慢性低水平铅暴露对发育期大鼠海马NMDAR-1 mRNA表达的影响

目的 探讨发育期低水平铅暴露对大鼠学习记忆影响的分子机制。方法 采用原位杂交技术 ,研究低水平铅暴露后发育期海马NMDA受体亚单位 1(NMDAR 1)mRNA表达的变化。结果 铅暴露组大鼠海马区锥体细胞层NMDAR 1mRNA与对照组相比在 16d时CA1区、CA3区分别增加 18 75 %和 13 2 % (P <0 0 5 ) ,而在齿状回颗粒细胞层表达却降低 14 2 9% (P <0 0 1) ;在 3 2、64d除齿状回颗粒细胞层表达降低 9 67%、10 67%外 (P <0 0 1)外 ,其余各海马区未见有明显的光密度变化。结论 发育期铅暴露能导致NMDAR 1mRNA表达的改变 ,进而影响NMDAR 1的表达 ,这可能是铅暴露影响学习记忆的分子机制之一。

以痫性发作为首发症状的自身免疫性脑炎12例临床分析

目的分析以痫性发作为首发症状的自身免疫性脑炎临床特点,提高诊断率。方法回顾分析我院收治的以痫性发作为首发症状的自身免疫性脑炎患者的临床表现、实验室检验结果、影像学检查结果和治疗效果。结果共收集12例患者,男性8例,女性4例,发病年龄17~65岁,中位数43岁。抗γ-氨基丁酸B型受体(GABABR)脑炎5例(其中GABABR和SOX-1抗体双阳性1例),抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)脑炎4例,抗富亮氨酸胶质瘤失活基因-1(LGI-1)脑炎2例,抗接触蛋白相关蛋白2(CASPR2)脑炎1例。患者均以痫性发作为首发症状,合并认知功能障碍5例,合并精神症状者3例,头部MRI发现病灶者3例,合并胸部CT显示肿瘤者2例,合并甲状腺相关抗体明显升高者4例。12例患者均进行免疫治疗,痫性发作明显改善,2例合并肺癌患者1年内死亡。结论AE的临床表现异质性大,首次痫性发作的患者需警惕AE,完善检查尽快明确诊断,尽早启动免疫治疗。

IL-1β对谷氨酸致痫大鼠大脑皮质、海马内NMDAR_1免疫反应变化的影响

为了进一步探讨 IL -1β在促进癫痫发作中的机制 ,用免疫组织化学方法比较了单纯用致痫量谷氨酸钠致痫的大鼠和预先向侧脑室注射 IL-1β再用阈下剂量的谷氨酸钠共同致痫的大鼠脑内 NMDAR1 免疫反应的变化。结果表明 ,IL-1β和谷氨酸钠共同致痫的大鼠大脑皮质及海马 CA3区 NMDAR1 免疫反应较对照组明显增强 (P<0 .0 5 ) ,与单纯用谷氨酸钠致痫的大鼠没有明显区别。如果预先给予 IL-1ra或 D-AP5则 IL-1β和谷氨酸钠的共同致痫效果不出现 ,脑内 NMDAR1 免疫反应与对照组比较未见明显增强 (P>0 .0 5 )。本实验结果表明 ,IL -1β具有促进癫痫发作的效应 ,这种促癫痫效应的发挥与谷氨酸受体具有协同作用 ,并与通道型 NMDA受体 R1

调督安神胶囊对PTX致痫大鼠海马神经元NMDAR1的影响

目的探讨调督安神胶囊对PTX致痫大鼠海马N-甲基D-天冬氨酸受体亚单位NR1(NMDAR1)的影响。方法建立PTX癫痫大鼠模型,再随机分为模型对照组、中药低剂量组、中药高剂量组、西药组。分别给予双蒸水和调督安神胶囊、西药灌胃。然后进行NMDAR1免疫组织化学染色和免疫阳性细胞记数。结果PTX致痫大鼠海马NMDAR1表达显著增强,而经过中药治疗后的癫痫大鼠海马NMDAR1阳性细胞数明显减少,接近于正常组。结论调督安神胶囊可以抑制海马组织中NMDAR1的过度表达,这可能是其改善癫痫大鼠学习和记忆障碍的机制之一。

弓状核损毁模型大鼠海马组织中GABA_A受体、NMDAR_1受体、c-fos蛋白、NGF受体的表达

目的 :探讨谷氨酸钠造成的下丘脑弓状核损毁模型鼠海马组织中γ -氨基丁酸 (GABAA)受体、N -甲基-D -天冬氨酸受体 (NMDAR1 )、c -fos蛋白、神经生长因子 (NGF)受体的表达。方法 :皮下注射谷氨酸钠建立SD新生大鼠弓状核损毁模型。正常组注射等量生理盐水作对照。GABAA 受体、NMDAR1 受体、c -fos蛋白、NGF受体的表达以免疫组化染色显示。结果 :造模组大鼠海马组织中GABAA 受体、NMDAR1 受体的表达均明显低于正常组 ,P<0 .0 5 ,NGF受体的表达明显高于正常组 ,P <0 .0 5 ,c-fos蛋白表达略高于正常组 ,但差异无统计学意义 ,P >0 .1。结论 :谷氨酸钠损毁弓状核对大鼠海马组织中GABAA 受体、NMDAR1 受体、NGF受体的表达有明显影响。

NMDA受体1和雌激素受体在白细胞介素-2致痫大鼠脑内的表达变化和共存

目的探讨白细胞介素2(IL-2)致痫与NMDA受体(NMDAR)和雌激素受体(ER)的关系。方法应用免疫组织化学、免疫荧光双标和激光共焦显微镜技术研究IL-2致痫大鼠及经免疫抑制剂预处理后再致痫大鼠脑内NMDAR-1、ER的表达变化以及NMDAR/ER和NMDAR/IL-2R共存情况。结果大鼠侧脑室注射IL-2以后,动物出现明显的癫痫发作,其大脑皮质和海马部位NMDAR-1及ER表达较对照组明显增多,免疫反应平均吸光度(A)值与对照组相比有极显著性差异;而用IL-2抑制剂环胞霉素(CsA)或糖皮质激素(G)预处理后再注射IL-2,动物未出现或仅出现轻微的癫痫发作,其NMDAR-1和ER表达较IL-2组明显减少(P<0.05)。研究还观察到大鼠脑内大脑皮质和海马部位NMDAR/ER或NMDAR/IL-2R之间存在着广泛共存。结论IL-2有致痫作用,NMDAR-1I、L-2R和ER在致痫活动中可能存在协同和互动作用。

大鼠卒中后抑郁模型中NMDA受体调控NLRP3-caspase-1通路的作用及分子机制

目的:阐明卒中后抑郁与炎症之间的关系,以及该过程中N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)对于NLRP3-caspase-1通路的影响。方法:以大脑中动脉栓塞(MCAO)模型联合大鼠悬尾实验(TST)模型构建大鼠卒中后抑郁模型,按实验要求分为Control组、MCAO组,PSD组(MCAO+TST组)、PSD+D-丝氨酸干预组(MCAO+TST+D组)、PSD+氯胺酮干预组(MCAO+TST+K组)共5组。以糖水消耗实验及血清5-HT检测评估大鼠精神状态,通过ELISA、Western Blot、real-timePCR等方法检测NLRP3-caspase-1通路相关分子的变化。随后采用D-丝氨酸及氯胺酮等对NMDAR的活性进行调节,以糖水消耗实验及血清5-HT,ELISA、Western Blot、Real-time PCR等方法进一步观察对上述指标的影响。结果:与Control组相比,MCAO组中的大鼠,其血清5-HT的水平以及糖水消耗比变化不明显(P>0.5),但NLRP3-caspase-1通路出现了激活(P<0.001);MCAO+TST组中,大鼠血清的5-HT及糖水消耗比明显下降,NLRP3-caspase-1通路相关分子出现了明显活化(P<0.001);而通过应用NMDA受体共激动剂D-丝氨酸干预,在MCAO+TST+D组中,大鼠糖水消耗比及血清5-HT出现了进一步的下降,同时NLRP3-caspase-1通路相关分子的激活较前更为明显(P<0.001);而应用NMDA受体拮抗剂氯胺酮后,MCAO+TST+K组中,大鼠糖水消耗比及血清5-HT较前明显提高,同时NLRP3-caspase-1通路相关分子的激活较前出现了下调(P<0.001)。结论:NLRP3-caspase-1通路所代表的炎症反应过程与卒中后抑郁的发生发展密切相关,而通过干预与其密切相关的NMDA受体,可实现对该过程的调控,起到影响卒中后抑郁程度的作用。

大鼠室旁核和视上核NMDAR_1及NADPH-d阳性神经元分布的性别差异

为了研究ＮＭＤＡＲ１ 及ＮＡＤＰＨ－ｄ 阳性神经元在室旁核及视上核分布的性别差异，本研究采用雌雄Ｗ ｉｓｔａｒ 大鼠，恒冷箱切片，分别进行ＮＭＤＡＲ１ 免疫细胞化学和ＮＡＤＰＨ－ｄ 组织化学反应，并进行ＮＭ ＤＡＲ１ 免疫细胞化学和ＮＡＤＰＨ－ｄ 组织化学双重反应，光镜下观察室旁核及视上核的阳性细胞分布状况。观察结果发现，雄性组室旁核中的ＮＭＤＡＲ１ 和ＮＡＤＰＨ－ｄ 双重反应阳性细胞明显多于雌性组。ＮＭ ＤＡＲ１ 免疫反应组可见免疫阳性神经元，但雌雄两组之间未见明显差异。ＮＡＤＰＨ－ｄ 组化反应组可见高尔基样的阳性细胞，雌雄两组之间也未见明显差异。ＮＭ ＤＡＲ１、ＮＡＤＰＨ－ｄ 及ＮＭＤＡＲ１ 和ＮＡＤＰＨ－ｄ 双重反应各组在视上核未见性别差异。室旁核ＮＭＤＡＲ１ 和ＮＡＤＰＨ－ｄ 双重反应的分布有明显性别差异的研究结果表明，雄性大鼠室旁核可能通过ＮＭ ＤＡＲ－ＮＯ 途径介导雄性大鼠的某些性行为。

法舒地尔联合谷氨酸降低胶质瘤细胞存活率

目的观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对胶质瘤细胞NMDAR-1表达和联合谷氨酸降低细胞存活率。方法使用法舒地尔干预原代人脑胶质瘤细胞48h后再加入谷氨酸共同培养细胞24h。相差显微镜观察法舒地尔对细胞形态变化的影响;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的存活率;免疫荧光和蛋白质印迹检测谷氨酸受体的表达变化。结果经过法舒地尔干预48h后,免疫荧光(NMDAR-1阳性细胞百分比计数:空白对照组18.9%±3.7%,Fas100μmol/L组79.4%±6.4%,P<0.05)和蛋白质印迹表明谷氨酸受体的表达明显升高(Fas50μmol/L组相对密度:Blank组4.07±1.04倍,P<0.05,Fas100μmol/L组为4.89±0.96倍,P<0.05),谷氨酸能明显降低经法舒地尔处理后的细胞的存活率(空白对照组与空白对照+谷氨酸组吸光度分别为1.47±0.11和1.34±0.20,P>0.05;Fas50μmol/L组和Fas50μmol/L+谷氨酸组为0.98±0.16和0.66±0.15,P<0.05;Fas100μmol/L组和Fas100μmol/L+谷氨酸组为0.89±0.13和0.49±0.17,P<0.05)。结论法舒地尔可以诱导人脑胶质瘤细胞谷氨酸受体的表达增高,从而可以联合谷氨酸发挥谷氨酸兴奋性毒性达到更好的抗胶质瘤的作用。

电针预处理对血管性痴呆大鼠神经细胞谷氨酸-NMDA受体信号转导通路的影响

目的:观察电针预处理对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠防治作用的可能机制。方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针预处理组。采用改良线栓法制备VD模型。电针预处理"百会""肾俞""后三里"穴,连续波,频率为100次/min,强度1 mA,每日1次,连续进行10 d。用比色法测定各组大鼠海马谷氨酸(Glu)含量的变化,原位杂交法测定海马N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR 1)mRNA表达的变化。结果:模型组海马Glu含量、NMDAR 1 mRNA表达明显高于假手术组(P<0.01),电针预处理组海马Glu含量、NMDAR 1 mRNA表达明显低于模型组(P<0.05)。结论:电针预处理可降低VD鼠海马组织Glu含量,下调海马NMDAR 1的表达,因而有可能通过减轻Glu-NMDAR信号路径诱导的细胞凋亡发生,保护脑细胞。

回神颗粒减轻中度创伤性脑损伤大鼠脑水肿的疗效机制

目的探讨回神颗粒对中度创伤性脑损伤(TBI)脑水肿的疗效机制。方法应用液压性脑损伤装置建立中度TBI模型,创伤压力为(170±10)kPa,作用时间为(20±2)ms,随机将大鼠分为6组:正常组、假手术组、模型3 d组、模型7 d组、治疗3 d组、治疗7 d组。治疗3 d组和治疗7 d组于创伤后即刻用2 mL药液(含回神颗粒0.27 g)灌胃1次,此后再分别于每日早晚各灌胃1次,每次2 mL药液。采用双光束荧光分光光度计测定6组动物脑细胞内游离钙浓度;采用荧光定量PCR检测6组动物脑组织内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(NMDAR-1)、水通道蛋白4(AQP-4)的变化。采用光镜和扫描电镜观察6组动物脑损伤区脑细胞的病理形态学改变。结果与正常组比较:模型3 d组细胞内游离钙明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗3 d组细胞内游离钙的浓度较模型3 d组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。与正常组比较:模型3 d组、模型7 d组NMDAR-1及AQP-4的表达均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。治疗3天组NMDAR-1及AQP-4的表达均较模型3 d组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。光镜和电镜下观察模型3 d组、模型7 d组、治疗3 d组和治疗7 d组均可见到明显的脑细胞损伤的病理形态学改变。与正常组和假手术组比较,存在明显区别;与模型3 d组和模型7 d组比较,应用回神颗粒后,治疗3 d组和治疗7 d组的脑损伤区病理形态学改变明显减轻。结论回神颗粒能够减轻创伤性脑水肿,维持细胞的正常结构,减轻创伤性脑损伤。其作用机制为可能为遏制钙超载、减轻NMDAR-1及AQP-4的过度表达。

以兴奋性毒性机制为靶点的神经保护策略研究进展

兴奋性毒性是最早发现并被广泛认可的脑缺血卒中后损伤的分子机制之一,当大脑处于缺血缺氧状态,由于代谢障碍,导致兴奋性神经递质释放增加与重摄取出现障碍,最终导致大脑缺血区域兴奋性神经递质的水平迅速升高[1]。随后谷氨酸受体的激活导致钙内流和神经元去极化,进而导致大脑中许多钙依赖通路的异常激活和坏死、凋亡和自噬过程的启动[2]。研究表明由谷氨酸介导的兴奋性毒性是导致缺血性脑卒中、癫痫、阿尔茨海默病、精神疾病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化病等神经系统疾病神经元损伤的重要作用机制[3]。自上世纪50年代兴奋性毒性的概念提出以来,关于谷氨酸释放、转运体功能改变、受体表达及其引起的下游细胞死亡信号的激活等已成为脑缺血损伤机制的研究重点。本文综述了近几十年以兴奋性毒性机制中的重要环节为靶点的神经保护策略,并对新一代兴奋性毒性抑制剂如何在上一代药物失败的情况下获得成功进行分析,以期为兴奋性毒性机制的研究和神经保护药物的研发提供帮助。

新型镇痛靶点α2δ-1-NMDAR稳定表达细胞株构建及镇痛药物筛选的应用

在多种神经性疼痛动物模型中均发现周围神经损伤可导致由CACNA2D1编码的α2δ-1蛋白在脊髓和背根神经节(DRG)中表达显著上调。CACNA2D1过表达使脊髓背角神经元的突触前和突触后NMDAR活性增强,引起疼痛过敏症。α2δ-1与NMDAR相互作用,促进了NMDAR在细胞表面转运和突触膜上的定位,可引起神经病理性疼痛,且α2δ-1-NMDAR复合物也被发现存在于其他多种病理状态下,如某些神经源性的高血压、脑缺血。本研究使用慢病毒转染构建稳定表达α2δ-1-NMDAR复合物的人肾胚HEK293T细胞株;通过荧光显微镜、RT-qPCR及Western blotting方法对所建立的稳转细胞系进行鉴定,结果显示HEK293T被成功转染且基因能够稳定表达;并采用膜片钳技术成功建立该细胞株靶向药物筛选体系。该细胞株为进一步研究α2δ-1-NMDAR复合物的相互作用机制及针对慢性疼痛和相关疾病的低副作用的药物筛选提供了良好应用前景的细胞模型。