NKD1调控Wnt/β-catenin信号通路影响结直肠肿瘤细胞周期的机制研究

目的探讨NKD1调控Wnt/β-catenin信号通路影响结直肠肿瘤细胞周期的作用机制。方法利用免疫组化和RT-PCR方法,检测NKD1在结直肠肿瘤癌组织和癌旁组织中的表达。选择人结直肠癌细胞SW620和HT29,分别转染NKD1干扰(NKD1 siRNA)慢病毒载体,RT-PCR和Western blot检测转染效果;定量蛋白质组学联合生信分析筛选NKD1富集的生物学功能及信号通路;CCK8、平板克隆实验检测NKD1对细胞增殖能力的影响;RT-PCR和Western blot检测NKD1对细胞周期标志物表达的影响;Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路核心分子的蛋白表达。结果NKD1在结直肠癌组织中表达高于癌旁组织(P<0.05);下调NKD1导致SW620和HT29细胞中NKD1 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05);定量蛋白质组学联合生信分析显示,下调NKD1差异蛋白主要富集细胞增殖和细胞周期生物过程,且显著富集细胞周期信号通路;相比对照组(Control组和NC组),siNKD1组SW620和HT29细胞增殖能力明显下降(P<0.05),细胞周期标志物CyclinD1、CDK2、CDK4、CDK6 mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。下调NKD1促进Wnt/β-catenin信号通路核心分子β-catenin、GSK3β、Axin2、c-Jun蛋白表达升高(P<0.05)。结论NKD1异常表达与结直肠癌发病机制相关,NKD1通过负向调控Wnt/β-catenin信号通路促进结直肠癌细胞增殖和细胞周期。

NKD1可促进结肠癌细胞的葡萄糖吸收:基于激活YWHAE基因的转录活性

目的通过研究NKD1与YWHAE调控关系,分析NKD1促进肿瘤细胞增殖的新作用机制。方法实验分组:(1)对照组:转染pcDNA3.0质粒的HCT116细胞、转染NC-siRNA的SW620细胞、正常HCT116细胞、正常SW620细胞;(2)实验组:转染pcDNA3.0-NKD1质粒的HCT116细胞、转染NKD1 siRNA的SW620细胞、HCT116-NKD1细胞、SW620-nkd1-/-细胞、转染pcDNA3.0-YWHAE质粒的SW620-nkd1-/-细胞。采用Western blot及qRT-PCR实验检测结肠癌细胞中过表达或敲除NKD1对YWHAE的蛋白及mRNA水平变化的影响。采用染色质免疫共沉淀(ChIP)技术检测NKD1是否结合YWHAE基因启动子区域。通过双荧光素酶报告基因实验分析NKD1对YWHAE基因启动子活性的调控作用。此外,采用免疫荧光实验分析NKD1与YWHAE相互作用情况。葡萄糖检测实验分析NKD1对肿瘤细胞吸收葡萄糖的调控作用。结果与对照组相比,过表达(或敲除)NKD1不仅在蛋白水平增强(或降低)YWHAE的表达,还在mRNA水平增加(或降低)其表达(P<0.001)。ChIP实验显示NKD1蛋白能够结合YWHAE启动子序列,双荧光素酶报告基因实验表明在结肠癌细胞中过表达(或敲降)NKD1能显著增强(或降低)YWHAE启动子的转录活性(P<0.05)。此外,免疫荧光结果显示NKD1蛋白与YWHAE蛋白在结肠癌细胞内相互结合。葡萄糖水平分析实验表明,敲除NKD1明显降低结肠癌细胞对葡萄糖的吸收水平(P<0.01),而在敲除NKD1的细胞中过表达YWHAE,则细胞对葡萄糖吸收能力得到恢复(P<0.05)。结论结肠癌细胞中NKD1蛋白通过激活YWHAE基因的转录活性,促进其表达,从而促进肿瘤细胞对葡萄糖的吸收。

Wnt信号通路成员蛋白NKD1、β-catenin和Cyclin D1在结直肠腺癌中的表达及意义

目的观察NKD1、β-catenin和Cyclin D1蛋白在结直肠正常黏膜、腺瘤和腺癌组织中的表达,探讨NKD1、β-catenin和Cyclin D1在结直肠正常黏膜-腺瘤-腺癌这一癌变过程中的表达变化及临床意义。方法应用免疫组化SP法检测38例结直肠正常黏膜、70例腺瘤、128例腺癌组织中NKD1、β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达。结果 NKD1在结直肠正常黏膜、腺瘤、腺癌组织中的阳性率依次降低(P<0.05),其在轻度异型增生腺瘤组织中的阳性率高于重度异型增生腺瘤组织(P<0.05);β-catenin异位表达率与Cyclin D1阳性率在结直肠正常黏膜、腺瘤、腺癌组织中均依次升高(P<0.01),且Cyclin D1在重度异型增生腺瘤组织中的阳性率高于中度及轻度异型增生腺瘤(P<0.05)。NKD1、β-catenin、Cyclin D1在结直肠腺癌组织中的表达均与癌分化程度、Duke分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。在结直肠腺癌组织中NKD1的阳性率和β-catenin异位表达率呈负相关(r_s=-0.645,P<0.01)。在结直肠腺癌组织中β-catenin异位表达率和Cyclin D1阳性率呈正相关(r_s=0.618,P<0.01)。结论 NKD1、β-catenin、Cyclin D1三者可能参与结直肠肿瘤的发生、发展,有望成为评价结直肠腺癌恶性程度及预后的指标。

结直肠癌中NKD1和β-catenin的表达及意义

目的观察NKD1和β-连环素(β-catenin)在结直肠正常黏膜组织、结直肠腺瘤及结直肠癌中的表达,探讨两者在结直肠肿瘤发生、发展中的作用。方法应用免疫组化SP法检测NKD1和β-catenin在正常黏膜组织、结直肠腺瘤、结直肠癌组织中的表达。结果 NKD1在正常组织中的阳性率明显高于结直肠腺瘤、结直肠癌,其表达与肿瘤的分化程度、Dukes分期及淋巴结转移相关,差异有统计学意义(P<0.05)。β-catenin在癌组织中的表达异常率明显高于癌旁正常组织,其异位表达率与肿瘤的分化程度、Dukes分期、淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P<0.05)。NKD1的表达和β-catenin异位表达呈负相关(rs=-0.691,P<0.01)。结论 NKD1的表达下调与β-catenin的异位表达,可能与结直肠肿瘤的发生、发展有关。

经典Wnt/β-catenin信号通路抑制因子NKD1在肿瘤中的表达

裸角质膜同源蛋白（d NKD）最早是在果蝇体内发现的,其基因突变是引起果蝇分节运动缺失的主要诱因。随后,d NKD的两个同系物NKD1及NKD2在哺乳动物体内被发现,二者分别位于人染色体16q12.1和5p15.3,具有43.8%的高度同源性。NKD1的生物学作用使其可以参与经典Wnt/β-catenin信号通路,从而影响肿瘤的发生发展和转归,另外,

乳腺癌组织中NKD1和β-catenin蛋白的表达及对预后判断价值的研究

目的检测乳腺癌组织中NKD1和β-catenin蛋白的表达特征。方法选择95例乳腺癌作为观察组,选择50例正常乳腺组织作为对照组,应用免疫组织化学技术检测两组中NKD1和β-catenin蛋白的表达。结果观察组中NKD1和β-catenin蛋白的表达量明显低于对照组,观察组中NKD1和β-catenin蛋白的表达与肿瘤的临床分期、淋巴结转移、脉管浸润的表达密切相关;观察组中NKD1和β-catenin的表达具有正相关性,生存分析显示NKD1和β-catenin低表达患者的预后差。结论乳腺癌中NKD1和β-catenin异常表达,二者对病变的进展具有重要作用,术后检测NKD1和β-catenin的表达可能对判断预后有一定价值。

SALL4、LGR5、NKD1在乳腺癌组织中的表达及意义

目的通过分析LGR5、SALL4、NKD1在乳腺癌组织与癌旁乳腺组织中的表达水平,探讨三者在乳腺癌组织中的表达及其相关性。方法选择2015年6月至2016年9月内蒙古包钢医院确诊并行乳腺癌切除术患者的乳腺癌组织30例及其对应的癌旁乳腺组织30例,年龄36~78岁,平均年龄57岁。应用Western blot从蛋白水平检测SALL4、LGR5、NKD1在乳腺癌组织及癌旁乳腺组织中的表达。结果 LGR5、SALL4、NKD1蛋白在乳腺癌组织表达分别为0.63±0.14、0.67±0.13、0.51±0.16(P<0.05),癌旁乳腺组织表达分别为0.53±0.16、0.58±0.11、0.61±0.11(P<0.05)。乳腺癌组织中LGR5与SALL4蛋白呈正相关(r=0.402,P<0.05);LGR5与NKD1蛋白呈负相关(r=-0.685,P<0.05);SALL4与NKD1蛋白呈负相关(r=-0.370,P<0.05)。LGR5、SALL4、NKD1蛋白在TNM分期中Ⅰ+Ⅱ期组表达分别为0.59±0.13、0.64±0.13、0.55±0.17(P<0.05),在Ⅲ期组中表达分别为0.75±0.10、0.75±0.09、0.41±0.11(P<0.05)。LGR5、SALL4、NKD1蛋白在淋巴结转移组中表达分别为0.73±0.11、0.74±0.08、0.40±0.11(P<0.05),在淋巴结未转移组中表达分别为0.58±0.13、0.64±0.14、0.57±0.16(P<0.05)。LGR5、SALL4、NKD1蛋白与乳腺癌患者的年龄、肿瘤的大小、肿瘤部位无关(P>0.05)。结论 LGR5、SALL4和NKD1的异常表达与乳腺癌发生、发展、浸润及转移密切相关,三者的联合检测可能对评估乳腺癌的生物学行为具有重要意义。LGR5、SALL4和NKD1可能是导致乳腺癌的发生、发展的重要因子。

NKD1、TCF-4和E-cadherin在结肠癌组织中的表达及意义

目的 探讨裸角质膜同源蛋白（NKD1）、T 细胞因子4（TCF-4）和钙黏糖蛋白（E-cadherin）在结肠癌组织中的表达及临床意义. 方法 ：选取我院结肠癌诊治患者35例,同时取35例癌组织为观察组,相对应的距肿瘤5cm 以上的癌旁组织为对照组,应用免疫组织化学技术检测 NKD1、TCF-4和 E-cadherin 在结肠癌、癌旁组织中的表达情况,并分析三者表达差异性与结直肠癌病理特征之间的关系及三者之间的相关性.结果 NKD1和 E-cadherin 在结肠癌组织中的表达阳性率明显低于癌旁组织,差异具有统计学意义（P〈0.05）,而结肠癌组织中 TCF-4的表达阳性率则明显高于其在癌旁组织中,差异具有统计学意义.NKD1和 E-cadherin 的表达与结肠癌患者的性别、年龄无关;而与结肠癌的分化程度、TNM 分期、淋巴结转移及浸润深度有关（P〈0.05）;TCF-4的表达与患者的性别、年龄、结肠癌的分化程度、浸润深均无关,而与结肠癌的 TNM 分期、淋巴结转移有关（P〈0.05）.NKD1和E-cadherin在结肠癌中的表达均与TCF-4呈负相关（P〈0.05）,而NK D1和E-cadherin在结肠癌中的表达呈正相关.结论 结肠癌中NKD1和E-cadherin的低表达及TCF-4的高表达对于结肠癌的发生、发展有关,对结肠癌早期诊断、个性化治疗及预后判断有一定的参考价值.

WT1、NKD1基因在急性髓系白血病中的表达及其与预后的关系

目的探讨Wilms(WT1)基因、裸角质膜同源蛋白(NKD1)基因在急性髓系白血病中的表达及其与预后的关系。方法将2018年2月至2019年6月该院收治的100例急性髓系白血病患者纳入研究作为观察组,选取同期于该院治疗的造血系统非恶性肿瘤(缺铁性贫血)患者100例作为对照组。纳入研究者均进行WT1、NKD1基因检测,比较两组人群NKD1、WT1基因的表达水平;使用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析WT1、NKD1基因检测用于急性髓系白血病诊断的价值;统计患者12个月内的生存率及生存时间,采用Pearson相关分析WT1、NKD1基因表达与患者生存预后的关系。结果观察组WT1、NKD1基因表达水平均高于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,WT1基因检测的曲线下面积(AUC)为0.979,NKD1基因的AUC为0.984,两者均具有较高的诊断价值。观察组100例患者总生存率为88.00%(88/100),平均生存时间为(10.42±2.69)月,WT1、NKD1基因表达均与患者生存时间呈正相关(r=0.417、0.492,P<0.001)。结论WT1、NKD1基因表达与急性髓系白血病发生、发展密切相关。

NKD1、β-catenin和Cyclin D1在结直肠癌中的表达及意义

目的观察裸角质膜同源蛋白（NKD1）、β-连环素（β-catenin）和细胞周期蛋白D1（CyclinD1）在结直肠癌组织中的表达．探讨其在结直肠癌变过程中的意义。方法收集2014年1月～2016年1月在鄂东医疗集团黄石市中心医院（我院）行结直肠癌根治术切除的癌症组织96例及27例肠管正常黏膜，并收集同期在我院治疗的38例结直肠腺瘤切除标本，采用sP免疫组化法对所有标本中NKDl、β—catenin和CyclinD1的表达情况进行检测，分析NKDl阳性率、CyclinD1阳性率与β—catenin异位表达率三者之间的相关性。结果结直肠癌组织中NKDl的阳性率（17．71％）明显低于结直肠正常黏膜（92．59％）及腺瘤组织（78．95％），差异有统计学意义（均P〈0．05）；结直肠癌组织中的β—catenin异位表达率（78．13％）和CyclinD1阳性率（84．38％）均明显高于结直肠正常黏膜、腺瘤组织中的表达率（42．11％、34．21％），差异有统计学意义（均P〈0．05）；NKDl、β—catenin和CyclinD1在结直肠腺癌组织中的表达均与癌分化程度、Duke分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论NKDl、β—catenin和CyclinD1可能参与了结直肠癌的发生、发展、侵袭和转移，联合检测可判断结直肠癌的生物学行为并作为临床治疗的参考依据。

急性髓系白血病患者NKD1基因的表达及其临床意义

目的:检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者裸角质膜同源蛋白(NKD1)的表达水平并分析其临床意义。方法:应用实时定量PCR方法检测125例初诊AML患者和22例对照者骨髓单个核细胞中NKD1的转录水平。根据NKD1表达水平将AML患者分为高、低表达两组,比较两组间临床参数的异同并分析其临床意义。结果:AML患者中NKD1的表达水平较对照组明显降低(U=805,P=0.002)。NKD1高、低表达两组患者的性别、年龄、外周血白细胞计数、外周血血小板计数、骨髓原始细胞比例、FAB/WHO分型以及常见基因突变间的差异无统计学意义(P均>0.05);NKD1高表达组血红蛋白水平明显高于低表达组(U=1 339,P=0.029);NKD1高、低表达两组患者经诱导治疗后完全缓解率间的,差异无统计学意义(P>0.05);全部AML、非M3及染色体核型正常患者中,NKD1低表达组总体生存时间明显短于NKD1高表达组(P均<0.05)。结论:NKD1在AML患者中呈低表达,可作为判断AML患者预后的分子标志物。

CDX-2、NKD1、GDF11在大肠癌中的表达及其与预后的相关性分析

目的:探讨CDX-2、NKD1、GDF11在大肠癌中的表达及其与预后的相关性分析。方法:选取2016年1月~2019年6月的大肠癌患者284例作为研究对象,采用免疫组织化学法(SP)检测大肠癌组织及其癌旁正常组织中的CDX-2、NKD1、GDF11表达,分析其在大肠癌患者的临床病理特征及预后的相关性。结果:大肠癌组织的GDF11阳性表达率显著高于癌旁正常组织,CDX-2和NKD1阳性表达率显著低于癌旁正常组织;CDX-2、NKD1和GDF11阳性表达与肿瘤阶段、淋巴结受累、同步转移、组织学分级、CEA水平有关;CDX-2阳性表达患者3年生存率显著高于其阴性表达患者(80.23% vs 53.03%),NKD1阳性表达患者3年生存率显著高于其阴性表达患者(78.95% vs 54.81%),GDF11阳性表达患者3年生存率显著低于其阴性表达患者(57.33% vs 76.27%);CDX-2的表达和NKD1表达相关较强,GDF11与CDX-2、NKD1的表达率相关性较弱。结论:CDX-2和NKD1可能协同参与了降低肿瘤细胞的入侵和迁移、抑制癌组织的增殖过程,GDF11作为生长调节因子可调节癌细胞增殖和分化,均可作为预后的重要指示。

乳腺癌中Wnt信号通路成分NKD1、β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达及意义

目的探讨NKD1、β-catenin和Cyclin D1在乳腺癌中的表达及意义。方法选取2010年至2016年大连市妇女儿童医疗中心和大连市友谊医院病理科30例正常乳腺组织和124例乳腺浸润性癌非特殊型标本及临床资料。采用免疫组化法检测标本中NKD1、β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果在乳腺癌组织中NKD1阳性表达率为30.65%;β-catenin异常表达率为72.58%;Cyclin D1阳性表达率为54.03%,与正常乳腺组织比较,差异均有显著性意义(P均<0.05)。NKD1和β-catenin表达与乳腺癌组织学分级、p TNM分期及淋巴结转移有关,Cyclin D1表达与乳腺癌p TNM分期及淋巴结转移亦有关,且NKD1表达缺失还与ER状态相关,差异均有统计学意义(P均<0.05)。NKD1与β-catenin和Cyclin D1表达呈正相关(r分别为0.454,0.332,P均<0.05)。结论 NKD1、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达与乳腺癌侵袭和转移密切相关,联合检测3种蛋白有助于判断乳腺癌生物学行为和评估预后。