NOS2基因DNA甲基化编辑调节NO浓度影响肌肉发育通路基因的表达

旨在探究对一氧化氮合成酶(NOS)2进行DNA甲基化编辑后对肌红蛋白的调控作用机制,并研究其对神经元一氧化氮合酶(nNOS)和内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的表达水平是否有影响。本试验采用DNA甲基化编辑技术在猪肾细胞系PK-15细胞对基因NOS2进行甲基化编辑,在猪肾细胞中检测NOS2基因启动子DNA甲基化水平、NOS2表达水平、细胞内一氧化氮浓度以及肌纤维和肌红蛋白相关基因的表达。结果发现,NOS2基因启动子前500 bp区域平均DNA甲基化水平降低,但差异不显著,而gRNA2结合位点附近的CpG位点甲基化水平增高。此外,对NOS2进行甲基化编辑后,NOS2基因表达量和其iNOS蛋白质表达量显著降低。随着NOS2表达降低,nNOS和eNOS表达显著增加。MYHC-Ⅱb和MYHC-Ⅱx的表达水平显著下降,Myoglobin蛋白表达也显著下降。综上,NOS2基因的异常表达能够影响细胞中的NO生成,同时也会影响NOS1和NOS3的表达,以及和肌肉发育相关基因的表达。

丁苯酞对脑梗死后血管性认知功能障碍患者认知功能及血清NO/NOS的影响

探讨丁苯酞对脑梗死后血管性认知功能障碍患者认知功能及血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)水平的影响。方法 选取2021年2月~2023年2月在广西壮族自治区凭祥市人民医院接受治疗的脑梗死后血管性认知功能障碍患者80例为研究对象,以随机数字法分为对照组(n=40)、观察组(n=40)。运用MMSE评分量表评定脑梗死后血管性认知功能障碍患者认知功能,同时检测血清NO/NOS水平。对照组给予传统性二级预防药物治疗,观察组在传统性二级预防药物治疗基础上给予丁苯酞治疗,两组内服药物连续口服至少90天。比较两组患者治疗前后MMSE分值变化、血清NO/NOS水平以及MMSE分值与血清NO、NOS水平的相关性。结果 丁苯酞观察组治疗后MMSE评分(28.72±1.50)分明显高于对照组的(24.31±2.54)分,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组患者的血清NO和NOS水平分别为(58.46±0.70)μmol/L和(31.09±4.59)μmol/L,明显高于对照组的(44.25±6.27)μmol/L、(24.55±4.08)μmol/L,差异均有统计学意义(P<0.05),并且两者呈正相关性(r=0.511,P<0.05)。结论 丁苯酞可以通过增加血清 NO和 NOS含量水平使脑梗死后血管性认知功能障碍患者的认知水平提升。

反复发热惊厥大鼠脑内NOS/NO体系的变化

目的研究一氧化氮合酶(NOS)/一氧化氮(NO)体系与反复发热惊厥(febrileseizures,FS)的关系。方法采用热水浴诱导大鼠FS,隔日1次,每次大鼠进行热水浴的时间不超过5min,共10次。大鼠随机分为2组:正常对照组和发热组,后者又根据惊厥与否进一步分为发热对照组和反复FS组。用原位杂交法观察大脑皮层神经元型NOS(nNOS)mRNA的变化,用分光光度计检测大鼠脑组织及血浆中NO含量,用放射免疫法检测大鼠脑组织cGMP含量。结果在大脑皮层深层,FS组nNOS表达阳性的神经元明显增高,而发热对照组仅出现少量nNOS阳性神经元,正常对照组偶见nNOS阳性神经元;脑组织及血浆中NO含量各组间无统计学意义;FS组脑组织cGMP含量明显高于正常对照组及高热对照组。结论大鼠反复FS后24h脑内nNOSmRNA表达增高,但此时NO不见增多,脑组织cGMP水平增高,可能由于其他途径调节所致。

血管性痴呆小鼠大脑皮质NOS活性及nNOS蛋白表达的改变

目的观察血管性痴呆小鼠大脑皮质一氧化氮合酶(NOS)和神经元型一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元的变化,探讨血管性痴呆的发生机制。方法复制小鼠血管性痴呆模型,利用Y-迷宫检测血管性痴呆模型小鼠学习记忆能力,采用NADPH-d组织化学和ABC免疫组织化学方法,研究血管性痴呆小鼠与正常小鼠大脑皮质NOS和nNOS阳性神经元数量的变化。结果血管性痴呆小鼠比正常小鼠Y-迷宫学习记忆训练次数明显增多,差异有统计学意义(P<0.01);大脑皮质NOS和nNOS阳性神经元的数量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血管性痴呆的发生可能与大脑皮质NOS和nNOS阳性神经元的数量明显增多有关。

NOS3单核苷酸多态性检测在妊娠高血压患者中的表达及临床指导价值研究

目的研究内皮型一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase 3,NOS3)单核苷酸多态性检测在妊娠高血压患者中的表达及临床指导价值。方法选择2016年3月—2018年1月本院收治的妊娠高血压患者(妊娠高血压组,74例)和正常妊娠孕妇(正常妊娠组,80名)作为研究对象,采集孕妇外周血,提取DNA,PCR-RFLP技术分析NOS3基因Glu298Asp位点的基因型。分析妊娠高血压患者NOS3基因Glu298Asp位点基因型、等位基因与妊娠高血压严重程度关系。分析妊娠高血压患者并发症、妊娠不良结局患者与基因型频率关系。结果正常妊娠组和妊娠高血压组孕妇NOS3基因Glu298Asp位点TT、GT、GG基因型频率比较,差异存在统计学意义(P<0.05)。正常妊娠组和妊娠高血压组孕妇NOS3基因Glu298Asp位点等位基因G和T频率比较,差异存在统计学意义(P<0.05)。比较轻度、中度和重度妊娠高血压患者NOS3基因Glu298Asp位点基因型频率,差异无统计学意义(P>0.05)。轻度、中度、重度妊娠高血压患者NOS3基因Glu298Asp位点等位基因T频率逐渐升高。基因型为GT的妊娠高血压患者并发胎盘早剥、左心力衰竭、HELLP综合征、DIC、急性肾功能衰竭总发生率明显高于基因型TT和基因型GG患者(P<0.05)。基因型为GT的妊娠高血压患者新生儿窒息、剖宫产、胎儿宫内窘迫、围生儿死亡妊娠不良结局总发生率明显高于基因型TT和基因型GG患者(P<0.05)。结论NOS3基因Glu298Asp位点基因型、等位基因频率与妊娠高血压有关,等位基因T频率越高,妊娠高血压严重程度增加,基因型为GT的妊娠高血压患者并发症和妊娠不良结局的总发生率增加。

振肌胶囊对大鼠疲劳模型血清NO含量及NOS活性的影响

观察不同剂量振肌胶囊及爱维治对大鼠疲劳模型血清一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性的影响。结果显示与正常对照组相比模型组血清NO含量及NOS活性明显升高(P<0.05),与模型组相比振肌胶囊组(大剂量)血清NO含量及NOS活性明显降低(P<0.05),表明振肌胶囊可能是通过降低NO含量及NOS活性发挥其抗疲劳作用的。

VEGF、b-FGF、NOS_2和NOS_3在非小细胞肺癌的表达及其临床意义

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (b -FGF)、一氧化氮合酶 2 (诱生型 ,NOS2 )、一氧化氮合酶 3(内皮型 ,NOS3)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其与肿瘤血管形成和淋巴结转移的关系。方法 :用免疫组化 (S -P法 )染色技术对 95例NSCLC石腊组织标本的VEGF、b -FGF、NOS2 和NOS3及肿瘤内微血管密度 (IMVD)进行检测和分析。结果 :VEGF、b FGF表达与TNM分期、IMVD及淋巴结转移有关 (P<0 .0 5) ,两者共表达与IMVD有关 (P <0 .0 1 )。NOS3与组织学分型、IMVD和淋巴结转移有关 (P <0 .0 5) ;NOS2与IMVD有关 (P <0 .0 5)。相关分析显示促血管形成因子 (VEGF、b FGF)与一氧化氮合酶 (NOS2 、NOS3)的表达呈正相关 (r=0 .30 1 8,P <0 .0 5)。结论 :VEGF和b FGF在促进血管形成和促进肿瘤转移方面可能起到协同作用 ,并且有NO的参与 ;VEGF、b FGF、NOS2

醛固酮降低新生大鼠心肌成纤维细胞iNOS表达和NO含量

目的为探讨醛固酮诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖及其对诱导型一氧化氮合酶 一氧化氮(iNOS NO)系统活性的影响。方法用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠CFs,采用MTT比色法、硝酸还原酶法、分光光度法和半定量RT PCR技术,观察不同浓度醛固酮对CFs的增殖、NO含量、iNOS活性和iNOSmRNA表达的影响。结果醛固酮(10 -11～10 -7mol/L)能剂量依赖性促进CFs的增殖,降低CFs的NO含量、iNOS活性及iNOSmRNA的表达(均P <0 .0 5 ) ,且螺内酯能逆转醛固酮的上述作用。醛固酮干预下CFs增殖数目与NO含量和iNOS活性呈显著负相关(r分别为- 0 . 94 2、- 0 . 978,均P <0 . 0 1)。结论醛固酮能剂量依赖性降低CFs的iNOS -NO系统活性,促进CFs增殖;螺内酯能逆转此作用。

电针“足三里”对酸化乙醇致胃黏膜损伤大鼠的胃组织总NOS、iNOS影响的时效关系研究

目的 :通过电针“足三里”对酸化乙醇致大鼠胃黏膜损伤模型胃黏膜影响的实验 ,探讨针刺的时效关系。方法 :将动物随机分组、造模 ,造模成功后针刺组进行电针。在电针后 7个不同时刻各组进行取材 ,检测胃组织总NOS、iNOS ,将各针刺组与其对应模型组的实验结果进行两两比较。结果 :针刺组与对应时间模型组动物指标均值有一定变化趋势 ,其中针刺 0组比其对应模型 0组总NOS、iNOS活性相对增高。结论 :本实验各针刺组治疗 1次后 ,不同的时段对损伤的胃组织总NOS、iNOS活性的影响不同 ,针刺后即刻可在一定程度上提高胃组织总NOS、iNOS活性 ,因而可能对胃黏膜起一定的保护作用。

高糖对人脐静脉内皮细胞凋亡及bcl-x、bax和eNOS表达的影响

目的:探讨高糖对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响,及其与bcl-x、bax和eNOS表达的相关性。方法:将培养成功的HUVEC以不同浓度的葡萄糖孵育72h,提取细胞总RNA。采用半定量逆转录聚合酶链反应(SQ-RT-PCR)法检测内皮细胞bcl-x、bax以及eNOS表达。用吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法进行内皮细胞凋亡定性。结果:高浓度葡萄糖(33.3mmol)可诱导HUVEC凋亡增加(P<0.01),eNOS及bcl-x表达减弱。HUVEC凋亡与eNOS表达呈负相关。结论:糖尿病状态下高血糖诱导内皮细胞凋亡,可能与bcl-x及eNOS表达减弱有关。

酒精对大鼠胚胎发育及脑nNOS表达的影响

采用整体动物模型观察器官形成期酒精暴露对宫内胚胎发育影响 ,结合酶组织化学和免疫组织化学技术 ,探讨酒精对脑组织中海马区NOS(nirticoxidesynthase活性和nNOS(neuronalnitricoxidesynthase)表达影响。结果显示 1 0g/kg/d组即可出现FAS形态特征 ;酒精能导致脑海马区NOS活性和nNOS表达增强 ,提示NO产量增高。结果说明酒精具有发育毒性 。

化瘀通络方对局灶性脑缺血大鼠再灌注(MCAO)后脑组织氧自由基和NOS表达的影响

目的:观察化瘀通络方治疗大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤对脑组织自由基及一氧化氮合成酶(NOS)和iNOS变化的影响。方法:制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,给予化瘀通络方治疗后观察丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及一氧化氮合成酶(NOS)和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的变化。结果:化瘀通络方可显著降低MDA含量以及iNOS和NOS活性,SOD含量升高。结论:在脑缺血再灌注损伤后,化瘀通络方能抑制脑缺血再灌注后脂质过氧化反应,促进自由基清除,对抗自由基损伤,提高脑组织自身抗氧化能力,降低NOS和iNOS介导脑缺血-再灌注时的神经损伤,保护脑细胞。

2型糖尿病并血管病变患者血浆GSH-Px、SOD、NO、NOS含量的变化

目的:探讨2型糖尿病并血管病变患者血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量变传及临床意义。方法:用化学法测定42例2型糖尿病并血管病变患者血浆GSH-Px、SOD、NO、NOS含量变化,并与50例2型糖尿病不伴血管性病变组和46例健康对照组比较。结果:2型糖尿病并发血管性疾病组血浆GSH-Px、SOD、NO、NOS活性比不伴血管性病变组显著降低(P<0.01),且两组均显著性低于正常对照组(P<0.01)。结论:2型糖尿病患者存在着氧化与抗氧化之间以及内皮细胞分泌NO功能失调,这种失调在2型糖尿病血管并发症发生和发展过程中起重要作用。

葡萄糖酸锌、MnCl_2对SiO_2致肺泡巨噬细胞NO、NOS水平变化的影响

[目的]观察葡萄糖酸锌(ZnG)、氯化锰(MnCl2 )及其联合作用对二氧化硅(SiO2 )致肺泡巨噬细胞(AM)一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)水平变化的影响,寻找两者的最佳剂量组合。[方法]采用大鼠肺灌洗法纯化获得1×10 6/mlAM后按设计分为:①生理盐水对照组;②SiO2 组:含SiO2 2 0 0 μg/ml;③SiO2 +ZnG组:内含SiO2 2 0 0 μg/ml外,ZnG分别为1.0、1.5、2 .2 5 μg/ml;④SiO2 +MnCl2 组:内含SiO2 2 0 0 μg/ml外,MnCl2 分别为0 .2 5、0 .5、1.0 μg/ml;⑤ZnG、MnCl2 联合作用组:每组内含SiO2 2 0 0 μg/ml外,ZnG和MnCl2 各按上述3种剂量,采用两因素三水平正交设计,共设9个剂量组。3 7℃,5 %CO2 培养箱培养18h后,检测细胞内NO含量、NOS活性。[结果]与SiO2 组比,ZnG、MnCl2 可以显著降低肺泡巨噬细胞NO水平及NOS的活性(P <0 .0 1) ;ZnG和MnCl2 的交互作用具有统计学意义,1.5 μg/ml的ZnG与0 .2 5 μg/ml的MnCl2 联合作用效果最好,NO、NOS水平分别降为(1.44 0±0 .0 70 ) μmol/L、(0 .761±0 .10 1)U/ml。[结论]Zn、Mn及两者联合作用在体外可有效降低SiO2 粉尘致AM的NO、NOS水平,为Zn、Mn应用于矽肺的防治提供了实验依据。

内脏伤害性刺激后Fos在大鼠脑内NOS阳性神经元内的表达

目的 :观察一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元在内脏伤害性信息传递通路上的分布。方法 :给予大鼠内脏伤害性刺激后 ,采用Fos免疫组织化学 (ABC法 )和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶 (NADPH d)组织化学双重染色的方法 ,观察脑内NOS和Fos阳性神经元的分布。结果 :脑内Fos/NOS双标阳性神经元主要分布在孤束核 ,中缝背核 ,丘脑室旁核 ,下丘脑室旁核、室周核、背内侧核 ,中脑导水管周围灰质腹外侧部、背外侧部 ,臂旁内侧核 ,内侧缰核 ,杏仁复合体内侧部等部位。结论

加味桃核承气汤对Aβ损伤大鼠脑组织NOS和iNOS表达的影响

目的观察加味桃核承气汤对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤大鼠脑组织一氧化氮合酶(NOS和iNOS)表达的影响,并探讨其机制。方法 SD大鼠36只随机分为4组(每组9只),空白对照组(利用立体定位仪将PBS注射到大鼠双侧海马)、痴呆组、中药组和西药组(后三组注射Aβ1-42全长肽)。造模7 d后,中药组以灌胃法(ig)给予加味桃核承气汤20 ml(20 mg·kg-1)治疗,西药组ig给予尼莫地平20 ml(15 mg·kg-1)治疗,同时空白对照组和痴呆组给予同样体积的生理盐水,1次/d,连续21 d。制作大鼠脑组织冰冻切片,利用NADPH-d酶组织化学染色法检测各组海马组织NOS阳性细胞数量及分布情况,免疫组织化学方法检测大脑皮质组织iNOS阳性细胞表达情况;并应用Westen blotting方法检测大鼠大脑皮质组织中核因子κB(NF-κB)蛋白的表达情况。结果与空白对照组相比,痴呆组大鼠海马组织中NOS阳性细胞分布不规律、数量明显减少,大脑皮质区iNOS阳性表达细胞增多,且NF-κB蛋白表达增高。而应用加味桃核承气汤治疗后,海马组织中NOS阳性细胞数量明显增加,大脑皮质区iNOS阳性表达细胞降低,NF-κB蛋白表达降低,与西药尼莫地平组相似。结论加味桃核承气汤可以增加Aβ损伤大鼠脑海马组织NOS阳性细胞数量,并可能通过抑制NF-κB途径,降低大脑皮质区iNOS表达。

染铅早期大鼠海马各区NOS和nNOS阳性神经元的变化

为了解海马各区NOS和nNOS阳性神经元在铅影响学习记忆神经毒机理中的作用 ,采用NADPH 黄递酶组织化学和免疫组化ABC法 ,观察了大鼠腹腔注射 130mg kg醋酸铅溶液染毒 3、6、12h和 2 4h后海马CA1 和CA3 区NOS和nNOS的阳性神经元数目的变化。结果显示 ,与对照组相比 ,大鼠染铅 6h时 ,海马CA1和CA3 区nNOS阳性神经元数目明显增加 (P <0 0 5 ) ;染铅 12h时 ,海马CA1 和CA3 区NOS和nNOS的阳性神经元数目均明显减少 (P <0 0 1) ;而染铅 2 4h时 ,只有海马CA1 区NOS和nNOS阳性神经元数目仍明显减少(P <0 0 5 ) ;而CA3 区未见明显变化。