肿瘤相关蛋白NGAL的生物学特征

人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)是一种肿瘤相关的糖蛋白。在乳腺癌、胃癌、结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌和食管癌等许多恶性肿瘤中异常表达,与癌细胞的侵袭、运动和转移等生物学行为密切相关。本文将对其生物学功能及其与肿瘤发生的关系进行阐述。

NGAL的结构与功能研究进展

NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin）是一种新的lipocalin,其结构与功能的研究进展为人瞩目。目前认为 ＮＧＡＬ具有运输疏水性小分子，调节明胶酶B(gelatinase B或matrixmetalloproteinase-9,ＭＭＰ－９）活性等功能，并可能参与免疫炎症反应以及肿瘤的发生发展，特别是肿瘤的浸润转移等过程。最近，ＮＧＡＬ蛋白的空间结构已被研究清楚。这对于促进ＮＧＡＬ生物学作用或功能的研究，特别是对其新的生物学作用或功能的探索，比如与肿瘤的关系（ＮＧＡＬ可能是一种新的癌基因或促癌基因）将具有十分重要的意义。对此作者进行了综合评述。

NGAL在肾间质纤维化不质阶段的表达及意义

目的动态观测单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白分子（NGAL）的表达变化，探讨NGAL在肾小管间质纤维化发展中的作用机制。方法48只SPF级雄性SD大鼠随机分为UUO模型组及假手术（SOR）组，每组24只，UUO组行左侧输尿管梗阻术，SOR组仅游离左侧输尿管不结扎。术后第1、4、7、14天分别处死每组6只大鼠，取左。肾行HE和Masson染色，并用免疫组化ELiVision^TM—plus法检测肾组织NGAL的表达。结果HE、Masson染色切片示：UUO组间质损伤指数与肾纤维化程度在术后不同时间点明显高于SOR组（P〈0．05）。免疫组化结果显示：SOR组大鼠肾组织中肾小管有一定量NGAL表达，UUO组术后第l天NGAL表达显著升高，第4天与其相比，差异无统计学意义，术后第7天表达量下降，术后第14天时明显低于第7天（P〈0．05），但仍高于SOR组（P〈0．05）。结论实验大鼠梗阻侧肾组织中NGAL的表达在梗阻早期明显上升，并保持一定高表达状态，但随着梗阻时问延长而下调，提示NGAL可能在肾间质纤维化早期起负向调节作用。

NGAL蛋白诱导食管癌细胞发生自噬

以往研究证明,中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)与食管癌密切相关,改变NGAL表达能够对癌细胞的形态结构产生明显影响,但确切的作用机制不明.在酵母细胞中表达NGAL蛋白,柱层析分离纯化.筛选NGALR(NGAL receptor)高表达与弱表达的人食管癌细胞系EC1.71和EC109作为实验细胞模型.5-FAM标记NGAL蛋白,加入到细胞培养上清中,对比研究NGAL蛋白入胞情况、细胞形态学改变、细胞自噬体产生、自噬相关基因表达、细胞内铁离子与铁蛋白水平以及相关细胞信号转导激酶的活性等.结果表明,NGAL蛋白可经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用,致使细胞发生典型的自噬性形态结构变化,自噬体大量产生,自噬相关基因的表达发生相应变化,ERK被激活,但细胞内的铁离子与铁蛋白未受明显影响.上述结果提示,诱导细胞发生自噬是外源性NGAL蛋白经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用的机制之一,与NGAL蛋白跨膜转铁未见直接关联,而ERK信号转导途径可能参与了这一过程.

NGAL重组蛋白的表达与纯化及其促进结肠癌转移的研究

目的研究NGAL重组蛋白促进人结肠癌细胞SW480转移的作用机制。方法通过基因工程方法构建重组表达载体pet32a-tev-NGAL,转化大肠杆菌(BL21-DE3)进行表达;采用亲和层析纯化,并用tev酶进行酶切获得NGAL重组蛋白;Transwell与基质胶实验检测NGAL对细胞迁移、侵袭能力的影响;Western blot检测NGAL对肿瘤转移相关蛋白表达的影响;ELISA检测不同肿瘤分期结肠癌患者血液中NGAL表达情况。结果成功构建pet32a-tev-NGAL原核表达载体,并通过体外表达与纯化获得NGAL重组蛋白;该蛋白促进SW480的迁移和侵袭;Western blot检测结果表明,NGAL激活EMT信号通路;ELISA结果表明,NGAL表达量与肿瘤恶化程度成正相关。结论 NGAL通过激活EMT信号通路促进结肠癌细胞SW480转移。

血清NGAL、CysC、RBP及MMP-2联合检测对糖尿病肾病的诊断价值

目的观察中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)、胱抑素C(CysC)、视黄醇结合蛋白(RBP)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)联合检测诊断2型糖尿病肾病(T2DN)的价值。方法 149例2型糖尿患者依据尿蛋白结果分成3组:正常蛋白尿组(NA组),微量蛋白尿组(MA组)和临床肾病组(CN组)。选取同期50例健康体检者为对照组(NC组)。分析并比较各组血清NGAL、CysC、RBP、MMP-2水平。结果 NA组、MA组和CN组血清中NGAL、CysC、RBP水平显著高于NC组(P<0.05或P<0.01),MMP-2水平显著低于NC组(P<0.01)。NA组、MA组、CN组NGAL、CysC、RBP及MMP-2联合检测的阳性率分别为66.0%、85.7%、92.0%,均高于单项检测的阳性率(P<0.05)。NGAL与CysC、RBP呈正相关(P<0.05),与MMP-2呈负相关(P<0.05)。结论 DN患者中血清NGAL、CysC、RBP显著升高,MMP-2显著降低,联合检测可作为DN的早期监控评估指标。

FLAG Pull-down技术筛选人乳腺癌细胞中NGAL相互作用蛋白

目的构建含有NGAL基因的p3XFLAG-NGAL真核表达载体并对其进行鉴定,获取人乳腺癌细胞MCF7中NGAL相互作用蛋白。方法提取MCF7细胞中总RNA,反转录为c DNA后采用聚合酶链反应扩增NGAL基因,上下游分别引入NotⅠ和Eco RⅠ酶切位点,双酶切后将其插入p3XFLAG-CMV-14质粒中,构建p3XFLAGNGAL重组质粒,并进行双酶切和测序鉴定。采用脂质体法转染该质粒至MCF7细胞中,经Western blot检测FLAG-NGAL融合蛋白的表达情况。再使用FLAG pull-down技术和蛋白质谱测定获取人乳腺癌细胞MCF7中NGAL相互作用蛋白。结果经过NotⅠ和Eco RⅠ双酶切及DNA测序验证,本研究成功构建p3XFLAG-NGAL真核表达载体,免疫印迹法证实转染了p3XFLAG-NGAL载体的人乳腺癌细胞MCF7高表达FLAG-NGAL融合蛋白,并利用FLAG pull-down技术筛选出人乳腺癌细胞MCF7中NGAL相互作用蛋白,经蛋白质谱测定为角蛋白-1(Keratin 1,KRT1)。结论成功构建p3XFLAG-NGAL真核表达载体,并获取人乳腺癌细胞MCF7中NGAL相互作用蛋白KRT1,为下一步研究乳腺癌的发生、发展机制提供新的思路和靶点。

慢性阻塞性肺病及吸烟人群血清MMP-9、NGAL、MMP-9/NGAL前体及中性白细胞弹性蛋白酶水平变化

目的确定吸烟情况对慢性阻塞性肺病(慢阻肺)患者血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、中性粒细胞明胶酶蛋白(NGAL)、MMP-9/NGAL前体及中性白细胞弹性蛋白酶(NE)水平的影响。方法在80名慢性阻塞性肺病患者(65名吸烟者,15名不吸烟者)和35名健康成年人(26名吸烟者,7名不吸烟者)中收集血清样本,随后进行ELISA测定血清样本中研究因子的水平。结果在患有慢阻肺的吸烟者中,MMP-9、NGAL和MMP-9/NGAL水平明显升高。此外,患有慢阻肺的吸烟者与健康的吸烟者相比,NE和MMP-3水平显著增高。结论 MMP-9、NGAL、MMP-9/NGAL和NE的血清水平能够反应与吸烟有关的慢阻肺患者的全身炎症状态。

尿液中NGAL、MCP-1、RBP诊断早期2型糖尿病肾病的价值分析

目的探讨尿液中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、视黄醇结合蛋白(RBP)诊断早期2型糖尿病肾病(DN)的价值。方法选取我院收治的2型糖尿病患者300例,依据DN发生情况(尿蛋白结果)分为DN组(n=120)和无DN组(n=180),选取同期健康体检人员50例作为健康组,检测所有研究对象尿液中的NGAL、MCP-1、RBP水平。结果在NGAL、MCP-1、RBP水平方面,DN组显著高于无DN组,无DN组显著高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线结果显示,三者联合检测诊断早期DN的敏感度、特异度、准确度分别为96.67%、96.11%、96.33%,显著高于三者单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NGAL、MCP-1、RBP与早期DN的发生有关,可作为诊断早期DN的重要参考指标,且三者联合检测具有更高的诊断价值,值得临床进一步推广。

血清NGAL、Cys-C、RBP联合检测对糖尿病肾损伤早期诊断的临床意义

目的探讨血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、胱抑素C(Cys-C)和视黄醇结合蛋白(RBP)联合检测在2型糖尿病肾功能损伤早期诊断中的临床意义。方法选择2015年11月至2016年10月西安市长安医院内分泌科就诊的220例2型糖尿病患者为观察组,根据尿微量白蛋白与尿肌酐比值(ACR)将患者分为单纯糖尿病(SDM)组83例、早期糖尿病肾病(EDN)组77例和临床期糖尿病肾病(CDN)组60例,并选择80例健康体检者为对照组。采用胶乳免疫增强比浊法检测血清Cys-C、RBP、NGAL,脲酶-谷氨酸脱氢酶法检测血清尿素(UREA),酶法检测血清肌酐(CREA),并对各组检测结果进行比较分析。结果 SDM组患者的血清NGAL、CysC、RBP、UREA与CREA检测结果与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);EDN组患者的血清NGAL、CysC及RBP检测结果与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),血清UREA与CREA比较差异均无统计学意义(P>0.05);CDN组患者的血清NGAL、CysC、RBP、CREA及UREA检测结果与对照组、SDM组及EDN组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。EDN组患者的血清NGAL、CysC、RBP阳性率分别为55.84%、59.74%、54.55%,均明显高于SDM组的19.28%、16.87%、15.66,差异均有统计学意义(P<0.05),而血清UREA、CREA阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05);CDN组患者的血清NGAL、CysC、RBP、UREA、CREA阳性率高于EDN组和SDM组,差异均有统计学意义(P<0.05);血清NGAL、CysC、RBP在SDM组、EDN组、CDN组联合检测的阳性率分别为25.30%,68.83%,96.67%,均高于各单项检测结果的阳性率;Pearson相关性分析结果显示,血清NGAL、CysC、RBP与尿ACR检测结果之间存在正相关(r=0.65、0.62、0.58,P<0.05)。结论血清NGAL、Cys-C和RBP可作为2型糖尿病患者肾损伤早期诊断的重要指标,联合检测可提高糖尿病肾病早期诊断的阳性率,对临床识别和早期诊断糖尿病肾病有重要临床意义。

血必净辅助治疗老年脓毒症伴发AKI疗效及对患者血清炎性因子尿L-FABP KIM-1 NGAL水平和心理韧性的影响

目的探讨血必净辅助治疗老年脓毒症伴发急性肾损伤患者的疗效及对患者血清炎性因子、尿肝型脂肪酸结合蛋白、肾损伤分子-1、中性粒细胞明胶酶-脂运载蛋白水平和心理韧性的影响.方法将176例老年脓毒症伴发急性肾损伤患者按照随机数字表法分为两组,每组88例.两组均给予常规治疗,研究组在此基础上联合血必净治疗,比较两组平均住院时间、28d病死率、治疗前后血清炎性因子、尿肝型脂肪酸结合蛋白、肾损伤分子-1、中性粒细胞明胶酶-脂运载蛋白水平及心理韧性评分.结果研究组住院时间显著短于对照组(P<0.01),28d病死率显著低于对照组(P<0.05).治疗后两组白细胞介素-6、白细胞介素-10、肿瘤坏死因子水平均显著低于治疗前(P<0.05或0.01),研究组较对照组下降更显著(P<0.05或0.01).治疗后两组尿肝型脂肪酸结合蛋白、肾损伤分子-1、中性粒细胞明胶酶-脂运载蛋白水平均较治疗前显著升高(P<0.01),研究组显著低于对照组(P<0.01).治疗后两组Connor-Davidson韧性量表评分均显著高于治疗前(P<0.05或0.01),研究组较对照组升高更显著(P<0.05).结论血必净辅助治疗老年脓毒症伴发急性肾损伤患者效果显著,可显著降低患者血清炎性因子水平,抑制尿肝型脂肪酸结合蛋白、肾损伤分子-1、中性粒细胞明胶酶-脂运载蛋白表达,提高患者的心理韧性.

阿魏酸哌嗪片联合黄芪注射液对急性肾衰竭患者β2微球蛋白、NGAL及临床疗效的影响

目的 探讨阿魏酸哌嗪片联合黄芪注射液对急性肾衰竭患者β2微球蛋白、NGAL及临床疗效的影响。方法 选取2012年6月~2015年10月慈溪市人民医院收治的急性肾衰竭患者56例,随机分为实验组和对照组,各28例。所有患者治疗前先进行常规护理,注入利尿剂与血管扩张剂,以增加患者的血清蛋白和维生素,从而使患者体内的酸碱度、水分及电解质达到平衡,同时给予血液透析及低分子肝素抗凝治疗。对照组在此基础上给予黄芪注射液20 m L/次,1次/天,静脉滴注,治疗4 w;实验组在对照组基础上给予阿魏酸哌嗪片200 mg/次,3次/天,治疗4 w。治疗后,比较2组患者β2微球蛋白、NGAL及KIM-1的水平。结果 2组存活率比较差异无统计学意义;治疗后,2组患者β2微球蛋白、NGAL及KIM-1水平均降低（P〈0.05）;与对照组比较,实验组患者β2微球蛋白、NGAL及KIM-1水平较低（P〈0.05）。结论 阿魏酸哌嗪片联合黄芪注射液对急性肾衰竭有较好的临床疗效,推测其机制与降低β2微球蛋白,NGAL及KIM-1水平有关。

尿L-FABP、NGAL联合ACR检测诊断妊娠期糖尿病早期肾功能损伤价值

目的:探究孕妇尿肝型脂肪酸结合蛋白质(L-FABP)、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)及尿清蛋白与尿肌酐比值(ACR)用于妊娠期糖尿病(GDM)早期肾功能损伤的临床诊断价值。方法:选取本院产科2018年1月—2019年12月收治的妊娠期糖尿病患者120例,根据是否发生早期肾功能损伤分为肾损伤组(n=36)和无肾损伤组(n=84),常规产前检查健康孕妇100例为对照组。收集晨中段尿检测尿液L-FABP、NGAL及ACR并分析3指标对妊娠期糖尿病早期肾功能损伤诊断价值。结果:尿L-FABP、NGAL、ACR水平对照组、无肾损伤组、肾损伤组逐渐升高(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,L-FABP、NGAL、ACR与尿微量白蛋白呈正相关(r=0.612、0.624、0.702,均P<0.05)。受试者工作特征曲线分析,L-FABP AUC为0.855,最佳截断值>53.12 ng/ml,灵敏度为74.8%,特异度为87.2%;NGAL AUC为0.812,最佳截断值>3.74μg/ml,灵敏度为70.2%,特异度为90.4%;ACRAUC为0.834,最佳截断值≥35.71,灵敏度为90.2%,特异度为85.4%。L-FABP、NGAL、ACR联合检测的灵敏度为96.7%,特异度为99.4%,AUC为0.979。结论:GDM早期肾功能损伤患者尿L-FABP、NGAL、ACR异常升高,3指标联合检测诊断GDM早期肾功能损伤效能较高,有助于早期诊断、及时干预,降低肾功能损伤。

公民逝世后器官捐献供肾损伤相关分子标志物的研究进展

供肾短缺是肾移植面临的一大难题,对供肾功能的准确评估可以降低器官的弃用率,以挽救更多的尿毒症患者。与病理学检查相比,循环中的分子标志物检测在临床应用中较为方便。本文就目前已发现的肾损伤标志物血清肌酐和血清胱抑素C(Cys-C)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、线粒体DNA(mtDNA)、肾损伤分子-1(KIM-1)和白细胞介素-18(IL-18)等方面的研究进展进行简要介绍。

DCD供肾灌注液生物标志物预测肾移植术后移植物功能延迟恢复的临床应用研究

目的探讨心脏死亡器官捐献(DCD)供肾静态冷保存(SCS)灌注液生物标志物预测肾移植受者术后发生移植物功能延迟恢复(DGF)的可行性。方法回顾性分析DCD供肾肾移植的64例受者和47例供者的临床资料。根据受者术后是否发生DGF分为DGF组(7例)与即刻肾功能恢复(IGF)组(57例),比较两组供肾SCS灌注液中4种生物标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、白细胞介素-18(IL-18)、肾损伤分子-1(KIM-1)的水平并分析其与DGF的相关性,分析各生物标志物对肾移植受者术后发生DGF的预测价值。结果DCD供肾肾移植受者术后DGF的发生率为11%(7/64)。DGF组供肾灌注液的NGAL水平高于IGF组(P=0.009),供肾灌注液的NGAL水平与肾移植受者术后DGF的发生呈正相关(r=0.430,P<0.001)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,灌注液中的NGAL和KIM-1水平升高对肾移植受者术后发生DGF具有一定的预测价值(均为P<0.05),当联合检测NGAL和KIM-1时,预测肾移植受者术后发生DGF的曲线下面积(AUC)为0.932[95%可信区间(CI)0.850~1.000],灵敏度为1.000,特异度为0.754(P<0.05)。结论DCD供肾SCS灌注液中的NGAL水平与肾移植受者术后DGF的发生存在相关性,联合检测灌注液中的NGAL和KIM-1水平可以较为准确地预测肾移植受者术后DGF的发生。

NGAL、MMP-9及TIMP-1在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达

目的:动态观测单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中中性粒细胞相关脂质运载蛋白(NGAL)、基质金属蛋白酶-9(MMP 9)及金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)的表达变化,探讨NGAL分子在肾小管间质纤维化发展中的作用机制。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为UUO模型组及假手术(SOR)组,每组24只,UUO组行左侧输尿管梗阻术,SOR组仅游离左侧输尿管不结扎。术后第1、4、7、14天分别处死每组6只大鼠,取左肾行HE&Masson染色,并用免疫组化ELiVision^(TM)-plus法检测肾组织NGAL、MMP-9及TIMP-1的表达。结果:HE、Masson染色切片示:UUO组间质损伤指数在术后各时间点高于SOR组(P<0.05)。免疫组化结果显示:UUO组术后各时间点NGAL表达高于SOR组(P<0.05),与肾小管损伤指数呈明显负相关;MMP-9在UUO术后早期(1～7天)有所上升,随着病程进展,7～14天表达有所下降;TIMP-1在UUO术后表达逐渐增强;NGAL与MMP-9/TIMP-1比值呈明显正相关。结论:NGAL在肾间质纤维化早期发挥负向调节作用,对调节MMP-9/TIMP-1的平衡亦发挥重要作用。

万古霉素用药后血清NGAL水平与肾功能变化的相关性研究

目的:探讨万古霉素暴露的脓毒症患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平与肾功能变化的相关性,评价其在预测万古霉素暴露患者早期肾损害中的作用。方法:以重症监护病房收治患者中接受万古霉素治疗并进行NGAL检测的脓毒症患者为研究对象。根据患者用药前NGAL水平,将纳入患者分为试验组和对照组2组,其中试验组为NGAL(+)组(≥50 ng·L-1),对照组为NGAL(-)组。分别记录2组患者用药前NGAL指标以及患者万古霉素用药前后血清肌酐(SCr)变化情况,白细胞计数(WBC)、C-反应蛋白(CRP)及降钙素原(PCT)等数据。以SCr绝对值增加>26.5μmol·L-1或增加达到基线值的1.5倍作为急性肾损伤(AKI)的诊断标准,评估NGAL水平与血肌酐变化、WBC、CRP及PCT之间的关系,比较NGAL(+)组和NGAL(-)组用药前后肌酐的变化情况及AKI发生率的统计学差异,并分析肾功能变化的影响因素。结果:本研究共纳入患者69例,其中试验组28例,对照组41例。万古霉素用药前、后对照组患者血肌酐水平分别为(79.6±22.4)μmol·L-1和(92.8±60.9)μmol·L-1,试验组患者用药前后的血肌酐水平分别为(89.9±22.8)μmol·L-1和(102.3±47.1)μmol·L-1。2组间及用药前后血肌酐值差异均无统计学意义(P>0.05)。血清NGAL与患者用药前后血肌酐变化水平无相关关系(P=0.168,R=0.176)。试验组与对照组AKI的发生率分别为32.14%和24.39%,试验组略高于对照组,但其差异无统计学意义(P>0.05)。试验组中NGAL水平与WBC、CRP及PCT水平之间均无明显的相关关系。结论:在患者入住ICU接受万古霉素治疗期间,血清NGAL尚不能证实单独作为万古霉素肾毒性的标记物。

模拟海拔4500米高原环境致大鼠肾脏适应性损伤的评估

目的:探讨模拟海拔4500米高原环境致大鼠肾适应性损伤的情况。方法:通过检测模拟海拔4500米高原环境下大鼠血清肌酐(Scr)、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)及尿蛋白,选择成年雄性SD大鼠130只,实验组80只大鼠通过低压氧舱模拟海拔4500米高原缺氧环境,对照组50只给予常规饲养,于0、14、28 d留取大鼠血液、尿液,测定Scr、NGAL及尿蛋白水平。结果:实验组14、28 d Scr、NGAL及尿蛋白水平较对照组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),实验组内28 d Scr、NGAL及尿蛋白水平均14 d下降趋势明显,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:急性缺氧早期大鼠肾发生一定适应性损伤,后期有所降低。