Rabbit Defensin(NP-1) Gene Transformation of Wheat and In Vitro Microbicidal Activity Assay of Transgenic Plants

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＳｉｎｃｅＶａｓｉｌｅｔａｌ．（１９９２）ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｅｄｔｈｅｏｂｔａｉｎｍｅｎｔｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｗｈｅａｔｐｌａｎｔｓ［１］，ｍｕｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｈａｓｂｅｅｎａｃｈｉｅｖｅｄｏｎｇｅｎｅｔｉｃｔｒａ...

小麦中外源基因瞬间表达调控研究及兔防御素(NP-1)基因的转化

将不同５’上游调控序列驱动下的ＧＵＳ基因用基因枪法导入小麦幼胚和胚性愈伤组织，通过组织化学分析法和荧光分析法对ＧＵＳ基因的表达进行定量检测，比较了几种启动子和烟草花叶病毒（ＴＭＶ）增强子序列对小麦中外源基因瞬间表达的调控作用；然后将其中效率最高的玉米Ｕｂｉｌ启动子与兔防御素（ＮＰ－１）基因连接起来，并加上Ｎｏｓ终止子，构建成ＮＰ－１基因小麦表达载体，并转化小麦幼胚。经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，初步确定ＮＰ－１基因已整合到小麦基因组中。转基因植株的抑菌试验正在进行中。

利用花粉管通道法将兔防御素NP-1基因导入小麦的研究

兔防御素NP-1是抗性谱最广的防御素之一。为提高小麦的抗病虫能力,培育优质高抗的小麦品种,采用花粉管通道法将兔防御素NP-1基因导入优质小麦品种G8901。对得到的193株T0植株进行抗除草剂筛选,获得4株抗性植株。通过PCR及PCR-Southern杂交,证实了NP-1基因已经整合到转基因植株的基因组中,并稳定遗传到T1。田间抗病虫鉴定结果表明,这些植株对于白粉病、叶锈和条锈病有较强的免疫力和抗性,但对于蚜虫的抗性没有明显提高。

兔防御素NP-1基因在小麦抗病育种中应用的初步研究

兔防御素NP-1是抗性谱最广的防御素之一。为了得到转NP-1基因的小麦植株,采用电激法、基因枪法和花粉管通道法将兔防御素NP-1基因导入普通小麦品种G9501和G8901中,经过抗生素和除草剂初步筛选得到8株G9501和4株G8901的转化植株。田间抗病虫鉴定结果表明,这些植株对于白粉病、叶锈和条锈病的抗性有较大的提高,但对于蚜虫的抗性没有提高,初步认为兔防御素NP-1基因已经导入小麦,并已经在小麦中得到了表达。转基因植株的进一步检测工作正在进行中。

猪博卡病毒(重庆株)NP1部分基因的克隆测序及生物信息学分析

通过设计特异性引物建立基于猪博卡病毒（Porcine Bocavivus,PBoV）NP1基因的特异性PCR方法,从重庆地区猪血液中扩增出PBoV-NP1的部分基因片段,进行基因测序,并与GenBank公布的PBoV、HBoV及PPV基因序列进行生物信息学分析.结果显示：本次试验克隆得到的PBoV重庆株NP1部分基因片段大小为257 bp,与已公布的PBoV-NP1基因的同源性为97.3％～100％;重庆株与PBoV瑞典株、PBoV中国株属同一进化分支,且PBoV重庆株NP1基因与PBoV瑞典株NP1基因亲缘性非常接近;PBoV重庆株NP1基因与GenBank公布的猪PBoV-NP1和1个人HBoV st1聚在博卡病毒一大分支,与PPV分属两大分支,而HBoVst1株又单独形成另一簇.这表明,PBoV重庆毒株与国外毒株的亲缘性非常接近,推测重庆地区猪群中感染的PBoV可能是通过引进或者进口国外动物性产品而传播感染猪群.

通过根瘤农杆菌介导法获得菊花转基因植株

以带叶茎段为外植体，通过根癌农杆菌介导法，将兔防御素NP－1基因导入菊花品种“001”中。经梯度卡那霉素（kanamycin，Km）筛选，获得了大量Km抗性植株，其中部分Km抗性植株经Southem杂交鉴定为转基因植株。从而成功地建立了菊花遗传转化系统，为菊花分子育种奠定了基础。