NEDD4基因多态性rs2271289与中国汉族人瘢痕疙瘩表型的相关性研究

目的探讨NEDD4基因多态性rs2271289与汉族人瘢痕疙瘩相关临床表型的相关性。方法结合课题组前期瘢痕疙瘩关联分析数据,选取309例瘢痕疙瘩患者1 080例正常对照者的NEDD4基因多态性rs2271289基因分型资料,PLINK 1.07软件对选取数据资料进行分析。结果在瘢痕疙瘩患者和正常对照者比较显示NEDD4基因多态性rs2271289基因频率存在差异有统计学意义(OR=1.62,95%CI:1.24~2.10,P=3.28E-04);通过分层分析显示严重瘢痕疙瘩患者与正常对照者等位基因频率分布差异有统计学意义(P<0.05),多发患者等位基因频率分布差异有统计学意义(P<0.05),但家族史阳性患者和阴性患者差异无统计学意义。结论 NEDD4基因多态性rs2271289与汉族人瘢痕疙瘩发病易感性相关,此外与瘢痕疙瘩发病严重程度相关,与家族史无关。

Ndfip2表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探究Nedd4家族交互作用蛋白2(Ndfip2)对人肝癌细胞SMMC-7721和HepG2增殖和凋亡能力的影响。方法选择正常肝细胞LO2、肝癌细胞SMMC-7721和HepG2进行培养,采用蛋白印迹法检测3组细胞中的Ndfip2的蛋白表达;对培养的SMMC-7721和HepG2细胞转染靶向Ndfip2小干扰RNA(siRNA)构建Ndfip2基因沉默组(si-Ndifip2组),转染无义siRNA序列构建阴性对照组(NC组),采用蛋白印迹检测两组细胞的转染效率,CCK-8、平板克隆形成和流式细胞术检测两组细胞的增殖率和凋亡率,蛋白免疫印迹检测相关细胞内磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(Ser473)[p-Akt(S473)]、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl2关联X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)的蛋白表达。结果与正常肝细胞LO2组比较,肝癌细胞SMMC-7721组和HepG2组中Ndfip2表达升高(P<0.05);与NC组比较,si-Ndfip2组SMMC-7721和HepG2细胞Ndfip2蛋白表达明显下调(P<0.01);与NC组相比,si-Ndifip2组肝癌细胞的增殖速率明显降低(P<0.01),凋亡率增加(P<0.05);si-Ndifip2组肝癌细胞中PI3K、p-Akt(S473)和Bcl2的蛋白表达水平均下降(P<0.05);而PTEN、E-cadherin、Caspase-3和Bax蛋白的表达则增加(P<0.05)。结论沉默Ndfip2抑制肝癌细胞的增殖能力,促进肝癌细胞凋亡,其可能机制与PTEN-PI3K/Akt信号通路的失活有关。

利用CRISPR/Cas9技术构建Nedd4基因敲除BMDM巨噬细胞系

目的利用CRISPR/Cas9技术构建Nedd4基因敲除骨髓衍生巨噬细胞系(BMDM),为研究Nedd4在巨噬细胞中的作用和机制奠定基础。方法利用在线软件筛选了评分较高的3个针对Nedd4基因的单向导RNA(sgRNA),然后将合成的sgRNA序列插入到PX330质粒中;将重组质粒转入BMDM细胞,通过有限稀释法获取单克隆,采用Western印迹检测单克隆细胞中NEDD4蛋白水平;通过序列测定确认单克隆细胞的DNA序列。结果通过Western印迹检测获取1株NEDD4蛋白缺失的BMDM细胞;测序结果表明该细胞系中Nedd4基因发生了16bp的缺失突变。结论利用CRISPR/Cas9技术构建的Nedd4敲除BMDM细胞系将成为研究Nedd4在巨噬细胞中的功能和机制的有力工具。

NEDD4基因单核苷酸多态性与精神分裂症及其临床特征的相关性

目的 探讨神经前体细胞表达发育进行性下调基因4 （neural precursor cell expressed developmentally down-regulated 4,NEDD45个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）位点与精神分裂症及其临床症状的相关性.方法 通过TaqMan探针法对464例精神分裂症患者及487名正常对照的SNPs位点进行基因分型;使用自制的一般资料调查表收集一般人口学资料,以阳性与阴性症状量表评定精神分裂症患者的精神病性症状特点及其严重程度.结果 病例组及对照组在rs3088077（等位基因：x2=18.024,P=0.000;基因型：x2=16.634,P=0.000）、rs7162435（等位基因：x2=6.771,P=0.009;基因型：x2=7.352,P=0.025）及rs2303579（等位基因：x2=11.253,P=0.001;基因型：x2=12.248,P=0.002）3个SNPs位点的等位基因频率及基因型频率分布的差异均有统计学意义;rs7162435的TT基因型在阳性与阴性症状量表中的兴奋敌对因子得分（14.53±3.925）明显升高,且与其他两种基因型的得分均值相比差异有统计学意义（F=3.551,P=0.029）.结论 NEDD4基因的单核苷酸多态性位点rs3088077、rs7162435及rs2303579与精神分裂症的发生可能存在相关性,且rs7162435的TT基因型可能增加冲动伤人的风险.结果提示泛素化过程可能对精神分裂症的发病存在影响.