过表达NOLC1诱导人非小细胞肺癌细胞凋亡

人核仁磷酸化蛋白1(Nucleolar and coiledbody phosphoprotein 1,NOLC1)在癌症的发生发展过程中起着至关重要的调控作用,为探讨NOLC1对肺癌细胞的作用,本研究通过Gateway系统构建重组NOLC1腺病毒载体,成功包装NOLC1腺病毒后,分别感染正常人类胚胎肺细胞(HEL)和非小细胞肺癌细胞(A549细胞),过表达NOLC1。通过MTT实验、AnnexinV-APC/PI双染法和线粒体膜电位实验,证明与HEL细胞相比,NOLC1的过表达对A549细胞的活性降低、凋亡增加、线粒体膜电位下降影响较为显著;通过Real-time PCR检测Caspase家族、TNF与受体家族和BCL2家族基因的表达,发现过表达NOLC1明显上调了A549细胞中促凋亡基因的表达,下调了抗凋亡基因的表达,其中两种重要的促凋亡蛋白CASP8和BAX均显著上调,但是在HEL细胞中这种影响不明显。研究结果表明过表达NOLC1蛋白通过对线粒体通路和死亡受体通路的共同作用,对非小细胞癌具有显著的抗肿瘤活性。

NOLC1基因在胃癌组织中的表达及其对顺铂耐药性的影响

目的:研究NOLC1在胃癌中的表达量以及与顺铂耐药的相关性。方法:使用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库对NOLC1在胃癌及正常胃组织表达水平进行评估,应用KaplanMeier生存分析预测NOLC1在胃癌患者中的预后价值。通过免疫组化检测临床胃癌及其癌旁正常标本中NOLC1的表达量。通过持续添加低浓度顺铂诱导构建顺铂耐药株细胞。使用免疫荧光和Westernblot检测耐药型和敏感型细胞中NOLC1表达水平。使用慢病毒构建NOLC1敲低的稳转株胃癌细胞。使用不同浓度的顺铂处理胃癌细胞24h后,通过CCK-8、克隆形成和流式细胞术检测NOLC1对胃癌对顺铂耐药的影响,使用Westernblot检测NOLC1敲低后顺铂诱导的细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果:NOLC1基因在胃癌组织中高表达(P<0.01)并且其高表达预示不良预后(P<0.01)。NOLC1在对顺铂耐药的胃癌细胞株中高表达(P<0.01)。敲低NOLC1后,顺铂对胃癌细胞的杀伤能力和增殖抑制效果增强(P<0.05),并且细胞中Cl-Caspase3、Cl-PARP蛋白等凋亡相关蛋白表达上调(P<0.01)。结论:NOLC1蛋白在胃癌中高表达并可以促进胃癌对顺铂的耐受。

泛素连接酶MDM2促进外源NOLC1的泛素化和降解

目的研究泛素连接酶MDM2对其调节因子NOLC1的泛素化和降解。方法克隆原核表达了NOLC1全长蛋白和其核定位信号区域,在体外泛素化体系中利用有泛素连接酶活性的重组MDM2研究其对NOLC1的泛素化。在哺乳动物细胞中,研究MDM2对外源转染的NOLC1的降解。结果在体外泛素化体系中MDM2泛素化NOLC1全长和其核定位信号区域;在哺乳动物细胞中,MDM2促进外源NOLC1降解超过70%,且NOLC1的降解通过蛋白酶体途经实现。结论 MDM2促进外源NOLC1的泛素化和降解,为研究MDM2-TP53-NOLC1之间的相互调节提供了新的线索。

人核仁磷酸化蛋白1(NOLC1)影响禽流感病毒感染过程研究进展

禽流感是由A型流感病毒引起的家禽类传染病,能够引发从呼吸系统病变到全身性败血症等多种症状。禽流感病毒的传播给养殖业带来巨大经济损失,同时对人类健康也造成威胁。研究表明,禽流感病毒非结构蛋白NS1通过与宿主细胞内多种蛋白相互作用影响了病毒的感染进程,人核仁磷酸化蛋白即是其中之一,该蛋白参与核仁组装、细胞生长发育及肿瘤发生等过程,还能与禽流感病毒的非结构蛋白NS1发生相互作用,影响禽流感病毒感染过程。本文对NOLC1蛋白的结构、功能及如何影响禽流感病毒的感染等相关研究进展进行综述。