辣木叶通过NF-κB 通路介导血管性痴呆小鼠mTOR、Cdc42的表达对学习记忆功能及海马神经元的保护机制

目的 探究辣木叶通过核因子(NF)-κB信号通路介导血管性痴呆(VD)小鼠海马区哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、细胞分裂周期蛋白(Cdc)42表达调控氧化应激状态对学习记忆功能的影响及海马神经元的保护机制。方法 通过Himori法制备VD小鼠模型,120只VD模型小鼠随机分为VD组,辣木叶低、中、高剂量(100、200、400 mg/kg)组,每组30只。30只健康BALB/c小鼠作为对照组。水迷宫实验分析学习记忆功能。比较各组海马体损伤、氧化应激指标、NF-κB信号通路及mTOR、Cdc42水平。结果 VD组目标象限停留时间、穿越平台次数、超氧化物歧化酶(SOD)水平、mTOR、Cdc42 mRNA和蛋白水平显著低于对照组,而海马组织损伤及海马组织中丙二醛(MDA)、核因子-κB上游激酶(IKK)、NF-κB mRNA和蛋白水平显著高于对照组(P<0.05)。辣木叶提取液干预后,目标象限停留时间、穿越平台次数、SOD水平、mTOR、Cdc42 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05),其中辣木叶高剂量>辣木叶中剂量>辣木叶低剂量组(P<0.05);海马组织损伤及海马组织中MDA、IKK、NF-κB mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05),其中辣木叶高剂量<辣木叶中剂量<辣木叶低剂量组(P<0.05)。结论 辣木叶可能通过调控VD小鼠氧化应激状态,抑制NF-κB通路,引起海马中mTOR、Cdc42表达增加,进而减少细胞凋亡数,保护受损神经元细胞,从而改善学习记忆功能。

银杏总黄酮通过ERK/NF-κB信号通路对兔蛛网膜下腔出血后血管痉挛的影响

目的 探究银杏总黄酮通过细胞外调节蛋白激(ERK)/核因子(NF)-κB信号通路对兔蛛网膜下腔出血(SAH)后血管痉挛的影响。方法 雄性家兔随机分为假手术组、模型组、银杏总黄酮(156 mg/kg)组、3,4,5,4′-四甲氧基二苯乙烯(DMU-212,ERK激活剂,18 mg/kg)组、银杏总黄酮(156 mg/kg)+DMU-212(18 mg/kg)组,每组6只,模型组和用药组兔建立SAH模型。分组处理后,检测各组神经功能并进行评分;尼氏染色检测各组大脑海马神经元形态变化;苏木素-伊红(HE)染色检测各组大脑基底动脉痉挛情况,比较各组管壁厚度及管腔横截面积;测定各组基底动脉血流速度和脑组织氧化应激因子[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)-Px、丙二醛(MDA)];Western印迹法检测各组脑组织ERK/NF-κB通路相关蛋白p-ERK/ERK、核内NF-κB p65蛋白表达水平。结论 与假手术组相比,模型组大脑海马神经元出现明显损伤,基底动脉表现出严重的痉挛现象,管壁厚度、神经功能评分、血流速度、MDA水平、p-ERK/ERK、核内NF-κB p65表达明显升高,管腔横截面积、SOD和GSH-Px水平明显降低(P<0.05)。与模型组、银杏总黄酮+DMU-212组相比,银杏总黄酮组大脑海马神经元损伤和基底动脉痉挛明显减轻,管壁厚度、神经功能评分、血流速度、MDA水平、p-ERK/ERK、核内NF-κB p65表达明显降低,管腔横截面积、SOD和GSH-Px水平明显升高(P<0.05);DMU-212组大脑海马神经元损伤和基底动脉痉挛明显加重,管壁厚度、神经功能评分、血流速度、MDA水平、p-ERK/ERK、核内NF-κB p65表达明显升高,管腔横截面积、SOD和GSH-Px水平明显降低(P<0.05)。结论 银杏总黄酮通过抑制ERK/NF-κB信号通路激活,降低氧化应激水平,减轻海马神经元损伤,进而改善兔SAH后血管痉挛症状,保护神经功能。

基于TLR4/NF-κB信号通路探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠肠组织损伤及肠道菌群的影响

目的 探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠脑组织Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路及肠组织损伤、肠道菌群的影响。方法 将50只大鼠建立缺血性脑卒中模型,随机分为低(7.16g/kg)、中(14.33 g/kg)、高(28.66 g/kg)剂量双路通脑方组和模型(M)组,并设假手术(S)组,每组10只。制作模型前30 min予以相应剂量双路通脑方颗粒溶液灌胃,在大鼠成模清醒后1 h给予该颗粒灌胃,连续6 d,每天2次。M组和S组同步灌胃无菌水。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测量脑梗死体积;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、干扰素(INF)-γ水平;Western印迹检测脑TLR4/NF-κB通路蛋白及结肠密封蛋白(Occludin)、闭合蛋白(Claudin)-1、紧密连接蛋白(ZO)-1蛋白表达;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织结构变化;16 S rDNA扩增测序法分析肠道菌群构成。结果 M组脑梗死比例较S组显著增加(P<0.05);中、高剂量双路通脑方组脑梗死比例较M组显著降低(P<0.05),且高剂量双路通脑方组最低,后续以高剂量28.66 g/kg进行研究。与S组相比,M组结肠黏膜结构损伤,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、髓样细胞分化因子(MyD)88蛋白及p-核因子κB抑制蛋白(IκB)/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平显著较高,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较低(均P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可改善结肠黏膜结构,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、MyD88蛋白及p-IκB/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平明显降低,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较高(P<0.05)。肠道菌群分析显示,与S组相比,M组菌群多样性和丰度降低,在门水平,M组厚壁菌门丰度和F/B值明显升高,而拟杆菌门明显降低(P<0.05);在属水平,M组瘤球菌属、拟杆菌属等丰度明显较高,双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度明显较低(P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可上调菌群多样性和丰度,明显提高拟杆菌门丰度,提高降低厚壁菌门丰度和F/B值,明显增加双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度,明显降低艾克曼菌属等丰度(均P<0.05)。结论 双路通脑方可重塑肠道菌群,恢复肠道屏障,并抑制脑TLR4/NF-κB通路活化,实现对缺血性脑卒中大鼠的治疗作用。

基于NF-κB信号通路探讨被动运动对膝关节骨关节炎大鼠关节软骨的保护作用

目的 观察被动运动对膝关节骨关节炎大鼠关节软骨的保护作用,并探索其作用机制。方法 SPF级SD大鼠30只随机分为空白对照组、模型组、被动运动组各10只。采用改良Hulth法建立膝骨关节炎大鼠模型,被动运动在术后第7天即开始进行,2次/d, 5 min/次,连续4 w。病理切片组织染色观察关节软骨的形态学变化。免疫组化检测各组关节软骨中白细胞介素(IL)-1β和基质金属蛋白酶(MMP)-13水平的含量变化,Western印迹和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测软骨组织中核转录因子(NF)-κB抑制蛋白(IκB)、NF-κB P65、IL-1β蛋白和相关基因mRNA的表达情况。结果 与空白对照组关节软骨相比,模型组关节软骨Mankin评分显著升高,IL-1β、MMP-13及NF-κB信号通路表达出现显著上调(P<0.01)。与模型组相比,给予被动运动治疗后,治疗组关节软骨Mankin评分显著降低,IL-1β、MMP-13及NF-κB信号通路表达显著下调(P<0.05)。结论 被动运动可以通过减轻炎症及软骨基质降解改善膝关节骨关节炎,其机制可能是通过抑制关节软骨中NF-κB信号通路的异常激活。

桑通颗粒对肺炎大鼠免疫调节、NF-κB表达水平的影响及肺组织的保护作用

目的探究桑通颗粒对肺炎大鼠免疫调节、核转录因子(NF)-κB表达水平的影响及肺组织的保护作用。方法选取健康大鼠60只,分为正常(A)组、模型(B)组、桑通颗粒低浓度(C)组、桑通颗粒中浓度(D)组、桑通颗粒高浓度(E)组、西药(F)组,10只/组。除A组外,其余均建立肺炎模型,A组与B组每日0.2 ml/10 g生理盐水灌胃,C、D、E组每日灌胃5、10、20g/kg桑通颗粒,F组给予20 mg/kg左氧氟沙星每日1次灌胃处理,均连续干预30 d。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α检测,流式细胞仪检测外周血CD4^(+)、CD8^(+)表达,苏木素-伊红(HE)染色观察病理形态,Western印迹与聚合酶链反应(PCR)分别检测核转录调节因子NF-κB、磷酸化NF-κB抑制因子蛋白(p-IKBα)、p65表达。结果与A组比较,B组IL-1β、IL-6、TNF-α显著升高(P<0.05);与B组比较,D组以上指标显著降低(P<0.05);与D组比较,E组以上指标显著降低(P<0.05);与E组比较,F组以上指标显著升高(P<0.05);B组与C组、D组与F组以上指标无统计学差异(P>0.05)。A组肺组织结构无损伤;B组、C组肺泡塌陷及间质水肿、充血、炎症浸润严重;D组、F组肺部仍伴随轻度增生及少量炎性浸润;E组水肿、炎性、管壁平滑肌及上皮细胞增生明显改善。与A组比较,B组CD4^(+)显著降低、CD8^(+)显著升高(P<0.05);与B组比较,D组CD4^(+)显著升高、CD8^(+)显著降低(P<0.05);与D组比较,E组CD4^(+)显著升高、CD8^(+)显著降低(P<0.05);与E组比较,F组CD4^(+)显著降低、CD8^(+)显著升高(P<0.05);其中B组与C组、D组与F组以上指标无统计学差异(P>0.05)。与A组比较,B组p-IKBα、NF-κB、p65 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05);与B组比较,D组以上指标显著降低(P<0.05);与D组比较,E组以上指标显著降低(P<0.05);与E组比较,F组以上指标显著升高(P<0.05);B组与C组、D组与F组以上指标无统计学差异(P>0.05)。结论桑通颗粒对肺炎大鼠具有一定治疗作用,可降低IL-1β、IL-6、TNF-α炎症水平,增加CD8^(+)、降低CD4^(+)而参与免疫调控,研究机制可能与抑制NF-κB、p-IKBα、p65表达相关性有关。

脑蛋白水解物联合长春西汀通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制

目的 探究脑蛋白水解物联合长春西汀通过Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88/核因子(NF)-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制。方法 选择102例重症高血压性脑出血患者随机分为两组各51例,对照组给予复方丹参液治疗,实验组给予脑蛋白水解物联合长春西汀治疗。于治疗前后分别检测患者临床指标变化、神经功能评分;检测血清氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)变化;检测血清内皮功能指标人内皮素(ET)-1,血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)变化;检测TLR4/MyD88信号通路、TLR4、MyD88和核因子(NF)-κB水平。结果 治疗前两组临床指标、神经功能评分、血清SOD、GSH-Px、MDA、ET-1、VEGF、NGF、TLR4、MyD88、NF-κB水平无显著差异(P>0.05);治疗后,与对照组相比,实验组临床相关指标、美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分降低,格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分和Barthel指数评分升高,SOD和GSH-Px水平升高,MDA、ET-1水平降低,VEGF和NGF水平升高,TLR4、MyD88、NF-κB水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 脑蛋白水解物联合长春西汀可改善重症高血压性脑出血患者神经功能,其机制与降低氧化损伤和TLR4/MyD88/核因子(NF)-κB信号通路的调控有关。

灵龟八法按时开穴灸对缺血性脑梗死大鼠脑组织MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的探究灵龟八法按时开穴灸对缺血性脑梗死大鼠脑组织损伤的影响及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子(NF)-κB信号通路的调控作用。方法60只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、灵龟八法按时开穴灸干预组(艾灸3壮组、艾灸6壮组、艾灸9壮组),除假手术组外,其余5组建立缺血性脑梗死大鼠模型。造模成功后,尼莫地平组灌胃12 mg/kg尼莫地平,灵龟八法按时开穴灸干预组于每日未时(13∶00~15∶00)分别进行开穴艾灸每穴3壮、6壮、9壮,其余组不做处理。实验结束后进行神经功能评分,检测血清中白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,观察海马组织病理改变和神经元凋亡情况,检测海马组织中磷酸化(p)-细胞外周调节蛋白激酶(ERK)、ERK、p-c-Jun氨基末端激酶(JNK)、JNK、p-p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、p38MAPK、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经元数量减少,排列紊乱,细胞变形,胞核固缩;大鼠神经功能评分、神经元凋亡率、血清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平、海马组织中p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK和p-NF-κB/NF-κB比值明显升高(P<0.05)。与模型组比较,尼莫地平组与灵龟八法按时开穴灸干预组海马组织损伤逐渐减轻,大鼠神经功能评分、神经元凋亡率明显降低(P<0.05);血清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平,海马组织中p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK和p-NF-κB/NF-κB比值明显降低(P<0.05)。与尼莫地平组比较,艾灸9壮组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论灵龟八法按时开穴灸可能通过抑制MAPK/NF-κB信号通路的表达,减轻炎症反应,改善神经元损伤,保护缺血性脑梗死大鼠神经功能。

基于ERK1/2-GSK3β-NFκB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响

目的 研究基于细胞外信号调节激酶(ERK)1/2-糖原合成酶激酶(GSK)3β-核因子(NF)κB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响。方法 40只SD大鼠随机抽取10只作为健康组进行对照,剩余建立慢性肾衰竭(CRF)模型,建模成功后分为模型组、治疗组(芪黄苁蓉通便散贴)、药物对照组(复元四红散)各10只。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肾功能、氧化应激相关指标水平,苏木素-伊红(HE)、Masson染色观察肾组织病理形态学,采集粪便检测肠道细菌种类及数量,Western印迹检测ERK1/2-GSK3β-NFκB通路相关蛋白。结果 与健康组相比,模型组尿素氮、血肌酐、尿酸、丙二醛、肠球菌、肠杆菌、ERK1/2、p-ERK1/2、GSK3β、p-GSK3β、NFκBp65、p-NFκBp65、单核细胞趋化蛋白-1、细胞间黏附分子-1升高,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、双歧杆菌、乳酸杆菌水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善,且以治疗组效果显著(P<0.05)。健康组肾组织结构正常;模型组肾小球变形,肾小管扩张,大量炎性细胞浸润;与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善。Masson染色显示,健康组结构正常;模型组出现肾组织肾小管发生变性、萎缩、破坏及再生等病理改变,间质中单核与淋巴细胞浸润及胶原纤维表达最多;治疗组与药物对照组肾小管、间质的病理改变得到有效改善,蓝色胶原纤维沉积也呈下降趋势。结论 芪黄苁蓉通便散贴可能是通过抑制ERK1-2-GSK3β-NF-κB通路的激活,改善CRF大鼠肠道菌群及肾功能。

复方黄柏液通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路逆转大鼠溃疡性结肠炎

目的探讨复方黄柏液逆转溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法免疫复合法建立溃疡性结肠炎大鼠模型,将50只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、复方黄柏液组,治疗14 d后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清及结肠黏膜白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,Western印迹检测大鼠结肠黏膜磷酸化核转录因子(NF)-κB、磷酸化磷酸肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达水平。结果复方黄柏液可有效抑制p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB蛋白的表达,通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路的异常激活减轻炎症反应。结论复方黄柏液能通过调节NF-κB介导PI3K/Akt信号通路逆转溃疡性结肠炎的炎性病变,化瘀解毒法是其起效关键。

基于NF-κB信号通路分析桔梗多糖对咳嗽变异性哮喘老龄大鼠的干预作用

目的研究基于核转录因子(NF)-κB信号通路分析桔梗多糖(PGP)对咳嗽变异性哮喘(CVA)老龄大鼠的干预作用。方法选取SD雄性老龄大鼠45只,随机分为空白组、模型组、低剂量桔梗多糖组与高剂量桔梗多糖组,模型组老龄大鼠15例,在建模中死去5只,其余3组各10只。检测各组咳嗽次数、炎性细胞数,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP组织抑制因子(TIMP)-1、嗜酸性粒细胞活化趋化因子(Eotaxin)水平,Western印迹检测转化生长因子(TGF)-β1、NF-κBp65、抑制蛋白(IκB)蛋白表达。结果模型组、低剂量桔梗多糖组、高剂量桔梗多糖组咳嗽次数、炎性细胞数、MMP-9、TIMP-1、Eotaxin水平、TGF-β1、NF-κBp65蛋白表达明显高于空白组,IκB蛋白表达明显低于空白组(P<0.05);低剂量桔梗多糖组、高剂量桔梗多糖组咳嗽次数、炎性细胞数、MMP-9、TIMP-1、Eotaxin水平、TGF-β1、NF-κBp65蛋白表达均明显低于模型组,IκB蛋白表达明显高于模型组(P<0.05);低剂量桔梗多糖组咳嗽次数、炎性细胞数、MMP-9、TIMP-1、Eotaxin水平、TGF-β1、NF-κBp65蛋白表达显著高于高剂量桔梗多糖组,IκB蛋白表达明显低于高剂量桔梗多糖组(P<0.05)。结论桔梗多糖可以通过抑制NF-κB信号通路,抑制咳嗽变异性哮喘的发展。

基于TGF-β/Smad信号通路研究NF-κB在电针抗慢性疲劳综合征中的作用及机制

目的 观察电针干预对慢性疲劳综合征(CFS)大鼠核转录因子(NF)-κB表达的影响,探索电针治疗CFS的作用机制。方法 清洁级SD雄性大鼠36只,随机将大鼠分为对照组、模型组、电针组各12只,采用负重强迫游泳联合慢性应激刺激造模建立CFS动物模型,电针组选取双侧感觉区、百会、宁神进行治疗,检测各组大鼠行为学指标(鼠尾悬挂实验,力竭游泳实验,水迷宫实验);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆褪黑素含量;免疫组化法(IHC)检测NF-κB p65蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测大鼠转化生长因子(TGF)-β1、Smad4 mRNA表达;Western印迹检测大鼠TGF-β1、Smad4蛋白的表达。结果 与对照组比较,模型组鼠尾悬挂实验挣扎次数减少,静止时间明显延长,力竭游泳时间明显缩短,水迷宫用时明显延长,有效区停留时间明显缩短;褪黑素含量昼夜波动程度减弱,变化趋势与对照组不同,海马区NF-κB p65阳性表达细胞数量增多,颜色较深,TGF-β1、Smad4 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,电针组鼠尾悬挂实验静止时间明显缩短,挣扎次数明显增加,力竭游泳时间明显延长,水迷宫用时明显缩短,有效区停留时间明显延长(P<0.05);褪黑素含量昼夜波动程度明显增强,变化趋势与对照组相似,海马区NF-κB p65阳性表达细胞数量明显减少,颜色较浅,TGF-β1、Smad4的mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论 电针治疗可明显改善CFS大鼠的疲劳状态和学习能力,降低海马区NF-κB蛋白表达,可能是通过调控TGF-β/Smad通路实现的。

基于调控NF-κB信号通路探讨白藜芦醇影响DCs成熟对恢复COPD小鼠Th17/Treg平衡的作用及机制

目的探索白藜芦醇与核因子(NF)-κB通路的相互关系,及其介导树突细胞(DCs)成熟从而恢复辅助T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)平衡的调控作用与分子机制。方法选用36只小鼠随机分为健康对照组(n=12只)、COPD组(n=12只)和白藜芦醇干预组(n=12只)。建立脂多糖(LPS)+香烟烟雾致敏的小鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,收集动物外周血、支气管肺泡灌洗液(BALF)、肺组织标本及提取骨髓源性DCs,苏木素-伊红(HE)染色光镜下观察肺组织病理改变,流式细胞术检测外周血、BALF中DCs成熟标志物及Th17/Treg比值,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测DCs中NF-κB的表达。结果3组外周血及BALF中CD80、CD86、TH17/Treg水平比较:COPD组>白藜芦醇干预组>健康对照组(均P<0.05);3组外周血及BALF中MHC-Ⅱ水平比较:健康对照组>白藜芦醇干预组>COPD组(均P<0.05)。健康对照组支气管壁光滑完整,肺组织、气道及血管周围未发现炎症细胞浸润。COPD组气道壁被炎性细胞浸润,细支气管显示出纤毛倒伏、缩短、粘连,其上皮黏液杯状细胞增生,明显出现肺气肿,可见形成的肺大泡。白藜芦醇干预组较COPD组有所改善,炎症细胞浸润减少,肺气肿及肺大泡亦有改善。结论白藜芦醇可抑制NF-κB信号通路而阻断DCs成熟,从而恢复COPD小鼠Th17/Treg的平衡,继而延缓COPD小鼠气道炎症的进展。

黄芩苷通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路减轻带状疱疹后遗神经痛大鼠神经炎症

目的探讨黄芩苷通过抑制Toll样受体(TLR)2/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子(NF)-κB信号通路减轻带状疱疹后遗神经痛(PHN)大鼠神经炎症的机制。方法SD大鼠随机分为对照组、模型组、黄芩苷低剂量(30 mg/kg)组、黄芩苷高剂量(60 mg/kg)组、黄芩苷高剂量+空载质粒组、黄芩苷高剂量+TLR2过表达组,每组10只,模型组和给药组通过腹腔注射树脂毒素(RTX)诱导建立PHN模型,对照组腹腔注射等剂量含10%Tween 80及10%乙醇的生理盐水,采用黄芩苷和质粒分组处理大鼠后,检测大鼠疼痛症状,比较自发缩足反射次数、缩爪阈值、热敏潜伏期;采用TUNEL法检测脊髓神经细胞凋亡率;采用免疫组织化学染色检测各组脊髓组织炎性细胞浸润,比较脊髓组织淋巴细胞功能相关抗原(LFA)-1阳性细胞比例;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊髓组织及血清炎症因子前列腺素(PGE)2、白细胞介素(IL)-18、环氧化酶(COX)-2水平;采用免疫印迹法检测各组脊髓组织TLR2/MyD88/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组缩爪阈值显著降低,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组、黄芩苷高剂量+空载质粒组缩爪阈值均显著升高,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均显著降低(均P<0.05);黄芩苷高剂量组缩爪阈值相比黄芩苷低剂量组显著升高,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著降低(均P<0.05)。与黄芩苷高剂量组比较,黄芩苷高剂量+空载质粒组各指标无明显变化(P>0.05);黄芩苷高剂量+TLR2过表达组缩爪阈值显著降低,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高(均P<0.05)。结论黄芩苷可通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路从而降低炎症因子产生释放,进而阻止PHN大鼠神经炎症,抑制脊髓神经细胞凋亡及炎性细胞浸润,最终改善大鼠长时程自发痛、机械性痛觉超敏反应与热痛觉减退症状。

有氧运动对CAP大鼠前列腺组织miR-155表达、TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨有氧运动对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠前列腺组织miR-155表达、Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路的影响。方法雄性健康SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、CAP模型对照组(模型组)、游泳运动观察组(运动组),每组10只,注射消痔灵进行大鼠造模,模型形成期7 d,后运动组进行50 min/(次·d)的游泳运动,每周运动6 d,持续28 d,正常组和模型组不进行任何运动,自由活动取食;末次运动结束后2 h处死大鼠,采用ELISA检测前列腺组织白细胞介素(IL)-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达,Western印迹检测TLR4、NF-κB P65蛋白相对表达,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-155表达,观察各组前列腺组织病理学改变。结果28 d游泳运动结束后,与正常组比较,模型组和运动组前列腺组织内IL-8、IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB P65和miR-155表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,运动组上述各项观察指标均显著降低(P<0.05);相关分析显示,TLR4、NF-κB P65与IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关,miR-155与TLR4、NF-κB P65、IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关(均P<0.01);病理观察显示,正常组前列腺组织学观察未见异常改变,模型组前列腺组织内可见腺体上皮细胞及纤维组织明显增生,间质中淋巴细胞等慢性炎症细胞浸润;与模型组比较,运动组前列腺腺体上皮细胞轻度增生,间质轻度纤维化,慢性炎症细胞浸润现象明显好转。结论有氧运动能够对CAP大鼠炎症起到缓解作用,其作用机制可能与miR-155调控TLR4/NF-κB信号通路有关。

黄芪甲苷通过miR-126/NF-κB信号通路调控人牙龈成纤维细胞增殖及凋亡的分子机制

目的 探讨黄芪甲苷对人牙龈成纤维细胞(HGFs)增殖、凋亡的影响及其对miR-126/核转录因子(NF)-κB信号通路的调控作用。方法 采用不同浓度的黄芪甲苷处理HGFs细胞,miR-NC、miR-126 mimics、anti-miR-NC、anti-miR-126转染入HGFs;anti-miR-NC、anti-miR-126分别转染入HGFs后加入黄芪甲苷处理细胞;anti-miR-126转染入HGFs后加入NF-κB抑制剂PDTC与黄芪甲苷共同处理细胞;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-126的表达量;采用Western印迹检测p-p65、磷酸化抑制蛋白κBα(p-IкBα)蛋白表达量。结果 不同浓度的黄芪甲苷可明显提高细胞活力与周期素(Cyclin)D1蛋白水平及miR-126的表达水平明显降低凋亡率及Cleaved-半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白水平(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-126组细胞活力明显升高,凋亡率明显降低(P<0.05),而转染anti-miR-126对细胞增殖与凋亡的作用与之相反;抑制miR-126表达可明显逆转黄芪甲苷对细胞增殖、凋亡及NF-κB信号通路的作用;添加PDTC处理后可明显提高细胞活力,明显降低凋亡率(P<0.05)。结论 黄芪甲苷可通过调控miR-126/NF-κB信号通路从而促进HGFs增殖及抑制细胞凋亡。

人参皂苷Rg3对低密度脂蛋白诱导的肾小球系膜细胞TGF-β/Smad/NF-κB通路及细胞凋亡的影响

目的人参皂苷Rg3对低密度脂蛋白(LDL)诱导人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子(TGF)-β/Smad/核因子(NF)-κB通路及细胞凋亡的影响。方法将培养的HMC,分别为对照组(不做任何处理)、LDL组(40μg/ml的LDL处理)、LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg315μmol/L组(低浓度组)、LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg330μmol/L组(中浓度组)、LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg360μmol/L组(高浓度组)。用噻唑蓝(MTT)法检测HMC增殖活性;Western印迹检测通路相关蛋白TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB及细胞凋亡相关蛋白、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶酶(caspase)-3蛋白的表达水平。结果与对照组相比,LDL组HMC增殖活性、TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与LDL组相比,低、中、高浓度组HMC增殖活性、TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB、Bcl-2蛋白表达水平明显降低,HMC凋亡率、Bax和Caspase-3蛋白水平明显升高,并呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3可抑制LDL诱导的HMC增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与TGF-β/Smad/NF-κB信号通路密切相关。

右美托咪定对大鼠坐骨神经阻滞血流动力学、疼痛及NF-κB表达的影响

目的探讨右美托咪定对大鼠坐骨神经阻滞血流动力学、疼痛及核转录因子(NF)-κB表达的影响。方法用随机法将36只大鼠分为假手术组(坐骨神经阻滞模型大鼠,SO组)、右美托咪定低浓度组(模型大鼠给予右美托咪定低浓度干预,DLC组)、右美托咪定高浓毒组(模型大鼠给予右美托咪定高浓度干预,DHC组)、罗哌卡因(模型大鼠给予罗哌卡因干预,ROP组),每组9只。比较各组机械性撤足阈值、足伸姿推力及血流动力学指标差异性,苏木素-伊红(HE)染色坐骨神经病理学变化;TUNEL法检测坐骨神经细胞凋亡;Western印迹检测坐骨神经组织中NF-κB、白细胞介素(IL)-6蛋白表达。结果与SO组相比,ROP组、DLC组及DHC组在0~2.0 h各时间段后肢机械缩足反射阈值(PWT)明显升高、后足伸姿推力(EPT)值明显降低(P<0.05);与ROP组相比,DLC组及DHC组0.5~3.0 h时间段PWT值明显升高、EPT值明显降低(P<0.05),DHC组在0.5~3.5 h各时间段PWT明显高于DLC组,EPT值明显低于DLC组(P<0.05)。与SO组相比,ROP组、DLC组及DHC组血流动力学指标明显升高(P<0.05);与ROP组相比,DLC组、DHC组血流动力学指标明显升高(P<0.05);与DLC组相比,DHC组血流动力学指标显著升高(P<0.05)。与SO组相比,ROP组坐骨神经凋亡率明显升高(P<0.05);与ROP组相比,DLC组坐骨神经细胞凋亡率明显下降(P<0.05),DHC组坐骨神经细胞凋亡率明显低于DLC组(P<0.05)。与SO组相比,ROP组、DLC组及DHC组坐骨神经组织中NF-κB、IL-6蛋白水平明显升高(P<0.05);与ROP组相比,DLC组和DHC组NF-κB、IL-6蛋白水平明显下降(P<0.05),且DHC组坐骨神经组织中NF-κB、IL-6蛋白水平明显低于DLC组(P<0.05)。结论右美托咪定维持坐骨神经阻滞大鼠血流动力学稳定,抑制NF-κB、IL-6炎性因子表达,发挥阵痛效果,对神经细胞具有保护机制。

壳聚糖影响动静脉内瘘模型兔血管重塑及TLR4/NF-κB信号通路改善血流动力学的机制

目的 观察壳聚糖对动静脉内瘘模型兔血管重塑及Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路的影响,初步探讨壳聚糖改善血流动力学的机制。方法 选取48只新西兰兔建立动静脉内瘘模型,术后在血管吻合部位涂以不同剂量(0、1、5、25μg/ml)壳聚糖溶液,分为模型对照组、低剂量壳聚糖组、中剂量壳聚糖组和高剂量壳聚糖组,每组12只,另取12只作为正常对照组,8 w后检测相关指标。苏木素-伊红(HE)染色观察血管组织形态学,Western印迹检测血管组织TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达量,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达。测定各组平均动脉压(MAP)和中心静脉压(CVP)。结果 各组TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达量均有明显差异(P<0.05)。TLR4蛋白及mRNA表达量中,建模的各组明显高于正常对照组,模型对照组高于中、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及其mRNA表达量中,低、高剂量壳聚糖组和模型对照组明显高于正常对照组(均P<0.05);模型对照组MyD88、NF-κB、PCNA蛋白表达量明显高于中剂量壳聚糖组(均P<0.05)。低、高剂量壳聚糖组MyD88蛋白表达量明显高于中剂量壳聚糖组(P<0.05);模型对照组MyD88、NF-κB蛋白表达量明显高于低、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。模型对照组MyD88、NF-κB和PCNA mRNA明显高于低、中、高剂量壳聚糖组(P<0.05);低、高剂量壳聚糖组MyD88 mRNA表达量明显高于中剂量壳聚糖组(P<0.05)。TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达量与PCNA蛋白表达量呈正相关(r=0.471、0.455、0.351;P<0.05),TLR4 mRNA表达量与PCNA mRNA表达量呈正相关(r=0.395;P<0.05)。各组MAP和CVP差异均有统计学意义(P<0.001),低、高剂量壳聚糖组和模型对照组MAP和CVP均明显高于中剂量壳聚糖组和正常对照组(P<0.05),且模型对照组明显高于低、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。结论 适宜剂量壳聚糖可以影响血管重塑,有效改善血流动力学,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路异常活化有关。

白头翁汤加减灌肠方对溃疡性结肠炎肠黏膜NF-κB mRNA的影响

目的:使用白头翁汤加减灌肠方治疗急性期左半结肠型溃疡性结肠炎患者,观察其疗效及对肠黏膜NF-κB mRNA表达的影响并探讨其机制。方法:34例左半结肠型患者随机分组法分为2组,治疗组采用白头翁汤加减灌肠方,对照组给予SASP保留灌肠,疗程均为45 d,比较2组的临床疗效及结肠镜下表现,RT-PCR法测定肠黏膜NF-κB mRNA的表达。结果:2组治疗后各症状均较前好转,其中治疗组对腹泻、脓血便、腹痛的缓解更具优势,治疗组总有效率(94.11%)高于对照组(76.47%),2组镜下表现积分均较前下降,组间比较差异有统计学意义。2组肠黏膜NF-κB mRNA的表达均较前下降,组间比较差异无统计学意义。结论:白头翁汤加减灌肠方较SASP能更好地缓解症状并改善肠黏膜的镜下表现,其作用机制可能通过下调NF-κB mRNA从而抑制促炎因子的产生及释放。

丹参酮ⅡA对TNF-α诱导的ECV304细胞NF-κB、IκB-α表达及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对血管内皮细胞株ECV304NF-κB、IκB-α及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达的影响,以阐明其抗动脉粥样硬化作用及机制。方法通过建立TNF-α诱导的ECV-304细胞损伤模型,以抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)做为对照,间接细胞ELISA方法定量检测NF-κB、IκB-α的表达,RT-PCR方法检测各组细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA的表达。结果TNF-α可增加ECV304细胞转录因子NF-κB的表达,同时降低其抑制因子IκB-α的表达,低浓度的丹参酮ⅡA对TNF-α引起的ECV304细胞NF-κB的表达升高无明显抑制作用,但可增加其IκB-α的表达;高浓度的丹参酮ⅡA可明显抑制NF-κB的表达,同时增加其抑制因子IκB-α的表达。同时丹参酮ⅡA抑制TNF-α诱导的ECV304细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA表达。结论丹参酮ⅡA可通过抑制转录因子NF-κB的激活及其相关粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达,这有利于抑制动脉粥样硬化过程中的炎症从而发挥抗动脉粥样硬化作用。