重组质粒pEGFP-N1-NPRL2对人胃癌细胞生物学特性的影响

目的:探讨pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体对SGC-7901胃癌细胞体外增殖﹑细胞周期、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法:构建pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体,并进行酶切及测序鉴定。脂质体介导转染入SGC-7901胃癌细胞,应用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot法检测NPRL2的基因及蛋白水平情况,CCK8法检测细胞增殖的变化,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率的变化,Transwell实验检测NPRL2对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:成功构建了pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体。重组质粒转染SGC-7901细胞后,通过荧光显微镜观察到绿色荧光的表达,RT-PCR和Westernblot法检测到NPRL2 mRNA及蛋白的表达,CCK8法检测发现NPRL2能够明显抑制肿瘤细胞增殖(P<0.05),细胞周期分析显示NPRL2使细胞停在G0～G1期(P<0.05),细胞凋亡结果显示NPRL2能抑制细胞凋亡(P<0.05),Transwell侵袭和迁移实验显示NPRL2使细胞侵袭迁移能力均降低(P<0.05)。结论:NPRL2可抑制肿瘤细胞的增殖、周期、侵袭及迁移,并促进凋亡。

抑癌基因NPRL2的研究进展

抑癌基因NPRL2(nitrogen permease regulator-like 2)也称肿瘤抑制候选基因4(tumor suppressor candidate4,TUSC4),定位于人染色体3p21.3区域,广泛存在于人体各种组织中,在生物物种之间具有高度保守性;研究发现,在人类多种肿瘤组织(如肺癌、乳腺癌和肾癌等)中的表达明显降低。NPRL2基因具有参与DNA错配修饰、调控细胞周期信号转导以及诱导细胞凋亡的生物学功能。NPRL2基因失活与多种肿瘤的发生和发展有关。但其具体的抑瘤机制尚不清楚,有待于进一步研究。

RKIP及NPRL2在涎腺黏液表皮样癌中的表达及其临床意义

目的:研究口腔黏液表皮样癌组织中RKIP和抑癌基因NPRL2的表达,探讨其表达与口腔黏液表皮样癌各临床病理因素之间的关系。方法:应用免疫组织化学染色方法检测48例口腔黏液表皮样癌组织和13例正常组织中RKIP和NPRL2的表达,并对其与临床病理特征的关系进行统计学分析。结果:RKIP和NPRL2均表达于黏液表皮样癌细胞的胞浆和部分胞膜。黏液表皮样癌组织与正常组织中RKIP和NPRL2高表达的阳性率分别为52.08%,92.31%和47.92%,100.00%,黏液表皮样癌组织与两者比较有显著性差异(P<0.05)。结论:RKIP和NPRL2可能参与了黏液表皮样癌的发生、发展过程。

胞浆转导肽介导抑癌基因NPRL2对肾癌细胞凋亡及Bax-Caspase3凋亡通路的影响

目的:证实胞浆转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)介导抑癌基因NPRL2以CTP-NPRL2融合蛋白形式对人肾癌细胞株786-O的作用,检测其诱导的肾癌细胞凋亡及其对Bax-Caspase3凋亡通路的影响。方法:构建重组质粒p ET28aCTP-NPRL2和p ET28a-NPRL2并转染大肠杆菌DH5α,从而得到原核表达体系用于CTP-NPRL2融合蛋白及NPRL2蛋白的表达和提取;Western blot验证CTP-NPRL2蛋白和NPRL2蛋白的表达;将肾癌786-O细胞分为2组,分别与等量的NPRL2蛋白和CTP-NPRL2蛋白共培养,采用免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜检测2种蛋白在肾癌细胞786-O的亚细胞定位情况;将在96孔板培养的786-O细胞分为5组,其中4组分别用1.0μmol/L CTP-NPRL2蛋白、2.0μmol/L CTP-NPRL2蛋白、4.0μmol/L CTP-NPRL2蛋白、4.0μmol/L NRPL2蛋白处理,剩余1组为对照组;MTT法检测各组786-O细胞增殖的情况;流式细胞仪分析各组细胞周期和细胞凋亡情况;real-time PCR、Western blot检测各组786-O细胞中Bax和Caspase-3在m RNA及蛋白水平的表达情况。结果:质粒测序结果显示成功构建所需的原核表达载体;Western blot结果显示CTP-NPRL2融合蛋白在原核表达载体中有表达。激光共聚焦显微镜结果提示CTP-NPRL2蛋白导入786-O细胞后定位于胞浆;MTT发现CTP-NPRL2组细胞增殖较NPRL2组及空白对照组受到明显的抑制(P<0.05);流式细胞分析显示,相对于空白对照组和NPRL2组,CTP-NPRL2组的凋亡率显著增高且处于G0/G1期细胞明显增多(P<0.05)。real-time PCR和Western blot结果提示,与空白对照组和NPRL2组比较,CTP-NPRL2组Bax和Caspase-3在m RNA和蛋白质水平的表达均明显上调(P<0.05)。结论:CTP介导抑癌基因NRPL2以CTP-NPRL2融合蛋白形式导入肾癌786-O细胞中并对其有明显的抑制作用,可能通过影响Bax-Caspase3凋亡通路的活性,抑制786-O细胞的增殖,并诱导其凋亡将细胞周期阻滞于G0/G1期,从而发挥抑癌作用。

口腔涎腺腺样囊性癌组织中RKIP和NPRL2的表达及其意义

目的:探讨抑癌基因RKIP和NPRL2在口腔涎腺腺样囊性癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学方法检测RKIP蛋白和NPRL2蛋白在52例口腔涎腺腺样囊性癌组织、26例癌旁腺样囊性癌组织及15例正常涎腺组织中的表达,并分析RKIP和NPRL2的表达与腺样囊性癌临床病理学特征的关系。结果:免疫组化结果显示腺样囊性癌组织、癌旁及正常涎腺组织中RKIP和NPRL2的阳性率分别为48.08%、76.92%、93.33%和46.15%、80.77%、93.33%;腺样囊性癌组织中RKIP和NPRL2的表达显著低于癌旁及正常涎腺组织,差异有统计学意义(P<0.05),而腺样囊性癌组织和癌旁组织中两者蛋白的表达均呈显著正相关(P=0.000,P=0.005)。结论:RKIP和NPRL2表达的减少或缺失与腺样囊性癌的发生发展、侵袭转移密切相关。

胃癌组织中NPRL2蛋白的表达变化

目的观察胃癌组织中NPRL2蛋白的表达变化。方法采用免疫组化SP法检测60例胃腺癌组织及其癌旁正常组织中的NPRL2蛋白。结果 NPRL2蛋白在癌旁正常组织中的阳性率为86.7%,明显高于癌正常组织中的26.7%,P<0.05。NPRL2蛋白表达与胃癌分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度、临床分期及患者的年龄、性别均无关(P均>0.05)。结论胃癌组织中NPRL2蛋白表达降低。

基因NPRL2在急性白血病中的表达

白血病是造血干细胞的克隆性疾病。我国白血病发病率为2.76/10万。在恶性肿瘤死亡率中,白血病居第6位（男性）和第8位（女性）,在儿童及35岁以下成人中则居第l位。其中急性髓细胞白血病最多（1.62/10万）,其次为急性淋巴细胞白血病（0.69/10万）。白血病的发生与原癌基因、抑癌基因和调控基因密切相关,

胃癌组织中NPRL2 mRNA的表达变化及意义

目的观察胃癌组织中NPRL2 mRNA的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测60例胃腺癌组织及其癌旁正常组织中NPRL2 mRNA的表达。结果 NPRL2 mRNA在胃癌及癌旁正常组织中均有表达,但胃癌组织中NPRL2 mRNA的表达显著降低(IOD比值为1.099±0.285),与癌旁正常组织(IOD比值为1.582±0.305)相比P<0.05。NPRL2 mRNA的表达与肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度、临床分期及患者的年龄、性别无显著相关(P均>0.05)。NPRL2 mRNA在不同分化程度、不同临床分期、有无淋巴结转移及不同年龄、性别患者的胃癌组织中的表达无显著差异(P均>0.05)。结论胃癌组织中NPRL2mRNA表达降低,其在胃癌的发生、发展过程中可能发挥重要作用。

NPRL2与膀胱癌患者临床病理特征的相关性及对膀胱癌细胞凋亡的影响

目的研究NPRL2与膀胱癌患者临床病理特征的相关性及沉默NPRL2对膀胱癌细胞系Biu87/RT-4凋亡的影响。方法收集本院泌尿外科2014年1月至2019年1月的131例膀胱癌患者癌组织标本,免疫组化检测膀胱癌组织中NPRL2表达情况,分析其与膀胱癌临床病理特征的相关性;检测CP-H068、Biu87和RT-4细胞系中NPRL2的表达,CCK-8法检测沉默NPRL2后细胞的增殖情况,流式细胞术检测凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果NPRL2在膀胱癌组织中高表达,为53.44%,与膀胱癌临床分期、分级存在显著相关性(P<0.05);NPRL2在膀胱癌细胞系Biu87/RT-4中的表达显著高于正常膀胱上皮细胞CP-H068(P<0.05);沉默NPRL2后Biu87/RT-4细胞增殖能力下降,凋亡率上升,凋亡相关蛋白JNK、Bax、caspase-9表达量增高,Bcl-2表达受抑制,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论膀胱癌中NPRL2表达与膀胱癌临床分期和分级相关,通过沉默膀胱癌细胞Biu87/RT-4中NPRL2的表达,可以有效抑制膀胱癌细胞增殖、促进细胞凋亡。

CTP-NPRL2融合蛋白对肾癌原代细胞迁移侵袭能力的抑制及机制研究

目的将原核表达的氮酶调节因子2(nitrogen permease regulator 2-like,NPRL2)融合蛋白通过胞浆转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)转入肾癌原代细胞内,观察其对肾癌原代细胞迁移侵袭的影响,并分析与肾癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系。方法胶原酶消化法培养肾癌原代细胞;构建原核表达质粒pET15b-CTP-NPRL2和pET15b-NPRL2,表达融合蛋白CTP-NPRL2和NPRL2,并通过Western blot鉴定目的蛋白的表达。将培养成功的原代细胞分为BLANK组、NPRL2组和CTP-NPRL2组。免疫荧光检测目的蛋白的细胞定位;Transwell迁移侵袭实验检测导入NPRL2蛋白后,对肾癌细胞迁移侵袭能力的影响;Real-time PCR检测Raptor、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤粘蛋白(Fibronectin)m RNA表达水平;Western blot检测Raptor、E-cadherin、Vimentin、Fibronectin蛋白表达水平。结果成功培养出肾癌原代细胞并通过鉴定;测序结果及Western blot检测结果显示质粒构建成功并表达出目的蛋白;免疫荧光检测结果显示CTP-NPRL2融合蛋白可以穿过胞膜并定位于胞浆;迁移和侵袭实验显示CTP-NPRL2组肾癌细胞迁移侵袭能力明显下降(P<0.05);Real-time PCR和Western blot检测结果显示CTP-NPRL2组Raptor、Vimentin与Fibronectin的m RNA、蛋白表达水平与NPRL2组和BLANK组相比明显降低(P<0.05),而E-cadherin的mRNA、蛋白表达水平与NPRL2组与BLANK组相比明显升高(P<0.05)。结论 NPRL2可能通过与Raptor相互作用影响mTORC1的活性,进而调节EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Fibronectin的表达量,影响肾癌细胞的迁移侵袭能力。

胃癌中NPRL2和CHK1的表达及意义

目的观察胃良、恶性病变组织中NPRL2和细胞周期检测点激酶1(CHK1)的表达及其临床病理意义。方法采用免疫组化SP法检测胃良、恶性病变组织中NPRL2和CHK1的表达,分析两者的表达水平与临床病理特征的关系以及两者表达的相互性。其中慢性浅表性胃炎20例,慢性萎缩性胃炎伴肠化32例,异型增生30例,胃癌50例。结果在慢性浅表性胃炎→慢性萎缩性胃炎伴肠化→异型增生→胃癌的过程中,CHK1的表达呈逐渐递增趋势,而NPRL2则逐步递减;NPRL2、CHK1表达均与浸润深度、分化程度、淋巴结转移明显相关,差异均有显著性(P<0.05);两者的表达与年龄、性别无关;胃癌组织中NPRL2和CHK1表达存在相关性(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示,CHK1阴性组2年生存率为72.2%,稍高于阳性组的56.2%(P>0.05);NPRL2阳性组2年生存率为83.3%,明显高于阴性组50%(P<0.01)。Cox回归多因素分析显示NPRL2表达是一独立预后因素。结论 NPRL2和CHK1表达水平可能是反映胃癌发生、进展、生物学行为及指导临床辅助治疗的重要生物学指标。NPRL2表达可作为评价胃癌预后的指标。

非小细胞肺癌组织中NPRL2蛋白的表达及意义

目的探讨NPRL2在非小细胞肺癌（non-small cell lungcancer，NSCLC）组织中的表达情况及临床意义。方法采用免疫组化sP法检测NSCLC组织和正常肺组织中NPRL2蛋白的表达水平。结果NSCLC组织中NPRL2的表达水平明显低于正常肺组织（P〈0．01）；NPRL2蛋白的表达水平分别与病理类型、分化程度、临床分期、淋巴结转移与否有关（P〈0．05）。结论NPRL2蛋白的低表达可能与非小细胞肺癌的发生发展密切相关。

NPRL2基因与奥沙利铂治疗结直肠癌的研究进展

结直肠癌(CRC)是全球三大恶性肿瘤之一,具有高发病率和高死亡率。研究发现,NPRL2基因与CRC发生、发展关系密切,CRC患者NPRL2基因表达显著降低。奥沙利铂是第三代铂类抗肿瘤药物,已广泛应用于胃肠道肿瘤化疗,可提高CRC患者生存率,但部分患者存在耐药。NPRL2基因可增加奥沙利铂治疗CRC的敏感性,是CRC潜在的治疗靶点。本文就NPRL2基因与奥沙利铂治疗CRC的研究进展作一综述。

NPRL2对结肠癌HT29细胞系自噬和凋亡的影响

目的:探讨NPRL2对人结肠癌细胞自噬的影响,并进一步探讨自噬和凋亡的关系。方法:构建过表达NPRL2慢病毒载体,转染至HT29细胞。检测转染48h后NPRL2、LC3B和p62蛋白表达量,吖啶橙染色检测细胞自噬。用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理转染后细胞,测定细胞增殖,细胞死亡,细胞caspase-3活性,细胞凋亡和caspase-3、Bax、Bcl-2、LC3B及p62的蛋白表达量,吖啶橙染色检测细胞自噬。结果:免疫印迹法检测结果表明NPRL2能够激活HT29细胞的自噬。前期研究结果表明,NPRL2能够促进HT29细胞凋亡。进一步研究NPRL2激活的自噬与凋亡之间的关系,结果表明3-MA抑制由NPRL2诱导的自噬,降低细胞活力,抑制其增殖,促进其凋亡,并促进活化caspase-3和Bax的表达,抑制Bcl-2的蛋白表达和细胞自噬。结论:NPRL2能够促进HT29细胞的自噬,但这种自噬抑制了NPRL2引起的细胞凋亡,通过抑制3-MA抑制NPRL2引起的自噬能够有效地促进结肠癌细胞的凋亡。

pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体的构建及其对人鼻咽癌细胞增殖的影响

目的:构建pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体并观察其对鼻咽癌细胞株CNE1体外增殖的影响。方法:提取CNE1细胞中总RNA,RT-PCR扩增NPRL2并克隆至pEGFP-N1载体,鉴定出阳性克隆送测序,以重组质粒转染CNE1细胞。通过Western blot检测转染细胞中NPRL2蛋白的表达,CCK-8法检测细胞增殖的变化。结果:成功构建了pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体,Western blot法检测到NPRL2蛋白的表达,CCK-8法检测发现NPRL2能够明显抑制肿瘤细胞增殖(P<0.05)。结论:成功构建pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体并转染至CNE1细胞,NPRL2可抑制肿瘤细胞的增殖。

NPRL2在结直肠癌中的抗肿瘤作用

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是全球最常见的癌症类型之一,其预后不佳提示明确CRC发病机制的重要性。既往研究表明,CRC的形成发展是多基因的,涉及多阶段变化,其中癌基因突变和肿瘤抑制基因(tumor suppressor gene,TSG)失活是促成CRC的重要因素。目前已经发现,氮通透酶调节因子-2(nitrogen permease regulator-like-2,NPRL2)作为抑癌基因在CRC中表达下调。NPRL2通过调节细胞周期进而抑制CRC的发生、发展,并且可以促进CRC细胞的凋亡和自噬,增强CRC细胞对多种化疗药物的敏感性。体内实验进一步验证了NPRL2在CRC中抗肿瘤和增强对化疗药物敏感性的作用。通过研究NPRL2在CRC中的抗肿瘤作用,有助于我们发现新的治疗手段。

结直肠癌癌组织NPRL2、PIVKA-Ⅱ的表达水平及临床意义研究

对NPRL2、PIVKA-Ⅱ的表达水平和临床意义进行分析。方法:把2018年6月-2020年7月我院接收的结直肠癌患者50例作为此次研究的对象,对其使用免疫组化检测,分析结直肠癌组织、正常结肠组织和癌旁组织中NPRL2和PIVKA-Ⅱ的表达水平及临床意义。结果:所有患者中结直肠癌组织内NPRL2表达率为36.00%,癌旁组织内NPRL2表达率为86.00%,正常结肠组织内NPRL2表达率为94.44%,而在这三种组织内,PIVKA-Ⅱ的表达率分别为52.00%、4.00%、0.00%,三种组织内PIVKA-Ⅱ和NPRL2表达率数据差异明显,P<0.05。结论:结直肠癌组织内,NPRL2和PIVKA-Ⅱ的表达水平均发生很大变化,和临床病理参数具有相关性,其可作为预后评估的依据。

NPRL2通过调控自噬参与去势抵抗前列腺癌对多西他赛耐药机制探究

研究探讨NPRL2通过调控自噬参与去势抵抗前列腺癌对多西他赛耐药机制。方法 回顾分析将我院于2017年9月-2019年12月期间接受的去势抵抗前列腺癌患者中,将这60例患者设为研究对象进行研究。把这60例患者随机换分成两个组,即观察组与对照组,将其中30例患者设为观察组,另30例患者设为对照组。患者在进行治疗时,对照组患者使用泼尼松进行治疗,而观察组患者使用多西他赛耐药物进行治疗。治疗结束,将两组患者的治疗效果以及发生不良反应情况进行对比。结果 与对照组相比较,观察组患者的治疗成效明显高于对照组,差异显著,(P<0.05)。与此同时,在发生不良反应方面,观察组患者出现不良症状的机率远远小于对照组患者,差异明显,(P<0.05)。结论 对于去势抵抗前列腺癌患者,在治疗期过程中采用NPRL2通过调控自噬参与多西他赛耐药进行治疗,治疗效果在显著提高的同时,其不良反应情况也相应减少,此治疗方式值得临床治疗上进行推广与使用。

RagA和Nprl2在果蝇肠道发育中的调节作用关系

动物胃肠道是食物消化和营养吸收器官,对机体健康至关重要。果蝇与哺乳动物的肠道在细胞组成、遗传调控等方面高度相似,是研究肠道发育的良好模型。体外培养细胞中的研究发现,Nprl2通过作用于Rag GTPase,抑制雷帕霉素靶点复合物1(target of rapamycin complex 1,TORC1)的活性,参与细胞代谢的调节。前期报道nprl2突变果蝇具有前胃增大、消化能力降低等肠道衰老相关表型。但对于Nprl2是否通过Rag GTPase调控肠道发育等方面尚不清楚。为了探究Rag GTPase在Nprl2调控果蝇肠道发育中的作用,本研究利用遗传杂交结合免疫荧光等方法对RagA敲减和nprl2突变果蝇的肠道形态、肠道细胞组成等方面进行研究。发现单独敲减RagA可以引起肠变粗、前胃增大等表型,敲减RagA能挽救nprl2突变体中肠道变细、分泌型细胞减少的表型,但并不能挽救nprl2突变体中前胃增大的表型。以上结果表明,RagA在肠道发育中发挥重要作用,Nprl2通过作用于Rag GTPase调节肠道细胞分化和肠道形态,但Nprl2对前胃发育和肠道的消化功能的调节可能通过不依赖于Rag GTPase的机制实现。

抑癌基因NPRL2对肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响

抑癌基因NPRL2(nitrogen permease regulator-like 2)在人类许多正常组织中均有明显的表达,而在人类多种肿瘤组织中的表达明显降低。该实验通过构建重组质粒pEGFP-N1-NPRL2并转染肾癌786-O细胞株,应用倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western blot检测NPRL2基因的表达情况;MTT法检测786-O细胞增殖的情况;流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡情况。结果显示:肾癌786-O细胞株转染重组质粒pEGFP-N1-NPRL2后,通过荧光显微镜可以观察到绿色荧光;RT-PCR和Western blot检测到NPRL2基因的转录和蛋白质表达水平明显增加(P<0.05);MTT法检测发现72 h时pEGFP-N1-NPRL2组、pEGFP-N1组和空白对照组的细胞D490值分别为0.654±0.030、1.528±0.022和1.572±0.036,pEGFP-N1-NPRL2组细胞的增殖较其他两组受到明显的抑制(P<0.05);流式细胞仪检测显示pEGFP-N1-NPRL2组、pEGFP-N1组和空白对照组的凋亡率分别为18.82%±0.40%、5.65%±0.12%和5.85%±0.07%,而处于G0/G1期的细胞比例分别为69.80%±1.40%、46.24%±1.30%和47.03%±0.45%,与其他两组相比,pEGFP-N1-NPRL2组的凋亡率显著增高而且G0/G1期细胞明显增多,表现出G0/G1期阻滞。提示抑癌基因NPRL2的转染可以抑制786-O细胞的增殖,并诱导其凋亡将细胞周期阻滞于G0/G1期。