原代培养脊髓神经元神经丝蛋白NF-H表达与免疫电镜观察

目的:研究原代培养脊髓神经元NF-H表达及免疫电镜的分布,为神经丝结构异常所致的神经疾病奠定实验基础。方法:采用神经细胞培养技术、免疫组织化学与免疫电镜技术,进行原代培养脊髓神经元的神经丝蛋白NF-H的表达,并用图像分析仪对NF-H表达进行了定量分析测定。结果:原代培养脊髓神经元中,神经丝蛋白的NF-H的表达,随细胞发育的逐渐成熟呈日趋上升趋势。免疫电镜观察可见神经丝蛋白呈电子密度高的丝絮状沉淀,均匀分布在细胞质中,在突起中呈束状排列。结论:神经丝蛋白的NF-H表达的增加,伴随着神经元的发育初期到成熟的形态结构变化,与培养时间成正相关。

中重型创伤性脑损伤患者早期血清pNF-H、AQP4变化及临床意义

目的:探讨中重型创伤性脑损伤患者早期血清p NF-H、AQP4水平变化及临床意义。方法:选取中重型创伤性脑损伤患者30例(观察组)及健康体检者15例(对照组),应用ELISA法检测患者伤后24 h内及伤后48、72、120 h血清中p NF-H、AQP4水平,分析其变化趋势与疾病演变和预后的关系。结果:观察组患者各时间点血清p NF-H、AQP4浓度较对照组显著高,差异有统计学意义(P<0.05),血清AQP4高峰出现于伤后72 h。重型颅脑损伤患者血清p NF-H、AQP4浓度明显高于中型患者。预后恶劣组患者血清AQP4、p NF-H浓度显著高于预后良好组(P<0.05)。结论:中重型创伤性脑损伤早期患者血清AQP4及p NF-H水平测定有助于评估的病情严重程度和预后。

NF-H在无症状颈动脉狭窄患者血清中的表达与认知功能的关系

目的:探讨无症状颈动脉狭窄患者颈动脉支架术前及术后血清神经丝蛋白重链(NF-H)表达与患者认知功能的关系。方法:入选2018年5月—2019年8月于四川省人民医院神经内科住院的40例伴有轻度认知功能损害的无症状颈动脉狭窄患者作为实验组,对照组为40例健康人群。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定实验组CAS术前、术后3月血清NF-H水平以及对照组血清NF-H水平。分别在CAS术前1周、术后3个月用简易智力状态检查量表(MMSE)及蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评价患者认知功能。比较术前、术后3月血清NF-H表达差异及患者术前及术后3个月认知功能变化。结果:实验组术前患者血清NF-H水平高于对照组(P<0.01),实验组术前MMSE评分为(26.08±1.59)分低于对照组MMSE评分(27.93±2.95)分(P<0.05),实验组术前MoCA评分明显低于对照组:(24.48±1.89)分个月vs.(27.97±1.21)分(P<0.01);与术前实验组相比,术后3个月实验组血清NF-H水平显著下降(P<0.01),这与实验组CAS术后3个月的后认知功能改善相符,实验组认知功能术前术后比较:MMSE(26.08±1.59)分vs.(27.48±1.95)分,P<0.05、MoCA(24.48±1.89)分vs.(26.83±.49)分,P<0.05;Pearson相关性分析得出,患者血清NF-H水平与患者MMSE评分及MoCA评分均呈负相关(P<0.01)。结论:无症状颈动脉狭窄患者存在不同程度的脑损伤及认知功能障碍,颈动脉支架术可有效改善颈动脉狭窄相关的认知功能损害,脑损伤标志物NF-H可能成为早期识别认知功能损害及监测颈动脉支架术后患者认知功能改变的生物学标志物。

NF-H基因参与K562/A02细胞多药耐药机制形成的研究

目的 分析K5 6 2 /A0 2细胞多药耐药性 (MDR)分子机制 ,寻找可能参与K5 6 2 /A0 2细胞耐药机制的新基因。方法 通过长期逐步增加K5 6 2细胞培养液中阿霉素 (ADM)的浓度 ,诱导出多药耐药细胞株K5 6 2 /A0 2 ,利用cDNAmicroarray比较K5 6 2和K5 6 2 /A0 2基因表达的差别 ,从中选择NF H基因进行RT PCR和免疫细胞化学验证 ,并利用反义核酸技术和细胞内ADM浓度的测定 ,进一步验证该基因与K5 6 2 /A0 2细胞多药耐药的关系。结果 通过比较发现 ,有 12个基因可能参与了K5 6 2 /A0 2细胞的耐药机制 ,其中 7个基因在K5 6 2 /A0 2中被下调 ,5个基因被上调。本研究结果显示 ,NF H基因在K5 6 2 /A0 2细胞中高表达 ,并且 ,将NF H和mdr1反义核酸同时转入K5 6 2 /A0 2细胞后 ,可明显提高细胞内ADM浓度 ,而单独转入NF H反义核酸效果不明显。结论 K5 6 2 /A0 2细胞耐药表型的形成是多因素的 ,除了P 糖蛋白 (P gp)等常见因素外 ,可能还有NF

川藏香茶菜庚素的体外抗炎作用与分子机制研究

为探究川藏香茶菜庚素(Pseurata H)对巨噬细胞炎症模型的抗炎作用及分子机制,利用LPS刺激RAW264.7细胞建立体外炎症模型,并分别以浓度为10、20和40μmol/L的Pseurata H干预该细胞模型。利用CCK-8法检测Pseurata H对细胞增殖活性的影响;Griess法和ELISA试剂盒分别检测细胞上清液中NO、IL-6和TNF-α的含量;Western Blot检测COX-2、iNOS蛋白、p-NF-κB和p-ERK蛋白的表达变化;以RT-qPCR法检测药物干预前后细胞中iNOS、TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA基因表达变化。结果表明:浓度为10、20和40μmol/L的Pseurata H对细胞没有毒性,不同浓度的Pseurata H对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型中NO、IL-6和TNF-α分泌具有很好的下调作用,对iNOS、COX-2、NF-κB、p-NF-κB、ERK和p-ERK蛋白的表达具有良好的抑制作用,且具有浓度效应。Pseurata H具有明显的抗炎作用,其作用机制可能是通过抑制NF-κB/MAPK信号通路而发挥抗炎作用。

Tropic1808在PC12细胞中的表达

目的构建稳定表达tropic1808基因的PC12细胞株,并通过观察稳定株中高分子量神经丝蛋白(NF-H)的表达以初步观察该基因的作用。方法构建重组真核表达载体pcDNA-HA-tropic1808,转染PC12细胞,经G418筛选、Westernblot鉴定。采用RT-PCR,实时PCR,Westernblot和细胞组织化学方法观察tropic1808稳定株中NF-H的表达。结果Westernblot检测表明,tropic1808基因稳定表达,RT-PCR,实时PCR,Westernblot和细胞组织化学方法均观察到NF-H在tropic1808稳定株中的表达高于空载体对照。结论Tropic1808基因可以在PC12稳定表达且NF-H在tropic1808稳定株中表达上升。

牛膝多肽促大鼠海马神经元突起的生长

目的研究牛膝多肽(ABPP)对体外培养的大鼠海马神经元突起生长的促进作用及其对生长相关蛋-白43(GAP-43)和神经丝蛋白(NF-H)mRNA和蛋白表达的影响。方法以体外原代培养的胎鼠海马神经元为研究模型,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)检测ABPP对海马神经元细胞活性的影响,通过免疫荧光细胞化学法,采用Image-Pro Express软件测量不同浓度ABPP(0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h,对海马神经元神经突起生长的影响;通过实时荧光定量PCR法定量分析不同浓度ABPP(0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药6h,对海马神经元GAP-43和NF-H基因表达的影响;采用免疫印迹法观察不同浓度ABPP(0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h后,对海马神经元GAP-43和NF-H蛋白表达的影响。同时应用胞外信号调节激酶(ERK)特异性拮抗剂PD98059与ABPP共培养海马神经元,分析ABPP对海马神经元的作用与ERK通路的关系。结果ABPP可有效地促进海马神经元突起的生长,加药后24h浓度为1.0mg/L,作用最强;实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光细胞化学法和免疫印迹检测的结果表明,ABPP能增加体外培养的海马神经元GAP-43和NF-H的mRNA和蛋白表达,PD98059可抑制该过程。结论ABPP能促进体外培养的海马神经元神经突起的生长,其作用与上调GAP-43和NF-H基因的表达相关,并可能与ERK通路有关。

灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎小鼠胃黏膜组织TLR2、NF-κBp65的影响

目的探讨灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎(HAG)小鼠胃黏膜组织Toll样受体2(TLR2)、核转因子p65(NF-κBp65)的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、胃三联组、灭幽汤组。采用复合因素(肥甘食物+湿热环境+幽门螺杆菌)建立BALB/c小鼠HP相关性胃炎脾胃湿热证模型。采用免疫组化法检测胃黏膜组织TLR2、NF-κBp65的蛋白表达情况。结果小鼠模型组与正常对照组比较TLR2与NF-κBp65表达均增加(P<0.05);与模型组比较,灭幽汤组小鼠胃黏膜TLR2与NF-κBp65表达均降低(P<0.05)。结论灭幽汤能根除HP,可减轻HP引起的胃黏膜炎症反应。其机制可能是通过下调TLR2,抑制NF-κBp65的激活,从而阻止NF-κB的活化,减轻胃粘膜炎症反应,进而发挥其治疗作用。

纳米流体热导率试验

采用自行设计的瞬态热线装置,测试了不同种类纳米流体的热导率,分析研究了粒子体积分数、粒径、温度、分散剂等因素对纳米流体热导率的影响.结果表明,低体积分数纳米流体的热导率比基液有较大幅度的提高,最大可达40%左右;纳米流体的热导率随着粒径的增大而减小,随着粒子体积分数的增大、温度的升高而增加,且分散效果越好的纳米流体热导率越大.试验热导率值大于常规固液混合物的H-C模型预测值,表明纳米流体具有不同于一般固液混合物的独特的优良导热特性.

低分子量神经丝蛋白(NF-L)的体外组装

利用超速离心和离子交换层析技术,从牛脊髓中分离纯化了神经丝蛋白三组分:NF-L,NF-M和NF-H。应用电镜负染色和金属投影方法研究神经丝的形态结构与NF-L的体外组装,结果表明:神经丝由10nm的核心纤维与外周的丝状突起组成;在近似生理条件下,NF-L可在60min内组装成10nm纤维,纤维由4根亚丝缠绕而成;在碱性缓冲液中,NaCl能促进NF-L装配成短纤维,这种10nm的短纤维无法连接成长纤维。

幽门螺杆菌相关性胃溃疡与胃癌中NF-κB、TFF3的表达及意义

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)和三叶因子3(TFF3)在胃溃疡和胃癌中表达的意义,以及与幽门螺杆菌(H.pylori)感染的关系。方法胃溃疡组(GU)60例,胃癌组(GC)70例,应用免疫组化方法测定TFF3和NF-κBp65的表达,同时检测H.pylori感染情况。结果 GC中NF-κBp65和TFF3表达水平均高于GU(P<0.01)。GC中NF-κBp65表达与TFF3表达呈显著正相关(r=0.350,P=0.003)。GU中H.pylori阳性病例中NF-κBp65、TFF3表达显著高于H.pylori阴性病例(P均<0.05)。H.pylori感染病例中,GC组的NF-κBp65、TFF3表达水平均比GU组高(P均<0.05);H.pylori阴性病例中,GC组的NF-κBp65、TFF3表达水平亦均比GU组高(P均<0.01)。结论 NF-κBp65和TFF3的高表达与胃癌的发生发展有着密切的关系,二者可能存在协同作用。H.pylori感染可以上调宿主胃黏膜NF-κBp65和TFF3的表达,表达的差异与胃溃疡和胃癌两种不同疾病转归相关。

支原体巨噬细胞活化脂肽-2经PI3K/Nrf2诱导单核细胞表达HO-1和NQO1

目的 观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2（MALP-2）对THP-1单核细胞血红素氧合酶-1（HO-1）和NAD（P）H：醌氧化还原酶-1（NQO1）表达的影响,以明确机体抵抗支原体感染所致炎性损伤的自我防御机制.方法 体外培养THP-1细胞并分为对照组和实验组.其中对照组加入等体积培养基,实验组根据不同的实验目的 加入不同浓度的MALP-2作用5～120 min或12 h,Western blot 检测HO-1和NQO1表达以及Akt磷酸化水平.同时,采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞,以证实PI3K参与HO-1表达.提取细胞核蛋白,凝胶迁移率实验和免疫荧光观察NF-E2相关因子2（Nrf2）的DNA结合活性和核转位情况,并采用特异性siRNA沉默Nrf2后,Western blot观察其对HO-1和NQO1表达的影响.结果 Western blot结果显示,MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1和NQO1蛋白,且呈一定的剂量依赖性.此外,MALP-2能激活PI3K,且PI3K抑制剂能抑制HO-1和NQO1的表达;凝胶迁移率实验和激光共聚焦结果显示,MALP-2能增强Nrf2的DNA结合活性及核转位,而PI3K抑制剂处理后,Nrf2的DNA结合活性以及核转位水平进一步降低.RNA干扰Nrf2后,HO-1和NQO1表达显著降低.结论 MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1和NQO1,其机制可能受PI3K/Nrf2调控.

NF-κB抑制对宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性影响的观察

目的:探讨抑制核转录因子κB(NF-κB)表达对宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性的影响。方法:通过对HeLa细胞加入NF-κB的抑制剂100μmol/LPDTC或2μmol/L PS-341,均作用2 h来抑制NF-κB的表达。将HeLa细胞分为PDTC组、PS-341组及对照组加入等量生理盐水。各组均给予直线加速器照射,剂量分别为0、2、4和6 Gy。用蛋白质印迹法来观察细胞核内NF-κB含量的变化,用TUNEL法来检测细胞的凋亡,用MTT法检测细胞增殖。结果:辐射可以使HeLa细胞内NF-κB的表达增多,PDTC及PS-341均可以抑制由射线介导NF-κB的增加。在0 Gy条件下对照组与PDTC组及PS-341组HeLa细胞的凋亡指数分别为3%、12%和15%,两实验组的凋亡指数均高于对照组,P<0.01;6 Gy条件下实验组细胞的凋亡指数都高于同条件下对照组,P<0.01。结论:在宫颈癌HeLa细胞中,PDTC及PS-341均可抑制NF-κB的表达从而增加了由射线介导的细胞凋亡,增加HeLa细胞的放疗敏感性。

丹参注射液抑制H_2O_2诱导的平滑肌细胞增殖的作用机制

目的 :观察丹参对H2 O2 诱导的离体大鼠主动脉平滑肌细胞 (VSMC)、增殖细胞核抗原 (PCNA)、核转录因子 (NF κB)蛋白表达和细胞增殖周期时相的影响 ,以探讨其可能的作用机制。方法 :以H2 O2 作为外源性活性氧(ROS)刺激VSMC增殖 ,用免疫细胞化学法检测培养的VSMC中PCNA和NF κB的表达 ,同时用流式细胞术测定细胞周期。结果 :H2 O2 可使VSMC胞核内PCNA和NF κB蛋白表达呈强阳性 ,并明显增加S期细胞百分比 (与对照组相比 ,P <0 0 5或P <0 0 1) ,加入丹参干预后 ,PCNA和NF κB蛋白表达明显受抑制 ,G0 /G1期细胞百分比升高 ,S期细胞百分比下降。结论 :抑制PCNA和NF κB蛋白表达 ,阻止细胞进入有丝分裂期可能是丹参抑制H2 O2 诱导的VSMC增殖的重要机制之一。

苯妥英钠对内毒素作用下人牙周膜成纤维细胞增殖和表达TNF-α的影响

目的:观察苯妥英钠(PHT)对内毒素(LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)增殖和表达肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:原代培养h PDLFs,分别与100 mg/L LPS、不同浓度PHT(5、20 mg/L)以及100 mg/L LPS+不同浓度PHT共同培养24 h后,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法观察不同浓度PHT对LPS作用下h PDLFs增殖活性的影响;采用免疫细胞化学SP法检测PHT对LPS作用下h PDLFs内TNF-α的表达情况。结果:100 mg/L的LPS可明显抑制h PDLFs的增殖活性、刺激h PDLFs表达TNF-α(P<0.05);20 mg/L PHT可明显促进h PDLFs的增殖(P<0.05),并可明显抑制h PDLFs表达TNF-α(P<0.05);将20 mg/L PHT与100 mg/L LPS联合作用于h PDLFs时,可明显逆转LPS对h PDLFs增殖(P<0.05),明显拮抗LPS介导h PDLFs表达TNF-α(P<0.05)。结论:20 mg/L PHT对LPS作用下的h PDLFs具有保护作用。

二甲双胍抑制乳腺癌MCF-7细胞作用的研究

目的初步探讨二甲双胍对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用。方法将乳腺癌MCF-7细胞分为实验组和对照组,实验组用终浓度为16.56g/L的二甲双胍培养,对照组不用二甲双胍干预。两组MCF-7细胞在相同条件下培养48h后分别提取细胞总蛋白,应用Western blot法检测乳腺癌MCF-7细胞中NF-κBp65、Lin28B的表达情况。以RT-PCR法检测MCF-7细胞中microRNA let-7下游基因HMGA2、H-Ras的转录水平。结果药物干预48h后,乳腺癌MCF-7细胞中NF-κBp65、Lin28B的表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组乳腺癌MCF-7细胞中自我复制和多向分化的相关基因HMGA2、H-Ras的转录水平明显下降,2-△△Ct测得两种基因的表达分别下降85%和96%(P均<0.05)。结论 16.56g/L的二甲双胍能够有效地降低乳腺癌MCF-7细胞中NF-κBp65、Lin28B的表达,进一步抑制乳腺癌MCF-7细胞多向分化和自我复制相关基因HMGA2和H-Ras的表达,从而为二甲双胍抑制乳腺癌的复发和转移提供实验依据。

Physagulin H通过阻断NF-κB和JNK/MAPKs信号通路抑制LPS诱导RAW 264.7细胞产生的炎症反应

采用脂多糖诱导的RAW 264.7巨噬细胞体外炎症模型评价physagulin H的抗炎活性.以MTT法评价细胞毒性,Griess法检测NO的含量,ELISA法检测PGE 2和TNF-α水平,Western Blot法检测炎症蛋白表达(iNOS和COX-2)以及对NF-κB炎性信号通路(IκB-α蛋白降解)和对MAPKs通路(JNK,p38和ERK蛋白磷酸化)的调控作用,研究physagulin H的抗炎活性及作用机制.结果表明,physagulin H可显著降低巨噬细胞RAW 264.7中NO、PGE 2和TNF-α的释放,还可显著降低iNOS和COX-2蛋白的高表达且呈浓度依赖性.PhysagulinH对LPS诱导NF-κB/IκB-α降解具有显著抑制作用.进一步的抗炎机制研究表明,physagulin H能抑制JNK磷酸化,但对ERK 1/2和p38磷酸化无明显抑制作用.综上,physagulin H是通过调控NF-κB和JNK/MAPKs信号转导通路下调LPS诱导的炎性蛋白的高表达,进而抑制小鼠巨噬细胞产生和释放过量炎症介质以及炎症因子,从而发挥抗炎作用.

一种集群环境下高可用的NFS服务器

文章说明了一种高可用性的NFS服务器原理和技术要点,在此基础上,给出了一个在集群文件系统环境中高可用性NFS服务器的软件框架及实现。

二甲双胍通过NF-κB对乳腺癌细胞MDA-MB-435S的抑制作用

目的探讨二甲双胍对乳腺癌细胞MDA-MB-435S的抑制作用。方法将细胞分为四组:A组(对照组),B组(TNF-α组),C组(TNF-α+10mM二甲双胍组),D组(10mM二甲双胍组)。培养48h后,运用Western Blot检测各组乳腺癌细胞MDA-MB-435S中NF-κ B、Lin28B的表达情况,RT-PCR检测A组、D组乳腺癌细胞MDA-MB-435S中microRNA let-7下游基因HMGA2、H-Ras的转录水平。结果药物干预48h后,与A组相比,B组乳腺癌细胞中NF-κB和Lin28B的表达均明显上调(P<0.01),而D组细胞中NF-κ B(P<0.01)和Lin28B(P<0.01)表达明显下降。与B组相比,C组乳腺癌细胞中NF-κ B(P<0.05)和Lin28B(P<0.01)表达下调。D组乳腺癌细胞中与肿瘤细胞自我复制和多向分化潜能相关的基因HMGA2和H-Ras转录分别下降83%(t=6.2;P<0.05)和94%(t=34.5;P<0.01)。结论 10mM浓度的二甲双胍能够有效的降低NF-κB、Lin28B的表达,进一步抑制乳腺癌细胞中自我复制和多向分化潜能相关基因HMGA2和H-Ras的转录。