目的:利用逆转录病毒介导的ARNA稳定沉默NF kappa B p65基因,观察沉默NF kappa B p65对HT29细胞药物敏感性的影响。方法:设计并合成针对p65基因的shRNA序列,构建逆转录病毒质粒;脂质体转染逆转录病毒质粒至结肠癌细胞株HT 29;G418筛选...目的:利用逆转录病毒介导的ARNA稳定沉默NF kappa B p65基因,观察沉默NF kappa B p65对HT29细胞药物敏感性的影响。方法:设计并合成针对p65基因的shRNA序列,构建逆转录病毒质粒;脂质体转染逆转录病毒质粒至结肠癌细胞株HT 29;G418筛选阳性细胞,局部消化法挑选单克隆;Western blot检测蛋白表达水平;于裸鼠皮下接种细胞形成种植瘤。结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示,构建成功的逆转录病毒载体被 Hind Ⅲ限制性内切酶切为两个分别长1950bp与5800 hp片段。测序结果显示,针对NF kappa B p65基因的shRNA序列成功插人逆转录病毒质粒。转染逆转录病毒载体的HT 29细胞持续表达绿色荧光蛋白,并对G418具抗性;Western blot结果显示逆转录病毒介导的shRNA有效沉默NF kappa B p65基因。经化疗后,沉默NF kappa B p65基因HT 29组的裸鼠种植瘤显著性低于HT 29组。结论:逆转录病毒介导的shRNA能高效、特异、稳定沉默NF kappa B p65基因,提高结肠癌裸鼠种植瘤对奥沙利铂的药物敏感性。展开更多
[目的]探讨核转录因子(NF-kappa B p65)和血管内皮生成因子(VEGF)在晚期原发性肝癌(HCC)组织和正常肝脏组织中的表达及其意义。[方法]采用免疫组织化学染色SP法检测65例晚期HCC组织切片(其中36例直径≥5cm,16例5cm>直径>2cm,13例...[目的]探讨核转录因子(NF-kappa B p65)和血管内皮生成因子(VEGF)在晚期原发性肝癌(HCC)组织和正常肝脏组织中的表达及其意义。[方法]采用免疫组织化学染色SP法检测65例晚期HCC组织切片(其中36例直径≥5cm,16例5cm>直径>2cm,13例直径≤2cm;28例肝内病灶数目大于1个,37例肝内病灶数目为1个)和30例正常肝脏组织(对照组)中NF-kappa B p65和VEGF抗体的表达水平,采用秩和检验方法分析其差异性,并再以直线相关方法分析NF-kappa B p65和VEGF在HCC中表达的相关性。[结果]各肿瘤组随肿瘤直径的增大,NF-kappa B p65和VEGF表达水平均出现递增的趋势。肝内(肿瘤数目>1个)NF-kappa B p65和VEGF表达水平强于肝内无转移组(P<0.05)。NF-kappa B p65和VEGF在HCC中表达呈正相关。[结论]VEGF有促进肝癌生长和侵袭转移作用,而NF-kappaBp65在HCC生长中有促进VEGF表达上调的作用。展开更多
文摘目的:利用逆转录病毒介导的ARNA稳定沉默NF kappa B p65基因,观察沉默NF kappa B p65对HT29细胞药物敏感性的影响。方法:设计并合成针对p65基因的shRNA序列,构建逆转录病毒质粒;脂质体转染逆转录病毒质粒至结肠癌细胞株HT 29;G418筛选阳性细胞,局部消化法挑选单克隆;Western blot检测蛋白表达水平;于裸鼠皮下接种细胞形成种植瘤。结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示,构建成功的逆转录病毒载体被 Hind Ⅲ限制性内切酶切为两个分别长1950bp与5800 hp片段。测序结果显示,针对NF kappa B p65基因的shRNA序列成功插人逆转录病毒质粒。转染逆转录病毒载体的HT 29细胞持续表达绿色荧光蛋白,并对G418具抗性;Western blot结果显示逆转录病毒介导的shRNA有效沉默NF kappa B p65基因。经化疗后,沉默NF kappa B p65基因HT 29组的裸鼠种植瘤显著性低于HT 29组。结论:逆转录病毒介导的shRNA能高效、特异、稳定沉默NF kappa B p65基因,提高结肠癌裸鼠种植瘤对奥沙利铂的药物敏感性。
文摘[目的]探讨核转录因子(NF-kappa B p65)和血管内皮生成因子(VEGF)在晚期原发性肝癌(HCC)组织和正常肝脏组织中的表达及其意义。[方法]采用免疫组织化学染色SP法检测65例晚期HCC组织切片(其中36例直径≥5cm,16例5cm>直径>2cm,13例直径≤2cm;28例肝内病灶数目大于1个,37例肝内病灶数目为1个)和30例正常肝脏组织(对照组)中NF-kappa B p65和VEGF抗体的表达水平,采用秩和检验方法分析其差异性,并再以直线相关方法分析NF-kappa B p65和VEGF在HCC中表达的相关性。[结果]各肿瘤组随肿瘤直径的增大,NF-kappa B p65和VEGF表达水平均出现递增的趋势。肝内(肿瘤数目>1个)NF-kappa B p65和VEGF表达水平强于肝内无转移组(P<0.05)。NF-kappa B p65和VEGF在HCC中表达呈正相关。[结论]VEGF有促进肝癌生长和侵袭转移作用,而NF-kappaBp65在HCC生长中有促进VEGF表达上调的作用。