NPPB对肝癌细胞增殖的影响

目的 观察氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)对人肝癌HHCC细胞增殖的影响。方法 将NPPB作用于HHCC细胞，应用细胞计数法及MTT比色分析法观察细胞增殖情况；同时应用流式细胞仪检测其细胞周期时相的变化。结果 NPPB使HHCC细胞数及MTT光吸收值(OD)较对照组均显著降低，去除NPPB后，OD值便可逐渐恢复；经100μmol/L的NPPB处理48h时，HHCC细胞G1期细胞比例比对照组明显增高，S期及G2期细胞比例则明显低于对照组。结论 NPPB能可逆抑制肝癌细胞增殖，并具有浓度依赖性；NPPB使细胞增殖停滞在G1期。

新疆地区慢性心力衰竭患者NPPB基因突变分析

目的探讨新疆地区慢性心力衰竭与NPPB基因变异之间的关系。方法选择新疆阿克苏地区第一人民医院门诊或者住院部确诊为慢性心力衰竭患者172例作为观察组,将其分为观察组W亚组(维吾尔族心力衰竭患者)91例、观察组H亚组(汉族心力衰竭患者)81例。另选择同期200例健康志愿者作为对照组,将其分为对照组W亚组(维吾尔族健康志愿者)100例;对照组H亚组(汉族健康志愿者)100例。提取4组对象外周血DNA,经PCR技术扩增NPPB基因的3个外显子,对目的基因进行测序,再将结果与Pub Med中Blast软件中的NPPB进行对比,分析NPPB基因的突变位点与维吾尔族和汉族心力衰竭患者之间的关系。结果 NPPB基因多态位点rs198388、rs198389均有群体代表性,rs198388、rs198389在观察组W亚组、观察组H亚组患者、对照组W亚组、对照组H亚组之间,无论基因型分布还是等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。4组不同基因型之间BNP水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 NPPB基因rs198388、rs198389多态位点与中国新疆地区慢性心力衰竭患者不存在关联。

NPPB基因SNP-c.-1298G/T与汉族人群脉压的相关性研究

目的:研究NPPB基因多态性(SNP-c.-1298 G/T)与汉族人群脉压的相关性。方法:取120例无亲缘关系的高血压患者、120例正常对照者外周血,应用聚合酶链反应(PCR)扩增NPPB基因5′侧翼区片段,产物纯化后直接测序,计数资料用卡方检验,计量资料用t检验或方差检验;在高血压组和正常对照组中分别记录了年龄、性别、体重指数、甘油三酯、总胆固醇、肌酐、尿素、平均动脉压、吸烟、饮酒、高血压病史(年)、脉压(PP)等指标,观察NPPB基因SNP-c.-1298 G/T多态性位点在汉族人群中的分布情况,以及高血压组和正常对照组中各基因型所对应的临床指标是否有统计学差异。结果:高血压组平均动脉压(MAP)、PP和肌酐高于正常对照组(P<0.05),其他临床指标差异无统计学意义;高血压组和正常对照组比较,NPPB基因SNP-c.-1298 G/T多态性位点的基因型频率和分布差异均无统计学意义(P>0.05);正常对照组中脉压在SNP-c.-1298 G/G基因型要大于GT+TT基因型(P<0.05)。结论:NPPB基因SNP-c.-1298 G/T多态性位点与汉族人群中原发性高血压的发病没有显著相关性,但脉压在对照组中SNP-c.-1298 G/G基因型大于GT+TT基因型。

氯通道阻滞剂NPPB对培养牛角膜内皮细胞增殖的抑制作用

目的观察氯离子通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸[5-nitro-2-(3-phenyl-propylamino)-benzoic acid,NPPB]对培养牛角膜内皮细胞增殖的作用。方法实验设5组,对照组,0.1%二甲基硫氧化物DMSO(di mathyl sulfoxide)组,50μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1NPPB组。应用MTT比色分析法观察细胞增殖情况,计算细胞存活率。采用流式细胞仪检测细胞周期时相的变化,计算细胞增殖指数。结果NPPB使培养牛角膜内皮细胞MTT光吸收值和细胞存活率较对照组均显著降低,并具有浓度和时间依赖性。经100μmol·L-1NPPB处理48h后,与对照组相比,细胞出现明显的凋亡峰,G1期细胞比例明显增高,S期及G2期细胞比例则明显降低,增殖指数明显下降。结论NPPB能浓度依赖性抑制培养牛角膜内皮细胞的增殖,并使细胞停滞于G1期。

NPPB基因在妊娠性高血压患者中的突变情况

目的:研究NPPB基因(natriuretic peptide precursorB,NPPB)在妊娠性高血压患者中的突变情况。方法:选取3例妊娠性高血压、80例其他类型高血压患者和60例健康体检者的外周血DNA,应用PCR技术对其NPPB基因进行扩增,产物纯化后,直接测序并收集患者的一般临床资料进行分析。结果:在1例妊娠合并高血压的患者中发现NPPB基因5′侧翼区(insert-1194bp,-1195bp)插入CC,导致后续的序列出现移码突变。结论:NPPB基因插入突变可能是妊娠性高血压发病的原因。

氯通道阻断剂NPPB对鸡喙外胚间充质细胞增殖分化影响的研究

目的研究氯离子通道阻断剂5硝基2(3苯丙胺)苯甲酸(5 nitro 2(3 phenylpropylamino)benzoic acid,NPPB)对鸡喙外胚间充质细胞(chicken mandibular mesenchymal cells,CMMC)增殖及分化能力的影响。方法应用MTT、实时定量PCR的方法,观察NPPB阻断氯离子通道后,鸡喙外胚间充质细胞在AA-BGP诱导成骨过程中,细胞增殖及Sox9 mRNA、Runx2 mRNA及Col10 mRNA的表达的变化。结果在AA-BGP诱导组及无AA-BGP诱导组,NPPB均抑制了CMMC的增殖(P<0.05)。在AA-BGP诱导组及无AA-BGP诱导组,NPPB下调Col10 mRNA及Runx2 mRNA的表达水平均有显著性差异(P<0.05),Sox9 mRNA的表达水平没有显著改变。结论阻断氯离子通道可抑制鸡喙外胚间充质细胞增殖,并影响细胞向肥大化的软骨细胞分化,可能通过调节Runx2水平影响分化。

NPPB对心室肌细胞容积敏感性氯通道的影响

目的 观察氯通道阻断剂对小鼠心室肌容积敏感性氯通道的影响。方法 采用急性分离的小鼠心 室肌细胞,低渗溶液激活容积敏感性氯通道电流,膜片钳全细胞记录法记录电流。结果 低渗溶液激活了一 个明显的容积敏感性氯通道电流,该电流具有明显的外向整流特征,能被5 硝基 2(3 苯丙胺) 苯甲酸可逆性 明显抑制,对内外向电流的抑制率几乎相等[(79.1±2.5)%比(77.1±2.2)%]。结论 小鼠心室肌细胞容积 敏感性氯通道电流具有外向整流性及时间依赖性失活特性,能被氯通道阻断剂所抑制,且该抑制作用具有一 定的电压依赖性。

NPPB基因多态性与海南黎族和汉族原发性高血压发病相关性

目的探讨脑钠肽基因(NPPB)位点RS198389的多态性与海南黎族原发性高血压及汉族原发性高血压的关系。方法以2015年3月—2016年3月陵水自治区县人民医院黎、汉族住院的原发性高血压患者272例(黎族136例,汉族136例)作为实验组,同时选取黎族汉族健康人群272例(黎族136例,汉族136例)作为对照组,各组间在年龄性别等方面差异无统计学意义(P>0.05)。采用等位基因特异性PCR方法,对NPPB基因RS198389突变位点进行多态性检测,并比较两组基因型频率和等位基因频率。结果黎族高血压组的NPPB基因RS198389多态性位点的TT、TC、CC基因型频率分布为50.7%、44.1%、5.2%,黎族正常对照组TT、TC、CC基因型频率分布为72.8%、23.5%、3.7%,分布差异有统计学意义(P<0.05)。汉族高血压组的NPPB基因RS198389 TT、TC、CC基因型频率分布为17.6%、77.2%、5.2%,汉族健康对照组TT、TC、CC基因型频率分布为63.2%、34.6%、2.2%,分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论NPPB基因RS198389多态性位点与海南岛汉族和黎族人群原发性高血压的发病均具有相关性;汉族和黎族组间比较,NPPB基因RS198389多态性位点与黎族高血压的相关性更为明显。

体积调节性氯离子通道阻滞剂NPPB对低渗条件下小胶质细胞活化的影响

目的探讨体积调节性氯离子通道(volume regulated anion channel, VRAC)阻滞剂NPPB(5-nitro-2-3-phenylpropylamino benzoic acid)对低渗状态下小胶质细胞活化的影响及机制。方法采用小胶质细胞系BV2细胞,分为对照组、低渗组、低渗+NPPB干预组,低渗+U0126组,通过LDH试剂盒检测NPPB对BV2细胞的毒性作用;采用免疫荧光技术和FITC标记鬼笔环肽染色检测BV2细胞形态变化及细胞面积;western blot检测BV2细胞MAPK信号通路的变化。结果 50μmol和100μmol的NPPB对BV2细胞无明显毒性作用。与对照组比较,低渗干预后BV2细胞迅速由静息状态下的分支状转变为活化的阿米巴状,IBA1表达显著增加,细胞面积显著增大;NPPB显著逆转低渗条件下BV2细胞形态变化,减少IBA1表达及细胞面积(P<0.05);与对照组比较,低渗干预显著增加p-Erk蛋白表达(P<0.05),而Erk、p-Jnk及p-p38蛋白表达水平无明显差异(P>0.05),NPPB显著降低BV2细胞p-Erk蛋白表达水平(P<0.05);Erk选择性抑制剂U0126干预后低渗状态下BV2细胞的面积显著减小(P<0.05)。结论低渗条件可诱导BV2细胞活化,VRAC阻滞剂NPPB可抑制低渗诱导的BV2细胞活化,Erk信号通路可能参与了VRAC介导的BV2细胞活化。

阴离子及其通道阻断剂对大鼠主动脉张力的影响

目的 :研究阴离子及其通道阻断剂在去甲肾上腺素 (norepinephrine,NE)引起的血管收缩中的作用。 方法 :常规离体血管灌流法。结果 :阴离子通道阻断剂尼氟灭酸 (niflumicacid ,NFA)和 5 硝基 2 ( 3 苯丙氨基 ) 苯甲酸 [5 nitro 2 ( 3 phenylpropylamino) benzoicacid ,NPPB]可以抑制去甲肾上腺素NE引起的血管收缩 ;用胆碱替代灌流液中的Na+后血管张力无明显变化 ,而谷氨酸钠替代灌流液中的NaCl后血管张力下降 ,用同族元素Br-替代Cl-后血管张力增加 ,并能被NFA和NPPB所抑制。结论 :阴离子在维持血管张力中的作用比Na+更为重要 ,提示阴离子通道可能在高血压发病中起一定作用。

氯通道阻断药对小鼠心室肌容积敏感性氯通道的影响

目的 :观察氯通道阻断药 5 硝基 2 (3 苯丙胺 ) 苯甲酸 (NPPB)和他莫昔芬对小鼠心室肌容积敏感性氯通道的影响。 方法 :采用急性分离的小鼠心室肌细胞 ,低渗溶液激活容积敏感性氯通道电流 ,膜片钳全细胞记录法记录电流。 结果 :低渗溶液激活一个明显具有外向整流特征的容积敏感性氯通道电流。NPPB能可逆性抑制该电流且对内外向电流的抑制率几乎相等〔外向抑制 (79.1± 2 .5 ) % ,内向抑制 (77.1± 2 .2 ) %〕。而他莫昔芬对该电流的抑制以外向电流占优势〔外向抑制 (75 .1± 1 .2 ) % ,内向抑制 (4 1 .2± 3.2 ) %〕。 结论 :小鼠心室肌细胞容积敏感性氯通道电流对NPPB和他莫昔芬十分敏感 。

氯离子通道阻滞剂对人眼小梁细胞增殖的影响

目的探讨氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸〔5-nitro-2-（3-phenyl-propylamino）-benzoic acid,NPPB〕对体外培养人眼小梁细胞增殖的影响。方法RT-PCR检测体外培养人眼小梁细胞ClC-3mRNA表达,用不同浓度的NPPB作用体外培养的人眼小梁细胞,台盼蓝染色细胞计数法检测细胞存活率,四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测其增殖能力。结果体外培养人眼小梁细胞存在ClC-3mRNA表达;不同浓度NPPB作用后小梁细胞存活率无显著差异;在一定浓度范围内（50-100μmol/L）,NPPB均可使体外培养的人眼小梁细胞增殖能力下降,其中100μmol/LNPPB的作用最强。结结论一定浓度的NPPB可降低体外培养的人眼小梁细胞增殖能力。

大型脑动静脉畸形直接显微手术治疗的效果分析

目的通过总结大型脑动静脉畸形的显微手术经验,探讨脑动静脉畸形显微手术的效果以及正常灌注压突破对显微手术的影响。方法回顾性分析93例采用显微外科手术治疗的大型脑动静脉畸形病例,按照Spetzler-Martin分级,3级者37例,4级者35例,5级者21例。结果术后出现再出血及急性脑肿胀者3例(3.2%),死亡2例。术后对91例患者进行随访,根据GOS分级,恢复良好82例(90.1%),中残7例(7.7%),重残2例(2.2%)。结论显微外科手术是治疗大型脑动静脉畸形的有效手段,术前精确的判断及术中精细的操作是手术成功的关键。正常灌注压突破对大型脑动静脉畸形直接显微手术无显著影响。

血管内栓塞联合手术切除治疗巨大脑动静脉畸形

为探讨术前血管内栓塞在治疗巨大脑动静脉畸形 (AVMs)中的作用 ,对 1996年 8月至 1998年 4月2 7例巨大AVMs患者进行了手术治疗。每个患者于术前均行AVMs血管内栓塞。结果发现 ,先行血管内栓塞后进行手术切除可明显减少术中出血 ,大大降低术后致残率和病死率 ,并可有效防止正常灌注压突破综合征(NPPB)。提示血管内栓塞与手术切除联合治疗巨大脑AVMs是一种行之有效的手段。

大鼠脑慢性缺血状态再灌注对海马区神经细胞凋亡及p21和p53蛋白表达的影响

目的通过建立大鼠慢性脑缺血再灌注模型,观察再灌注时大鼠海马区神经细胞凋亡及p53和p21蛋白的表达。方法70只健康雄性SD大鼠随机分为对照组(n=10),模型组(n=30),模型再灌注组(n=30),应用TUNEL法检测细胞凋亡情况,用免疫印迹法检测大鼠海马p53和p21蛋白的表达。结果对照组未见凋亡细胞,模型组凋亡细胞数明显少于模型再灌注组(p<0.05);p53和p21蛋白在对照组无表达,模型组表达少于模型再灌注组(p<0.05),术后48h达高峰,72h后逐渐降低。结论慢性脑缺血再灌注后海马神经细胞凋亡,海马区p53和p21蛋白表达上调可能参与正常灌注压突破综合症发病机制。

实验性灌注压突破的脑组织电镜表现

经历了慢性缺血后的脑组织在灌注恢复正常时有可能发生严重的脑水肿甚至脑出血,临床上将这种现象称为"正常灌注压突破"(normal perfusion pressure breakthrough,NPPB。通过在实验动物颈部建立颈总动脉-颈外静脉瘘并饲养14周后快速阻断其瘘口,模拟了临床上引起 NPPB 的条件和过程。通过对实验动物脑组织进行电镜检查,发现慢性缺血可引起脑组织内毛细血管内皮细胞变性等结构缺陷,以及毛细血管周围的水肿样改变,内皮细胞的紧密连接疏松,部份标本中红细胞"逸出"管外被周细胞吞噬,可能是 NPPB 超微结构方面的证据。

氯离子通道阻滞剂对人眼小梁细胞吞噬作用的影响

目的探讨氯离子通道阻滞剂—5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸5-nitro-2-(3-phenyl-propylamino)-benzoic acid,NPPB对人眼小梁细胞吞噬功能的影响。方法培养人眼小梁细胞,对其进行免疫化学染色鉴定,采用RT-PCR技术检测小梁细胞CLC-2mRNA的表达,然后应用流式细胞仪定量检测不同浓度NPPB作用下,小梁细胞对乳胶株的吞噬指数。结果体外培养的人眼小梁细胞NES染色阳性,且成功检测出CLC-2mRNA表达。当加入10μmol/L的NPPB作用6h后,小梁细胞对乳胶株的吞噬指数与对照组相比无明显改变(P>0.05),而50μmol/L的NPPB作用后,小梁细胞对乳胶株的吞噬作用明显降低(P<0.01),低于对照组,且随着加入NPPB浓度的增加,吞噬指数逐渐降低。结论氯离子通道阻滞剂浓度依赖的抑制小梁细胞的吞噬功能,且氯离子通道CLC-2可能参与调节小梁细胞吞噬过程。