Effects of NPY Gene on Total Number of Eggs at 300 Days of Age in Donglan Black-bone Chicken

In this study, PCR-RFLP technique was employed to detect the genetic polymorphism of NPY gene and analyze the effects of various genotypes on the total number of eggs at 300 days of age in 135 Donglan black-bone chicken. According to the results, there were three genotypes （AA, AB and BB） of NPYgene in Donglan black-bone chicken group. Different genotypes exhibited significant effects （P 〈 0. 05 ） on the total number of eggs at 300 days of age. The total number of eggs at 300 days of age of AA genotype was significantly higher than that of BB genotype （P 〈 0. 05）. Therefore, the polymorphic site of NPY gene could be used as a candidate molecular marker that affects egg laying in Donglan black-bone chicken.

兰州鲇NPY基因的克隆和表达分析

针对兰州鲇人工驯食转化率、苗种培育成活率低等问题,为利用基因编辑技术创制和培育易驯食兰州鲇新种质,开展了兰州鲇神经肽Y基因(NPY)的克隆及其表达分析研究。结果表明:兰州鲇NPY基因cDNA序列全长为775 bp,包括288 bp的开放阅读框,编码95个氨基酸,含有1个跨膜螺旋和1个信号肽胰腺激素类识别结合位点。兰州鲇NPY蛋白序列与南方鲇的一致性最高,为98.95%。荧光定量PCR检测发现NPY mRNA在脑组织中表达量最高,其次是下丘脑,肌肉中表达量最低。不同年龄雄性各组织中NPY mRNA表达水平均高于雌性;且雌雄性别组间均表现出随年龄的增长NPY mRNA表达下降的特征。利用原位杂交技术进行脑组织细胞定位发现,脑细胞中NPY主要在细胞质中表达;不同部位脑组织中主要以前脑的视前区、视顶盖和脑垂体,小脑的豆状核区域以及延脑的尾状核区域表达量较丰富。进一步进行饥饿补偿验证发现,饥饿可引起脑组织NPY表达量显著升高,摄食后NPY表达量显著下降。上述结果表明,NPY基因可能在兰州鲇生长和摄食过程中都具有重要作用,可作为对后续功能基因进行编辑的重要验证并创制新种质,对加快兰州鲇良种新品种选育具有重要的理论意义和技术支撑作用。

NPY、IGF-1基因对文昌鸡繁殖性状的遗传效应

采用PCR-RFLP技术检测文昌鸡NPY基因和IGF-1基因的多态性,并分析NPY、IGF-1基因对文昌鸡繁殖性能的影响。结果表明:300日龄NPY AA型个体平均产蛋数(88.95枚)与NPY aa型个体平均产蛋数(81.55枚)相比差异显著,NPY基因以加性方式作用,其中300日龄产蛋数加性效应值为-0.252(P<0.05)。IGF-1基因同样以加性方式作用,其中300日龄产蛋数加性效应值为0.199(P<0.05)。300日龄IGF-1 bb型个体平均产蛋数(89.03枚)与IGF-1 BB型个体平均产蛋数(82.61枚)相比差异显著,400日龄IGF-1 bb型个体平均产蛋数(137.84枚)与IGF-1 BB型个体平均产蛋数(127.82枚)相比差异显著;IGF-1 bb型个体平均连产天数(3.38 d)分别与IGF-1的BB、Bb型个体平均连产天数(2.96、2.78 d)相比差异均显著。

神经肽(NPY)基因多态性与邵伯鸡母系繁殖性状的关联性分析

以神经肽(NPY)基因为候选基因,利用PCR-SSCP技术检测该基因的SNPs,并分析基因多态性与邵伯鸡母系母鸡的开产日龄、开产蛋重、开产体重以及300日龄总产蛋数之间的关联性。结果显示,在NPY基因上发现1个SNP位点,带有1对等位基因A和B,基因频率分别为0.35和0.65;不同基因型仅与开产体重性状间有显著相关,表现为基因型AA个体的平均开产体重比基因型AB个体的平均开产体重重119.03 g,且差异显著(P<0.05),基因型AA个体的平均开产体重比基因型BB个体的平均开产体重重47.6 g,但差异不显著(P>0.05);基因型BB个体的平均开产体重比基因型AB个体的平均开产体重重71.43 g,差异显著(P<0.05)。

能量水平对文昌鸡开产前后NPY基因mRNA表达以及开产性状的影响

为研究不同能量水平日粮对文昌鸡开产性状和开产前后(15、20和25周龄)NPY基因在下丘脑和卵巢组织中表达的影响,根据文昌鸡各生长阶段能量需要量的95%、100%、105%分别设置为低(Ⅰ)、中(Ⅱ)、高(Ⅲ)3个能量组进行饲养,每组5个重复,每个重复40只,并准确记录开产日龄、开产体重和开产蛋重,同时运用RT-PCR方法分别分析各能量组鸡只在开产前后下丘脑和卵巢NPY基因mRNA的表达量。结果表明,高能促进文昌鸡开产日龄提前;15、20和25周龄,低能组NPYmRNA表达量均高于中能组和高能组;15、20和25周龄低、中、高能组卵巢中NPYmRNA表达量变化不大,无显著差异。结果提示,能量水平的改变能够调节文昌鸡下丘脑和卵巢NPY基因mRNA表达和性成熟时间。

PTD-NPY融合基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达

应用重叠延伸PCR方法扩增HIV-1TAT蛋白转导结构域(PTD)与鼠源神经肽Y(NPY)的融合基因,克隆目的片段并插入酵母表达载体pPICZαA,构建成重组表达质粒pPICZα-PTD-NPY。PCR和酶切鉴定及测序正确后,经限制性内切酶SacI线性化重组表达质粒并通过电转化整合到巴斯德毕赤酵母菌GS115的染色体基因组中。阳性重组酵母菌用含1%甲醇的培养基诱导其分泌表达。经过120h的诱导,取上清浓缩除盐后进行SDS-PAGE电泳,表明该系统成功表达了PTD-NPY融合蛋白,Western blotting实验证实表达产物具有特异性。获得真核表达的PTD-NPY融合蛋白,为下一步的应用研究提供了物质基础。

NPY基因SNPs与优质鸡睾丸性状的关联分析研究

本文采用PCR-RFLP技术,对560只黄羽肉公鸡的NPY基因3个酶切位点进行了多态性研究,并分析其与睾丸性状的关系。结果表明:rs3和rs19识别位点在隐性纯合子的情况下表现为较大的睾丸重(P<0.05)和睾丸指数,这两个位点可以作为睾丸性状的候选分子标记。

能量与NPY基因对文昌鸡开产性状的影响

为了研究日粮能量水平与神经肽Y(neuropeptide,NPY)基因对文昌鸡开产性状的影响,运用PCR-RFLP方法检测3组试验鸡群(Ⅰ组,低能组;Ⅱ组,中能组;Ⅲ组,高能组)NPY基因DraⅠ酶切位点的多态性,共得到3种基因型,并对其与开产性状间进行了方差分析。结果表明,日粮能量水平对开产日龄、开产体重、开产蛋重无显著影响(P>0.05),但是由高能到低能,开产日龄呈现由早到晚的趋势,开产蛋重呈现由低到高的趋势。NPY基因型对开产日龄、开产体重、开产蛋重无显著影响(P>0.05)。

大口黑鲈北方亚种和佛罗里达亚种NPY基因的DNA和cDNA克隆及序列分析

神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)在机体的摄食活动中发挥重要作用,是哺乳动物最重要的一种内源性促食欲因子。为了解大口黑鲈(Micropterus salmoide)NPY基因的结构及进一步研究该基因在大口黑鲈中的功能作用,采用RT-PCR和RACE技术,克隆了大口黑鲈北方亚种(M.salmoides salmoides)和佛罗里达亚种(M.salmoides floridanus)NPY基因c DNA序列,结果表明两亚种NPY c DNA均包括一个编码99个氨基酸的ORF框和长度为52 bp的5'非编码区(5'-UTR);采用PCR和基因组步移技术获得了长度分别为3 561 bp和3 565 bp的大口黑鲈北方亚种和佛罗里达亚种NPY基因DNA序列。序列分析结果表明,大口黑鲈北方亚种和佛罗里达亚种NPY基因由4个外显子和3个内含子组成。经MATINSPECTOR软件预测,在北方亚种和佛罗里达亚种启动子序列分布有TATA框、CAAT框、CCAAT-Box、GATA-Box等基本转录调控元件。实验在大口黑鲈两亚种NPY DNA序列间发现了6个单个位点碱基差异,与大口黑鲈北方亚种相比佛罗里达亚种启动子区域出现一个4个碱基的插入。不同物种间NPY基因的序列同源性分析表明大口黑鲈与鳜鱼和石斑鱼的NPY基因核苷酸同源性最高,达90%和88%,氨基酸同源性分别为93%和95%。

鸭的NPY基因克隆和适应性检验分析

根据已知的鸭近缘物种及哺乳动物的神经肽Y（Neuropeptide Y,NPY）基因序列设计引物,利用RT-PCR技术从高邮鸭生殖轴组织总RNA中克隆出NPY基因cDNA序列,采用生物信息学方法分析不同物种间序列同源性和进化关系,并利用PAML4b检测位点选择压力。序列分析结果表明,克隆获得的鸭NPY基因cDNA片段序列长度约300bp,其与近缘物种序列的相似性在92%~96%之间,与哺乳动物序列的相似性在77%~84%之间,与鱼类序列的相似性在33%~39%之间。在系统进化树的拓扑结构中,禽类、哺乳动物和鱼类分别位于独立分支,揭示的系统发育关系和物种进化相一致。序列适应性进化检验结果表明,哺乳动物NPY基因在进化过程中经历了正选择作用,而禽类和鱼类NPY基因经历了较强的净化选择作用。研究结果有助于了解NPY基因进化历程及结构与功能变异,为进一步研究其与鸭繁殖性能的关系提供了基础。

猪NPY受体Y1 cDNA的克隆及分析

[目的]研究猪NPY-Y1受体在猪激素分泌及发育生理功能中的调节作用。[方法]从初情期的苏姜猪母猪中提取下丘脑组织总RNA,RT-PCR扩增出NPY-Y1 cDNA,扩增产物克隆入pGEM-T easy载体中进行序列测定。[结果]试验扩增产物与GeneBank公布的猪NPY-Y1序列比较,其同源性达到100%。[结论]为下一步研究猪NPY-Y1基因的生理功能和作用机理奠定了基础。

气虚血瘀证血浆NPY、ET、CGRP的改变及相关性研究

目的 :同步观察气虚血瘀证患者血浆神经肽Y(NPY)、内皮素 (ET)、降钙素基因相关肽 (CGRP)的变化及其意义。方法 :用放射免疫分析法 (RIA)检测了 5 8例气虚血瘀证患者、2 3例青年健康者、15例老年健康者的血浆NPY、ET、CGRP水平。结果 :气虚血瘀组血浆NPY、ET水平明显高于青年健康组和老年健康组 (P <0 .0 1) ,同时 ,其血浆CGRP水平显著低于青年健康组和老年健康组 (P <0 .0 1)。老年健康组与青年健康组间血浆NPY、ET、CGRP水平均无显著性差异 (P >0 .0 1)。气虚血瘀组、青年健康组和老年健康组血浆NPY与ET、CGRP水平均无相关性 (P >0 .0 1)。老年健康组和青年健康组血浆ET、CGRP水平呈显著正相关 (P <0 .0 1) ,气虚血瘀组血浆ET、CGRP水平呈显著负相关 (P <0 .0 1)。结论 :血浆NPY、ET水平上升、CGRP水平下降可作为气虚血瘀证的微观诊断指标之一 ,在一定程度上反映气虚血瘀证患者病情的轻重。同步观察气虚血瘀证患者血浆NPY、ET、CGRP水平的动态变化 ,可作为判断病情进展和疗效的指标。

日粮能量水平与NPY基因对文昌鸡产蛋性能的影响

为研究日粮能量水平与NPY基因对文昌鸡产蛋性能的影响,600只文昌鸡随机分为3组(Ⅰ组,低能组;Ⅱ组,对照组;Ⅲ组,高能组),每组设置5个重复,每个重复40只试验鸡。运用PCR-RFLP方法检测3组试验鸡群NPY基因DraⅠ酶切位点的多态性,并与产蛋性能进行方差分析。结果表明:不同能量水平之间的文昌鸡300日龄体重差异显著(P<0.05);日粮能量水平与NPY基因对300日龄产蛋数产生明显的互作效应(P<0.05),AA基因型300日龄产蛋数在高能组比在低能组和对照组分别少20.02个和28.45个。

新生儿缺氧缺血性脑病血清IGF-I、NPY和CGRP水平检测的临床意义

目的探讨缺氧缺血性脑病患儿(HIE)血清IGF-I、NPY和CGRP水平的变化及临床意义。方法应用放射免疫分析法对38例HIE新生儿急性期与35例HIE新生儿恢复期进行了血清IGF-I、NPY和CGRP水平检测,并与35例正常新生儿作比较。结果 HIE患儿急性期血清IGF-I、CGRP水平显著低于正常新生儿组(P<0.01),而血清NPY水平又非常显著地高于正常新生儿组(P<0.01),至恢复期血清IGF-I、NPY和CGRP水平和正常新生儿仍有显著性差异(P<0.05)。结论血清IGF-I、NPY和CGRP在中枢神经系统中起保护作用,并与新生儿HIE的病理过程密切相关。

天柱番鸭NPY基因克隆及其在组织中的表达分析

试验旨在克隆天柱番鸭神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)基因,并分析其在天柱番鸭不同组织中的转录水平。以天柱番鸭产蛋期组织混合cDNA为模板,通过RT-PCR扩增天柱番鸭NPY基因的完整CDS区进行克隆测序,并结合生物信息学分析工具分析其同源性及遗传进化关系,同时进行NPY蛋白理化特性、亚细胞定位、信号肽、糖基化与磷酸化位点、二级结构、三级结构等预测,并对NPY基因在天柱番鸭不同组织中的转录水平进行检测。结果表明,天柱番鸭NPY基因CDS区全长294 bp,编码97个氨基酸,核苷酸序列与氨基酸序列同源性比对显示,NPY基因在不同物种间具有一定的遗传多样性,与绿头鸭亲缘关系最近;NPY蛋白为酸性不稳定蛋白,存在1个信号肽(第1-28位氨基酸),亚细胞定位为100%位于细胞外;存在1个功能结构域PAH,同时含有2个O-糖基化和丰富的磷酸化位点,空间结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。实时荧光定量PCR结果表明,NPY基因mRNA在天柱番鸭各组织中均有分布,在大脑中表达水平相对较高,在胰腺、腺胃中表达量次之,与其他组织间差异极显著(P<0.01),在肌胃中表达量最低。本试验结果为进一步研究NPY基因在调控家禽能量平衡、生长发育、脂肪沉积、繁殖性能等多种生理功能提供了参考。

猪发育期NPY-Y1和GPR54受体基因的表达规律研究

[目的]研究猪发育期NPY-Y1和GPR54受体基因的发育性变化。[方法]分别选取初生、60、120、初情期、180日龄的苏姜猪母猪各3头,采集下丘脑、垂体、卵巢组织样品,提取组织RNA,采用荧光定量PCR分析NPY-Y1、GPR54受体基因的发育性变化。[结果]下丘脑、垂体与卵巢内NPY-Y1 mRNA从初生到初情期表达量逐渐下降,在初情期达到最低,初情期后呈上升趋势。在3种组织内,初情期与其他时期NPY-Y1 mRNA表达量均存在显著差异(P<0.05);GPR54 mRNA从初生到初情期表达量逐渐上升,在初情期达到最高,初情期后呈下降趋势。在3种组织内,初情期也与其他时期GPR54 mRNA表达量也均存在显著差异(P<0.05)。[结论]猪发育期NPY-Y1基因与GPR54基因表达存在负相关性。

黄颡鱼神经肽Y基因(NPY)cDNA全序列的克隆及其表达特征分析

【目的】克隆黄颡鱼神经肽Y基因(NPY),研究其在不同组织及在饥饿情况下脑组织中的表达情况,探讨其在黄颡鱼摄食活动中的作用。【方法】利用RT-PCR和RACE技术,克隆黄颡鱼NPY基因的cDNA序列全长,对其编码氨基酸进行生物信息学分析;利用半定量PCR和实时荧光定量PCR技术,对NPY基因在黄颡鱼成体不同组织(脑、心脏、肝脏、肾脏、脾脏、胃、肌肉、鳃、性腺)中的表达情况进行研究,并检测饥饿不同时间(0,24,48,72,96,120,144和168h)以及饥饿168h重新投饵1,3和5h后黄颡鱼脑组织中NPY表达水平的变化。【结果】黄颡鱼NPY基因cDNA序列全长772bp,开放阅读框282bp,编码93个氨基酸,其与瓦氏黄颡鱼同源性最高(97%),与斑点叉尾鮰、建鲤、胭脂鱼、中华倒刺鲃的同源性分别为87%,72%,72%和70%。NPY基因在黄颡鱼成体组织脑、脾脏、肝脏、鳃、性腺中都有表达,而在心脏、肌肉、胃、肾脏中不表达,在脑中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01);在饥饿处理24～144h时,随饥饿时间的增加,黄颡鱼脑组织中NPY表达量升高,但在饥饿168h重新投饵3h后,NPY表达量即可下降到正常水平。【结论】NPY基因在黄颡鱼脑中大量表达,随着饥饿时间的增加脑组织中NPYmRNA表达量上升,重新投饵后其表达量很快下降到正常水平,表明NPY基因在黄颡鱼摄食活动中发挥着重要作用。

NPY基因多态性对番鸭产蛋性能的影响

为探讨NPY基因变异对天柱番鸭产蛋性能的遗传效应,测定了番鸭产蛋性能指标,采用PCR产物纯化直接测序法筛查NPY基因单核苷酸多态性(SNP)位点,并分析其对产蛋性能的影响。结果表明,在番鸭NPY基因启动子区检测到2个中度多态的SNP位点(A411G和A540G),每个SNP位点均产生3种基因型(AA、AG和GG),其基因型分布均未偏离Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。共发现3种单倍型和4种双倍型。单倍型H1和双倍型H1H2频率最高,均为0.467。在开产日龄上,基因型AG极显著(P<0.01)早于基因型AA,双倍型H1H1显著(P<0.05)早于其他双倍型;在开产蛋质量上,基因型AG显著(P<0.05)高于基因型AA,双倍型H3H3显著(P<0.05)高于H1H1和H1H2;在300日龄产蛋量上,基因型GG极显著(P<0.01)高于基因型AA、基因型AG显著(P<0.05)高于基因型AA,双倍型H3H3显著(P<0.05)高于H1H2和H2H2。综上,基因型AG和双倍型H3H3的番鸭产蛋性能优异,这2个突变位点可作为产蛋性能选择的遗传标记。

基于连接酶检测反应的NPY基因多态与清远麻鸡繁殖性状的相关性研究

为建立一个基于聚合酶链反应—连接酶检测反应的基因多态性检测系统,探讨清远麻鸡神经肽Y基因(NPY)的多态性,并分析其对清远麻鸡开产日龄、开产蛋重、开产体重、40周平均蛋重、50周平均蛋重以及52周产蛋数的遗传效应。应用PCR-LDR方法对NPY基因转录起始区4bp的缺失突变进行基因型分型。结果表明:基因型分型结果同直接测序分型结果一致。不同基因型个体间仅在开产体重上存在显著差异,BB型个体的开产体重显著低于AA和AB型个体。说明NPY基因多态影响清远麻鸡的开产体重。

高血压脑出血患者血肿中NPY和CGRP对继续出血及脑水肿的影响

目的 探讨高血压脑出血患者脑内血肿中神经肽 Y(NPY)与降钙素基因相关肽 (CGRP)与脑出血病理变化的关系。方法 采用放射免疫法测定 30例脑出血患者脑血肿和外周血浆中 NPY与 CGRP的含量。结果 血肿与患者血浆 NPY和 CGRP含量均高于对照组血浆水平。有继续出血者血肿 NPY和 CGRP含量高于非继续出血者的水平。血肿抽吸后 ,外周血中含量下降。结论 NPY和 CGRP两种物质增多是高血压脑出血继续出血、血肿扩大和脑水肿发生的重要病理机制之一。