养肺活血方对肺纤维化大鼠细胞外信号调节激酶1/2和核因子κ-B信号通路的影响

目的探讨养肺活血方对博莱霉素诱导肺纤维化大鼠肺组织细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)和核因子κ -B(NFκ-B)表达的影响。方法大鼠麻醉后,经气管软骨环间隙向心端穿刺,气管内注入博莱霉素A5 (5 mg/kg)建立大鼠肺纤维化模型,假手术组大鼠在同样麻醉条件下气管内注入等量生理盐水。术后第2日开始每日灌胃给药,假手术组和模型组予5‰羧甲基纤维素钠(CMC钠)溶液,地塞米松组予等容积地塞米松蒸馏水溶液,各中药治疗组予等容积相应中药合剂,灌胃28 d,麻醉处死大鼠,将左肺固定,包埋切片,常规脱蜡。用免疫组化SABC法检测ERK1/2和NFκ-B的表达;采用光学显微镜和全自动图像获取系统随机测量并计算平均光密度(I OD)值。结果模型组大鼠肺组织ERK1/2和NFκ-B的表达明显高于假手术组(P<0.01)。各中药治疗组肺组织ERK1/2和NF κ-B的表达明显低于模型组(P<0.01)。结论影响ERK1/2和NFκ -B信号通路可能是中药养肺活血方治疗肺纤维化的机制之一。

茶多酚诱导鼻咽癌细胞cyclin D1表达下调

目的：探索茶多酚及其单体抑制鼻咽癌细胞增殖的分子机制。方法：应用光学显微镜、 MTT测定、流式细胞仪、报告基因和 Western blot分析等方法，研究茶多酚及其单体对细胞增殖和细胞周期的影响及分子机理。结果：茶多酚处理鼻咽癌细胞 CNE1- LMP1 24 h后，分裂相细胞显著减少，细胞增殖受到抑制，细胞的生存率从 100％下降到 38.1％ (200μ g/ml)； S期细胞明显减少，从 22.20％下降至 13.16％ (200μ g/ml)， G0/G1细胞所占百分率增加，从 68.50％上升至 74.08％，细胞出现 G1/S阻滞。同时， cyclin D1基因启动子转录活性显著下调，与对照组比下降 4～ 5倍，但相同浓度的茶多酚与 (－ )- epigallocatechin- 3- gallate(EGCG)处理没有显著性差别， cyclin D1蛋白表达水平明显降低。采用荧光酶双报告基因系统分析，发现茶多酚处理 12～ 14 h后， AP- 1、 NFκ B的反式激活活性均显著下降，与对照组 (0μ g/ml)比分别下降 5～ 6倍、 7～ 8倍，且呈明显的量效关系。结论：茶多酚能抑制鼻咽癌细胞 CNE- LMP1增殖，茶多酚诱导所致 cyclin D1基因的转录和表达下调可能在其中起着重要作用。

CXCL8 siRNA通过PI3K/Akt/NF-κB信号途径抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨CXC趋化因子配体8[chemokine(C-X-C motif)ligand 8,CXCL 8]基因沉默对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响,以及磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)/核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号转导途径在其中所起的作用。方法 :应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测CXCL8在4种结肠癌细胞株HT-29、Wi Dr、Ca Co-2和Co Lo320中的表达水平。应用Lipofect AMINE2000脂质体转染法将靶向CXCL 8基因的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)转染至4种结肠癌细胞,然后采用蛋白质印迹法检测CXCL8蛋白的表达。WST-1法和Transwell小室实验分别检测CXCL 8基因沉默对4种结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响。蛋白质印迹法检测CXCL 8基因沉默后HT-29细胞中PI3K/Akt/NF-κB通路主要蛋白的磷酸化水平的变化。结果 :CXCL8在4种结肠癌细胞株中均高表达,而CXCL8 si RNA转染后CXCL8蛋白表达均被明显抑制(P值均<0.01)。转染CXCL8 si RNA后结肠癌细胞的增殖和侵袭能力均明显降低(P值均<0.01)。HT-29细胞中CXCL 8基因沉默可明显抑制CXCL8诱导的PI3K、Akt和NF-κB蛋白磷酸化(P值均<0.01)。结论 :CXCL8基因沉默能够显著抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭,推测其机制与下调PI3K/Akt/NF-κB信号通路蛋白的活化相关。

双重血浆置换联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎的疗效

目的探索双重血浆置换(double filtration plasmapheresis,DFPP)联合甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的疗效。方法2016年4月~2017年5月RA患者120例,随机分为对照组和观察组,每组60例。对照组给予甲氨蝶呤和来氟米特治疗。观察组在对照组治疗基础上给予DFPP。监测2组患者治疗前后炎症因子、Dickkopf-1(DKK1)、核因子κ-B受体活化因子配体(nuclear factorκ-B receptor activation factor ligands,RANKL)水平以及关节症状变化,并进行对比分析。结果治疗后2组患者DKK1增加(t=4.112,P<0.001),RANKL、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、类风湿因子、C反应蛋白、红细胞沉降率、疼痛关节数和肿胀关节数水平下降,观察组的变化程度大于对照组(t值分别为2.208,3.926,10.320,35.509,7.233,42.563,9.603,6.056;P值分别为<0.001,<0.001,<0.001,<0.001,<0.001,<0.001,<0.001,<0.001);观察组患者不良反应总数明显低于对照组(χ^(2)=3.159,P=0.047)。2组间白细胞、血小板、白蛋白差异无统计学意义(P>0.05)。结论DFPP联合MTX治疗促使血清DKK1升高,降低RANKL和炎症因子,改善临床症状。

视神经脊髓炎IgG刺激原代培养大鼠星形胶质细胞免疫反应

视神经脊髓炎(NMO)主要累及星形胶质细胞,导致中枢神经系统炎症、脱髓鞘和组织损伤。脑内病灶常高表达水通道蛋白4(AQP4),AQP4被认为是NMO血清IgG的抗原目标。根据NMO的可逆性及对NMO病灶演变特点的分析,笔者推测NMO IgG可能诱导了星形胶质细胞的动态免疫过程。培养原代大鼠星形胶质细胞,加入从NMO患者血清中提取或纯化的IgG,星形胶质细胞出现炎性增殖,同时基因表达出现与之匹配的明显变化。且星形胶质细胞反应因子脂质运载蛋白-2、多种趋化因子、细胞因子、应激反应因子的表达均增加。而在培养的原代星形胶质细胞中加入从正常对照者血清中提取的IgG则无上述变化。此星形胶质细胞的反应还与疾病种类相关。从复发缓解型多发硬化、Sj觟gren's或系统性红斑狼疮患者血清中提取的IgG加入培养的原代星形胶质细胞中也不能导致上述变化。笔者推测是NMO IgG与AQP4结合,导致星形胶质细胞出现炎症反应,并出现基因在转录和翻译水平的相应变化。抑制星形胶质细胞的炎症反应可能有助于减少星形胶质细胞增殖,缓解NMO病灶的发展。

4-1BB信号拮抗肿瘤上清诱导的树突状细胞凋亡及其机制

目的研究4-1BB信号对肿瘤上清诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)凋亡的拮抗作用及其机制。方法IL-4和GM-CSF诱导C57BL/6小鼠骨髓细胞,得到未成熟DCs,磁珠纯化。以抗4-1BB激发型抗体2A或CD40激发型抗体1c10刺激DCs,在不同条件下检测DCs的凋亡情况。以抗体标记NFκ-Bp65亚基,激光共聚焦显微镜检测抗4-1BB激发型抗体2A处理后DCs内NFκ-Bp65亚基向核内的转位情况。结果DCs上4-1BB信号的激发能拮抗由B-16肿瘤上清诱导的DCs凋亡,效果低于CD40信号,并能引起NFκ-Bp65亚基向核区转位。结论4-1BB信号的激发提高了DCs抵抗肿瘤上清诱导凋亡的能力,此作用通过包含NFκ-B通路的相关胞内信号传导途径实现。

PARP-1抑制对PM2.5致人支气管上皮细胞炎症反应的保护作用

目的 研究抑制多聚二磷酸腺苷核糖多聚酶-1（poly ADP-ribose polymerase-1,PARP-1）是否能缓解/逆转细颗粒物（PM2.5）诱导的炎症反应。方法 以不同质量浓度（0-1 000μg/mL）PM2.5处理正常人支气管上皮细胞（human bronchial epithelium cell line,HBE细胞）24h,台盼蓝拒染法测定细胞活力,采用200、400、600μg/mL PM2.5进行后续实验;设PM2.5（600μg/mL）单处理组、PARP-1抑制剂4-氨基-1,8-萘二胺（4-AN）（10μg/mL）单处理组、4-AN＋PM2.5组、溶剂（DMSO）对照组,免疫印迹法检测PARP-1、核因子κ-B（NF-κB）的p65亚基和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达水平,硝酸酶还原法检测一氧化氮（nitric oxide,NO）水平。结果 PM2.5 200、400、600μg/mL单独处理HBE细胞时,细胞存活率随着PM2.5质量浓度增高而下降,PARP-1、p65核转位、iNOS和NO水平升高,400、600μg/mL PM2.5处理组与DMSO对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;4-AN预处理可拮抗PM2.5诱导的PARP-1表达与p65核转位升高,同时炎症介质NO与催化合成NO的iNOS水平显著下降（与PM2.5单处理组比较,差异有统计学意义,P〈0.05）,并恢复至正常水平（与4-AN单处理组和对照组比较差异无统计学意义,P〉0.05）。结论 抑制PARP-1可以明显缓解PM2.5对HBE细胞的致炎作用,其机制与下调NF-κB核转位进而阻断炎症介质表达有关。