腺病毒介导的NELL1基因对小鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的探讨重组腺病毒(Ad-GFP-NELL1)介导的NELL1因子对小鼠成骨细胞(MC3T3E1)增殖、分化及OCN(骨钙素)和OPN(骨桥蛋白)基因表达的影响。方法免疫荧光染色鉴定重组腺病毒(Ad-GFP-NELL1)转染细胞后绿色荧光蛋白(GFP)及NELL1的表达;不同转染滴度Ad-GFP-NELL1转染MC3T3E1细胞,荧光显微镜下观察转染效果;将MC3T3E1细胞分为对照组,NELL1组(Ad-GFP-NELL1转染)和GFP组(Ad-GFP转染),利用CCK-8试剂盒检测并绘制生长曲线;观察和计量茜素红染色后钙结节数目;定量PCR检测成骨相关基因OCN,OPN表达的改变。结果免疫荧光显示Ad-GFP-NELL1转染大鼠骨髓基质干细胞72h后能同时表达NELL1和GFP;在最佳转染滴度200pfu/cell转染条件下,Ad-GFP-NELL1及Ad-GFP对MC3T3E1细胞增殖没有明显影响(P>0.05)。NELL1组细胞钙结节数目(7±2)比空白对照组(2±1)及Ad-GFP组(2±1)明显增多(P<0.05),OCN(3.7倍),OPN(5.1倍)的表达也明显上升。结论 Ad-GFP-NELL1转染MC3T3E1细胞后能有效促进细胞的成骨分化作用,且对其增殖无明显毒性作用。

NELL1和FMO3基因mRNA在绵羊肝脏与脂肪组织中的表达

旨在探究不同营养水平及不同生长阶段脂尾型绵羊NELL1和FMO3基因mRNA的组织特异性表达模式。选择健康、体质量相近的9月龄滩羊、同羊、哈萨克羊和西藏羊(羯羊)各3只,活体采集尾部脂肪样品。选择健康4月龄滩羊112只随机分为4组,公母各半,每组4个重复,每个重复7只羊。根据体质量增加目标分为3个阶段:22~28kg,28~35kg,35~40kg,每个阶段各组分别饲喂不同营养水平的日粮。每个生长阶段结束时采集肝脏、肾周脂肪、尾脂、皮下脂肪的组织样品,提取样品总RNA,采用实时荧光定量PCR的方法分析NELL1和FMO3 mRNA的表达差异。结果表明,FMO3 mRNA在哈萨克羊尾脂中的表达量最高,在同羊、滩羊、西藏羊尾脂中依次下降,且差异显著;NELL1 mRNA在西藏羊尾脂中的表达量最高,在滩羊、同羊、哈萨克羊中的表达量依次下降;营养水平和月龄对尾脂和肝脏中NELL1和FMO3 mRNA的表达水平有显著影响,而对皮下脂肪和肾周脂肪中NELL1和FMO3 mRNA的表达影响不显著。表明FMO3mRNA的表达水平与脂肪沉积呈正相关,而NELL1 mRNA的表达水平与脂肪沉积呈负相关;NELL1与FMO3对绵羊尾脂和肝脏中的脂肪沉积起调控作用,为进一步揭示脂尾型绵羊体内脂肪沉积的调控机制提供理论基础。

腺病毒介导NELL1促进骨溶解后的高质量骨再生

[目的]研究具有特异性成骨作用的NELL1因子对磨屑所致骨溶解的影响,为骨溶解病的治疗提供一种新方案。[方法]建立聚乙烯(Polyethylene,PE)颗粒诱导的颅骨骨溶解模型,68只Balb/c小鼠随机分成4组,即假手术组:术后1 d颅顶皮下注射0.1 ml生理盐水;颗粒对照组:植入10 mg PE颗粒,术后1 d注射0.1 ml生理盐水;实验组(Ad-GFP-NELL1组):植入10 mg PE颗粒,术后1 d注射0.1 ml(109 pfu)NELL1荧光重组腺病毒载体(Ad-GFP-NELL1);安慰剂组(Ad-GFP组):植入10 mg PE颗粒,术后1 d注射0.1 ml(109pfu)荧光重组腺病毒载体(Ad-GFP)。术后10 d采用活体荧光成像检测NELL1及GFP表达情况,并于处死后进行Micro-CT、组织学及生物力学的检测。[结果]活体荧光证实实验组与安慰剂组小鼠颅顶有NELL1及GFP的高度表达,Micro-CT 3D图像观察实验组小鼠的颅骨骨溶解所致骨量丢失明显减少,所选兴趣区(ROI)的骨体积(BV)、骨密度(BMD)、骨小梁厚度(Tb.Th.3D)、骨表面积体积比(BS/BV)均明显优于对照组及安慰剂组。组织学切片观察到实验组的骨再生明显增多。另外,实验组小鼠的颅骨弹性模量[(2.50±0.12)MPa]也明显优于对照组[(0.60±0.20)MPa]及安慰剂组[(0.82±0.09)MPa](OP<0.01)。[结论]腺病毒介导表达的成骨因子NELL1能通过促进高质量的骨再生平衡磨屑所致骨溶解的骨量丢失,是治疗骨溶解的一种潜在性解决方案。

脂质体介导NELL1基因对脂肪干细胞影响的体外研究

目的研究Nel样分子I型(nel-like typeⅠmolecular,NELL1)对大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖和分化的影响。方法分离培养大鼠ADSCs并进行传代;在成骨诱导条件下,以脂质体为载体,分别搭载NELL1质粒和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)质粒作为实验组和对照组,转染第三代ADSCs;通过MTT、RT-q PCR、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性以及茜素红染色方法检测细胞增殖和分化能力;采用单因素方差分析进行统计学运算。结果实验组与对照组对比,细胞数量差异无统计学意义(P>0.05),ALP活性及钙结节形成量实验组明显高于对照组。第3d和第7d时,实验组成骨相关基因Runx2、ColⅠ、ALP表达增加(P<0.01),14d时ColⅠm RNA表达增加(P<0.05)。结论 NELL1对ADSCs增殖无明显影响,促进其向成骨细胞分化。

NELL-1:高效特异的新型生长因子

骨与其他组织的再生往往需要种子细胞、支架材料和相关生长因子三方面的参与,而生长因子作为维持微环境的重要组成部分,对于组织再生起着重要作用。人类尼尔样-1型分子（Nel-like molecule-1,NELL-1）基因位于第11号染色体p15.1-p15.2,