蒲金口服液对HIBD幼鼠脑组织PSD-95、NMDAR-2B表达的影响

目的探讨蒲金口服液对缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)幼鼠的神经保护机制。方法单侧颈总动脉结扎联合缺氧环境制备HIBD幼鼠模型。动物分为中药组、西药组、模型组、假手术组、空白组。中药组蒲金口服液0.1 mL/(kg·d)灌胃;西药组单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液3 mL/(kg·d)腹腔注射;余组生理盐水0.1 mL/(kg·d)灌胃,均每日1次,连续14 d。Morris水迷宫测试学习与记忆行为能力,尼氏染色观察脑组织神经元,透射电镜观察突触超微结构,Western Blot检测脑组织PSD-95、NMDAR-2B表达。结果蒲金口服液可改善HIBD幼鼠神经损伤,上调脑组织突触后密度蛋白95(PSD-95)、谷氨酸受体2B抗体(NMDAR-2B)表达(P<0.05)。结论蒲金口服液改善HIBD幼鼠神经行为学表现,可能与其调控PSD-95、NMDAR-2B表达,维护突触稳态有关。

蒲金口服液对宫内感染/炎症致早产脑损伤大鼠脑组织PSD-95、NMDAR-2B表达的影响

目的:观察蒲金口服液对宫内感染/炎症致早产脑损伤大鼠脑组织突触后致密物95(postsynaptic density-95,PSD-95)、N-甲基-D-天冬氨酸受体-2B(N-methyl-D-aspartate receptor-2B,NMDAR-2B)表达的影响。方法:将18只SPF级雄性大鼠与36只雌性大鼠以12比例合笼饲养,雌鼠受孕后另外饲养。将36只怀孕母鼠分为LPS组(n=30)和对照组(n=6),LPS组孕鼠腹腔注射350μg·kg^(-1)的LPS制作宫内感染动物模型,然后记录孕鼠的分娩时间及新生仔鼠体重,胎龄<22 d为早产仔鼠。将80只LPS组早产仔鼠按随机数字表法分为4组,每组20只,分别为高剂量蒲金口服液组(25 g·kg^(-1))、低剂量蒲金口服液组(12.5 g·kg^(-1))、银杏叶提取物组(3 mg·kg^(-1))、模型组。随机选对照组正常分娩仔鼠20只,设为空白组。每组大鼠中的10只于仔鼠出生第0—7天进行早期药物干预,其余10只于仔鼠出生第7—14天进行晚期药物干预。HE染色观察新生仔鼠脑损伤状况;RT-PCR检测PSD-95 mRNA、NMDAR-2B mRNA表达水平;Western Blot检测脑组织中PSD-95及NMDAR-2B蛋白表达水平。结果:与对照组比较,LPS组活产仔鼠数和仔鼠出生体质量均显著降低(P<0.05);LPS组孕鼠子宫壁充血,胎盘呈老化状态,绒毛间质纤维组织增生,毛细血管管腔变小,子宫和胎盘内可见炎性细胞浸润;LPS组仔鼠脑室旁白质结构稀疏,神经元排列紊乱,出现明显的结构缺陷,少量细胞出现核固缩、溶解的现象。与空白组比较,模型组PSD-95、NMDAR-2B蛋白及mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);与模型组比较,低、高剂量蒲金口服液组PSD-95、NMDAR-2B蛋白及mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);与同时期低剂量蒲金口服液组比较,高剂量蒲金口服液组PSD-95、NMDAR-2B蛋白及mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);与晚期干预比较,早期干预的低、高剂量蒲金口服液组PSD-95、NMDAR-2B蛋白及mRNA相对表达量显著升高(P<0.05)。结论:蒲金口服液在促进神经细胞恢复方面作用显著,其机制可能与促进PSD-95、NMDAR-2B的表达,改善突触后膜致密物积聚与修复,调节突触可塑性,保持突触的结构完整性有关,且早期、高剂量干预效果更显著。

电针对血管性痴呆大鼠海马NMDAR-2 B mRNA表达及学习记忆能力的影响

目的:探讨电针改善血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆能力的作用机制。方法:将成年雄性SD大鼠采用永久性结扎双侧颈总动脉法建立VD模型,设立空白组、假手术组、模型组、电针非穴位组和电针穴位组,每组各10只。电针穴位组选取"百会""大椎"和双侧"肾俞"穴,电针非穴位组选取第1腰椎和第2腰椎两侧胸腹交界处的非穴位点,每天1次,每次20 min,连续30 d。Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,用原位杂交技术测定大鼠海马CA1区和齿状回N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)-2 B mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组平均逃避潜伏期延长,平台所在象限停留时间缩短,海马结构NMDAR-2 B mR-NA表达减少(P<0.05)。与模型组相比,电针穴位组的平均逃避潜伏期缩短,平台所在象限停留时间延长,海马结构NMDAR-2 B mRNA表达增高(P<0.05);电针非穴位组与模型组比较,各项指标无明显变化。结论:电针穴位可以提高VD大鼠海马CA1区及齿状回NMDAR-2 B mRNA的表达,增强学习记忆能力。

川芎干预Panx1-Src-NMDAR-2B信号通路对神经病理性疼痛模型大鼠中枢敏化的作用机制研究

兴奋性毒性(excitatory toxicity, ET)是中枢敏化(central sensitization, CS)引发神经病理性疼痛(neuropathic pain, NPP)的重要因素,而血清缝隙连接蛋白-1(pannexin^(-1), Panx1)-Src-N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位(N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B,NMDAR-2B)关联是ET启动CS的一条新的重要通路,揭示川芎中枢止痛作用是否通过同步调控脊髓/脑Panx1-Src-NMDAR-2B通路来实现。该研究采用动态活体的脑/脊髓同步微透析技术,结合行为学、高效液相荧光法、ISCUSflex微透析分析仪、超敏多因子电化学发光分析法、ELISA和Western blot法,以坐骨神经部分损伤(sciatic nerve injury, SNI)大鼠为工具,考察川芎醇提物对脊髓背角(spinal dorsal horn, SDH)和脑前扣带回(anterior cingulate cortex, ACC)区NMDAR-2B、Src和Panx1蛋白表达以及细胞外液兴奋性氨基酸、细胞因子、能量代谢物质和P物质变化规律的影响。与假手术组相比,SNI模型组大鼠机械痛阈显著降低(P<0.01),冷痛敏评分显著升高(P<0.01);ACC细胞外液中谷氨酸(glutamate, Glu)、丝氨酸(D-serine, D-Ser)和甘氨酸(glycine, Gly)水平显著升高(P<0.05),SDH细胞外液中Glu、D-Ser、白细胞介素-1β(interleukin^(-1)β, IL^(-1)β)、乳酸(lactic acid, Lac)水平显著升高(P<0.05),而肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)水平显著降低(P<0.05);脑ACC组织中NMDAR-2B、Src和Panx1蛋白水平显著升高(P<0.05)。与SNI模型组相比,川芎醇提物高、中剂量组均能显著提高模型大鼠机械痛阈的镇痛活性(P<0.05),而川芎醇提物中剂量组也能显著降低冷痛敏评分(P<0.05)。川芎醇提物高、中剂量组显著抑制SNI大鼠脑ACC细胞外液中Glu、D-Ser和Gly的含量(P<0.05),也能抑制脊髓SDH细胞外液中Glu含量(P<0.05)。川芎醇提物中剂量组也能明显升高SDH细胞外液中葡萄糖(glucose, Gluc)、Lac、干扰素-γ(interferon-gamma, IFN-γ)、角质形成细胞趋化因子/人生长调节癌基因趋化因子(keratinocyte chemoattractant/rat homologues of human growth-regulated oncogenes, GRO/KC)和白细胞介素-4(interleukin-4)的含量(P<0.05)。川芎醇提物不同剂量组也能显著抑制大鼠脑ACC和脊髓SDH组织中NMDAR-2B、Src和Panx1蛋白水平(P<0.05)。川芎的中枢镇痛作用可能与其抑制大鼠脑ACC和脊髓SDH细胞外液中Glu、D-Ser和Gly的释放,降低两区域内NMDAR-2B、Src和Panx1蛋白表达,调控脊髓、脑2个水平上Panx1-Src-NMDAR-2B通路有关。以上结果可阐明川芎临床止痛功效的科学依据。

血管性痴呆大鼠N-甲基-D-天冬氨酸-2B受体变化机制的研究

目的研究血管性痴呆(VD)大鼠形成过程中N-甲基D-天冬氨酸-2B受体(NR2B)的变化规律及作用机制。方法永久性结扎双侧颈总动脉制备VD大鼠模型,用Morris水迷宫衡量大鼠的学习记忆水平,用免疫组化法检测大鼠海马NR2B的表达。结果随缺血时间延长,VD大鼠的学习记忆能力下降,缺血4周后与对照有显著差异(P<0.01);NR2B的表达随缺血时间变化,呈先升后降改变,缺血2周时表达最多,与对照有显著差异(P<0.01),此后逐渐减少,并明显低于对照组(P<0.01),缺血16周时表达最少。结论VD大鼠学习记忆的改变与海马NR2B的变化相关,缺血早期NR2B过表达产生神经毒引起该能力下降;而在慢性缺血期,这种损害则是因NR2B含量不足难以完成生理功能所致。

α-硫辛酸对铅暴露海马神经元突触生成的影响和保护机制

[目的]探讨α-硫辛酸对铅暴露大鼠海马神经元树突棘突触形成的神经保护作用和机制。[方法]取新生大鼠(出生后24 h内,P0)海马组织进行细胞培养,体外培养第6天(DIV6)转染绿色荧光蛋白(GFP),DIV7开始加入醋酸铅(1μmol/L)处理至试验结束(DIV13),并在DIV12给予α-硫辛酸(100 nmol/L,1μmol/L和10μmol/L)处理24 h,然后观察树突棘的变化并进行量化分析。整体动物试验以SD母鼠喂饲300 mg/L醋酸铅水溶液,幼鼠自出生后至断奶(出生后第21天)经母乳铅暴露。幼鼠自从出生后第14天(PND14)到PND21经腹腔注射给药25 mg/kgα-硫辛酸,研究LA对铅暴露的海马神经元海马树突棘的修复作用,检测海马AMPA和NMDA受体的表达水平。[结果]α-硫辛酸对铅处理的体外培养海马神经元树突棘密度损伤有保护作用,且呈剂量依赖性。整体动物试验发现,铅暴露能显著降低海马CA1区锥体神经元和DG区颗粒细胞的树突棘密度。α-硫辛酸可以显著上调突触后NMDA受体亚单位NR2B的表达(P<0.05),但不影响AMPA受体亚单位的合成和表达。[结论]α-硫辛酸可以修复铅暴露引起的突触损伤,富含α-硫辛酸的食品可防治儿童铅中毒。