水牛NONO和PSPC1基因对成纤维细胞抗衰老的作用研究

旁粒相关基因NONO和PSPC1在DNA损伤修复、转录调控、细胞增殖等方面发挥重要作用.该研究旨在克隆水牛NONO,PSPC1基因并对其进行序列分析,探讨其对水牛胎儿成纤维细胞增殖及衰老的影响.首先扩增水牛NONO,PSPC1编码区序列并构建其过表达载体,对不同代数水牛胎儿成纤维细胞中旁粒相关基因的表达进行检测.构建细胞衰老模型,将过表达NONO,PSPC1载体转染第10代成纤维细胞,培养至15代进行细胞增殖、 β-半乳糖苷酶、细胞衰老和凋亡相关基因表达分析.分别得到1 424 bp和1 574 bp的水牛NONO和PSPC1编码区序列,生物信息学分析发现水牛NONO基因与黄牛和人的序列相似度分别为98.9%和91.2%;水牛PSPC1基因与黄牛、绵羊、山羊和人序列相似度分别为99.5%,86.0%,98.8%,89.3%.随着细胞培养代数增加,旁粒相关基因表达降低.过表达转染试验结果发现:与空白组和阴性对照组相比,2个试验组细胞增殖速度变快,β-Gal细胞阳性率和P21,P16,Bax表达均显著下降(p<0.05);2个试验组间相比,上调PSPC1表达后细胞增殖速度更快,β-Gal细胞阳性率和P21,P16,Bax表达均显著降低(p<0.05).上调NONO和PSPC1基因表达能够促进细胞增殖,降低凋亡相关基因的表达进而延缓细胞衰老.

辛伐他汀和NONO对乳腺癌细胞增殖的影响

目的:探讨辛伐他汀和NONO(non-POU-dormain-containing,octamerbinding protein)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法 :将靶向NONO基因的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)片段si RNA-NONO和NONO过表达重组载体pc DNA4/TO-NONO分别转染至乳腺癌MCF-7细胞后,分别应用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法和细胞计数法检测NONO m RNA和蛋白的表达及细胞的增殖情况。辛伐他汀(20μmol/L)处理MCF-7细胞后,分别应用细胞计数法、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞的增殖、NONO m RNA及蛋白的表达水平。辛伐他汀处理pc DNA4/TO-NONO转染组MCF-7细胞后,应用细胞计数法检测细胞的增殖情况。实时荧光定量PCR和组织总胆固醇酶法检测si RNA-NONO转染组MCF-7细胞中3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-Co A reductase,HMGCR)m RNA和胆固醇水平。结果 :si RNA-NONO转染组MCF-7细胞中NONO m RNA和蛋白的表达水平低于阴性对照组[MCF-7细胞转染si RNA negative contro(lsi RNANC)](P<0.01,P<0.05),pc DNA4/TO-NONO转染组MCF-7细胞中NONO m RNA和蛋白的表达水平高于转染空载体pc DNA4/TO的对照组(P值均<0.01)。si RNA-NONO转染组MCF-7细胞的增殖能力明显低于si RNA-NC转染组(P<0.05),而pc DNA4/TO-NONO转染组MCF-7细胞的增殖能力明显高于转染空载体pc DNA4/TO的对照组(P<0.05)。辛伐他汀(20μmol/L)处理组MCF-7细胞的增殖能力和NONO mR NA及蛋白的表达水平均明显低于辛伐他汀未处理的对照组(P<0.05,P<0.01,P<0.05)。pc DNA4/TO-NONO转染组细胞经辛伐他汀处理后,细胞的增殖能力明显低于未用辛伐他汀处理的细胞(P<0.01)。si RNANONO转染组MCF-7细胞中HMGCR m RNA和胆固醇水平均明显低于si RNA-NC转染组(P值均<0.01)。结论 :辛伐他汀可以抑制MCF-7细胞的增殖,可能与抑制NONO的表达有关。

先天性心脏病伴全面发育迟缓患儿1例的NONO基因变异分析

目的探讨1例先天性心脏病(CHD)伴全面发育迟缓(GDD)患儿的遗传学病因。方法选取2022年4月27日于福建省儿童医院心脏外科就诊的1例CHD伴GDD患儿为研究对象。收集患儿的临床资料,采集患儿的脐带血样及其父母的外周静脉血样,用全外显子组测序(WES)对患儿进行检测,对候选变异进行Sanger测序家系验证,并分析其致病性。结果患儿为男性,3岁3个月,具有心脏异常及发育迟缓等表现。WES检测结果提示其NONO基因存在c.457C>T(p.Arg153*)无义变异,Sanger测序证实其父母均未携带相同的变异。该变异已被在线人类孟德尔遗传(OMIM)、美国国家生物技术信息中心临床突变数据库(ClinVar)及人类基因突变数据库(HGMD)收录;而未被国际千人基因组计划数据库(1000 Genomes)、单核苷酸多态性数据库(dbSNP)和基因组聚合数据库(gnomAD)等正常人群数据库收录。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)相关指南评级为致病性变异。结论NONO基因c.457C>T(p.Arg153*)变异可能是本研究CHD伴全面发育迟缓患儿的遗传学病因。上述发现丰富了NONO基因c.457C>T(p.Arg153*)变异的表型谱,为患儿的临床诊断与家系遗传咨询提供了依据。

NONO基因沉默对乳腺癌细胞生物学特性影响研究

目的无POU域八聚体结合蛋白(non-POU domain containing octamer-binding protein,NONO)是一种参与多种核内事件的多功能核蛋白,NONO与某些肿瘤的发生密切相关。本研究旨在探讨NONO基因沉默对乳腺癌细胞(SKBR3)增殖、迁移和侵袭生物学特性的影响。方法用含有靶向人NONO基因shRNA的慢病毒感染SKBR3细胞,并用嘌呤霉素进行筛选,通过蛋白质印迹法检测SKBR3细胞中NONO蛋白表达,建立稳定的NONO基因沉默的SKBR3细胞系;采用CCK-8法和平板克隆实验检测NONO基因沉默对SKBR3细胞增殖的影响;通过体外Transwell迁移和侵袭实验检测NONO基因沉默对SKBR3细胞迁移和侵袭能力的影响。结果蛋白质印迹法实验结果显示,SKBR3、NONO基因沉默的SKBR3(SKBR3-NONO-si)和阴性对照SKBR3(SKBR3-NC)组细胞NONO蛋白表达相对灰度值分别为0.716 7±0.225、0.103±0.045和0.727±0.127,差异有统计学意义,F=16.699,P=0.004,表明成功地建立了稳定的NONO基因沉默的SKBR3细胞系。CCK-8实验结果显示,细胞接种后7 d,SKBR3、SKBR3-NONO-si和SKBR3-NC细胞CCK-8吸光度值分别为1.717±0.233、0.566±0.158和1.110±0.187,差异有统计学意义,F=78.469,P<0.001;平板克隆形成实验结果显示,细胞培养14d后,SKBR3、SKBR3-NONO-si和SKBR3-NC组形成的克隆数分别为64.667±14.84、21.167±7.414和53.667±11.587,差异有统计学意义,F=16.333,P<0.001;以上结果均说明,NONO基因沉默抑制SKBR3细胞增殖能力。Transwell迁移实验结果显示,细胞接种后20h,SKBR3、SKBR3-NONO-si和SKBR3-NC组迁移细胞数分别为62.333±7.767、44.667±7.637和85.333±11.930,差异有统计学意义,F=14.338,P=0.005;侵袭实验结果显示,细胞接种后40h,SKBR3、SKBR3-NONO-si和SKBR3-NC组侵袭细胞数分别为27.667±7.024、24.666±3.512和81.000±5.568,差异有统计学意义,F=97.558,P<0.001;与SKBR3-NC细胞相比,NONO基因沉默的SKBR3-NONO-si细胞迁移和侵袭能力均明显降低。结论 NONO基因沉默抑制SKBR3细胞增殖、迁移和侵袭,提示NONO可能是促进乳腺癌细胞增殖、转移和侵袭一个新的重要调控蛋白。