NKG2D在细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK)抗血液肿瘤细胞的作用

本研究探讨细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK)通过NKG2D受体和配体相互作用杀伤血液肿瘤细胞的机制。用含有rhIL-2,抗CD3抗体,IFN-γ的培养液培养健康人的外周血单个核细胞(PBMNC)2周后,用流式细胞仪分析CIK细胞的细胞亚群以及细胞表面NK细胞受体,同时检测血液肿瘤细胞株表面NKG2D配体的表达水平。CAM标记靶细胞,用流式细胞仪检测CIK细胞对血液肿瘤细胞的杀伤作用。结果表明,大部分CIK细胞为CD3+细胞(97.85±1.95%),CD3+CD8+细胞和CD3+CD56+细胞的比率较培养前明显升高(P<0.001;P=0.033);约86%的CIK细胞表达NKG2D受体,几乎不表达CD158a,CD158b和NCR受体;血液肿瘤细胞株U266、K562和Daudi均表达一定水平的NKG2D配体,CIK细胞对这3种血液肿瘤细胞株均具有较高的杀伤作用,这种杀伤作用可以被抗NKG2D抗体部分抑制(U266 52.67±4.63%vs 32.67±4.81%,P=0.008;K562 71.67±4.91%vs 50.33±4.91%,P=0.007;Daudi 68.67±5.04 vs 52.67±2.60%,P=0.024)。结论:大多数的CIK细胞表达NKG2D受体,NKG2D受体和配体的相互作用可能是CIK细胞杀伤血液肿瘤细胞的作用机制之一。

AS_2O_3对CD34^+白血病细胞NKG2D配体表达及NK杀伤活性的影响

目的:观察AS2O3对CD34+早期急性髓系白血病细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤活性的影响。方法:流式细胞仪检测KG1a细胞表面CD34抗原表达率,MTT法确定AS2O3的基本工作浓度,以不同浓度的AS2O3处理KG1a细胞,流式细胞仪测定处理前后KG1a细胞NKG2D配体的表达情况;MACS法分离5例健康个体的NK细胞,LDH释放法检测NK细胞对AS2O3处理前后KG1a细胞的杀伤活性。结果:10nmol/ml的AS2O3作用KG1a细胞后,能使KG1a细胞表面ULBP1的表达水平显著上调(P<0.05),同时也激发了NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:AS2O3能上调CD34+白血病细胞表面NKG2D配体的表达水平,诱导NK细胞对其的杀伤活性,启示AS2O3可与NK细胞组成过继性免疫化疗方案,提高急性白血病的疗效。

苦参碱对白血病细胞NKG2D配体表达的作用研究

本研究旨在探讨人白血病细胞表面NK细胞活化性受体NKG2D配体分子的表达水平及中药苦参碱对白血病细胞NKG2D配体表达的作用。流式细胞术检测白血病细胞表面MICA/B和ULBP1、2、3四种NKG2D配体的表达。苦参碱处理白血病细胞株K562、OUN-1、U937和K562/AO2及原代培养的人白血病细胞,流式细胞术分析药物处理后细胞表面NKG2D配体的表达改变。结果表明,几株常见人白血病细胞及原代人白血病细胞表面均有NKG2D配体分子的表达,多数有ULBP分子的高表达或ULBP表达明显高于MICA/B,但不同细胞表面NKG2D配体的表达模式明显不同。苦参碱处理可上调白血病细胞表面部分NKG2D配体的表达水平,提示苦参碱对不同白血病细胞NKG2D配体分子的表达调节不同。K562细胞表面NKG2D配体ULBP2和ULBP3分子的高表达可能是介导NK细胞对其高杀伤性的重要原因。结论:人白血病细胞及原代人白血病细胞表面均有NKG2D配体的表达,但不同细胞NKG2D配体的表达模式不同。苦参碱可上调白血病细胞表面部分NKG2D配体分子的表达。

肺癌细胞中NKG2D配体MICA及ULBP高表达及其在CIK介导的肿瘤细胞杀伤中的作用

目的:探索肺癌细胞中NKG2D配体的表达量及其与CIK细胞介导的肿瘤细胞毒性的关系。方法:在肺癌组织、癌旁组织及肺癌细胞株中用实时荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹法检测NKG2D配体的表达量。应用流式细胞仪检测肿瘤细胞株A549和QG56表面NKG2D配体的表达情况。体外分离培养CIK细胞,比较NKG2D单克隆抗体预处理CIK细胞和无NKG2D单克隆抗体预处理CIK细胞介导的肿瘤细胞毒性。结果:NKG2D在肺癌组织及肺癌细胞株中高表达。CIK细胞对肺癌细胞株A549表现出较强的细胞毒性,但用NKG2D单克隆抗体预处理CIK细胞后可显著降低这种作用(P<0.05)。结论:NKG2D配体在肺癌组织和肺癌细胞株中高表达。对于CIK细胞介导的肺癌细胞杀伤作用,NKG2D与其配体的相互作用至关重要。

板蓝根多糖促进NKG2D配体表达增强NK细胞对食管癌细胞的杀伤作用及机制研究

目的:研究板蓝根多糖(RIP)影响NK细胞对食管癌细胞杀伤作用的分子机制。方法:MTT法检测细胞增殖率,Western blot检测增殖相关蛋白CyclinD1、p21和p27的表达,ELISA法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α的表达,流式细胞术检测NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1和ULBP2的表达,钙黄绿素释放法(CARE-LASS)检测NK细胞对食管癌细胞的杀伤率。结果:RIP可促进NK-92细胞增殖,抑制食管癌Eca-109细胞增殖,且具有显著剂量依赖性。食管癌可促进NK细胞中TNF-α和IFN-γ的表达。RIP可促进食管癌细胞Eca-109中NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1和ULBP2的表达,促进与食管癌细胞联合作用后NK细胞中TNF-α和IFN-γ表达,提高NK-92细胞对食管癌Eca-109细胞的杀伤活性。结论:RIP通过提高食管癌Eca-109细胞中NKG2D配体表达,促进NK-92细胞中TNF-α和IFN-γ表达,增强NK-92细胞对食管癌细胞的杀伤作用。

NKG2D及其配体在肿瘤免疫中的研究进展

活化性受体NKG2D(natural-killer group 2,member D)及其配体在NK、γδ+T和CD8+T细胞介导的肿瘤免疫应答中扮演了重要角色。深入理解NKG2D及其配体在肿瘤免疫中的作用有助于临床预防和治疗肿瘤。该文阐述了NKG2D的分子结构特性、表达调控及其配体的分类和表达调控;主要介绍了NKG2D及其配体在肿瘤免疫中的作用;最后分析了NKG2D免疫途径中存在的问题和治疗应用前景。

NKG2D配体的表达直接影响NK细胞对不同发育阶段DC的杀伤

目的:探讨NKG2D配体在不同发育阶段树突状细胞(DC)表面的表达及其对自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响。方法:用细胞因子(rhIL-4、rhGM-CSF、TNF-α)体外诱导培养单核细胞来源的未成熟树突状细胞(iDC)和成熟树突状细胞(mDC)并鉴定形态和表型,免疫磁珠法分离纯化NK细胞。流式细胞术(FCM)检测iDC和mDC表面NKG2D配体MICA/B、ULBP1-3的表达。用LDH释放法检测NK细胞对iDC和mDC的杀伤活性以及抗NKG2D单克隆抗体(mAb)阻断NK细胞后的杀伤活性。结果:培养的iDC和mDC具有典型的细胞形态和免疫表型特征。iDC表面表达MICA、MICB、ULBP1、ULBP3,表达率分别为(32·39±8·30)%、(17·75±3·40)%、(26·71±6·48)%、(38·37±6·89)%;mDC表面表达MICA、ULBP3,表达率分别为(7·82±2·67)%、(8·36±2·42)%,比iDC表面相应配体表达率低(P<0·01)。各效靶比NK细胞对iDC的杀伤活性均比对mDC的杀伤活性高,差异有统计学意义(P<0·01)。抗NKG2D mAb阻断NK细胞后对iDC杀伤活性比阻断前减弱(P<0·05);对mDC的杀伤活性与阻断前相比无统计学意义(P>0·05)。结论:NKG2D配体在iDC表面表达高,介导了NK细胞对iDC的杀伤,而对mDC的杀伤无影响,是NK细胞对iDC选择性高杀伤的分子机制之一。

IL-2、IL-15增强免疫编辑后NK细胞NKG2D的表达及其对鼻咽癌CNE2细胞的杀伤活性

目的:观察IL-2、IL-15对免疫编辑后NK细胞NKG2D的表达及其对鼻咽癌CNE2细胞杀伤活性的影响。方法:抗CD56磁珠纯化NK细胞后分为4组:(1)编辑前NK细胞组:加入100 U/ml IL-2;(2)单纯编辑组:NK细胞与CNE2细胞10∶1混合,加入100U/ml IL-2;(3)IL-2再培养组:纯化编辑后的NK细胞,加入1 000 U/ml IL-2;(4)IL-15再培养组:纯化编辑后的NK细胞,加入10 ng/ml IL-15。24 h后,流式细胞仪检测各组NK细胞表面NKG2D的表达;LDH释放测定法测定效靶比20∶1时各组NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性。结果:编辑前NK细胞组、单纯编辑组、IL-2再培养组、IL-15再培养组NK细胞表面NKG2D的表达率分别为(97.63±0.83)%、(53.50±1.25)%、(94.47±1.00)%、(98.07±0.21)%。IL-2、IL-15再培养组NK细胞NKG2D的表达分别比单纯编辑组有显著的增加(P<0.01),该4组NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性分别为(35.90±3.27)%、(4.70±2.30)%、(31.70±3.56)%、(40.18±2.94)%,IL-2再培养组、IL-15再培养组明显提高编辑后NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性(P<0.01),IL-15的作用强于IL-2。结论:高剂量IL-2、IL-15可以上调免疫编辑后NK细胞表面NKG2D的表达,恢复编辑后NK细胞对鼻咽癌细胞CNE2的杀伤活性,IL-15的作用强于IL-2。

顺铂对鼻咽癌细胞NKG2D配体表达和NK细胞杀伤活性的增强作用

目的研究顺铂(Cisplatin,DDP)作用前后人鼻咽癌细胞CNE2NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子表达的改变及NK细胞杀伤活性的变化。方法MTT法测定DDP对CNE2细胞的50%抑制量(IC50);以此浓度DDP作用CNE2细胞24h,乳酸脱氢酶释放法检测效靶比20:1时,NK细胞对DDP作用前后的CNE2细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测DDP作用前后的CNE2细胞表面NKG2D配体(MI-CA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)和HLA-Ⅰ类分子表达的变化。结果DDP对CNE2细胞的IC50为5mg/L。效靶比20:1时,NK细胞对5mg/LDDP作用前后的CNE2细胞的杀伤活性分别为(38.11±1.41)%,(47.71±1.53)%,差异有统计学意义(P<0.05),DDP作用后CNE2细胞表面MICA/B、ULBP1、ULBP3表达显著升高,与作用前相比差异有统计学意义(P<0.05)。ULBP2、HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P>0.05)。结论DDP能提高CNE2细胞NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP3)的表达,从而增强CNE2细胞对NK细胞杀伤的敏感度。

紫杉醇增强肺癌细胞NKG2D配体表达和CIK细胞杀伤活性

目的研究不同浓度紫杉醇作用人肺腺癌A549细胞48小时后NKG2D配体表达的改变及CIK细胞杀伤活性的变化。方法 采用MTT法测定紫杉醇对A549细胞24小时的50%抑制率(IC50);流式细胞术检测IC50、1/2 IC50、1/4 IC50浓度紫杉醇作用A549细胞48小时后A549细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达的变化;乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,CIK细胞对IC50浓度的紫杉醇作用前及作用48小时后A549细胞的杀伤活性。结果 不同浓度紫杉醇作用48小时后A549细胞表面MICA、MICB、ULBP2、ULBP3表达显著升高,ULBP1表达降低(P<0.05)。效靶比10∶1、20∶1、30∶1时,CIK细胞对A549细胞的杀伤活性分别为(11.08±1.22)%、(36.22±0.91)%、(45.73±2.00)%;CIK细胞对IC50浓度紫杉醇作用48小时后的A549细胞杀伤活性分别为(20.79±3.33)%,(53.47±1.62)%、(66.39±0.77)%,与作用前比较均明显增强(P<0.05)。结论 紫杉醇作用后能提高A549细胞NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP2、ULBP3)的表达,从而增强A549细胞对CIK细胞杀伤的敏感性。

吉非替尼上调NKG2D配体表达增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性

目的:研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼对人肺腺癌A549细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤活性的影响及其分子机制。方法:MTT法测定吉非替尼对A549细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测吉非替尼、EGFR下游分子LY294002(PI3-K抑制剂)、SB203580(MAPK抑制剂)、STAT21(STAT3抑制剂)、Rottlerin(PKC抑制剂)作用A549细胞24小时后A549细胞NKG2D配体的表达。乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,NK细胞对吉非替尼作用前、后A549细胞的杀伤活性。结果:吉非替尼上调A549细胞MICB、ULBP1表达,增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性,EGFR下游分子MAPK、STAT3抑制剂不影响A549细胞NKG2D配体的表达,PI3-K抑制剂下调A549细胞MICA表达,PKC抑制剂上调ULBP1表达。结论:吉非替尼上调NKG2D配体表达增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性。

Olaparib对HL-60细胞NKG2D配体表达的调节作用及相关机制研究

目的:研究Olaparib对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞表面NKG2D配体表达的调节作用,并初步探索其内在调控机制。方法:对数生长期的HL-60细胞经不同浓度Olaparib(1.25、2.5、5、10μmol/L)作用24、48 h后,采用流式细胞术检测细胞表面NKG2D配体表达情况;Western blot检测HL-60细胞内ERK蛋白表达变化情况;CFSE/PI法检测NK细胞对HL-60细胞的杀伤作用。结果:10μmol/L Olaparib作用24和48 h均可上调HL-60细胞表面NKG2D配体的表达,5μmol/L Olaparib作用48 h可诱导ULBP-2、ULBP-3表达上调;Western blot检测结果显示,Olaparib处理后的HL-60细胞内ERK磷酸化水平增强。Olaparib可增强NK细胞对HL-60细胞的杀伤作用,但ERK抑制剂可下调NK细胞对HL-60细胞的杀伤作用。结论:Olaparib可上调HL-60细胞表面NKG2D配体表达,增强NK细胞对其的杀伤作用,其机制可能与Olaparib促进ERK磷酸化表达有关。

食管癌放疗中MICA-NKG2D系统功能变化与疗效的临床研究

目的探讨食管癌在放疗中MICA-NKG2D配受体功能变化，以及其变化与放疗疗效的关系。方法取食管鳞癌细胞株ECA109，用不同剂量照射后用流式细胞术检测MICA表达。采用ELISA法检测接受不同放疗剂量的食管癌患者血清中sMICA浓度，采用流式细胞术检测NK细胞NKG2D受体的表达，胞内染色法分析NK细胞杀伤靶细胞功能的变化，并在结束时及结束后4周，用WHO评价标准评价放疗疗效，研究NK细胞NKG2D受体的表达率提高与放疗疗效的关系。1年后评价生存率与NK细胞NKG2D受体的表达率提高的关系。结果食管鳞癌细胞株ECA109仅当32Gy的照射量才能诱导MICA明显表达并促进NK细胞对其的杀伤效应。放疗中食管癌患者血清内sMICA含量无明显变化，40～60gy的放疗剂量时NKG2D阳性的NK细胞数增加，同时其NK细胞毒活性最强。放疗前后NKG2D阳性的NK细胞数增加越高的放疗后疗效评价越好。但1年后的评价未证实此结论。结论放疗可以促使食管鳞癌细胞诱导MICA明显表达并促进NK细胞对其的杀伤效应。放疗中食管癌患者血清sMICA含量无明显变化，但放疗可使NKG2D阳性的NK细胞数增多，增加越明显的患者短期放疗疗效越好，但对远期1年生存率没有明显的影响。

NKG2D配体在人脑胶质瘤细胞的表达及其在体外条件下对NK细胞杀伤活性的影响

目的观察NKC2D配体在人脑胶质瘤细胞(HGCs)的表达及其对自然杀伤(NK)细胞杀伤HGC活性的影响。方法流式细胞仪检测HGCs表面的NKG2D配体的表达;采用MTT法检测NK细胞在不同效靶比时对HGCs的杀伤活性;当效靶比为50∶1时,检测不同单抗对杀伤活性的阻断作用。结果HGCs表达NKG2D的配体MICA、ULBP2、ULBP3,不表达NKG2D的配体MICB、ULBP1。MICA、ULBP2和ULBP3分子在HGC表面的表达率分别为(63.52±6.67)%、(62.01±5.65)%和(51.36±2.38)%。效靶比为10∶1、20∶1、50∶1、100∶1时,杀伤活性分别为(23.58±1.69)%、(37.17±3.45)%、(49.69±4.31)%和(54.07±6.12)%;在各效靶比时(除效靶比50∶1组与效靶比100∶1组间外),NK细胞对HGCs的杀伤活性在各组间差异均有统计学意义(P=0.000)。用anti-MICA、anti-ULBP2及anti-ULBP3单抗可明显阻断NK细胞对HGC的杀伤活性,与阻断前相比均有统计学意义(P=0.000)。结论HGCs表达NKG2D的配体MICA、ULBP2、ULBP3,NK细胞在体外可杀伤HGCs。HGCs配体的抗体可明显阻断NK细胞对HGCs的杀伤活性。

氧化应激可选择性诱导细胞的NKG2D配体的表达

目的探讨氧化应激与细胞NKG2D配体表达的关系,分析氧化应激对NK细胞功能的影响。方法加H2O2诱导培养的肿瘤细胞处于氧化应激状态。用RT-PCR、Real-time PCR和流式细胞仪等方法分析细胞多种NKG2D配体的表达。用CCK-8法检测NK92细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结果氧化应激可诱导肿瘤细胞多种NKG2D配体的表达,不同的肿瘤细胞诱导表达的NKG2D配体不同;NKG2D配体表达上调可有效提高NK细胞的细胞毒活性,此效应可被抗NKG2D抗体所阻断。结论NKG2D配体可能在机体的免疫应答中发挥正向的调节作用。

NKG2D的结构与功能

目的:探讨NK细胞活化性受体NKG2D的结构与功能。方法:采用回顾性分析法系统归纳总结国内外近20年有关NKG2D结构与功能的研究资料。结果:NKG2D是表达于NK细胞表面的Ⅱ型膜蛋白受体,其基因定位于12p12. 3-p13. 1,含10个外显子和9个内含子。NKG2D单聚体蛋白质的三维结构含2个α螺旋,2个β片层,4个二硫键,主要依靠接头蛋白传递活化信号。NKG2D以同源二聚体形式结合DAP10,并使之磷酸化,然后与肿瘤表面的相应配体MICA、MICB、ULBPs结合,激活PI3K、PLCγ2、JNK-cJunN等信号通路,使NK细胞TNF-α、IFN-γ、颗粒酶释放分泌增加,Fas L、TRAIL表达上调,对肿瘤细胞发挥细胞毒性效应。结论:活化的NK细胞高表达NKG2D,而肿瘤细胞则高表达MICA、MICB、ULBPs,活化NK细胞表面的NKG2D与MICA、MICB、ULBPs结合,触发NK细胞释放多种细胞因子、分泌颗粒酶、表达Fas L、TRAIL,使靶细胞溶解,多途径发挥抗肿瘤作用。

P13K/mTOR信号通路参与调控KG1a细胞NKG2D配体的表达

目的:自然杀伤细胞活化性受体(NKG2D)配体的低表达是白血病干细胞(LSC)逃避免疫杀伤的关键因素,磷脂酰肌醇3-激酶/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/mTOR)信号通路在LSC中高度活化,探讨PI3K/mTOR信号通路是否参与调控LSC中NKG2D配体的表达。方法:采用PI3K/mTOR信号通路抑制剂NVP-BEZ235对人急性骨髓白血病细胞(KG1a细胞)进行干预后,采用细胞技术试剂盒CCK-8检测KG1a细胞增殖,采用流式细胞术检测KG1a细胞周期及凋亡,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及免疫印迹(Western blot)检测细胞中NKG2D配体MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3的表达。结果:抑制剂NVP-BEZ235显著抑制KG1a细胞的增殖,并将KG1a细胞周期阻滞于细胞周期G0/G1期;NVP-BEZ235抑制剂干预后,KG1a细胞NKG2D配体MICB信使核糖核酸(mRNA)相对表达量显著升高,ULBP1、ULBP2、ULBP3、mRNA及蛋白表达量也显著升高。结论:PI3K/mTOR调控LSC的增殖及周期,且其能够调控NKG2D的表达,该结果为通过PI3K/mTOR抑制靶向治疗耐药的LSC提供了数据支持。

NKG2D配体在NK细胞杀伤三氧化二砷诱导的KG1a细胞中的作用

目的:探讨低浓度的三氧化二砷(ATO)作用急性髓系白血病KG1a细胞株后,对KG1a细胞增殖的影响及与NK细胞联合杀伤肿瘤细胞可能的作用机制。方法:XTT法检测不同浓度ATO对KG1a细胞24 h、48 h的细胞生长抑制作用;LDH检测试剂盒检测定NK细胞对KG1a细胞的杀伤作用;甲基纤维素集落形成实验检测不同实验处理组的集落数;流式细胞术检测低浓度的ATO作用前后KG1a细胞表面NKG2D配体的表达水平。结果:一定浓度范围内ATO对KG1a细胞的增殖抑制作用呈时间浓度依赖性;对比单用ATO处理KG1a细胞组,联合NK细胞后集落形成数明显降低(P<0.05)。对比NKG2D单克隆抗体预处理后的NK细胞联合ATO处理组,NK细胞联用ATO处理组的细胞杀伤率更高、集落形成数明显降低(P<0.05);ATO作用后能够上调KG1a细胞表面NKG2D配体ULBP1的表达(P<0.05)。结论:低浓度的ATO联合NK细胞能抑制KG1a细胞的增殖,其机制可能与低浓度的ATO诱导KG1a细胞表面NKG2D配体ULBP1的表达从而增加NK细胞对KG1a细胞的杀伤作用有关。

沙利度胺对白血病细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤敏感性的影响

目的:探究沙利度胺对白血病细胞自然杀伤细胞及活性受体D(natural killer cell group 2 member D,NKG2D)配体表达及自然杀伤细胞(natural killer,NK)杀伤敏感性的影响。方法:取对数生长期白血病细胞株HL-60、K562细胞,以不同浓度沙利度胺作用48h,并设置未经沙利度胺处理的细胞为对照组,采用细胞计数实验(cell counting kit-8,CCK-8)检测沙利度胺对细胞的半抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50),实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)和流式细胞术检测细胞NKG2D配体[MHC-I类链相关分子A(major histocompatibility complex classⅠchain-related protein A,MICA)、MICB]及人巨细胞病毒UL16蛋白的结合蛋白[(UL16-binding proteins,ULBPs:ULBP1、ULBP2、ULBP3)]表达情况,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放法检测沙利度胺对NK-92MI细胞的杀伤效率。结果:沙利度胺干预HL-60、K562细胞,IC50分别为30.06、31.95μg/mL,且随着沙利度胺浓度的升高,抑制作用越明显;与对照组比较,沙利度胺组MICB、ULBP1、ULBP2基因mRNA水平明显升高(P<0.05),但MICA和ULBP3 mRNA水平无明显变化(P>0.05);与对照组比较,沙利度胺组MICB、ULBP1、ULBP2表达明显升高(P<0.05),但MICA和ULBP3表达无明显变化(P>0.05);效靶比分别为1:1、5:1、10:1时,与对照组比较,沙利度胺组NK-92MI对细胞的杀伤效率明显升高(P<0.05)。结论:沙利度胺可能通过提高NKG2D配体MICB、ULBP1、ULBP2表达,提高HL-60、K562细胞对NK-92MI的杀伤敏感性。

氧糖剥夺对小鼠小胶质细胞NKG2D受体及其配体表达的影响

目的探究自然杀伤细胞活化受体(NKG2D)在氧糖剥夺损伤小胶质细胞中的表达变化及炎症反应中的潜在作用。方法建立小鼠神经元细胞HT22氧糖剥夺(OGD)模型,造模19小时后复氧复糖,分别收集正常条件培养基(Control)和OGD培养基(Model)刺激小鼠BV2小胶质细胞。CCK-8法检测HT22和BV2细胞活性;qPCR检测BV2细胞中NKG2D受体信号通路及炎症因子表达;ELISA法检测BV2细胞培养上清中炎症因子含量。结果OGD可介导HT22神经元细胞存活率明显下降(P<0.01),但OGD上清对BV2细胞活性无明显影响(P>0.05)。与Control组比较,NKG2D受体及其H60配体、接头蛋白DAP10的mRNA表达水平明显上升(P<0.01),但RAE-1与MULT1配体未见明显变化(P>0.05);同时,肿瘤坏死因子(TNF-α)在Model组BV2细胞中的mRNA水平及培养基中的蛋白含量均明显上升(P<0.01)。结论氧糖剥夺可诱导BV2细胞H60/NKG2D、下游效应器DAP10及炎症因子表达。提示NKG2D受体信号通路可能在脑缺血后小胶质细胞的炎症反应中发挥重要作用。