CFL2)轴的调控作用,及其对人胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭等生物学行为的影响。方法:体外培养BGC-823细胞,将lncRNA NEAT1低表达载体(si-NEAT1)及miR-506-5p抑制物(miR-506-5p inhibitor)转染至BGC-823细胞,分为si-NC组、si-NEAT1组、inhibitor NC组、miR-506-5p inhibitor组、si-NEAT1+inhibitor NC组、si-NEAT1+miR-506-5p inhibitor组。RT-qPCR检测lncRNA NEAT1及miR-506-5p表达以判定转染效率;CCK-8法检测增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;Transwell小室法检测侵袭;Western blot检测CFL2、细胞周期素依赖激酶4(CDK4)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA NEAT1、CFL2与miR-506-5p的靶向关系;裸鼠荷瘤试验进一步验证lncRNA NEAT1、miR-506-5p、CFL2三者之间的靶向调控作用。结果:与si-NC组相比,si-NEAT1组细胞增殖、侵袭能力、CFL2表达降低,凋亡率、miR-506-5p表达升高(P<0.05)。与inhibitor NC组相比,miR-506-5p inhibitor组细胞增殖、侵袭能力、CFL2表达增加,凋亡率、miR-506-5p表达降低(P<0.05)。LncRNA NEAT1可靶向调节miR-506-5p表达,CFL2是miR-506-5p的靶基因。敲低miR-506-5p可减弱lncRNA NEAT1低表达发挥的抗增殖、抗侵袭、促凋亡作用(P<0.05)。miR-506-5p inhibitor可减弱lncRNA NEAT1低表达发挥的抗移植瘤增长作用(P<0.05);过表达CFL2可减弱miR-506-5p过表达的抗移植瘤增长作用(P<0.05)。结论:LncRNA NEAT1可通过靶向调控miR-506-5p/CFL2轴,来影响人胃癌细胞的增殖、侵袭、凋亡等生物学行为。

LncRNA NEAT1通过靶向miR-103a-3p/SDF2轴调节滋养层细胞增殖、凋亡和侵袭

目的:探讨lncRNA NEAT1在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达及对滋养层细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法:qRT-PCR检测lncRNA NEAT1在PE患者胎盘组织中的表达,将人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo随机分为对照(control)组、pcDNA-NC组、pcDNA-NEAT1组、si-NC组、si-NEAT1组、si-NEAT1+inhibitor NC组、si-NEAT1+miR-103a-3p inhibitor组,分别检测各组HTR-8/SVneo细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,Western blot检测SDF2蛋白表达。双荧光素酶报告基因验证LncRNA NEAT1、SDF2与miR-103a-3p的靶向关系。结果:LncRNA NEAT1在PE患者胎盘组织中表达水平升高。与pcDNA-NC组比较,pcDNA-NEAT1组lncRNA NEAT1表达、SDF2蛋白表达、细胞凋亡率显著升高,miR-103a-3p表达及细胞增殖活性、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-NEAT1组lncRNA NEAT1表达、SDF2蛋白表达、细胞凋亡率显著降低,miR-103a-3p表达及细胞增殖活性、迁移和侵袭能力显著升高(P<0.05)。下调miR-103a-3p表达可明显减弱沉默lncRNA NEAT1表达对HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移与侵袭的促进作用,并增加细胞凋亡(P<0.05)。双荧光素酶检测结果显示,lncRNA NEAT1、SDF2与miR-103a-3p有靶向关系。结论:LncRNA NEAT1在PE胎盘组织中高表达,沉默lncRNA NEAT1表达可通过上调miR-103a-3p,抑制SDF2表达,促进滋养层细胞增殖与侵袭。