NoV GⅡ.2亚型RT-RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的建立

近年来,一种新的诺如病毒GⅡ.2亚型(norovirus GⅡ.2,NoV GⅡ.2)通过牡蛎等生食海鲜感染人群,引发急性胃肠炎,并在全球广泛传播。为实现NoV感染的现场诊断和快速疫情响应,亟需建立快速便捷的NoV GⅡ.2亚型核酸检测方法。本研究通过设计引物、crRNA,经优化反应条件后,建立了NoV GⅡ.2亚型RTRPA-CRISPR/Cas12a检测方法。结果显示:利用引物NoV-GⅡ.2-F1B和NoV-GⅡ.2-R1对NoV GⅡ.2标准RNA进行RT-RPA扩增,结合crRNA1介导的CRISPR/Cas12a报告体系,能在40 min内完成NoV GⅡ.2核酸检测;该方法检测灵敏度为10 copies/μL,且与轮状病毒、腺病毒、星形病毒、人副肠孤病毒、博卡病毒和札如病毒无交叉反应;应用该方法和qRT-PCR法,分别对30份临床模拟样本进行检测,发现总符合率达96.67%。结果表明,本研究建立的NoV GⅡ.2亚型RT-RPA-CRISPR/Cas12a检测方法无需依赖昂贵设备,具有灵敏度高、特异性强、操作便捷快速等特点,为NoV GⅡ.2感染的现场检测和防控提供了新方法。

臭常山内生真菌Diaporthe orixae sp.nov.化学成分研究

目的:研究臭常山内生真菌Diaporthe orixae sp.nov.的化学成分。方法:综合运用硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶、半制备高效液相等色谱技术对臭常山内生真菌Diaporthe orixae sp.nov.提取物的乙酸乙酯部分进行分离纯化,结合理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果:从臭常山内生真菌Diaporthe orixae sp.nov.中分离得到11个化合物,分别鉴定为:mannitol(1)、邻苯二甲酸二甲酯(2)、(R)-6-hydroxymellein(3)、ethyl acetylorsellinate(4)、8-甲氧基补骨脂素(5)、norpestaphthalide A(6)、norpestaphthalide B(7)、tyrosol(8)、de-O-methyldiaporthin(9)、(R,R)-5,7-dihydroxy-3-(1-hydroxyethyl)phthalide(10)、腺苷(11)。结论:以上化合物均为首次从臭常山内生真菌中分离得到,其中,化合物1~7、9~11为首次从该真菌中分离得到。

Weiwoboidae fam.nov.of 'Higher' Fulgoroidea (Hemiptera:Fulgoromorpha) from the Eocene Deposits of Yunnan,China

A new family of so-called ‘higher’ planthoppers, Weiwoboidae fam. nov., from the Lower Eocene of Yunnan is described. A new monotypic genus, Weiwoboa gen. nov., with Weiwoboa meridiana sp. nov. is also described and illustrated. The characters of tegmen venation of the new family, its evolution, and supposed relationships are briefly discussed.

Cyr61、CTGF、NOV、WISP-1基因在肾癌中的表达

目的探讨肾癌组织CCN蛋白中Cyr61、CTGF、NOV和WISP-1基因的蛋白表达水平及意义。方法采用Western blot半定量方法检测31例肾癌组织和18例癌旁正常肾组织中Cyr61、CTGF、NOV、WISP-1基因的蛋白表达。结果Cyr61、CTGF、NOV、WISP-1蛋白在肾癌组织中的表达水平均低于癌旁正常组织(P<0.05),其中乳头状肾癌的NOV和WISP-1表达水平高于透明细胞癌(P<0.05),G1级肿瘤NOV表达水平高于G2,3肿瘤(P<0.05)。结论Cyr61、CTGF、NOV和WISP-1在肾癌中低表达,CCN基因在肾癌的发生和发展中可能起抑制作用。

大鼠学习记忆能力与nov基因表达的关系

采用主动回避法进行大鼠学习记忆训练 ,选出学习成绩好和差的大鼠 ,用原位杂交、免疫细胞化学结合图像分析方法观察nov基因表达的差异。结果显示 ,novmRNA和NOV蛋白阳性神经元主要分布于海马、扣带皮质和联合皮质锥体层、基底神经节和下丘脑等脑区。好成绩组NOV蛋白免疫反应最强 ,阳性细胞最多 ,差成绩组nov基因的表达比假性条件反射组的表达稍强。novmRNA的表达在各组之间无明显的差异。以上结果提示 ,nov基因可能参与学习记忆的调控过程 ,这种调控发生在NOV蛋白翻译水平。

NOV蛋白免疫反应阳性神经元在鲢、鸡和几种哺乳动物脑的比较发育

目的：研究鲢、鸡、牛、犬和大鼠脑肾母细胞瘤过度表达基因（ｎｏｖ）蛋白免疫反应阳性神经元的比较发育。方法：免疫组织化学技术。结果：低等脊椎动物鲢脑仅有少量ＮＯＶ蛋白免疫反应阳性神经元，分布于延髓的一些核团、丘脑前核、丘脑后核、下丘脑背侧核、下丘脑外侧核。鸡脑ＮＯＶ蛋白免疫反应阳性神经元除广泛分布于脑干外，小脑、间脑和大脑纹状体的多数脑区阳性神经元亦较多。哺乳动物牛、犬和大鼠脑ＮＯＶ蛋白免疫反应阳性神经元广泛分布，脑干、小脑、间脑和大脑都检测到强烈阳性信号。结论：ｎｏｖ基因在从低等脊椎动物到高等脊椎动物的进化过程中非常保守，提示它在脑神经元生长。

Actinoplanes sichuanensis sp.nov I03A-00723发酵产物的分离纯化、结构鉴定与生物活性研究

目的分离、鉴别游动放线菌(Actinoplanes sichuanensis sp.nov)I03A-00723菌株产生的活性组分。方法对I03A-00723菌株进行发酵,采用硅胶柱层析和HPLC等方法进行分离纯化,对获得的组分进行理化性质、UV、MS、1H-NMR、13C-NMR等数据分析及活性测定。结果通过分离纯化,从I03A-00723发酵产物中分离到8个单一组分,其中,组分95-2,135已分别被鉴定为大豆苷元和染料木素,其它几个具有抗VRE和PDF酶活性的小组分的结构有待鉴定。结论在Actinoplanes sichuanensis sp.nov I03A-00723的发酵产物中发现抗VRE和抑制PDF酶的活性物质;首次从游动放线菌中分离得到大豆苷元和染料木素。

NOV对大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨NOV基因和蛋白对大鼠神经干细胞 (NSCs)增殖和分化的影响。方法 NOV基因重组质粒转染COS 7细胞和NSCs ,收集COS 7细胞和NOV基因修饰COS 7细胞的条件培养液 (简称COS CM和NOV CM ) ,作用于培养的NSCs ,3H TdR掺入检测NSCs的增殖 ,免疫细胞化学和流式细胞仪检测NSCs的分化。结果 ①NOV CM能明显促进NSCs对3H TdR的摄入 ,说明NOV CM能明显促进细胞的增殖 ,另外NOV CM的促细胞增殖作用具有一定的量效关系 ;②免疫细胞化学和流式细胞仪结果显示 ,NOV CM促进NSCs向神经元方向分化 ;③NOV基因修饰NSCs分化时 ,神经元的比例增高。

NOV基因修饰神经干细胞移植对损伤大鼠脊髓功能恢复的影响

目的 观察NOV基因修饰神经干细胞 (NSCs)移植对损伤大鼠脊髓功能的治疗作用。方法 40只Wistar大鼠随机分为对照组 (A组 )、损伤组 (B组 )、NSCs组 (C组 )和NOV NSCs组 (D组 ) ,每组 10只 ;将NSCs悬液注入C组切断脊髓处 ,D组注入等量的NOV基因修饰NSCs悬液 ,B组注射等量的生理盐水。术后 2个月 ,采用BBB评分和皮层体感诱发电位 (CSEP)观察大鼠脊髓功能的恢复程度。结果 ①术后 2月BBB评分B、C、D组大鼠有所恢复 ,但都未达到正常水平 ;C组和D组的大鼠恢复较好 ,评分较高 ,与B组有显著性差异 ;其中D组比C组恢复要好。②脊髓损伤后 ,各组的CSEP波均消失 ,术后 2月除B组外C组和D组的波形均有不同程度的恢复 ,但潜伏期延长 ,其中C组比D组更长 ,两者之间有显著性差异。

昆明地区早寒武世三叶形虫新属——PanlongiaLiu et Luo gen.nov.

简述早寒武世关山动物群的研究现状及重要意义。重点描述该动物群中一三叶形虫新属PanlongiaLiuetLuogen.nov.及其两个新种:即个体小、拥有等大的头甲和尾甲、边缘没有明显突出刺状物的PanlongiatetranodusaLiuetLuogen.etsp.nov.及头甲后侧和尾缘具刺的PanlongiaspinosaLiuetLuogen.etsp.nov.。三叶形虫在关山动物群中的首次发现为寒武纪生命大爆发以及古地理、古板块恢复的研究提供了有益的证据。

Cyr61、CTGF和Nov基因在孤立性大肝癌中的表达及其意义

目的探讨CCN家族成员的Cyr61、CTGF和Nov基因在孤立性大肝癌、结节性肝癌、小肝癌中的表达差异及其临床意义。方法比较孤立性大肝癌、结节性肝癌、小肝癌的临床病理特征,采用半定量的RT-PCR方法分析各组肝癌组织中Cyr61、CTGF和Nov基因的表达,并分析其表达临床病理特征的关系。结果83.3%(10/12)的结节性肝癌有静脉浸润,明显高于孤立性大肝癌和小肝癌(P<0.05),结节性肝癌的分化程序和肝硬化程度也明显较孤立性大肝癌和小肝癌差(P<0.05),孤立性大肝癌和小肝癌间的病理指标比较无显著性差异(P>0.05)。孤立性大肝癌中Cyr61和CTGF基因表达量均较结节性肝癌低,差异有显著性意义(P<0.01)。结论孤立性大肝癌的临床病理特征较好,且Cyr61、CTGF基因在孤立性大肝癌中的表达明显低于结节性肝癌,提示孤立性大肝癌有相对较好的肿瘤生物学行为。

南海珊瑚内生细菌Pelomonas puraquae sp.nov(B-2)中环二肽类次生代谢产物研究

为了研究珊瑚内生细菌Pelomonas puraquae sp.nov(B-2)次生代谢产物,采用现代分离纯化方法对其发酵液和菌丝体的次生代谢产物进行分离、纯化,得到8个单体化合物。通过现代波谱分析(1D NMR和MS等)和物理常数对照等方法对其进行结构鉴定,均为环二肽类物质,依次为:环(羟脯-苯丙)二肽(1)、环(脯-酪)二肽(2)、环(苯丙-甘)二肽(3)、环(苯丙-丙)二肽(4)、环(丙-酪)二肽(5)、环(亮-甘)二肽(6)、环(甘-缬)二肽(7)、环(丙-缬)二肽(8)。所有化合物均首次从该细菌中分离得到。

nov基因的表达与脑的种系发育分化平行相关

用地高辛标记的cRNA探针原位杂交组织化学方法研究了鲢、鸡、牛、犬和猫脑肾母细胞瘤过度表达基因阳性神经元的比较发育。结果显示 ,低等脊椎动物鲢脑仅有少量novmRNA阳性神经元 ,分布于延髓的迷走神经背核、三叉神经背核、丘脑前核、丘脑后核、下丘脑背侧核、下丘脑外侧核。鸡脑阳性神经元除广泛分布于脑干外 ,小脑、丘脑的多数核团、下丘脑的背侧核、腹侧核和后核以及大脑纹状体等多数脑区也有一定分布。哺乳动物牛、犬和猫脑中novmRNA阳性神经元广泛分布 ,在脑干、小脑、间脑和大脑都检测到强烈阳性信号。以上结果表明 ,在从低等脊椎动物到高等脊椎动物的进化过程中nov基因的表达也从低级中枢向高级中枢扩展 ,提示该基因的表达与脑的种系发育、脑功能的分化平行相关。

反义nov基因对培养神经元神经递质分泌的影响

目的 研究 nov基因在神经元功能分化和神经递质分泌中的作用。 方法 利用反义核酸技术构建成反义 nov基因真核表达载体 p BK- nov。采用脂质体转染技术 ,将反义表达载体导入培养的大鼠大脑皮质神经元和纹状体神经元 ,经 G418筛选出被转染的神经元继续培养。RT- PCR检测转染后 nov m RNA的表达量。采用高效氨基酸分析仪和高效液相色谱仪 ,检测抑制 nov基因表达后氨基酸类递质和多巴胺类递质的变化。 结果 谷氨酸和肾上腺素的分泌量明显下降 ,γ-氨基丁酸上升 ,而对多巴胺的分泌没有显著的影响。 结论 以上结果提示 ,nov基因在中枢神经系统神经递质的生成释放和代谢中起作用 ,可能籍此调节神经系统的功能。

NOV及BNIP3基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达及其意义

本研究探讨NOV及BNIP3基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达及意义。给小鼠经尾静脉接种小鼠粒单核细胞白血病细胞株WEHI-3,随机将小鼠分成化疗组和对照组,然后在接种后不同时间点取2组小鼠骨髓组织,采用qRT-PCR方法动态检测NOV、BNIP3 mRNA的表达情况,分析其表达与白血病发生及发展的关系。结果表明:对照组小鼠NOV、BNIP3 mRNA表达水平在接种后2周开始逐渐增高,死亡时达到高峰,分别由接种前的1.85E-05与3.44E-03,升高至濒死时的3.57E-02与3.48E-02(p<0.05)。化疗组小鼠2种基因的表达率则在化疗后迅速降至2.51E-05与1.58E-03(p<0.05),与接种前水平相近(p>0.05),复发时再次升高,死亡时2基因表达率与对照组无明显差异(p>0.05)。结论:NOV及BNIP3基因在白血病小鼠中表达明显增高,其表达异常可能参与了小鼠白血病的发生与发展;2种基因表达率与疗效密切相关,因此NOV和BNIP3表达水平在疗效评估及MRD检测中具有重要价值。

NOV对人神经干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨NOV蛋白对人神经干细胞 (HNSCs)增殖和分化的影响。 方法 NOV基因重组质粒转染COS 7细胞 ,收集COS 7细胞和NOV基因修饰COS 7细胞的条件培养液 (COS CM和NOV CM ) ,作用于培养的HNSCs,3H TdR掺入液闪检测HNSCs的增殖 ,免疫细胞化学和流式细胞仪检测HNSCs的分化。 结果 (1)NOV CM能明显促进HNSCs对3H TdR的摄入 ,说明NOV CM能明显促进HNSCs的增殖 ,另外NOV CM的促细胞增殖作用具有一定的量效关系 ;(2 )免疫细胞化学和流式细胞仪结果显示 ,NOV CM促进HNSCs向神经元方向分化。结论 NOV蛋白可能具有促进HNSCs增殖和分化的作用。

广西靖西寒武纪三叶虫Tamdaspis jingxiensis sp.nov.的个体发育及畸形

描述采自广西靖西果乐剖面三都组一三叶虫新种Tamdaspis jingxiensis sp.nov.,根据该种三叶虫完整标本的背壳特征,认为Liushuicephalus Luo,1983是Tamdaspis Lisogor,1977的晚出异名。同时描述T.jingxiensis sp.nov.的个体发育过程和两块畸形标本,并认为该畸形是因被捕食者咬伤而形成的。

不同金属离子对产氢发酵细菌Biohydrogenbacterium R3 sp.nov.发酵产氢能力的影响

研究浓度为0．5mg／L的ZnSO4、CuSO4、CoCl2、CaCl2、Fe^0、FeSO4以及不同浓度梯度下CoCl2对BiohydrogenbacteriumR3sp．nov．产氢发酵效能的影响。研究发现，当反应器内分别添加0．50mg／L的ZnSO4、CuSO4、CoCl2、CaCl2、Fe^0、FeSO4时，BiohydrogenbacteriumR3sp．nov．的生长和产氢效能与对照组相比均有一定程度的提高。综合比较不同金属离子对BiohydrogenbacteriumR3sp．nov．的产氢及生长效能的促进作用，当反应器内添加0．50mg／L的FeS04时，BiohydrogenbacteriumR3sp．nov．的氢气产量达到最大值228mL／L，此时的细胞浓度为0．43g／L，而添加了CoCl：的反应器内BiohydrogenbacteriumR3sp．nov．的细胞浓度达到最大值0．87g／L，此时的氢气产量为191．5mL／L。CoCl：的浓度在0．05～0．50mg／L范围内时，当CoCl：浓度为0．05mg／L时，氢气产量达到最大值205mL／L，而当CoCl2浓度在0．30mg／L时，细胞浓度达到最大值1．03g／L，当CoCl：浓度在1．00～2．00mg／L范围内时，BiohydrogenbacteriumR3sp．nov．的氢气产量与细胞浓度均开始下降，产生了高浓度抑制现象。

lpa-miR-nov-66通过调控cAMP路径抑制α-MSH介导的羊驼黑色素生成

α-黑素细胞刺激素(α-MSH)和lpa-miR-nov-66在羊驼黑色素细胞产生黑色素过程中均起重要的调控作用,但二者之间的关系尚未报道.本研究在体外培养的羊驼黑色素细胞中通过转染lpamiR-nov-66和添加α-MSH处理,用实时定量PCR和Western印迹检测黑色素细胞内基因表达水平,ELISA法检测c AMP和cGMP的产量,RTCA实时无标记细胞功能分析黑色素细胞增殖以及紫外分光光度法检测黑色素产量,证实二者在调控羊驼黑色素细胞产生黑色素颗粒过程中的关系.结果显示,与单纯α-MSH处理相比,lpa-miR-nov-66转染结合α-MSH处理组中,小眼转录因子(MITF)和酪氨酸酶(TYR)在转录水平和翻译水平的表达均降低,而酪氨酸酶相关蛋白2(TYRP2)在转录和翻译水平的表达均升高;cGMP的产量升高,cAMP的产量下降;黑色素细胞增殖没有显著变化;黑色素细胞内黑色素产量下降.与单纯转染lpa-miR-nov-66相比,lpa-miR-nov-66转染结合α-MSH处理组中,MITF、TYR和TYRP2在转录水平和翻译水平的表达均升高;cGMP的产量下降,cAMP的产量升高;黑色素细胞增殖没有显著变化;黑色素细胞内黑色素产量升高.上述结果证明,lpa-miR-nov-66通过调控羊驼黑色素细胞中毛色形成的c AMP路径,抑制α-MSH对黑色素细胞产生黑色素的促进作用.