天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠血管重塑的抑制作用及对NOX2/ROS通路、内质网应激的影响

目的研究天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)血管重塑的抑制作用及机制。方法将大鼠随机分为正常对照组、模型组、厄贝沙坦组和天麻钩藤饮组。给药过程中每周测量大鼠尾动脉压;给药4周后,HE染色检测胸主动脉组织情况,测量与计算内膜-中层厚度(intima-media thickness,IMT)、内膜-中层厚度/管腔直径(lumen diameter,LD),同时扫描电镜检查组织形态变化;免疫组织化学测定NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulating protein 78,GRP78)蛋白的表达情况;ELISA测定血浆中活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量。结果(1)尾动脉压检测:与正常对照组比较,模型组大鼠收缩压均显著升高(P<0.05);与模型组比较,给药第1周起各治疗组大鼠收缩压均下降(P<0.05)。(2)胸主动脉组织形态学检测:扫描电镜可见模型组胸主动脉壁较正常对照组明显增厚;与模型组比较,各治疗组胸主动脉壁厚度均降低。HE染色观察可见正常对照组胸主动脉血管结构正常,未见动脉管壁增生;模型组胸主动脉壁明显增厚,单位面积细胞核数量增多;与模型组比较,各治疗组胸主动脉壁厚度、单位面积细胞核数量均减少。与正常对照组比较,模型组胸主动脉IMT、IMT/LD增加(P<0.05);与模型组比较,各治疗组胸主动脉IMT、IMT/LD下降(P<0.05)。(3)免疫组织化学检测胸主动脉中NOX2、CHOP、GRP78蛋白表达水平:与正常对照组比较,模型组血管壁NOX2、CHOP、GRP78蛋白表达水平显著上升(P<0.05);与模型组比较,各治疗组血管壁NOX2、CHOP、GRP78蛋白表达均下降(P<0.05)。(4)ELISA测定血浆中ROS含量:与正常对照组比较,模型组大鼠血浆中ROS含量显著上升(P<0.05);与模型组比较,各治疗组ROS含量显著下降(P<0.05)。结论天麻钩藤饮在降压的同时抑制血管重塑,其机制可能与抑制NOX2/ROS通路介导的内质网应激有关。

LHPP通过调控NOX2/SHP2通路活性抑制结直肠癌的增殖、侵袭和转移

目的探讨组氨酸磷酸酶(LHPP)通过氧化应激通路对结直肠癌增殖、侵袭和迁移的影响,并初步阐明其作用机制。方法使用Liposome3000进行细胞转染操作。将质粒OE-NC、OE-LHPP和寡核苷酸片段si-NC、si-LHPP分别转染进SW480细胞中,通过Western Blot检测LHPP、NOX2、p-SHP2的蛋白表达量;将质粒OE-NC、OE-LHPP组转染进SW480细胞中并同时使用NCA刺激,通过Western Blot检测NOX2、p-SHP2、p-PI3K、p-ERK1/2、MMP-9、Cyclin D1的蛋白表达量;将质粒OE-NC、OE-LHPP转染进SW480和SW620细胞中,并同时使用NAC刺激,通过划痕实验检测细胞的迁移距离,Transwell实验检测通过孔的细胞数量,克隆形成实验检测细胞的增殖能力。结果SW480细胞中OE-LHPP组LHPP和NOX2蛋白表达水平明显高于OE-NC组(P<0.05),但p-SHP2蛋白表达水平明显低于OE-NC组(P<0.01);SW480细胞中si-Si-LHPP组LHPP和NOX2蛋白表达水平明显低于OE-NC组(P<0.01),但p-SHP2蛋白表达水平明显高于si-NC组。与OE-NC组相比,SW480细胞中OE-LHPP的NOX2蛋白表达水平明显升高(P<0.01),但p-SHP2、p-PI3K、p-ERK1/2、MMP-9、Cyclin D1蛋白表达水平明显降低(P<0.01),SW480和SW680细胞迁移距离缩短、穿过孔的细胞数量减少和细胞克隆形成数量减少;加入NAC干预后,消除了SW480和SW680细胞中OE-NC组和OE-LHPP组在NOX2、p-SHP2、p-PI3K、p-ERK1/2、MMP-9、Cyclin D1的差异,也消除了细胞划痕、细胞侵袭和细胞增殖的差异。结论LHPP通过促进氧化应激抑制SHP2、PI3K和ERK通路活性进而抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移的影响进而缓解结直肠癌的进展。

基于LOX-1/NOX2信号通路探讨槲皮素抑制中性粒细胞胞外诱捕网形成机制

目的探讨溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)诱导中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成的分子机制及槲皮素的干预作用。方法使用LPC诱导大鼠原代中性粒细胞,构建NETs形成的体外模型并进行槲皮素干预,检测NETs形成情况及相关通路蛋白表达水平。结果100 mg·L^(-1) LPC可在体外诱导NETs形成,其与LOX-1/NOX2通路相关蛋白表达上调有关,槲皮素干预可有效降低LOX-1和NOX2蛋白表达水平并减少NETs形成。结论槲皮素通过调控LOX-1/NOX2信号通路抑制NETs形成,发挥对相关炎症性疾病的保护作用。

红景天苷通过抑制NOX2-ROS-MAPKs信号途径保护H2O2诱导的PC12细胞凋亡

目的探讨红景天苷保护H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的分子机制。方法 PC12细胞置于含10%马血清、5%胎牛血清的高糖DMEM完全培养基中常规培养。不同浓度的红景天苷预处理细胞2 h,然后H_2O_2作用细胞特定的时间,Westernblot检测细胞凋亡相关蛋白PARP,caspase 3的表达及胞内信号分子p38,ERK和JNK的磷酸化水平;DAPI染色检测细胞核的形态改变;ROS检测试剂盒检测胞内ROS的水平;膜质分离实验检测NOX2的两个重要亚基gp91^(phox)和p47^(phox)在胞膜和胞质中的含量;免疫共沉淀实验检测gp91^(phox)和p47^(phox)的结合。结果红景天苷浓度依赖性的抑制H_2O_2诱导PC12细胞凋亡;减弱H2O2诱导p38,JNK和ERK的磷酸化;减少H2O2诱发的ROS释放;抑制gp91^(phox)和p47^(phox)的结合,进而抑制NOX2的活性。结论红景天苷通过抑制NOX2-ROS-MAPKs信号通路保护H2O2诱导PC12细胞凋亡。

牛支原体NOX2的原核表达及黏附特性

旨在探究牛支原体(Mycoplasma bovis,Mb)NADH氧化酶NOX2的生物学功能,本研究参照GenBank中Mb湖北分离株(Mb Hubei-1 strain)nox2基因序列设计引物,应用PCR扩增获得Mb临洮分离株的nox2基因,在测序及序列优化的基础上,构建原核表达载体pET-nox2,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达,进而对表达产物rMbNOX2的酶促活性、免疫原性,NOX2在Mb内的分布,rMbNOX2抗血清的补体介导体外杀菌活性和对Mb黏附宿主细胞的抑制活性进行了分析。结果表明,Mb临洮株nox2基因全长1350 bp,与GenBank中已知序列的Mb nox2基因序列比较,除Mb JF4278株相似性为97.93%外,其余均为99.93%。SDS-PAGE结果显示,优化的nox2基因在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白rMbNOX2相对分子质量约为67 ku,且具有良好的酶促活性;ELISA与Western blot结果显示,rMbNOX2具有良好的免疫原性,且Mb NOX2在细胞浆中的分布多于细胞膜;补体介导的体外杀菌试验及黏附抑制试验证实,rMbNOX2抗血清具有明显的补体介导杀支原体活性,并可有效抑制Mb对宿主细胞的黏附。本研究为深入探讨Mb NOX2生物学功能奠定了基础。

豨莶草提取物对膝骨关节炎大鼠软骨组织损伤及NOX2/ROS/NF-κB通路的影响

目的观察豨莶草提取物对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨组织病理损伤的影响,并探讨其与NOX2/ROS/NF-κB通路的关系。方法将75只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和豨莶草低、中、高剂量组各15只。模型组和豨莶草不同剂量组向大鼠后肢双侧膝关节腔注射碘乙酸钠构建KOA模型;假手术组注射生理盐水。造模后,豨莶草低、中、高剂量组分别给予75、150、300 mg/kg豨莶草提取物经口灌服,假手术组和模型组给予生理盐水经口灌服。处死大鼠,取后肢双侧膝关节,用番红固绿法染色,采用Mankin评分评价关节软骨损伤情况;取后肢双侧膝关节软组织,采用硫代巴比妥酸法检测MDA含量,氮蓝四唑法检测SOD含量;RT-PCR法检测膝关节组织NOX2、NF-κB mRNA表达,Western blotting法检测膝关节组织NOX2、NF-κB蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组Mankin评分升高,MDA含量升高,SOD含量降低,NOX2、NF-κB mRNA及蛋白表达均升高(P均<0.05);与模型组相比,豨莶草低、中、高剂量组Mankin评分、MDA含量、NOX2和NF-κB mRNA及蛋白表达均降低,中、高剂量组SOD含量升高(P均<0.05);与低剂量组相比,中、高剂量组Mankin评分、MDA含量、NOX2 mRNA和蛋白、NF-κB蛋白表达量及高剂量组NF-κB mRNA降低,高剂量组SOD含量升高(P均<0.05);与中剂量组相比,高剂量组Mankin评分、MDA含量、NOX2 mRNA和蛋白、NF-κB蛋白表达量降低,SOD含量升高(P均<0.05)。结论豨莶草提取物能够减轻KOA大鼠关节软骨组织的病理性损伤,其机制可能与调节NOX2/ROS/NF-κB通路有关。

地塞米松诱导PC12细胞氧化应激损伤及对NOX2表达的影响

目的观察地塞米松(DEX)对大鼠嗜铬瘤细胞(PC12)细胞氧化应激损伤及对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)表达的影响。方法体外培养的PC12细胞随机分为正常对照组、H2O2(100μmol/L)组、DEX(1、5、10μmol/L)组。四甲基偶氮唑盐(MTT)法测细胞存活率,双氢溴化乙啶(DHE)荧光染色法测定细胞内活性氧(ROS)水平。RT-PCR法检测NOX2、小G蛋白(Rac1)mRNA表达。Western blot法检测NOX2、p47phox的表达。结果与正常对照组比较,DEX作用于PC12细胞24 h后,DEX(5、10μmol/L)组细胞活力下降、ROS水平显著增高。进一步研究显示DEX(5、10μmol/L)组可以上调NOX2和Rac1 mRNA的表达,可以增加NOX2、p47phox的表达。结论 DEX可以增加PC12细胞ROS的生成,诱导PC12细胞氧化应激损伤,其机制可能与增加NOX2表达有关。

硫氧还蛋白对血管内皮细胞Nox2通路调控的研究

目的探讨动脉粥样硬化发生发展中硫氧还蛋白(Trx)对NADPH氧化酶Nox2亚型的调控作用及机制。方法应用腺病毒感染的方法,在原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立高表达硫氧还蛋白(Ad-Trx)及其对照(Ad-GFP)的细胞模型,将致动脉粥样硬化重要危险因子氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)作为刺激剂,应用免疫印迹法检测Nox2、Rac1的表达及Akt的磷酸化;用免疫印记及免疫荧光的方法检验Trx在内皮细胞中的蛋白表达水平;DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)水平;提取细胞膜组织,用酶学方法测定内皮细胞NADPH氧化酶的活性。结果免疫印记结果显示腺病毒感染在内皮细胞中成功上调了Trx的表达,与对照组相比上调了3.3倍(P<0.01)。与对照组相比,过表达Trx明显下调了ox-LDL刺激下内皮细胞Nox2、Rac1及p-Akt的表达(分别下调了31.5%、23.8%和20.8%,均为P<0.05),抑制了ox-LDL诱导的ROS增加(25.3%,P=0.0247)及NADPH氧化酶活性增加(32.6%,P=0.004)。结论过表达Trx通过减少ox-LDL刺激下内皮细胞Nox2、Nox2结合蛋白Rac1的表达及Nox2下游信号分子Akt的磷酸化,抑制了内皮细胞Nox2通路的过度活化及氧化应激,减轻炎症损伤,保护内皮细胞功能。

NADPH氧化酶Nox2和Nox4在小鼠肠炎中的表达及意义

目的探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶家族的主要成员NADPH氧化酶2 (Nox2)和Nox4在小鼠肠炎模型结肠组织中的表达及意义。方法选用6～8周龄的129S/SV雄性小鼠建立结肠炎模型,将其随机分为对照组、1. 5%葡聚糖硫酸钠(DSS)组和3. 0%DSS组,对照组自由饮水,1. 5%DSS组和3. 0%DSS组分别给予含1. 5%DSS和3. 0%DSS饮用水自由饮用6 d。通过体质量变化、疾病活动指数(DAI)评分和组织病理学评分等方法评估肠道炎症程度。使用酶标仪间接测定小鼠血清中丙二醛(MDA)的含量,以评估实验小鼠的氧化应激程度。采用实时定量PCR技术检测结肠组织中促炎因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6 (IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及Nox2和Nox4 mRNA表达情况;采用免疫组织化学法检测结肠组织中Nox2和Nox4蛋白表达情况。结果对照组小鼠未见肠炎表现,1. 5%DSS组小鼠呈轻度肠炎表现,3. 0%DSS组小鼠呈重度肠炎表现。杯状细胞在1. 5%DSS组体积增大、数量减少,在3. 0%DSS组进一步减少,甚至消失(均P <0. 05)。MDA在1. 5%DSS组升高,在3. 0%DSS组进一步升高(均P <0. 05)。Nox2和Nox4 mRNA和蛋白的表达量在不同炎症程度时表达不同。两者mRNA和蛋白的表达量一致,炎症组均显著高于对照组,且均随炎症程度增加表达进一步增加(均P <0. 05)。Nox2蛋白主要表达于浸润的吞噬细胞和中性粒细胞等炎细胞中;Nox4蛋白表达于中性粒细胞和淋巴细胞等炎细胞中。结论 Nox2和Nox4在小鼠肠炎的发病过程中发挥重要作用。

电针对脑缺血再灌注小鼠脑组织NOX2/gp91phox表达的影响

目的:探讨电针对脑缺血再灌注(I/R)损伤后的神经保护机制,明确电针对脑损伤后氧化应激的抑制作用。方法:采用小鼠大脑中动脉闭塞模型制备脑局灶性缺血1 h再灌注3、24、48 h模型。每组又分为模型组、电针组、药物组、gp91phox基因敲除组(下文简称基因组),另设同时段假手术组。以神经功能缺损评分和局灶脑血流(rCBF)变化为造模成功和效应指标,并RT-PCR检测NOX2/gp91phox基因在小鼠脑组织的表达情况,光泽精增强发光法检测NOX活性。结果:①神经行为学评分:造模各组均有不同程度的缺损表现,再灌注即刻缺损情况较再灌注干预后严重,基因组灌注即刻评分明显低于模型组(P<0.05),与模型组比较,灌注后3、24、48 h基因组、药物组、电针组神经行为学评分均明显降低(P<0.05)。②rCBF:各造模组rCBF明显减少,灌注后3、24、48 h各组rCBF均有增加,药物、电针组比模型组升高明显(P<0.05)。③NOX活性:模型组各时相之间无明显差异,基因组NOX活性无明显表达(P<0.01),药物组、电针组比模型组的同时相均有明显下降(P<0.01),药物和电针组的组间比较无明显差异。④NOX2/gp91phox基因表达:模型组各时相之间无明显差异,基因组无蛋白表达,与各组比较均有显著差异(P<0.01),药物组、电针组比模型组的同时相均有明显下降(P<0.01),药物组和电针组的组间比较无明显差异。结论:通过与敲除gp91phox基因组的小鼠相比较,电针“百会”“大椎”穴位可以通过抑制NOX2/gp91phox表达,达到抑制I/R后小鼠的氧化应激损伤效果,发挥保护脑组织的作用。

siRNA靶向抑制Nox2在阿霉素致人皮肤成纤维细胞损伤中的作用及机制研究

目的:探讨siRNA靶向抑制Nox2在阿霉素致人皮肤成纤维细胞损伤中的作用及机制。方法:构建阿霉素致人皮肤成纤维细胞损伤模型,检测阿霉素处理的细胞中Nox2蛋白质的表达。根据实验设计分为正常组、单纯siRNA-Nox2转染组、阿霉素模型组及siRNA-Nox2转染+阿霉素处理组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)试剂盒检测细胞氧化应激水平。Western blotting法检测siRNA靶向抑制Nox2对阿霉素诱导的细胞凋亡的影响。结果:Western blotting结果表明,与正常组相比,阿霉素模型组细胞Nox2蛋白质水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。MMT法检测结果提示,相较于阿霉素模型组,siRNA-Nox2转染可提高细胞增殖能力和存活率,差异有统计学意义(P<0.05)。与阿霉素模型组相比,siRNA转染+阿霉素组细胞MDA和ROS水平降低,SOD活性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果表明,siRNA-Nox2转染可显著降低阿霉素诱导的细胞凋亡,差异有统计学意义(P <0.05)。结论:siRNA靶向抑制Nox2保护阿霉素诱导的人皮肤成纤维细胞损伤,其机制与降低胞内氧化应激和ROS水平有关。

NADPH氧化酶NOX1、NOX2和DUOX2在溃疡性结肠炎中的表达分析

目的探讨NADPH氧化酶家族(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases,NOXs)的主要成员NOX1、NOX2和双氧化物酶(dual oxidase,DUOX)2(人:NOX1、NOX2和DUOX2;小鼠:Nox1、Nox2和Duox2)在人炎症性肠病和小鼠肠炎模型结肠中的表达。方法人结肠标本选自于通过结肠镜活检或手术切除的炎症性肠病组织及距离病变组织边缘5 cm以上正常组织;同时选用8~10周龄的C57BL/6雌性小鼠建立结肠炎模型,采用掷硬币法将其随机分为对照组和慢性肠炎组,慢性肠炎组先自由饮用1.0%(质量分数)葡聚糖硫酸钠7 d,然后自由饮水14 d,循环3次;通过体质量变化和HE染色方法评估肠道炎性反应程度。采用实时定量PCR技术和免疫组织化学方法分别检测结肠组织中NOX1、NOX2及DUOX2 mRNA和蛋白表达情况,并分析在人炎症性肠病中三者表达情况与临床特征之间的关系。结果 NOX1、NOX2和DUOX2 mRNA在人炎症性肠病结肠组织中的表达量均显著高于自身正常对照组织,分别增高2.8、2.0和3.3倍(P均<0.01);与人不同,Nox1和Duox2 mRNA在小鼠慢性肠炎结肠组织中的表达量差异无统计学意义,Nox2 mRNA增加2.4倍(P<0.01)。Nox1蛋白在正常结肠上皮细胞刷状缘和胞质中表达;Nox2蛋白主要表达于浸润的吞噬细胞和中性粒细胞;Duox2蛋白在正常结肠黏膜组织中低表达;三者在人炎症性肠病结肠组织中表达均上调(均P<0.01);在小鼠慢性肠炎模型中,Nox2和Duox2蛋白上调(均P<0.01),而Nox1无变化。除了NOX2 mRNA在男性病人表达高于女性病人外,未发现这些氧化酶与病人临床特征之间有关联。结论NOX1、NOX2和DUOX2不但在维持机体正常生理功能过程中发挥重要作用,而且在炎症性肠病初期阶段的发病中也起一定的作用。

紫云英苷通过NOX2/ROS/NF-κB信号通路抑制哮喘气道炎症

目的探究紫云英苷(astragalin,AG)对哮喘小鼠气道炎症的影响及作用机制。方法SPF级雄性小鼠50只随机分为正常组、哮喘模型组、紫云英苷低(AG25)、中(AG50)、高(AG100)剂量组。鸡卵白蛋白吸入制备哮喘小鼠模型,收取支气管肺泡灌洗液(BALF)后,Diff-Quik染色计数细胞数量,ELISA检测BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平。HE染色观察小鼠肺组织炎症变化。利用DCFH-DA探针检测ROS水平,比色法检测SOD活性和MDA含量。Western blot检测肺组织IL-4、IL-5、IL-13、NOX2、p47phox、p-NF-κB p65、NF-κB p65、IκBα、p-IκBα和β-actin表达。结果AG明显减少BALF各炎症细胞及总细胞数量,降低BALF和肺组织IL-4、IL-5、IL-13含量,减少肺组织炎症细胞浸润。AG抑制NOX2和p47phox表达,降低ROS水平和MDA水平,提高SOD活性,抑制IκBα和NF-κB p65磷酸化。结论AG通过NOX2/ROS/NF-kB信号通路调节氧化应激反应减轻哮喘气道炎症。

北五味子提取物对糖尿病大鼠心肌组织中NOX2和p47phox表达的影响

目的:探讨北五味子提取物(SCE)对糖尿病大鼠心肌组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚单位NOX2和p47phox表达的影响,并阐明其对大鼠心肌的保护作用。方法:选取49只清洁级健康雄性Wistar大鼠采用腹腔单次注射链脲佐菌素(STZ)方法建立糖尿病大鼠模型。45只成模大鼠随机分为模型组(n=12)、低剂量(100 mg·kg^-1)SCE组(n=11)、中剂量(200 mg·kg^-1)SCE组(n=11)和高剂量(400 mg·kg^-1)SCE组(n=11),另取10只Wistar大鼠作为正常对照组。干预12周后麻醉下腹主动脉取血,分离血清,取心脏,称取左心室质量,计算左心室质量指数(LVMI),全自动分析仪检测血清中空腹血糖(FBG)、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,HE染色观察各组大鼠心肌病理形态表现,比色法测定各组大鼠心肌组织丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽激酶(GSH)活性,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠心肌组织中NOX2和p47phox mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中NOX2和p47phox蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠LVMI增加(P<0.01),心肌细胞排列紊乱,血清中FBG、CK和LDH水平及心肌组织中MDA水平升高(P<0.05或P<0.01),心肌组织中SOD和GSH活性明显降低(P<0.05),而NOX2和p47phox mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,不同剂量SCE组大鼠LVMI降低(P<0.05或P<0.01),心肌损伤减轻,血清中FBG、CK和LDH水平及心肌组织中MDA水平降低(P<0.05或P<0.01),心肌组织中SOD和GSH活性升高(P<0.05或P<0.01),NOX2和p47phox mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01),且呈一定的剂量依赖性。结论:SCE可降低糖尿病大鼠FBG水平,抑制心肌NADPH氧化酶表达,降低心肌组织氧化应激水平,该作用可能与其心肌保护作用有关。

健脾清化散瘀饮对慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃黏膜TXNDC5、NOX2、NF-κB、TNF-α表达的影响

目的观察健脾清化散瘀饮对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃黏膜炎症水平、萎缩程度,以及含硫氧还蛋白结构域5(TXNDC5)、吞噬细胞NADPH氧化酶(NOX2)、核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达影响。方法 Wistar清洁级大鼠按照随机数字法分为空白对照组(n=8)与造模组(n=42),采用"氨水+去氧胆酸钠+乙醇法灌胃"法建立CAG大鼠模型,造模成功后,造模组随机分中药低、中、高治疗组,给予相应药物连续干预4周后,采用HE染色检测大鼠胃黏膜病变情况,采用免疫组化法检测胃组织中TXNDC5、NOX2、NF-κB、TNF-α蛋白表达。结果与空白对照组相比,模型组大鼠炎症细胞浸润明显,胃黏膜固有腺体萎缩、减少,胃黏膜组织中TXNDC5、NOX2、NF-κB、TNF-α蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,健脾清化散瘀饮低、中、高剂量治疗组胃黏膜固有腺体萎缩及炎症程度明显改善,组织中TXNDC5、NOX2、NF-κB、TNF-α蛋白表达水平均有所下降,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论健脾清化散瘀饮可有效改善CAG大鼠胃黏膜组织病理改变,其机制可能与降低胃黏膜组织中TXNDC5、NOX2、NF-κB、TNF-α表达有关。

NADPH氧化酶NOX2和NOX3基因在胃癌组织中表达的探讨

目的探讨NADPH氧化酶NOX2和NOX3基因在胃癌组织中的表达情况。方法收集在我院行胃癌根治术患者的胃癌及自身正常对照组织标本各15例,慢性胃炎患者胃镜下活检胃黏膜组织标本20例,采用实时定量PCR法检测NOX2和NOX3 mRNA的表达情况。结果 NOX2和NOX3 mRNA在胃癌组织中的表达量显著高于自身正常对照组织和慢性胃炎组织;NOX2 mRNA在胃癌自身正常对照组织与慢性胃炎胃黏膜组织中的表达无明显差异;NOX3 mRNA在后两者中的表达量均很少。结论 NADPH氧化酶NOX2和NOX3在胃癌的发生和发展过程中可能发挥重要作用。

利拉鲁肽通过NOX2调控小胶质细胞/巨噬细胞极化改善糖尿病大鼠脑缺血损伤

目的观察利拉鲁肽(liraglutide)对局灶性脑缺血糖尿病大鼠缺血侧脑组织小胶质细胞/巨噬细胞极化及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NOX2)表达的影响。方法将75只大鼠按照随机数字表法分为脑缺血(CI)组、糖尿病脑缺血(DCI)组、胰岛素(Ins)组、利拉鲁肽(Lir)组和NOX2激动剂TBCA(tetrabromocinnamic acid)+利拉鲁肽(TBCA)组,每组15只。脑缺血后第3天行神经功能缺损评分;2,3,5-氯化三苯四氮唑((TTC))染色测脑梗死体积;免疫荧光双标染色检测小胶质细胞/巨噬细胞CD16/32、CD206与Iba1共标情况;Western blot检测NOX2、TNF-α、IL-1β、IL-10、TGF-β的蛋白表达。结果与DCI组相比,Lir组大鼠神经功能评分减少,脑梗死体积减小,同时M1型小胶质细胞/巨噬细胞Iba1^(+)/CD16/32^(+)细胞数减少,TNF-α、IL-1β、NOX2表达减少,而M2型小胶质细胞/巨噬细胞Iba1^(+)/CD206^(+)细胞数增多,IL-4、IL-10表达增多(P<0.05)。上述效应可被NOX2激动剂TBCA所逆转(P<0.05)。结论利拉鲁肽的神经保护作用可能与其抑制NOX2表达,同时促进小胶质细胞/巨噬细胞向M2型转换有关。

NOX2与中枢神经系统关系的研究进展

NOX2是NADPH氧化酶的一个亚型,通过质膜传递电子,产生活性氧,从而发挥着各种生理和病理作用。NOX2与神经细胞的发育、增殖、活化、凋亡等过程密切相关,在中枢神经系统中各种疾病的发生、发展中具有重要作用,通过抑制NOX2,减少活性氧,可有效防治神经系统疾病。本文对NOX2在神经系统中的生理及病理作用的研究进展进行了阐述。

还原型辅酶Ⅱ氧化酶2(Nox2)介导缺血/再灌注损伤

缺血/再灌注损伤（IRI）和活性氧的生成可引发移植物功能延迟恢复（DGF）,我们推测还原型辅酶Ⅱ氧化酶2（Nox2）在此过程中起重要作用。我们用野生型和Nox2（-/-）小鼠IRI模型和具有DGF的患者体外验证这个假设。在缺氧条件下,Nox2（-/-）小鼠的近端小管上皮细胞减少了基质金属蛋白酶-2（MMP2）、波形蛋白和热休克蛋白27（HSP27）的表达。

急性脑梗死外周血中NOX2、SOD水平变化的临床意义

目的：探讨外周血 NOX2、SOD 水平与急性脑梗死的关系。方法收集98例急性脑梗死患者，采用 ELISA 法以及 WST-1还原法分别测定急性脑梗死患者患病后24 h、3 d、7 d、14 d 以及对照组 SOD、NOX2在外周血的水平，并与91例健康者进行比较。结果脑梗死组外周血 SOD 值表达于发病后24 h 内降低显著多于对照组（P 〈0.01），至3-7 d 达到高峰（P 〈0.01），然后在发病后14 d 逐渐升高，水平仍低于对照组，但差异无统计学意义（P〉0.05）；脑梗死组 NOX2在发病后24 h 即明显升高（P 〈0.01），至3-7 d 达到最高值（P 〈0.01），之后又缓慢下降，至发病后14 d 接近正常。进一步将脑梗死分为轻、中、重三组，发现发病7 d 时重度、中度脑梗死组 NOX2、SOD 的水平与轻度脑梗死组、对照组比较，差异均有统计学意义（P 〈0.05）。结论急性脑梗死患者外周血 NOX2与 SOD 水平存在着动态变化，与脑梗死的严重程度有关，其浓度水平对急性脑梗死的病情变化及治疗具有重要的价值。