电针通过调控NOS神经元改善慢性应激致肠易激综合征大鼠的内脏痛敏的研究

目的:观察电针“天枢”“足三里”“大肠俞”对慢性应激致肠易激综合征(IBS)模型大鼠粪便粒数、内脏痛敏及结肠-氧化氮合酶阳性(NOS)神经元表达的影响,探讨电针干预IBS的机制。方法:70只大鼠随机分为正常组、模型组、天枢组、足三里组和大肠俞组,每组14只。模型组、天枢组、足三里组和大肠俞组采用慢性避水应激(WAS)方法和慢性不可预测轻度应激(CUMS)法联合建立动物模型。天枢组、足三里组、大肠俞组分别电针大鼠双侧“天枢”“足三里”“大肠俞”穴。采用腹壁回撤反射(AWR)、腹直肌肌电(EMG)评估大鼠内脏敏感性,采集结肠电信号,免疫组化法、Western blot法检测结肠NOS阳性神经元表达。结果:造模后,与正常组比较,模型组大鼠粪便颗粒数先增多后减少,差异有统计学意义(P<0.05),AWR评分升高,差异有统计学意义(P<0.01),结肠慢波频率减慢,差异有统计学意义(P<0.01),腹直肌放电、结肠NOS阳性神经元和NOS蛋白表达均增多,差异有统计学意义(P<0.05)。电针治疗均可逆转上述变化,且天枢组AWR评分低于大肠俞组、足三里组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:电针“天枢”“足三里”“大肠俞”可通过下调结肠肌间神经网NOS阳性神经元的表达,减轻其内脏敏感性,从而恢复结肠运动,缓解肠易激症状;电针“天枢”穴对内脏敏感性的调节作用较“足三里”“大肠俞”穴更为明显。

微小杆菌NOS基因密码子偏好性分析

对微小杆菌NOS基因密码子偏好性进行分析,为后续NOS基因的功能验证及遗传转化等研究提供理论依据。研究表明:微小杆菌NOS基因的密码子偏好性较弱,偏好使用G/C结尾的密码子;比较分析不同细菌NOS基因的密码子偏好性参数,发现不同细菌NOS基因密码子偏好性存在一定差异,整体看,放线菌NOS基因密码子偏好性比蓝藻,厚壁菌门强;与其他细菌NOS基因的CDS序列及RSCU值聚类分析表明,微小杆菌NOS基因与放线菌NOS基因表现出相近的密码子使用偏好性;中性绘图、PR2-plot和ENc-plot分析均表明,自然选择是影响NOS基因密码子偏好性形成的主要因素;与7种模式生物的基因组密码子使用频率比较发现,在异源转化受体选择中,大肠杆菌原核表达系统较酵母菌真核表达系统更适合微小杆菌NOS异源表达,常见5种作物均可作为微小杆菌NOS基因的遗传转化受体,其中水稻更理想。本研究初步揭示了微小杆菌NOS基因密码子使用规律,对后续开展基因功能验证有重要的指导作用,同时也可为生物一氧化氮合成酶进化提供一定科学依据。

基于ROTI和AATR的测地型GNSS接收机监测北半球高纬度区域电离层闪烁准确性分析

当前,第25个太阳周期已进入强活跃时期,能引发大量电离层不规则体,进而对使得穿行其中的GNSS信号产生电离层闪烁。这已成为影响GNSS全球稳定导航定位服务的重要干扰源。对全球电离层闪烁进行广泛且全面的监测是消除闪烁对GNSS干扰的重要前提,然而传统电离层闪烁监测接收机(ISMR)分布有限,无法满足闪烁全球监测需求;测地型接收机分布广泛,但从其低采样数据中提取的闪烁因子缺乏新太阳周期长时序监测数据验证,导致其闪烁监测可靠性存疑。为此,本文基于近3 a新太阳周期测地型接收机数据,以ISMR提供的闪烁因子为参考,从代表性空间天气事件闪烁响应、日闪烁发生率、闪烁持续时间概率分布、闪烁日发生规律及其随极昼、极夜、地磁指数的特征变化等方面,对比研究了两种测地型接收机电离层闪烁因子(即电离层总电子含量变化率指数ROTI和沿弧段电子含量变化率指数AATR)监测北极高纬度区域电离层闪烁的准确性,并给出了ROTI和AATR在高纬度区域判断闪烁发生的经验阈值。结果表明,ROTI和AATR均能较为准确探测到地磁扰动、太阳活动等因素驱动的区域电离层闪烁,并能有效表征电离层闪烁统计学上的日变化规律,但两种闪烁因子不能准确区分闪烁和电离层电子密度梯度变化,导致在电子密度梯度变化剧烈期间存在较高虚警。该研究成果可为准确选择区域电离层闪烁监测因子提供指导。

不同负荷运动训练对大鼠脑组织中一氧化氮合酶活性的影响

为了探讨不同负荷的运动训练对大鼠脑组织中一氧化氮合酶ＮＯＳ活性的影响，对大鼠进行为期８周的不同负荷的游泳训练，并测定大鼠脑组织中构建型ＮＯＳｃＮＯＳ和诱导型ＮＯＳｉＮＯＳ活性。研究结果：经过８周的运动训练后，９０ｍｉｎ训练组脑组织中ｃＮＯＳ活性显著高于对照组，而１５０ｍｉｎ训练组脑组织中ｉＮＯＳ活性显著高于对照组。结果表明，中等负荷的运动训练可使脑组织中ｃＮＯＳ活性升高，而大负荷的运动训练可使脑组织中ｉＮＯＳ活性升高。从而表明：适当的运动训练对改善大脑的功能具有一定的作用，而大负荷的运动训练可产生大量的一氧化氮，影响大脑的功能，可能导致运动性疲劳和过度训练的发生。

苦马豆素对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

【目的】探索苦马豆素(SW)与小鼠腹腔巨噬细胞功能之间的关系,为SW免疫研究提供新的试验依据。【方法】将70只小鼠随机分为7组,其中5组分别按0.05、0.2、0.8、3.2和6.4mg·kg-1每天灌服SW生理盐水,连续21d,另2组为生理盐水和空白对照组。收集小鼠腹腔巨噬细胞,经脂多糖(LPS)诱导活化,用ELISA法检测TNF-α生成,酶法检测一氧化氮合酶(NOS)活性,化学法检测H2O2浓度,MTT比色法检测杀伤肿瘤细胞活性及吞噬中性红能力。【结果】SW剂量在0.2～3.2mg·kg-1之间,能够提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬和杀伤活性﹑NOS活性,促进TNF-α和H2O2生成,且均呈剂量效应关系;6.4mg·kg-1SW对小鼠巨噬细胞的活性具有抑制作用。【结论】低剂量SW可以通过提高NOS活性介导巨噬细胞信号传递通路,促进TNF-α和H2O2生成,发挥其吞噬和杀伤功能;高剂量SW对小鼠巨噬细胞免疫功能起抑制作用。提示,SW对小鼠腹腔巨噬细胞具有双向调节作用。

连续性血液净化治疗对全身炎症反应综合征及脓毒血症患者一氧化氮合酶和降钙素原的影响

目的:研究连续性血液净化(CRRT)对治疗全身炎症反应综合征(SIRS)及脓毒血症(Sepsis)的临床疗效及对患者一氧化氮合酶(NOS)和降钙素原(PCT)的影响,为CRRT和SIRS治疗提供新思路。方法:收集收住本院急诊ICU、内科ICU及外科ICU的SIRS及Sepsis患者病例,记录在血液净化治疗前及治疗后24、48、72h的生命体征、氧合指数(PaO2/FiO2)、血生化、血常规、血气分析、APACHE II评分的变化,并采用比色法检测患者血清NOS含量变化,采用免疫发光法检测患者血清PCT含量变化。结果:CRRT治疗后24、48、72h血生化及血常规指标均有显著改善,各时间点NOS值及PCT值较治疗前均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CRRT治疗能显著改善SIRS/Sepsis患者的临床症状,其治疗作用与清除损伤性作用因子NOS及PCT相关。

急性脑梗死患者血浆Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF的变化及意义

目的探讨血浆生物标志物检查诊断急性脑梗死患者的特异性和敏感度,以辅助临床诊断和病情随访。方法分别测定150例急性脑梗死患者(观察组)和50例健康查体者(对照组)的血浆同型半胱氨酸(Hcy)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)、可溶性血栓调节蛋白(s TM)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及血管性假血友病因子(v WF)水平。结果观察组血浆Hcy、e NOS、s TM、hs-CRP、v WF水平均显著高于对照组(P均<0.05)。根据ROC曲线得出当Hcy临界值为9.11μmol/L时诊断急性脑梗死的敏感性为95.2%、特异性为76%,e NOS临界值为437.30μmol/L时诊断的敏感性为79%、特异性为96%,s TM临界值为7.43μmol/L时诊断的敏感性为75.2%、特异性为96%,hs-CRP临界值为3.38 mg/L时诊断的敏感性为81.9%、特异性为90%,v WF临界值为194.85 ng/m L时诊断的敏感性为75.2%、特异性为80%。结论血浆Hcy、e NOS、s TM、hs-CRP、v WF水平可作为急性脑梗死诊断的辅助指标。

大气细颗粒物(PM_(2.5))对心血管内皮细胞NOS的影响

运用体外试验方法,探讨了大气细颗粒物的心血管毒性及其可能的作用机制.采集上海城区大气中的PM2.5,并以0.01、0.05、0.2、1mg·mL-1剂量染毒大鼠心血管内皮细胞24h后,观察PM2.5对心血管内皮细胞内总NOS,iNOS及cNOS活力等指标的影响.发现与对照组相比,0.2mg·mL-1染毒组的心血管内皮细胞总NOS和iNOS活力显著增加,而cNOS活力显著降低,并且随着PM2.5染毒剂量的增加,存在剂量反应关系.这一结果表明,PM2.5可通过诱导心血管内皮细胞的iNOS活性,对心血管系统产生氧化应激损伤,氧化应激作用可能是PM2.

川芎嗪注射液对小鼠缺血再灌注心肌的保护作用

目的:观察川芎嗪注射液(LGT)对心肌缺血再灌注的影响并探讨其作用机制。方法:将小鼠随机分为4组,以40%川芎嗪注射液0.25mL.(10g)-1灌胃处理,1周后腹腔注射垂体后叶素(P it)和硝酸甘油(N it),复制心肌缺血再灌注模型,观察小鼠标准Ⅱ导联心电图变化;心肌组织一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量;血清肌酸激酶(CK)活性。结果:缺血再灌注小鼠心电图J点发生明显偏移,LGT预处理小鼠心电图J点变化幅度明显减少,心肌组织NOS、SOD活性显著增加,MDA的含量及血清CK活性显著降低(P<0.01)。结论:川芎嗪注射液能保护心脏,减轻心肌缺血再灌注引发的损伤;其作用机制可能与增加缺血再灌注心肌组织NOS、SOD活性,减少MDA含量和血清CK活性有关。

异丙酚抑制炎性痛大鼠脊髓NOS神经元的c-fos表达

用福尔马林致痛模型、c fos基因免疫组织化学法和NADPH d组织化学技术 ,研究大鼠脊髓结构对福尔马林痛刺激的反应及异丙酚在其调节过程中的影响。结果表明 ,福尔马林痛刺激后 ,刺激侧脊髓背角出现大量Fos免疫样阳性神经元 ,其中部分为FLI/NOS双标记神经元 ;痛刺激之前或之后给予异丙酚 ,背角各层FLI神经元和FLI/NOS双标记神经元的数量均显著减少 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;单纯腹腔注射异丙酚或生理盐水 ,脊髓未见或偶见FLI神经元。上述结果提示

急性应激时大鼠脑内一氧化氮及一氧化氮合酶的变化

目的 :探讨急性应激状态下脑内一氧化氮 (NO)含量和一氧化氮合酶 (NOS)活性的变化及意义。方法 :采用放免法测定强迫游泳应激后 1、 3小时的大鼠额叶、海马、中脑和下丘脑内NO含量和NOS活性。结果 :应激结束后 1小时 ,海马和下丘脑内NO含量和NOS活性均显著性增高 (t分别为 2 3 2、 2 61,P均 <0 0 5 )。应激结束后 3小时 ,额叶、海马、中脑和下丘脑内NO含量均显著性增高 (t分别为 3 5 7、4 2 6、 3 88、 4 93 ,P均 <0 0 1) ,NOS活性均显著性增高 (t分别为 2 3 2、 2 61,P均 <0 0 5 )。结论 :急性应激状态下 ,各脑区的NOS活性增加 。

转基因花卉的DNA提取与多重PCR分析

分别以CTAB法、DNA提取试剂盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊 3种花卉的基因组DNA ,凝胶电泳结果表明试剂盒提取的效果较好 .设计合成了 3对引物 ,分别扩增花椰菜花叶病毒 (Cauliflowermosaicvirus,CaMV) 35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因 (nos)终止子、大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶II(nptⅡ )基因 .普通PCR检测结果表明 ,3种花卉 6个样品中仅矮牵牛的 1个样品含有这 3种转基因成分 ,酶切鉴定结果验证了PCR产物为非假阳性 .尝试以多重PCR同时检测转基因矮牵牛与对照阳性质粒中的 2个或 3个转基因成分 。

前荷叶碱对人脐静脉内皮细胞一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

目的观察前荷叶碱(Pronuciferine)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)的影响,探讨其对HUVECs血管活性分子分泌的调节作用。方法从莲子心中提取前荷叶碱,体外培养HUVECs,用不同浓度(10μmol/L、1μmol/L、0.1μmol/L、0.01μmol/L)的前荷叶碱分别作用于HUVECs,观察细胞形态,MTT法观察前荷叶碱对HUVECs活性的影响,比色法测定各组的NO、总NOS(tNOS)、诱导型NOS(iNOS)。结果和对照组比较,前荷叶碱对内皮细胞形态和活性无明显影响,能增加HUVECs释放NO,及tNOS生成(p<0.01),但对iNOS影响不大。结论前荷叶碱可能通过增加tNOS生成而提高HUVECs释放NO,从而保护内皮功能。

针刺对拟血管性痴呆大鼠脑内NO、NOS及血液流变学影响的实验研究

目的:建立拟血管性痴呆(VD)的动物模型,探讨针刺对VD大鼠模型的学习记忆行为、脑内NO含量、NOS活性及VD大鼠血液流变学的影响。方法:选用纯系健康雄性Wistar大鼠36只,随机分成假手术组、模型组、针刺组和西药对照组,采用2-血管阻断法(2-VO)制作VD大鼠模型。在大鼠“百会”“大椎”穴行针刺治疗。检测VD大鼠穿梭箱实验成绩,比色法检测脑组织NO含量、NOS活性,并检测VD大鼠的全血粘度、血浆粘度、红细胞压积及纤维蛋白原浓度。结果:数据经统计学处理表明,针刺“百会”“大椎”穴可明显减少模型大鼠在穿梭箱实验中的电击次数和电击时间(P<0.01);降低脑组织内NO的含量及NOS活性(P<0.05);可使VD大鼠的全血粘度、血浆粘度、红细胞压积及纤维蛋白原浓度降低(P<0.05,0.01)。结论:针刺能改善VD大鼠的学习记忆能力,降低脑组织内NO的含量及NOS活性,改善VD大鼠的血液流变学状态,从而改善大脑的血液供应,促进智能的恢复。

ERK1/2参与自发性高血压大鼠离体血管环对apelin-13舒张反应性降低作用

研究自发性高血压大鼠(spontanously hypertensive rat,SHR)离体血管环对G蛋白偶联受体APJ的内源性配体apelin-13的血管收缩与舒张反应及其与一氧化氮(NO)和ERK1/2通路关系.采用离体血管环体外灌流方法用Power-Lab生物信息采集仪检测血管环的张力.实验分组如下:新福林(Phenylephrine,PE)组,乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)组,apelin-13组,apelin-13+PE组,apelin-13+Ach组,PD98059(ERK1/2抑制剂)+PE组,PD98059+Ach组,LNNA(L-nitro-arginine,硝基左旋精氨酸,一氧化氮合酶抑制剂)+PE组,LNNA+Ach组,apelin-13(预孵育)+PD98059+PE组,apelin-13(预孵育)+PD98059+Ach组,apelin-13(预孵育)+LNNA+PE组和apelin-13(预孵育)+LNNA+Ach组,以WKY大鼠血管环为对照组.培养大鼠血管平滑肌细胞,Western blot检测ERK1/2蛋白表达.结果显示:a.apelin-13对于有内皮的血管表现出浓度依赖性舒张作用,血管舒张百分比SHR<WKY大鼠,而对于去除内皮血管,apelin-13则表现出收缩血管的作用,且收缩张力SHR>WKY大鼠,apelin-13预孵育,能减少SHR和WKY大鼠血管对新福林的缩血管反应性,增加对乙酰胆碱的舒张反应性;b.NOS抑制剂LNNA阻断NO形成后,血管环对apelin-13的舒张反应明显抑制,且SHR组较WKY组对apelin的舒张反应减少更明显,提示apelin-13的舒血管效应至少部分依赖NO通路,而SHR高血压大鼠NO通路障碍减弱了apelin对血管的舒张作用;c.ERK1/2抑制剂PD98059预孵育后血管环对apelin-13表现出浓度依赖性的收缩,与去除内皮后apelin-13的收缩血管效应趋势一致,血管收缩张力SHR>WKY大鼠,PD98059逆转了apelin-13引起的血管舒张效应;d.Apelin-13促大鼠VSMCsERK1/2磷酸化增加并呈剂量依赖性和时间依赖性,ERK1/2抑制剂PD98059可以减少apelin-13诱导ERK1/2的磷酸化.结果表明,自发性高血压大鼠离体血管环对apelin-13舒张反应性降低,NO通路和ERK1/2通路介导了apelin-13的舒张血管作用.

藏鸡高海拔适应与肺组织NOS活力的研究

为研究藏鸡高海拔适应机制，本试验测定了藏鸡和低地鸡种在高海拔环境饲养时的右心指数，分析了海拔和品种对鸡肺组织一氧化氮合酶（NOS）活力的影响。结果表明在高海拔环境中。藏鸡的右心指数平均为22．91％，在正常范围内；而对照的矮小隐性白（D）和寿光鸡（S）右心指数分别为28．8096和29．89％，表现不同程度的右心增大；藏鸡肺组织NOS活力明显高于低地鸡，特别是在高海拔环境中差异更加显著，比低地鸡高35％～118%。藏鸡NOS活力较高可能是藏鸡在高海拔环境右心指数保持正常的原因．是高海拔适应生理特征之一。

应激性防御反应过程中脑内一氧化氮合酶阳性神经元分布的变化

本实验采用 NADPH-d方法研究发现 :在应激的早期 ( 1～ 6d) ,一氧化氮合酶阳性神经元在大脑皮质、基底前脑、纹状体、间脑和脑干内出现的部位增多 ,一氧化氮合酶阳性神经元的数量也增多 ;而在应激的晚期 ( 9d以后 ) ,一氧化氮合酶阳性神经元出现的部位及数量明显减少。提示在慢性应激的早期一氧化氮合酶活性增高 ,合成一氧化氮的能力增强 ;而在应激的晚期一氧化氮合酶活性降低 。

增龄对大鼠阴茎勃起功能的影响

目的 探讨增龄在勃起功能障碍 ( ED)中的作用。方法 应用注射阿朴吗啡和电刺激海绵体神经的方法 ,观察低月龄大鼠与老龄大鼠阴茎勃起情况 ,采用免疫组化方法检测大鼠阴茎组织一氧化氮合酶 ( NOS)的染色情况。结果 注射阿朴吗啡后 ,老龄大鼠阴茎勃起次数要少于低月龄大鼠 ( P<0 .0 5) ;电刺激海绵体神经后 ,老龄组大鼠阴茎海绵体内压增幅与低月龄大鼠相近 ( P>0 .0 5) ,但勃起潜伏期延长 ( P<0 .0 5) ;组织化学染色显示低月龄大鼠阴茎组织 NOS的染色明显强于老龄大鼠。结论 增龄对大鼠阴茎勃起功能有一定的影响 ,主要表现在中枢调节及

丹参素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤组织iNOS、NOS、NO的影响

目的:观察丹参素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤组织iNOS、NOS、NO的影响并探讨其脑保护作用机制。方法:将78只SD新生大鼠随机分成假手术组(n=6),缺氧缺血模型组(n=18),丹参素低剂量组(n=18),丹参素中剂量组(n=18),丹参素高剂量组(n=18)。通过结扎左颈总动脉和吸入8%低氧混合气制备缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型。假手术组不进行缺氧缺血处理。丹参素各治疗组按低、中、高剂量分别于造模后0、24h两个时点按15,30,60mg·kg-1腹腔注射用生理盐水稀释至0.5mL的丹参素注射液。缺氧缺血模型组及假手术组于相应时点腹腔注射生理盐水0.5mL。假手术组于缺氧缺血后6h,缺氧缺血模型组与各丹参素治疗组于缺氧缺血后6,24,48h断头取脑,测定脑组织匀浆iNOS、NOS、NO浓度。结果:与假手术组比较,缺氧缺血模型组新生大鼠大脑中iNOS在缺氧缺血后6h时变化不大;而在缺氧缺血24h后升高,应用丹参素治疗后回降,呈一定的量效关系,差异有统计学意义(P<0.05);NOS及NO在缺氧缺血后6,24,48h均升高,应用丹参素治疗后回降,且呈一定的量效关系,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:丹参素能抑制nNOS、iNOS的产生,从而减少过高的NO的产生,而发挥对新生鼠HIBD时脑的保护作用。

冬季温度变化对钉螺一氧化氮合酶的影响

目的 了解冬季气候变暖影响钉螺生存繁殖的作用机理。方法 冬季采集的钉螺放入不同温度的恒温培养箱 ,模拟外界气候变暖。用酶组织化学技术观察不同温度下钉螺中枢神经节、雌雄生殖腺一氧化氮合酶 (NOS)的变化。结果 中枢神经节 NOS的含量 0℃组及 - 4℃组明显高于对照组 (P<0 .0 5 )。睾丸组织 NOS的平均灰度值随着温度的降低呈上升的趋势 ,- 2℃以下的实验组同对照组相比差异有显著性 (P<0 .0 5 )。卵巢组织 NOS的平均灰度值变化较为复杂 ,其平均灰度值呈先上升后下降 ,然后再上升的变化趋势。结论 温度变化对钉螺的生存和繁殖都产生较大的影响 ,生殖腺对外界温度的变化敏感度明显大于神经节。冬季温度升高会使钉螺体内的 NOS发生变化 。