老年早期糖尿病肾病患者血清炎症因子、外周血NFκ-B活性变化及阿托伐他汀的治疗作用

目的观察老年早期糖尿病肾病(DN)患者血清炎症因子水平、外周血NF-κB活性的变化,并探讨阿托伐他汀对DN患者的治疗作用。方法根据是否合并DN将96例2型糖尿病患者分为糖尿病(DM)组30例、DN组66例。DN组随机分为DM常规治疗组(DN1组)31例、DM常规治疗+阿托伐他汀治疗组(DN2组)35例,并选择30例健康体检者作为对照组(NC组)。分别观察各组患者高敏C反应蛋白(hs-CRP)、TNF-α、IL-6、IL-1β及外周血NF-κB p65的磷酸化水平。结果 NC组、DM组、DN组血清hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平及外周血NF-κBp65活性逐渐升高(P<0.01或<0.05)。阿托伐他汀治疗后NF-κB p65活性及hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β明显下降(P<0.01或<0.05)。结论阿托伐他汀可抑制老年早期DN患者外周血NF-κB p65的活性,并可降低血清hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子的水平,显著改善患者炎症状态。

内毒素对妊娠期糖尿病患者外周血单核细胞TLR4 mRNA及NFκ-B mRNA表达的影响

目的研究妊娠期糖尿病(GDM)患者外周血单核细胞在内毒素(LPS)作用下Toll样受体4(TLR4)mRNA及核因子-κB(NFκ-B)mRNA的表达,探讨GDM的发病机制。方法正常妊娠孕妇20例为对照组,GDM患者20例为GDM组,受试者静脉血分离出单核细胞,用LPS刺激并培养,RT-PCR法检测单核细胞TLR4 mRNA及NFκ-B mRNA的表达,ELISA法检测培养液中白介素-1(IL-1)、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNFα-)水平。结果与对照组相比,GDM组TLR4 mRNA及NFκ-B mRNA表达增加,差异具有统计学意义(P<0.01)。两组TLR4 mRNA与NFκ-B mRNA表达水平存在相关性(rsGDM=0.768,rs对照=0.833,P<0.05)。与对照组比较,GDM组IL-1、IL-10及TNFα-水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 GDM组孕妇体内TLR4 mRNA、NF-κB mRNA呈高表达,炎症因子IL-1、IL-10、TNFα-升高,提示存在免疫炎症,LPS-TLR4-NFκ-B通路介导了大量炎症因子释放,参与了GDM的发病。

短间隔高压氧预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后NFκ-B表达的影响

目的:探讨短间隔高压氧预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后NF-κB表达的影响。方法:80只成年雄性Wistar大鼠,随机分为2组(每组n=40):对照组为常压空气组;HBO组为短间隔高压氧预处理组。采用肾下腹主动脉阻断法造成脊髓缺血再灌注损伤,观察两组再灌注后4 h、12 h、24 h、48 h时的后肢运动神经功能评分;再灌注48 h时取出腰段脊髓组织(L5-7)行石蜡包埋、切片,采用免疫组织化学法检测各组动物脊髓组织中NF-κB表达变化。结果:再灌注4 h、12 h、24 h、48 h时,HBO组神经功能学评分均明显优于对照组(P<0.05)。HBO组各时间点NF-κB阳性表达均明显低于对照组。HBO组和对照组后肢运动神经功能学评分与脊髓组织NF-κB表达呈正相关(r=0.72,0.65,P<0.05)。结论:高压氧预处理对缺血再灌注损伤的脊髓具有保护作用,且其所诱导的脊髓缺血耐受的机制与NF-κB有关。

NFκ-B在细胞凋亡中的调节作用和应用前景

核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NFκ-B)是细胞核内重要的转录调节因子,是细胞存活、细胞周期、细胞黏附和迁移的重要调节者。本文主要介绍了NFκ-B在细胞凋亡中的作用,探讨了细胞凋亡与宰后肌肉嫩化的关系,并展望了NFκ-B参与宰后肌肉嫩化过程的研究前景。

胰腺癌组织中NFκ-B/p65、IKKβ的表达及临床意义

目的探讨NF-κB/p65、IKKβ在胰腺导管腺癌组织中的表达、临床意义和诊断价值。方法应用组织芯片和免疫组织化学的方法检测88例人胰腺导管腺癌组织和11例正常胰腺组织中NF-κB/p65及IKKβ的表达,并分析其与临床病理特征及患者预后的关系。结果在88例胰腺癌组织中,NF-κB/p65、IKKβ的阳性表达率分别为54.55%和46.59%,正常胰腺组织分别为18.18%和9.09%,且两者的表达与胰腺癌的临床分期、淋巴结转移相关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤部位、大小、病理学分级无关(P>0.05)。经Spearman秩相关检验分析NF-κB/p65与IKKβ之间表达呈正相关(r=0.378,P=0.000,P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,胰腺癌组织中NF-κB/p65与IKKβ表达阳性的患者生存时间缩短。Cox多因素相关分析表明NF-κB/p65和IKKβ是影响患者生存期的独立预后因素(分别P1=0.004,P2=0.041)。结论胰腺癌中NF-κB/p65、IKKβ的异常表达与临床分期、淋巴结转移相关,提示NF-κB信号转导通路可能在胰腺癌的发生、发展中发挥重要作用,两者可以为胰腺癌的早期诊断及预后的判断提供参考依据。

PPARγ、NFκ-B、TNFα-在慢性缺血性肾病大鼠模型中的表达及意义

目的观察PPARγ、NF-κB、TNFα-在慢性缺血性肾病大鼠模型中的表达,探讨PPARγ、NFκ-B、TNF-α之间的关系及其在慢性缺血性肾病中的作用。方法通过单侧肾动脉部分结扎建立慢性缺血性肾病动物模型。按随机数字表法将16只大鼠分为模型对照组(MC)和假手术组(sham)2组,每组8只。测大鼠术后第4、8、12周动脉血压(SBP)。术后第12周末测24 h尿蛋白、尿β2微球蛋白(β2-MG),然后处死大鼠取肾脏观察肾组织病理改变;分别用免疫组化SP法和RT-PCR法测定肾组织PPARγ、NFκ-B蛋白和PPARγ、NFκ-B、TNF-αmRNA的表达。结果与sham组比较,MC组SBP明显上升,24 h尿蛋白、尿β2-MG水平均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。组织病理检查结果示:与sham组比较,MC组间质有大量炎症细胞侵润,肾小管损伤较明显(均P<0.05)。免疫组化检查结果示:与sham组比较,MC组PPARγ、NF-κB蛋白表达水平均明显升高(均P<0.05)。RT-PCR结果示:与sham组比较,MC组PPARγ、NF-κB、TNFα-mRNA表达水平均升高(均P<0.05)。直线相关性分析表明,MC组大鼠PPARγmRNA表达水平与肾脏病理损害评分及NFκ-B、TNF-αmRNA表达水平均呈正相关(r分别为0.976、0.992、0.954,均P<0.01)。结论慢性缺血使大鼠肾脏PPARγ、NF-κB、TNF-α表达上调,加重肾损害。

降浊升清法对抗动脉粥样硬化炎症反应及干预NFκ-B的动物实验研究

目的:探讨降浊升清汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样斑块炎症反应及NFκ-B的影响。方法:ApoE基因敲除小鼠给予高脂饲料喂养,利用HE染色法确定造模成功后,小鼠随机分为3组中药组、西药组及空白组,分别给药后用HE染色观察小鼠斑块的形成,用原位杂交法检测NFκ-B mRNA的表达,研究降浊升清法抗动脉粥样硬化及对炎症信号的抑制作用。结果:给药后,中药组与空白组对照NFκ-B的阳性率的表达有统计学意义,中药组与西药组对照对动脉组织中NFκ-B的阳性率的表达无统计学意义。结论:降浊升清汤与辛伐他汀均可抑制动脉组织中NFκ-B的表达,通过改善斑块内部成分来稳定易损斑块,具有程度不同的调脂作用,其机制可能与调节脂质代谢和抑制炎症反应有关。说明降浊升清汤该方药对动脉硬化炎症反应有一定的改善和调节作用。

NFκ-B在肺癌中作用的研究进展

NFκ-B是介导许多免疫和炎症反应的中心物质,同时也是细胞凋亡信号通路中一个重要的转录调节因子。其在肺癌组织中异于平常,与肺癌的发生密切相关。核因子NFκ-B主要是通过调节一系列参与免疫、炎症反应及凋亡的基因转录来发挥作用,但其具体的转录机制仍不是十分清楚。作者综述国内外NFκ-B与肺关系的研究文献,旨在探讨NFκ-B在癌症尤其是对肺癌作用方面的研究进展。

CCK-8对LPS诱导大鼠血管平滑肌细胞SOD基因表达及NF-κB活性增高的影响

目的:观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞(TASMCs)SOD基因表达的影响,初步探讨NF-κB的信号介导作用.方法:用贴块法培养大鼠TASMCs,经LPS,CCK-8,CCK+LPS及溶剂单独或共同孵育细胞,用RT-PCR技术检测MnSOD和Cu-ZnSOD mRNA表达;用免疫细胞化学检测细胞NF-κBP65蛋白表达;用Westernblot检测IκBα蛋白表达.结果:溶剂组存在MnSOD和Cu-ZnSOD mRNA基础表达;与溶剂组相比,LPS诱导TASMCsMnSOD和Cu-ZnSOD mRNA表达上调、胞核P65蛋白表达上调(P<0.05),而胞质IκBα蛋白水降低平(P<0.05);CCK-8可剂量依赖性地抑制拮抗LPS的上述作用(P<0.05);CCK-8单独作用可明显抑制MnSOD和Cu-ZnSOD mRNA的基础表达(P<0.05),而对NF-κBP65,IκBα蛋白无明显影响.结论:CCK-8可抑制LPS诱导TASMCsMnSOD和Cu-ZnSOD mRNA的表达,NF-κB起介导作用.

NF-κB抑制剂和IFN-γ对BAFF-R基因启动子活性的影响

目的:探讨IFN-γ和NF-κB抑制剂对人BAFF-R基因启动子活性的影响。方法:以人全血基因组DNA为模板,PCR方法扩增得到BAFF-R基因转录起始点上游5’端-1562^+261 bp的片段,与荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic连接构建8个序列缺失质粒。将重组质粒瞬时转染人多发性骨髓瘤细胞株KM3,通过检测荧光素酶的相对活性,确定启动子活性最强的区域;分别用NF-κB抑制剂(BAY11-7082)和IFN-γ对活性最强的启动子进行干预,测定并比较荧光素酶的相对活性;同时RT-PCR检测干预前后BAFF-R基因mRNA的表达水平。结果:IFN-γ对BAFF-R基因启动子活性有促进作用并且可以上调BAFF-R mRNA的表达,NF-κB抑制剂(BAY11-7082)对BAFF-R基因启动子活性有抑制作用并且可以下调BAFF-R mRNA的表达。结论:IFN-γ和NF-κB信号通路参与了BAFF-R基因的转录调控,为进一步研究BAFF-R的调节机制提供了基本的依据。

养肺活血方对肺纤维化大鼠细胞外信号调节激酶1/2和核因子κ-B信号通路的影响

目的探讨养肺活血方对博莱霉素诱导肺纤维化大鼠肺组织细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)和核因子κ -B(NFκ-B)表达的影响。方法大鼠麻醉后,经气管软骨环间隙向心端穿刺,气管内注入博莱霉素A5 (5 mg/kg)建立大鼠肺纤维化模型,假手术组大鼠在同样麻醉条件下气管内注入等量生理盐水。术后第2日开始每日灌胃给药,假手术组和模型组予5‰羧甲基纤维素钠(CMC钠)溶液,地塞米松组予等容积地塞米松蒸馏水溶液,各中药治疗组予等容积相应中药合剂,灌胃28 d,麻醉处死大鼠,将左肺固定,包埋切片,常规脱蜡。用免疫组化SABC法检测ERK1/2和NFκ-B的表达;采用光学显微镜和全自动图像获取系统随机测量并计算平均光密度(I OD)值。结果模型组大鼠肺组织ERK1/2和NFκ-B的表达明显高于假手术组(P<0.01)。各中药治疗组肺组织ERK1/2和NF κ-B的表达明显低于模型组(P<0.01)。结论影响ERK1/2和NFκ -B信号通路可能是中药养肺活血方治疗肺纤维化的机制之一。

肌肉萎缩与氧化应激

肌肉是机体具有收缩性的组织,它的主要功能是通过力量产生引起机体各部位的运动.肌肉萎缩是肌肉质量和力量丧失,肌肉活动功能减退的一种反应,在许多生理和病理情况下都可以出现.肌肉萎缩时不仅表现为肌肉结构形态的变化,如肌肉的重量和体积减少,肌纤维类型改变,最主要是肌肉蛋白质水解作用增强、合成减少.氧化应激是机体氧化产物超过机体抗氧化防御能力一种应激状态,可以导致细胞、组织和器官的损伤.大量证据表明,氧化应激参与肌肉萎缩的致病过程.探讨氧化应激在肌肉萎缩中的作用,对了解肌肉萎缩的致病机制有重要作用.本文对氧化应激和肌肉萎缩的关系,氧化应激参与肌肉萎缩时的蛋白质水解途径,以及连接氧化应激和肌肉萎缩的两个重要细胞信号转导通路做一简要综述.

核因子-κB、波形蛋白在自身免疫性甲状腺炎中的表达及相关性研究

目的探讨核因子-κB(NFκ-B)在桥本甲状腺炎(HT)中的表达以及与vimentin表达的相关性。方法采用免疫组织化学方法,检测28例桥本甲状腺炎及9例正常甲状腺组织中NFκ-B及vimentin的表达。并从17例HT免疫组化阳性标本中选择3例作免疫荧光双标记染色,用激光共聚焦显微镜分别检测CK8和vimentin、NFκ-B和vimentin的共表达。结果在正常及桥本甲状腺炎的滤泡上皮中,均可见CK8的阳性表达。vimentin在桥本甲状腺炎组(68.9±39.87()和正常甲状腺组(22.4%±34.63%)的阳性细胞百分数比较,两者差异显著(P=0.004)。NFκ-B在桥本甲状腺炎组和正常甲状腺组的阳性表达率分别为64.29%(18/28)和11.11%(1/9),两者差异显著(P=0.008);NFκ-B的阳性表达且与vim entin的阳性表达有正相关(r=0.662,P<0.01)。免疫荧光双标记激光共聚焦显微镜观察发现,CK8和vimentin、NFκ-B和vimentin明确共定位于HT滤泡上皮细胞的胞质中。结论桥本甲状腺炎滤泡上皮存在vimentin表达的明显增强,表明HT甲状腺滤泡上皮细胞存在上皮-间叶的免疫表型转化,而NFκ-B与vimentin表达增加关系密切。

川芎嗪对肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白及核因子-κB的影响

目的：探讨川芎嗪对肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSC）表达α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、核因子-κB（NFκ-B）的影响。方法：体外培养人肝星状细胞,免疫细胞化学法检测HSC中α-SMA的表达以及NFκ-B表达的核迁移。结果：在50-800mg/L浓度范围内,川芎嗪处理组α-SMA表达量不同程度减少,且抑制作用随剂量增加而增强;川芎嗪处理组NF-κB表达量较少并且主要位于细胞质,很少发生核迁移。结论：川芎嗪可以使活化的HSC中α-SMA、NFκ-B表达下降。

核因子-κB信号通路的研究进展

探讨转录因子中NF-κB(nuclear factor kappa B)家族的组成、激活与调节。NF-κB对相当多数量的基因发挥中心性转录调节作用,其在免疫与疾病发生、发展中起重要作用,作为新靶点在新药设计与相关疾病治疗新策略方面前景远大。

两种不同明胶液对脓毒症大鼠肺毛细血管漏的影响

目的观察琥珀酰明胶(MFG)和脲联明胶对盲肠结扎穿孔(CLP)所致脓毒症大鼠肺毛细血管漏及炎性反应的影响。方法 96只雄性SD大鼠,随机分为八组,每组12只,CLP+聚明胶肽组(聚明胶肽分别7.5、15和30 ml/kg,为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组)和CLP+MFG组(MFG分别7.5、15和30 ml/kg,为Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组);CLP组(NS 30 ml/kg,Ⅶ组);假手术组(NS 30 ml/kg,Ⅷ组)。各组术后4 h按要求静脉输注相应的液体,输注速率为0.2 ml/min。6 h后处死大鼠,取肺组织,分别测量肺毛细血管通透性、含水量、肿瘤坏死因子α(TNFα-)表达、核因子κB(NFκ-B)活性和超微结构改变。结果脲联明胶(15 ml/kg和30 ml/kg)和MFG(30 ml/kg)均可显著减少肺毛细血管漏,但MFG降低作用更强(P<0.05),两种明胶均可改善肺超微结构,但均不能降低TNFα-的表达和NFκ-B的活性。结论聚明胶肽与MFG均可减轻肺毛细血管漏,改善肺组织的超微结构改变,但与炎症反应无关。

茶多酚诱导鼻咽癌细胞cyclin D1表达下调

目的：探索茶多酚及其单体抑制鼻咽癌细胞增殖的分子机制。方法：应用光学显微镜、 MTT测定、流式细胞仪、报告基因和 Western blot分析等方法，研究茶多酚及其单体对细胞增殖和细胞周期的影响及分子机理。结果：茶多酚处理鼻咽癌细胞 CNE1- LMP1 24 h后，分裂相细胞显著减少，细胞增殖受到抑制，细胞的生存率从 100％下降到 38.1％ (200μ g/ml)； S期细胞明显减少，从 22.20％下降至 13.16％ (200μ g/ml)， G0/G1细胞所占百分率增加，从 68.50％上升至 74.08％，细胞出现 G1/S阻滞。同时， cyclin D1基因启动子转录活性显著下调，与对照组比下降 4～ 5倍，但相同浓度的茶多酚与 (－ )- epigallocatechin- 3- gallate(EGCG)处理没有显著性差别， cyclin D1蛋白表达水平明显降低。采用荧光酶双报告基因系统分析，发现茶多酚处理 12～ 14 h后， AP- 1、 NFκ B的反式激活活性均显著下降，与对照组 (0μ g/ml)比分别下降 5～ 6倍、 7～ 8倍，且呈明显的量效关系。结论：茶多酚能抑制鼻咽癌细胞 CNE- LMP1增殖，茶多酚诱导所致 cyclin D1基因的转录和表达下调可能在其中起着重要作用。

双重血浆置换联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎的疗效

目的探索双重血浆置换(double filtration plasmapheresis,DFPP)联合甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的疗效。方法2016年4月~2017年5月RA患者120例,随机分为对照组和观察组,每组60例。对照组给予甲氨蝶呤和来氟米特治疗。观察组在对照组治疗基础上给予DFPP。监测2组患者治疗前后炎症因子、Dickkopf-1(DKK1)、核因子κ-B受体活化因子配体(nuclear factorκ-B receptor activation factor ligands,RANKL)水平以及关节症状变化,并进行对比分析。结果治疗后2组患者DKK1增加(t=4.112,P<0.001),RANKL、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、类风湿因子、C反应蛋白、红细胞沉降率、疼痛关节数和肿胀关节数水平下降,观察组的变化程度大于对照组(t值分别为2.208,3.926,10.320,35.509,7.233,42.563,9.603,6.056;P值分别为<0.001,<0.001,<0.001,<0.001,<0.001,<0.001,<0.001,<0.001);观察组患者不良反应总数明显低于对照组(χ^(2)=3.159,P=0.047)。2组间白细胞、血小板、白蛋白差异无统计学意义(P>0.05)。结论DFPP联合MTX治疗促使血清DKK1升高,降低RANKL和炎症因子,改善临床症状。

视神经脊髓炎IgG刺激原代培养大鼠星形胶质细胞免疫反应

视神经脊髓炎(NMO)主要累及星形胶质细胞,导致中枢神经系统炎症、脱髓鞘和组织损伤。脑内病灶常高表达水通道蛋白4(AQP4),AQP4被认为是NMO血清IgG的抗原目标。根据NMO的可逆性及对NMO病灶演变特点的分析,笔者推测NMO IgG可能诱导了星形胶质细胞的动态免疫过程。培养原代大鼠星形胶质细胞,加入从NMO患者血清中提取或纯化的IgG,星形胶质细胞出现炎性增殖,同时基因表达出现与之匹配的明显变化。且星形胶质细胞反应因子脂质运载蛋白-2、多种趋化因子、细胞因子、应激反应因子的表达均增加。而在培养的原代星形胶质细胞中加入从正常对照者血清中提取的IgG则无上述变化。此星形胶质细胞的反应还与疾病种类相关。从复发缓解型多发硬化、Sj觟gren's或系统性红斑狼疮患者血清中提取的IgG加入培养的原代星形胶质细胞中也不能导致上述变化。笔者推测是NMO IgG与AQP4结合,导致星形胶质细胞出现炎症反应,并出现基因在转录和翻译水平的相应变化。抑制星形胶质细胞的炎症反应可能有助于减少星形胶质细胞增殖,缓解NMO病灶的发展。

CXCL8 siRNA通过PI3K/Akt/NF-κB信号途径抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨CXC趋化因子配体8[chemokine(C-X-C motif)ligand 8,CXCL 8]基因沉默对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响,以及磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)/核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号转导途径在其中所起的作用。方法 :应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测CXCL8在4种结肠癌细胞株HT-29、Wi Dr、Ca Co-2和Co Lo320中的表达水平。应用Lipofect AMINE2000脂质体转染法将靶向CXCL 8基因的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)转染至4种结肠癌细胞,然后采用蛋白质印迹法检测CXCL8蛋白的表达。WST-1法和Transwell小室实验分别检测CXCL 8基因沉默对4种结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响。蛋白质印迹法检测CXCL 8基因沉默后HT-29细胞中PI3K/Akt/NF-κB通路主要蛋白的磷酸化水平的变化。结果 :CXCL8在4种结肠癌细胞株中均高表达,而CXCL8 si RNA转染后CXCL8蛋白表达均被明显抑制(P值均<0.01)。转染CXCL8 si RNA后结肠癌细胞的增殖和侵袭能力均明显降低(P值均<0.01)。HT-29细胞中CXCL 8基因沉默可明显抑制CXCL8诱导的PI3K、Akt和NF-κB蛋白磷酸化(P值均<0.01)。结论 :CXCL8基因沉默能够显著抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭,推测其机制与下调PI3K/Akt/NF-κB信号通路蛋白的活化相关。