珍宝丸介导NF-κB/p65通路对脊髓损伤大鼠的神经保护作用

目的探讨珍宝丸对脊髓损伤大鼠的神经保护作用及相关机制。方法60只SD大鼠随机均分为对照组、模型组和珍宝丸组,对照组大鼠仅暴露脊髓,模型组和珍宝丸组大鼠均构建脊髓损伤模型。造模成功后,珍宝丸组大鼠给予口服0.6 g/kg珍宝丸干预治疗,间隔24 h给药1次,持续给药28 d,对照组和模型组大鼠则给予相同剂量的生理盐水灌胃。采用巴索·比蒂·布雷斯纳汉(BBB)评分法评估干预治疗前和治疗后4周各组大鼠运动行为学变化;实验结束取大鼠脊髓组织标本,通过HE染色和TUNEL染色法观察评估大鼠脊髓组织病理学变化及神经细胞凋亡情况;通过qRT-PCR法检测炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10的表达情况;采用Western blot法检测核因子κB(NF-κB)/p65通路相关蛋白的表达情况。结果干预治疗后4周,模型组大鼠BBB评分低于对照组,珍宝丸组大鼠BBB评分高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组大鼠脊髓组织结构、形态正常;模型组大鼠脊髓组织结构紊乱,有明显出血、坏死、水肿,大量炎性细胞浸润;珍宝丸组大鼠脊髓组织病变程度较模型组明显减轻。珍宝丸组脊髓组织细胞凋亡数较模型组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,模型组脊髓组织中TNF-α和IL-6表达升高,IL-10表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,珍宝丸组脊髓组织中TNF-α和IL-6表达显著降低,IL-10表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠脊髓组织中NF-κB/p65和p-NF-κB/p65蛋白表达均较对照组上调,差异有统计学意义(P<0.05);珍宝丸组大鼠脊髓组织中NF-κB/p65和p-NF-κB/p65蛋白表达均较模型组下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论珍宝丸治疗能够有效改善脊髓损伤大鼠行为学症状,减轻其病理变化,具有神经保护作用,其作用机制可能与阻断NF-κB/p65通路、抑制炎症因子表达有关。

慢性肾脏病NF-κB p65和炎性因子与动脉硬化的关系及HDF治疗对其影响

目的 探讨慢性肾脏病(CKD)患者体内核因子(NF)-κB p65和相关炎性因子水平与并发动脉硬化之间的关系及进行血液滤过透析(HDF)治疗对其产生影响。方法 随机选取肾功能正常的CKD1期患者(N组)40例N组,血液净化中心维持性血液透析(HD)CKD5D期患者80例,分别测定血清NF-κB p65和人单核细胞趋化蛋白(MCP)-1水平、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素(IL)-6、IL-8及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,同时B超测定患者颈动脉内-中膜厚度(IMT),以判断是否并发动脉硬化;之后CKD5D期患者随机分为在线(OL)HDF组及HD组,分别以OL HDF及HD进行治疗,治疗3个月后两组复测以上指标进行比较并再次进行颈动脉超声检查测定IMT。结果 与N组相比,HD组、HDF组治疗前血清IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP、MCP-1、NF-κB p65水平均明显增高(P<0.01);NF-κB p65蛋白表达明显增高,发生动脉硬化比例也明显增高(P<0.05)。经3个月治疗后,HD组血清IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP、MCP-1、NF-κB水平,NF-κB p65蛋白表达均无明显变化(P>0.05),仍明显高于N组,但HDF组上述指标较治疗前相比明显改善(P<0.05),NF-κB p65蛋白表达受抑制。3个月后HD组动脉硬化发生率明显增高(P<0.05),而HDF组减少,但无统计学差异(P>0.05)。结论 HDF治疗下调NF-κB p65蛋白表达,能明显减轻慢性肾衰患者的微炎症状态,减少动脉硬化的发生率,是维持性HD患者的必要治疗。

TPPU通过抑制p38 MAPK/NF-κB p65信号通路对阿尔茨海默病细胞模型的抗神经炎症作用

目的在Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)小胶质细胞(BV2细胞)模型中,采用对BV2细胞进行干预,探讨1-三氟甲氧基苯基-3-(1-丙酰哌啶-4-基)脲(TPPU),TPPU是否具有抗神经炎症作用及其可能的抗炎机制。方法利用Aβ25-35作用BV2细胞构建AD细胞模型,CCK8法分别检测不同浓度Aβ25-35和TPPU处理对BV2细胞活性的影响,最终选择20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为造模组,0.1μM TPPU预处理BV2细胞3h,20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为治疗组进行后续实验。利用ELISA法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,倒置荧光显微镜检测活性氧(ROS)产生,real-time PCR检测小胶质细胞M1表型促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1β(IL-1β)基因mRNA表达水平和检测M2表型抗炎因子IL-10及标志物Arg1基因mRNA表达水平。通过Western blot法检测细胞中炎症因子TNF-α蛋白及p38 MAPK/NF-κB p65信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组BV2细胞活力降低(P<0.05),ROS显著升高(P<0.05),MDA含量显著增多(P<0.05),SOD活性显著下降(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显上调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显下调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型组相比,经TPPU预处理后,BV2细胞活力明显升高(P<0.05),ROS显著降低(P<0.05),MDA含量显著下降(P<0.05),SOD活性显著提高(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显下调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显上调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论TPPU抑制Aβ25-35诱导的BV2细胞炎症反应,促进BV2细胞由M1表型向M2表型极化,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB p65信号通路激活有关。

小檗碱下调NF-κB p65/TGF-β1/CTGF信号通路缓解小鼠肾纤维化损伤

目的研究小檗碱(berberine,BBR)对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)小鼠的保护作用并探索其可能机制。方法C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham)、UUO组、(50、100、200 mg·kg^(-1))BBR处理组,每组8只。除Sham组外,其余各组行左侧输尿管结扎,建立UUO模型。造模后,Sham和UUO组小鼠灌胃生理盐水,BBR处理组小鼠分别按照50、100、200mg·kg^(-1) BBR灌胃,处理14 d。生化分析仪检测小鼠血清中肌酐(serum creatinine,Scr)及尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;HE、Masson、TUNEL及免疫组织化学染色观察肾组织病理改变;ELISA检测血清中促炎细胞因子的表达;Western blot检测肾脏中NF-κB p65、TGF-β1、CTGF蛋白水平。结果与UUO组相比,BBR组小鼠Scr和BUN水平明显下降;肾病变减轻,间质纤维化减低;血清促炎细胞因子表达水平降低;NF-κB p65、TGF-β1、CTGF表达减少,呈一定剂量依赖性。结论小檗碱具有抑制NF-κB p65/TGF-β1/CTGF信号通路的潜力,可抑制肾脏炎症及纤维化,减轻UUO诱导的肾损伤。

黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用及血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)、cAMP和脑组织NF-κB表达的影响

目的:观察黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用并探讨其作用机制。方法:采用背部皮下注射干酵母构建大鼠发热模型,SD雄性大鼠随机分为正常对照,模型组,阳性组(阿司匹林,0.1 g/kg),黄芩苷高、中、低剂量组(160、80、40 mg/kg),连续给药3 d,测定各组大鼠肛温的变化;酶联免疫法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))与环磷酸腺苷(cAMP)水平;Western Blot检测各组大鼠脑组织NF-κB p65(核转录因子-κB p65)蛋白表达。结果:黄芩苷高剂量组有显著解热效果(P<0.01),黄芩苷各剂量组均可不同程度降低大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE 2和cAMP含量;与正常组比较,模型组脑组织NF-κB p65蛋白表达增多,黄芩苷高剂量组可明显降低大鼠脑组织NF-κB p65表达(P<0.05)。结论:黄芩苷可显著性降低干酵母引起的体温升高,解热机制可能与抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)与cAMP的分泌和减少脑组织NF-κB p65蛋白表达有关。

白茅根不同提取物对阿霉素肾病大鼠的保护作用及对TGF-β_1、NF-κB p65分子表达的影响

目的:研究白茅根不同提取物对阿霉素肾病大鼠的影响及其机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、泼尼松阳性对照组及白茅根石油醚部位组、乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组、水部位组,一次性尾静脉注射阿霉素(ADR)复制阿霉素肾病模型,灌胃给药8 w。于造模前1 d及造模后每周末将大鼠放入代谢笼中,收集24 h尿液,全自动生化仪检测尿蛋白含量。于末次给药24 h后,眼眶取血,全自动生化仪检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量;ELISA法检测血清TNF-α含量,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、NF-κB p65的表达;光镜下观察肾脏组织病理学改变。结果:与模型组比较,白茅根提取物乙酸乙酯部位组大鼠24 h尿蛋白在第6、7、8周显著降低,TP、ALB含量显著升高,炎性细胞因子TNF-α含量以及TGF-β1、NF-κB p65阳性率显著降低;正丁醇部位组、水部位组TG含量显著降低,24 h尿蛋白含量分别在7、6周显著降低;光镜下病理形态学观察显示乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位组大鼠肾组织损伤明显改善。结论:白茅根不同提取物对阿霉素肾病大鼠有不同程度的保护作用,其中乙酸乙酯部位组作用最强,其作用机制可能是通过降低TGF-β1以及NF-κB p65的表达,抑制TNF-α的活性,进而改善阿霉素肾病大鼠肾组织病变。

丁苯酞对缺血性脑卒中大鼠脑组织NF-κB p65、IL-6、TNF-α表达的影响

目的:观察丁苯酞对缺血性脑卒中大鼠脑组织NF-κB p65、IL-6、TNF-α表达的影响,阐明其作用机制。方法:将50只大鼠随机分为假手术组、模型组、丁苯酞低、中、高剂量组(剂量分别为20、40、60 mg/kg)。模型组、丁苯酞低、中、高剂量采用右侧大脑中动脉阻塞法建立大鼠缺血性脑卒中模型,假手术组不进行栓线操作。采用Bederson法对大鼠进行神经功能评分,采用TTC染色法观察大鼠脑梗死体积,Western blot检测大鼠脑组织NF-κB p65蛋白表达水平,采用免疫荧光方法观察NF-κB p65入核情况。酶联免疫吸附检测大鼠脑组织IL-6、TNF-α水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分和脑梗死体积显著增加,脑组织NF-κB p65蛋白表达水平显著升高,NF-κB p65入核显著增加,IL-6、TNF-α水平显著增加( P <0.05)。与模型组比较,丁苯酞低、中、高剂量组神经功能评分和脑梗死体积显著减少,脑组织NF-κB p65蛋白表达水平显著降低,NF-κB p65入核显著减少,IL-6、TNF-α水平显著降低( P <0.05)。结论:丁苯酞对缺血性脑卒中有保护作用,其机制与抑制脑组织NF-κB p65活化,降低脑组织炎性因子IL-6、TNF-α水平有关。

溃疡性结肠炎小鼠肠道通透性改变与TNF-α及NF-κB P65的关系

目的:采用2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)定量灌胃诱导小鼠溃疡性结肠炎(UC),观察小鼠结肠通透性改变与肿瘤坏死因子α(TNF-α)及NF-κB p65的关系。方法:48只ICR小鼠随机分为2组(n=24):对照组和模型组。模型组小鼠给予2.5%DSS定量灌胃诱发小鼠急性UC,对照组小鼠予同体积的蒸馏水灌胃代替。记录两组小鼠疾病活动指数(DAI),9 d后测定两组小鼠结肠组织病理学评分、结肠通透性、TNF-α及NF-κB p65。统计分析DAI、结肠通透性、TNF-α与NF-κB p65之间的相关性。结果:与对照组比较,模型组小鼠DAI、结肠病理学评分、结肠通透性、TNF-α、NF-κB p65均显著增高(P均<0.01)。小鼠DAI增高与结肠通透性密切相关(P均<0.01),结肠通透性增高与TNF-α、NF-κB p65密切相关(P均<0.01)。结论:与对照组小鼠相比,DSS造模小鼠的结肠通透性显著增高,并与TNF-α、NF-κB p65增高呈正相关。TNF-α、NF-κB p65增高导致结肠通透性增高,进而导致炎症免疫反应过度增强,可能是UC发病的重要环节。

人参皂苷Rb1通过抑制NF-κB p65介导的炎症和氧化应激改善内皮细胞复制性衰老

【目的】本研究旨在探讨人参皂苷Rb1对内皮细胞复制性衰老的作用和机制。【方法】建立人原代脐静脉内皮细胞(HUVEC)复制性衰老模型,根据细胞形态的变化、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性率和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的表达水平评估HUVEC衰老;将复制性衰老模型细胞分为0、20、40、80、100μmol/L Rb1组,不同浓度人参皂苷Rb1处理衰老细胞48 h后观察衰老指标SA-β-Gal染色和PAI-1蛋白变化,每组3个复孔;采用Western blot方法检测对照组(CPDL 2的HUVEC)、模型组(衰老细胞组)及人参皂苷Rb1组核因子κB p65(NF-κB p65)的活性,每组3个复孔;检测对照组、模型组及人参皂苷Rb1组细胞培养液中氧化应激和炎症指标,每组3个复孔。【结果】累计细胞群体倍增值(CPDL)16的HUVEC可作为复制性衰老模型;与0μmol/L Rb1组相比,80μmol/L Rb1组SA-β-Gal染色阳性细胞数和PAI-1蛋白表达均明显降低(P <0.001);复制性衰老细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活力明显低于对照组(P <0.001),而丙二醛(MDA)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量及NF-κB p65的活性均明显高于对照组(P <0.001),80μmol/L人参皂苷Rb1处理后SOD活力明显增加(P <0.05),MDA、IL-6、TNF-α的产量明显减少(P <0.05),NF-κB p65活性降低(P <0.001)。【结论】人参皂苷Rb1可通过抑制NF-κB p65介导的氧化应激和炎症反应延缓复制性内皮细胞衰老。

沉默NF-κB p65基因下调TNF-α诱导的肺泡上皮细胞的炎症反应

目的建立急性肺损伤体外细胞炎症模型,探讨NF-κB p65基因沉默减轻细胞炎症、保护肺结构细胞的可行性。方法以TNF-α(10 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549),运用RNA干扰技术沉默NF-κB p65基因,采用RT-PCR及Westernblotting法检测沉默效率,ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β、IL-8、IL-10等炎症因子浓度。结果 TNF-α刺激A549细胞可在基因水平上调NF-κB p65的表达,并增加NF-κB蛋白的核转位,上调细胞培养上清中IL-1β、IL-8、IL-10的浓度;预转染NF-κB p65 siRNA可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65表达,降低上述各炎症因子浓度(P<0.05)。结论急性肺损伤体外细胞炎症模型构建成功,RNA干扰技术能有效沉默该模型NF-κB p65基因,下调炎症反应水平,保护肺泡上皮细胞,为急性肺损伤免疫调控机制的研究和基因靶向治疗提供实验依据。

在人乳腺癌细胞增殖中LXRα、NF-κB p65和cyclinD1的差异表达（英文）

LXRα可以抑制包括乳腺癌在内的多种肿瘤细胞的增殖,而这种抑制作用的具体机制尚不明了.因此本文探讨了LXRα、NF-κB p65和cyclin D1三者在人乳腺癌细胞增殖中的差异表达.首先采用免疫组化法检测了乳腺癌及癌旁组织中LXRα,NF-κB p65和cyclin D1的表达,结果表明,3种蛋白主要表达于细胞核,且NF-κB p65和cyclin D1在癌组织中的表达显著高于癌旁组织,而LXRα则在癌组织中表达显著降低.用MTT和Western blot检测TO901317对乳腺癌细胞增殖及3种蛋白表达的影响,结果显示,随着TO901317浓度的增加与时间的延长,其对细胞增殖的抑制作用逐渐增强,与此同时能上调LXRα的表达,并下调NF-κB p65和cyclin D1的表达.进一步通过RNA干扰技术下调LXRα的表达,以及应用NF-κB抑制剂PDTC观察TO901317上述作用的改变,发现LXRαsiR NA显著降低TO901317对3种蛋白表达的影响和对细胞增殖的抑制作用.而PDTC则加强TO901317的上述作用效果,除了几乎不影响LXRα的表达外.综上所述,LXRα/NF-κB p65/cyclin D1在乳腺癌细胞增殖中具有重要作用,有助于进一步明确LXRα为新的乳腺癌调控靶点,为今后乳腺癌的分子靶向治疗提供新的思路.

久泻灵颗粒对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠TLR4及NF-κB p65表达的影响

目的探讨久泻灵颗粒对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB p65蛋白基因的表达的影响。方法通过灌服大黄水煎液,肌肉注射氢化可的松并结合TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)混合乙醇灌肠建立动物模型。将90只大鼠随机分为空白组、模型组、久泻灵颗粒治疗7、14、21 d组及阳性对照(SASP)组,用药治疗后采用免疫组化SP法和RT-q PCR法分别检测大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB p65蛋白和基因的表达。结果结肠黏膜形态学评分结果显示,各治疗组评分均有降低,差异有显著性(P<0.01);免疫组化SP法结果显示:TLR4、NF-κB p65在模型组大鼠中表达均显著增强(P<0.01);药物干预后各治疗组大鼠TLR4、NF-κB p65表达均减弱(P<0.05);RT-q PCR法结果显示:与空白组比较,模型组大鼠TLR4、NF-κB p65表达增强(P<0.01);与模型组比较,治疗后各组大鼠TLR4、NF-κB p65表达减弱(P<0.05)。结论久泻灵颗粒可减轻结肠黏膜炎症反应,起到修复黏膜的作用,其原因与降低脾肾阳虚型UC模型大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB p65基因的转录和蛋白的表达有关。

穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜组织NF-κB p65活性及STAT3表达的影响

目的通过观察穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织核转录因子κB(NF-κB)及信号转导子和转录激活因子3(STAT3)表达的影响,探讨穿山龙总皂苷抑制类风湿性关节炎血管新生可能的信号转导通路作用机制。方法将造模成功的60只CIA大鼠随机分为CIA模型组、雷公藤组(阳性对照组)、穿山龙总皂苷组、薯蓣皂苷元组、穿山龙水溶性皂苷片组,另设正常对照组,每组12只。造模成功后分别给予相应的药物灌胃,连续治疗35 d。应用TransAMTMNF-κB p65活性检测试剂盒检测滑膜组织中NF-κB p65的DNA结合活性。应用免疫组织化学染色的方法观察滑膜组织中STAT3蛋白的表达。结果与正常对照组相比,CIA模型组大鼠滑膜细胞核蛋白提取物中NF-κB p65的DNA结合活性和滑膜组织中STAT3蛋白的表达显著增高,有统计学意义(P<0.01);与CIA模型组相比,穿山龙总皂苷组、雷公藤组、薯蓣皂苷元组、穿山龙水溶性皂苷片组的NF-κB p65的DNA结合活性和STAT3蛋白的表达均显著降低,有统计学意义(P<0.01);各治疗组之间两两比较均无统计学意义(P>0.05)。结论穿山龙总皂苷可能通过抑制NF-κB信号转导通路中NF-κB p65的活性和JAK-STAT信号转导通路中重要底物STAT3蛋白的表达,起到抑制类风湿性关节炎血管新生的作用。

苍附导痰汤对肥胖型PCOS-IR模型大鼠卵巢TLR4/NF-κB p65信号通路的影响

目的 探讨苍附导痰汤对肥胖型PCOS-IR (polycystic ovarian syndrome-insulin resistance, PCOS-IR)模型大鼠卵巢Toll受体4(TLR4)/核转录因子κB p65(NF-κB p65)信号通路的调控作用。方法 48只♀大鼠随机分为正常组8只和模型组40只。来曲唑(1 mg·kg^(-1))联合高脂饮食建立肥胖型PCOS-IR大鼠模型,快速革兰染色法观察动情周期,挑选24只模型大鼠随机分为:模型组、阳性药(二甲双胍135 mg·kg^(-1))组、苍附导痰汤高、低剂量(57.96、14.49 g·kg^(-1))组,每组各6只,药物干预21 d。观察动情周期、卵巢和子宫指数变化;血液生化仪测定空腹血糖(FBG)和血脂(甘油三酯TG和总胆固醇TC)变化;酶联免疫吸附(ELISA)法测定空腹胰岛素(FINS)水平;免疫组化法和荧光定量PCR法检测卵巢中TLR4和NF-κB p65蛋白及基因的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,卵巢多囊性改变明显,FBG、TG、TC含量和FINS、HOMA-IR水平上调,卵巢中TLR4和NF-κB p65蛋白及mRNA表达均增加(P<0.05);与模型组比较,苍附导痰汤高剂量组大鼠排卵周期得到改善,卵巢多囊性改变减轻,上述指标出现明显逆转(P<0.05)。结论 苍附导痰汤能有效改善肥胖型PCOS-IR大鼠卵巢排卵和糖脂代谢功能,作用机制可能与调控卵巢TLR4/NF-κB p65信号通路有关。

NF-κB p65基因在TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤中的作用

目的建立急性肺损伤肺泡上皮细胞炎症模型,探讨NF-κB p65基因在炎症诱导的氧化应激损伤中的作用。方法以肿瘤坏死因子α(TNF-α,10 ng/mL)刺激A549细胞,运用RNA干扰技术沉默核因子κB(NF-κB)p65基因,采用RT-PCR及Western blot法检测沉默效率,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-4、IL-6等炎症因子浓度,比色法检测细胞内丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)浓度,MTT法检测细胞存活率。结果 TNF-α刺激A549细胞可在基因及蛋白水平上调NF-κB p65的表达,并增加NF-κB蛋白的核转位;同时细胞培养上清中IL-1β、IL-4、IL-6的浓度升高,细胞内MDA增多,SOD减少,细胞存活率降低。预转染NF-κB p65 siRNA可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65表达,降低TNF-α诱导的上述各炎症因子及MDA浓度的增高,减少SOD的耗损,A549细胞存活率升高(P<0.05)。结论 NF-κB能介导TNF-α触发的过度炎症反应和氧化应激,导致细胞存活率明显降低;沉默NF-κB p65基因可有效下调炎症反应水平及其诱发的氧化应激,减轻肺结构细胞的损伤。

艾灸对克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65及TNF-α、IL-1β调节作用的研究

目的:通过观察隔药灸对克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65及炎症因子TNF-α、IL-1β表达的影响,探讨艾灸治疗克罗恩病的效应机制。方法:清洁级雄性SD大鼠随机分为4组,分别为正常组、模型组、隔药灸组和西药组,采用三硝基苯磺酸(TN-BS)合乙醇溶液灌肠制备克罗恩病大鼠模型,模型制备成功后,隔药灸组取天枢穴(双)、气海穴进行隔药灸治疗,西药组采用美沙拉秦灌胃治疗。治疗结束后,采用HE染色,光镜下观察各组大鼠结肠组织病理学变化,应用免疫组织化学技术观察各组大鼠结肠NF-κB p65与TNF-α、IL-1β的表达,并进行图像分析。结果:与正常组比较,模型组大鼠结肠组织呈现裂隙状溃疡及炎症表现,部分大鼠结肠在黏膜下层可见肉芽肿形成,结肠NF-κB p65、TNF-α、IL-1β的表达均显著增高(均P<0.01);与模型组比较,隔药灸组、西药组大鼠结肠形态结构改善,肠道炎症减轻,结肠NF-κB p65与TNF-α、IL-1β的表达均显著降低(均P<0.01);相关性分析结果显示,TNF-α、IL-1β的表达与NF-κB p65的表达均呈正相关性。结论:隔药灸能下调克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65、TNF-α、IL-1β的表达;艾灸(隔药灸)可能通过抑制克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65的表达,进而减少其下游炎症因子TNF-α、IL-1β的表达,从而减轻肠道炎症,改善结肠组织形态结构,发挥治疗作用。

小檗碱抑制核因子NF-κB p65表达及转位改善游离脂肪酸诱导的3T3-L1细胞胰岛素抵抗的分子机制

目的 观察小檗碱对游离脂肪酸诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型核因子（nucleartran-scriptionfactorkappaB，NF-κBp65）表达及转位的影响，探讨小檗碱改善胰岛素抵抗的分子机制。方法以0．5mmol／L软脂酸诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗，予以小檗碱进行干预，同时以阿司匹林作为阳性对照，用葡萄糖氧化酶法检测培液中的葡萄糖消耗量，以2-脱氧-[^3H]-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率，用Westernblot检测3T3-L1脂肪细胞总NF-κBp65蛋白及核NF-κBp65蛋白的表达，用激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）对NF．．cBp65进行定位显示。结果0．5mmol／L软脂酸作用24h使3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗降低41％，胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制67％，NF-κBp65蛋白表达明显增加，CLSM显示NF-κBp65核转位增加；同时加入小檗碱或阿司匹林则可逆转上述效应。但软脂酸、小檗碱、阿司匹林对3T3-L1脂肪细胞总NF-κBp65蛋白的表达无明显影响。结论小檗碱可以改善游离脂肪酸诱导的胰岛素抵抗，其分子机制可能是小檗碱通过抑制NF-κB的活化转位调节相关基因的表达而起作用。

霍山石斛水提取物通过介导NF-κB/p65和p38 MAPK减轻小鼠酒精性肝损伤

本研究主要探讨霍山石斛水提取物对酒精性肝损伤小鼠的保护作用及其机制。将60只昆明小鼠随机均分成5组,正常组喂饲普通饲料,模型组喂饲普通饲料+52%白酒[12 m L/(kg·bw)]灌胃,低、中、高剂量石斛组喂饲普通饲料+霍山石斛水提取物(1 g/kg、5 g/kg和10 g/kg)灌胃+52%白酒灌胃。40 d后,测肝功能指标(ALT、AST)、氧化应激指标(SOD、MDA)、炎症因子指标(CRP、TNF-α),肝脏做HE染色切片观察,Western blot检测了小鼠肝脏组织中NF-κB/p65和p38 MAPK的磷酸化水平。切片可见,中、高剂量石斛组肝脏组织损伤情况较模型组明显减轻。中、高剂量石斛组较模型组SOD升高(P<0.01),ALT、AST、MDA、CRP和TNF-ɑ降低(P<0.01)。高剂量霍山石斛水提取物可显著抑制酒精性肝损伤诱导的NF-κB/p65和p38 MAPK的磷酸化水平升高。结果表明,霍山石斛水提取物可降低酒精对肝细胞的损伤作用,其作用机制可能是通过介导NF-κB/p65和p38 MAPK发挥抗氧化、抗炎作用来实现的。

人参二醇组皂苷对内毒素休克大鼠心肌组织CD14、IkB和NF-κ B p65表达的影响

目的通过观察内毒素诱导的休克大鼠心肌CD14、核因子-κB抑制蛋白(IκB)和核因子-κB亚基p65(NF-κB p65)的表达变化,探讨人参二醇组皂苷(panaxadiolsaponin,PDS)对休克大鼠心肌保护作用的相关机制。方法 40只Wistar大鼠分为空白对照组(CTR)、内毒素休克模型组(LPS)、地塞米松治疗组(DEX)和人参二醇组皂苷治疗组(PDS)。LPS(5 mg/kg)舌下静脉注射复制休克模型,当动脉血压降至初始血压的2/3时作为判定休克的标准。记录不同时间段平均动脉压(mean arterial pressure,MAP),各组大鼠分别于休克后2 h和4 h测定血清谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、肌酸激酶(creatinekinase,CK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,采用R T-PCR方法检测心肌组织CD14和IκB mR NA水平,Western blotting检测CD14和NF-κBp65蛋白质表达水平。结果各组大鼠注入LPS 5min后进入休克状态,并在10min后MAP代偿性回升,但LPS组从休克第45 min MAP进行性下降,而PDS和DEX组在LPS组进入可逆性失代偿阶段后,仍维持代偿性变化;LPS组血清中AST、CK和LDH活性最强,PDS及DEX组酶活性明显低于LPS组(P<0.05);R T-PCR结果显示,LPS组IκB mR NA表达明显减弱,CD14 mR NA表达增强,给予DEX治疗后IκB和CD14 mRNA表达均降低;给予PDS治疗后IκB mRNA表达较LPS组明显增高,而CD14表达明显降低;Western blotting证实,LPS组CD14及NF-κB表达明显增高,给予DEX和PDS治疗后CD14和NF-κB表达受到抑制,其表达量接近CTR组。结论 PDS对休克大鼠心肌具有保护作用,能减轻内毒素血症时心肌表达CD14、IκB和NF-κB p65。

龙鳖胶囊对骨关节炎滑膜细胞p38MAPK信号通路及NF-κB p65的调控研究

目的:观察龙鳖胶囊对骨关节炎滑膜细胞p38MAPK信号通路及NF-κB p65的调控作用。方法:建立膝骨关节炎大鼠模型,于造模后开始给予低、中、高剂量的龙鳖胶囊灌胃(0.312 5、0.625、0.937 5 g·kg-1),连续4周,取膝关节制成组织切片,免疫组化SP法检测滑膜组织中MEK-3/6、p38、ATF2、NF-κBp65和P-MEK-3/6、P-p38、P-ATF2、P-NF-κBp65的表达情况。结果:给药2周、4周后,各组细胞均有MEK-3/6、p38、ATF2、NF-κBp65和P-MEK-3/6、P-p38、P-NF-κBp65阳性表达,其中造模组MEK-3/6、p38、ATF2、NF-κBp65和P-MEK-3/6、P-p38、P-NF-κBp65阳性细胞百分比均高于对照组和龙鳖低、中、高剂量组(P<0.01)。给药2周、4周后,各组细胞均有P-ATF2弱阳性表达;2周后,造模组P-ATF2阳性细胞百分比高于对照组和龙鳖低、中、高剂量组(P<0.05);4周后,各组间P-ATF2阳性细胞百分比比较,均无统计学差异(P>0.05)。结论:龙鳖胶囊可抑制过度亢进的p38MAPKs和NF-κB信号,抑制骨关节炎滑膜细胞中p38MAPKs和NF-κB信号通路的活化,从而发挥减轻滑膜炎症的作用。