维生素E抑制子痫前期脐血清诱导脐静脉内皮细胞中NOSTRIN表达上调的体外研究

目的：探讨子痫前期患者脐血清诱导脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）中人内皮型一氧化氮合酶运输介导物（endothelial nitric oxide synthase traffic inducer，NOSTRIN）的表达及维生素E对其表达的调节作用。方法：采用消化培养法培养正常晚孕妇女的HUVEC，传代后待细胞长满至70％～80％后，加或不加维生素E作用30min后分别加入正常妊娠（正常组）及子痫前期（子痫前期组）脐静脉血清，培养48h后，MTI测定细胞活力，RT-PCR测定NOSTRINmRNA的表达，分光光度法测定细胞上清中eNOS的活性。结果：子痫前期患者脐静脉血清培养的HUVEC，其细胞的活力明显低于正常组（P〈0．05），细胞中NOSTRINmRNA的表达量明显高于正常妊娠组（P〈0．01），细胞上清中eNOS的活性明显低于正常组（P〈0．01）；加维生素E预处理后，子痈前期组细胞的活力明显升高（P〈0．05），其细胞中NOSTRIN的表达水平明显下降（P〈0．01），eNOS活性明显升高（P〈0．01）。结论：子痫前期患者脐静脉血清可使HUVEC细胞活力降低、NOSTRIN表达增加以及eNOS活性降低，维生素E可抑制子痫前期患者脐静脉血清诱导的NOSTRIN表达的增加以及eNOS活性降低。

妊高征患者胎盘组织中NOSTRIN表达的研究

目的:观察内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial n itric oxide synthase traffic inducer,NOSTR IN)在妊高征(pregnancy induced hypertension syndrom e,PIH)患者胎盘组织中的表达,探讨其在血管病变中的作用。方法:HE染色观察胎盘绒毛血管病变;硝酸还原酶法测定胎盘组织中的NO代谢产物亚硝酸基/亚硝基(NO2ˉ/NO3ˉ);分光光度法测定胎盘组织中eNOS的活性;W estern b lot检测胎盘血管组织中NOSTR IN蛋白质的表达。结果:HE染色可见PIH组胎盘细小血管壁增厚,管壁纤维素样坏死发生率显著高于对照组(P<0.01);PIH组孕妇胎盘组织中的NO2ˉ/NO3ˉ为(27.53±7.48)μmol/mg,与对照组(54.27±9.53)μmol/mg比较显著降低(P<0.01);PH I组患者胎盘组织eNOS活性(12.826±3.61)U/mg与对照组(21.720±3.83)U/mg比较显著降低(P<0.01);W estern b lot显示,两组胎盘组织中均有58kDa的NOSTR IN蛋白质表达,但PIH组表达量明显增高(P<0.01)。PIH组胎盘组织中NOSTR IN表达水平与eNOS活性呈负相关(r=-0.58,P<0.01)。结论:NOS-TR IN表达增加参与了妊高征患者胎盘绒毛血管的病变过程。

内皮型一氧化氮合酶运输诱导物NOSTRIN基因的克隆与表达

目的 构成内皮型一氧化氮合酶运输介导物 (endothelialnitricoxidesynthasetrafficinducer,NOSTRIN)基因的原核表达重组体 ,并进行初步表达。方法 从人胎盘组织中提取总RNA ,经反转录 -聚合酶链式反应 (RT -PCR)扩增出NOSTRIN基因 ;将NOSTRIN基因克隆入 pGEM -T载体中 ,经DNA测序确认后 ,构建原核表达重组体 pRSET -NOS ,在工程菌BL2 1(DE3)中进行IPTG诱导表达。结果 所获得的NOSTRIN基因测序正确 ,并表达重组蛋白 ,经SDS -PAGE分析 ,相对分子量为 5 8KD。结论 构建的原核表达重组体 pRSET -NOS能高效表达重组NOSTRIN蛋白。

川芎嗪抑制子痫前期脐血清诱导脐静脉内皮细胞中NOSTRIN表达上调的体外研究

目的:探讨子痫前期患者脐血清诱导脐静脉内皮细胞(HUVEC)中人内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)的表达及川芎嗪对其表达的调节作用。方法:采用消化培养法培养正常晚孕妇女的HUVEC,传代后待细胞长满至70%～80%后,加或不加川芎嗪作用30min后分别加入正常妊娠(正常组)及子痫前期(子痫前期组)脐静脉血清,培养48h后,MTT测定细胞活力,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定NOSTRIN的表达。结果:子痫前期患者脐静脉血清培养的HUVEC,其细胞的活力(0.1318±0.031)明显低于正常组(0.1929±0.055),P<0.05,细胞中NOSTRIN mRNA的相对表达量(0.493±0.057)明显高于正常组(0.202±0.031),P<0.01,加川芎嗪预处理后,子痫前期组细胞的活力明显升高(0.1864±0.041),其细胞中NOSTRIN mRNA的相对表达量(0.273±0.048)明显下降(P<0.01)。结论:子痫前期患者脐静脉血清可诱导NOSTRIN表达增加,应用川芎嗪预处理后,可抑制NOSTRIN表达的增加,川芎嗪对子痫前期的防治有一定作用。

内皮型一氧化氮合酶运输介导物在子痫前期患者脐血管中的表达

目的研究内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial n itric oxide synthase traffic inducer,NOSTR IN)在子痫前期(pre-ec lampsia,PE)患者脐血管中的表达,探讨其在子痫前期发病中的作用。方法免疫组织化学法检测脐血管中NOSTR IN的表达,并通过高清晰度彩色病理图文分析系统对其定量分析;RT-PCR检测子痫前期患者脐血管组织中NOS-TR IN mRNA的表达。结果免疫组织化学显示正常妊娠和子痫前期患者脐血管中都有NOSTR IN的表达,但子痫前期患者脐血管内皮细胞胞浆染色为深棕色,而正常妊娠者脐血管内皮细胞胞浆染色为浅棕色;RT-PCR显示子痫前期患者脐血管组织中NOSTR IN mRNA的表达水平显著高于正常妊娠(P<0.01)。结论子痫前期患者脐血管组织中NOSTR IN表达增加,这可能是子痫前期发病机制的重要因素之一。

内皮型一氧化氮合酶运输介导物在子痫前期患者胎盘组织中的定位及定量研究

目的探讨内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial n itric oxide synthase traffic inducer,NOSTR IN)在子痫前期(pre-ec lampsia,PE)患者胎盘血管内皮细胞中表达的变化及其在子痫前期发病过程中的作用。方法HE染色后镜下观察胎盘组织及血管的病理变化,免疫组织化学方法及W estern b lot检测子痫前期患者胎盘组织中NOSTR IN的表达。结果HE染色显示子痫前期患者胎盘绒毛血管变细,数目减少,血管合体膜增厚,纤维素样坏死明显多于正常妊娠;免疫组织化学显示正常妊娠和子痫前期患者胎盘血管内皮细胞中都有NOSTR IN的表达,但子痫前期患者胎盘血管内皮细胞胞浆染色较正常妊娠明显增强;W estern b lot显示子痫前期患者胎盘组织中NOSTR IN的表达显著高于正常妊娠(P<0.01)。结论胎盘组织中NOSTR IN表达增加可能是子痫前期发病机制的重要环节之一。