NR5A1基因新突变致46,XY完全性性腺发育不良患者的临床诊治与遗传学分析

目的探讨由NR5A1基因新突变致46,XY完全性性腺发育不良(46,XY CGD)患者的临床特征及分子遗传学机制。方法回顾性分析1例社会性别为女性、染色体核型为46,XY患者的临床资料,并进行全外显子组及线粒体组基因检测。结果患者阴蒂肥大,存在尿道口及阴道口,且两者间无共同通道;超声提示存在始基子宫、双侧卵巢显示不清;性腺活检提示性腺为发育不良的睾丸组织;染色体核型为46,XY;全外显子组及线粒体组基因检测提示9号染色体上的NR5A1基因出现新的杂合错义突变,变异信息为:c.205C>T:p.Arg69Cys;母亲未携带该基因变异。结论46,XY CGD临床表现多样,NR5A1基因变异是其重要病因之一,为明确该病的临床诊断及发病机制提供依据。

湖羊NR5A1基因SNPs筛选及其与产羔数的关联分析

为探讨NR5A1基因能否作为湖羊产羔性状的候选基因,同时寻找与湖羊繁殖性能相关的分子标记,以高繁殖力湖羊为研究对象,采用DNA池结合测序方法筛选NR5A1基因在湖羊中的SNPs位点,并利用PCR-RFLP和AS-PCR方法进行多态位点分型,利用SPSS软件分析不同基因型与湖羊产羔数的相关性。结果表明,在湖羊NR5A1基因中检测到6个SNPs位点,分析发现g.6052A/G位点为Taq I酶切位点,其余5个位点处没有酶切位点存在。在湖羊群体中,g.3362G/C(GG、GC、CC)、g.4342G/A(GG、GA、AA)、g.4666C/T(CC、CT、TT)、g.6052A/G(GG、AG、AA)和g.6991T/G(TT、TG、GG)位点均检测到3种基因型,而g.5699C/G位点在湖羊群体中仅发现2种基因型GG和GC。6个位点的多态信息含量(PIC)从0.306到0.375不等,均属于中度多态(0.25<PIC<0.50),杂合度(He)从0.377到0.500,在这6个SNPs位点中,仅g.6052A/G位点处于Hardy-Weinberg平衡状态。连锁分析发现,g.3362G/C和g.6052A/G 2位点在湖羊群体中紧密连锁,二者共构建了8种单倍型组合,AAGG为主要的单倍型,占总数的35.90%,AGCG和AACG次之,分别占总数的20.30%和18.75%。关联分析发现g.6052A/G位点GG型湖羊的平均产羔数显著高于AA型(P<0.05)和AG型(P<0.05),其余位点的各基因型在湖羊的头胎产羔数、二胎产羔数、三胎产羔数和平均产羔数间差异均不显著。AAGG单倍型和AACG单倍型的二胎产羔数比AGCG单倍型的二胎产羔数分别多0.40(P<0.05)和0.53(P<0.01),差异显著。说明,NR5A1基因对湖羊产羔数有一定的影响,g.6052A/G位点、g.3362 G/C和g.6052A/G连锁可作为湖羊繁殖性能的有效遗传标记,用于湖羊的分子选育。

湖羊NR5A1基因全序列克隆和表达特征分析

以江苏特色绵羊品种——湖羊为研究对象,克隆湖羊NR5A1基因全序列,分析其序列特征,并对湖羊组织和大、小卵泡中NR5A1表达特征进行研究。结果表明,湖羊NR5A1基因全长19 016 bp,含6个外显子和5个内含子;编码区全长1 386 bp,编码461个氨基酸残基,包含经典的DNA结合区(DBD)和配体结合区(LBD)。RT-PCR结果显示NR5A1基因在湖羊组织中广泛表达,其中在卵巢中高表达,脾脏次之; qRT-PCR和Western blot结果显示在湖羊大卵泡中NR5A1 mRNA和蛋白质水平均显著高于小卵泡,表明NR5A1基因参与调控湖羊卵泡发育,并与繁殖性能有关。

46,XY女性性逆转患者的NR5A1基因突变分析

目的分析XY女性性逆转患者核受体亚家族5,组A,成员1(nuclear receptor subfamily 5 group A member 1,NR5A1)基因的基因突变情况。方法抽提样本外周血白细胞的DNA,对NR5A1的2～7外显子进行PCR扩增,扩增产物直接测序,重复实验和克隆测序实验验证检测到的突变,酶切分析筛查110名正常人群排除突变的多态性。结果在5例样本中未检出明显异常的突变,只在样本4中检出1个多态突变(p.G146A),该突变在正常对照人群中检出了37.3%的突变率。结论尽管在本研究中只检出1个基因多态突变,但结合国外报道,NR5A1的基因突变和性逆转的发生还是存在相关性。

湖羊转录因子CTCF基因序列分析及其对NR5A1基因转录活性的调控

转录因子CTCF在动物生长发育过程中发挥重要的调控作用,但其在绵羊中的序列特征、组织器官表达及功能目前尚不清楚。本研究以湖羊CTCF基因为研究对象,采用PCR方法克隆获得其编码区全序列,发现其序列全长2187 bp,编码727个氨基酸残基,含有11个连续的锌指结构域。组织器官表达谱分析发现CTCF基因在湖羊各个组织器官中广泛表达,在子宫中表达量相对较低,在胃中表达量相对较高。JASPAR在线软件预测发现核受体NR5A1基因内含子(翻译起始位点ATG前393 bp片段)含有3个CTCF结合位点,双荧光素酶试验结果显示,CTCF结合位点突变后NR5A1基因转录活性显著或极显著下降,表明CTCF可能通过调控NR5A1基因转录参与调控湖羊繁殖性能。

46,XY性发育障碍儿童NR5A1基因突变1例报告及文献复习

目的探讨NR5A1基因突变导致的46,XY性发育障碍(DSD)的临床表现和分子诊断。方法回顾分析1例社会性别为女性的46,XY DSD患儿的临床资料,并复习相关文献。结果社会性别为女性的11.5岁患儿,因偶然发现阴蒂肥大半个月就诊;初步系列实验室检查诊断考虑支持46,XY DSD,高促性腺激素性发育不良。全基因组外显子组DNA测序提示NR5A1基因,c.937 C>T,p.Arg313Cys杂合突变;母亲为杂合突变携带者,父亲无异常。结论临床表现为46,XY DSD,性腺发育不良、外生殖器女性化合并肾上腺功能不足;提示存在SF1基因突变的可能性,全基因组外显子基因测序可帮助明确诊断。

NR5A1基因变异致46,XY性发育异常1例患者的遗传学分析

目的分析1例性发育异常(DSD)患儿的临床特征,探讨其遗传学病因。方法选取2019年7月29日因原发闭经就诊于临沂市人民医院遗传咨询门诊的1例DSD患儿作为研究对象,收集其临床资料。应用染色体核型分析及实时荧光定量PCR检测Y染色体微缺失,分析患儿染色体是否存在异常。利用高通量测序对患儿及父母进行基因检测,对候选变异进行Sanger测序验证,对变异位点进行致病性评估。结果患儿年龄为13岁,社会性别女,存在原发性闭经,男性第二性征发育,超声检查未探及子宫及明确卵巢结构,可探及窄带样阴道低回声及弯曲阴茎海绵体样结构。患儿染色体核型为46,XY,Y染色体AZF区段不存在缺失。基因测序发现患儿存在母源的NR5A1:c.323delA(p.Q108Rfs*188)。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)遗传变异分类标准与指南,NR5A1:c.323delA变异评级为致病性变异(PVS1+PM2Supporting+PP4)。结论NR5A1:c.323delA变异考虑是该DSD患儿的致病原因,为临床诊断和治疗提供遗传学依据。

NR5A1基因变异致46,XY性发育异常15例的基因型及表型分析

目的通过分析15例NR5A1基因变异导致的46,XY性发育异常的临床及分子遗传学特点。方法回顾性分析2016年3月至2021年12月在郑州大学附属儿童医院诊断的46,XY性发育异常患者中NR5A1基因变异患儿的病例资料。对患儿进行全外显子组测序,确认候选位点,并进行Sanger测序验证。根据患儿疾病特点对患儿进行治疗并跟踪随访。结果15例患儿初诊年龄在0.17~14岁,其中5例以女性抚养、10例以男性抚养。性腺组织为睾丸,无残留Müllerian或卵睾丸结构,均有程度不同的外生殖器异常,外生殖器男性化程度(EMS)评分平均为4.8分,包括小阴茎(100.0%)、尿道下裂(86.7%)、阴囊未融合(46.7%)、睾丸位置异常(60.0%),其中尿道下裂为Ⅱ°~Ⅳ°。5例生长迟缓,均无皮肤色素沉着。患儿染色体核型均为46,XY,促肾上腺皮质激素、皮质醇水平、电解质均在正常范围,绒促性素激发试验5例反应正常,9例反应低下。抗苗勒管激素和抑制素B随着年龄增长而异常下降。15例患儿共检出14个NR5A1变异位点,变异多发生在第4外显子,其中9个变异位点为截至2022年12月在HGMD数据库未见收录。结论NR5A1基因变异致46,XY性发育异常临床表型广泛,外生殖器表现为程度不同的雄性化不足,肾上腺受累罕见。

Epididymis cell atlas in a patient with a sex development disorder and a novel NR5A1 gene mutation

This study aims to characterize the cell atlas of the epididymis derived from a 46,XY disorders of sex development(DSD)patient with a novel heterozygous mutation of the nuclear receptor subfamily 5 group A member 1(NR5A1)gene.Next-generation sequencing found a heterozygous c.124C>G mutation in NR5A1 that resulted in a p.Q42E missense mutation in the conserved DNA-binding domain of NR5A1.The patient demonstrated feminization of external genitalia and Tanner stage 1 breast development.The surgical procedure revealed a morphologically normal epididymis and vas deferens but a dysplastic testis.Microfluidic-based single-cell RNA sequencing(scRNA-seq)analysis found that the fibroblast cells were significantly increased(approximately 46.5%),whereas the number of main epididymal epithelial cells(approximately 9.2%),such as principal cells and basal cells,was dramatically decreased.Bioinformatics analysis of cell–cell communications and gene regulatory networks at the single-cell level inferred that epididymal epithelial cell loss and fibroblast occupation are associated with the epithelial-to-mesenchymal transition(EMT)process.The present study provides a cell atlas of the epididymis of a patient with 46,XY DSD and serves as an important resource for understanding the pathophysiology of DSD.

一例NR5A1基因新变异所致46,XY性发育异常的遗传学分析

目的探讨1例46,XY性发育异常(disorders of sex development,DSD)患儿的遗传学机制,并分析其基因型与表型的相关性。方法对患儿进行全外显子组测序,并对其NR5A1基因的第1~7外显子进行多重连接探针扩增检测。结果患儿表现为幼稚女童外阴,Tanner分期为1期。B超可见卵巢和子宫。患儿外周血染色体核型为46,XY,全外显子组测序发现其携带NR5A1基因第5外显子杂合缺失(chr9q33.3:127255298-127255438),为新发现的致病变异,遗传自母亲,父亲未见异常。结论46,XY DSD患儿主要表现为外生殖器男性化不足,NR5A1基因变异是其重要的遗传学病因。全外显子组测序提高了基因变异的检出率,为患儿家庭的遗传咨询提供了确切的依据。

NR5A1基因杂合突变所致新表型——46，XX性发育障碍

目的 总结新近发现的NR5A1基因突变所致46，XX卵睾性发育障碍患儿的临床特征，加深专科医生对NR5A1基因突变导致的临床疾病谱的认识。方法 报道1例由NR5A1基因杂合突变所致46，XX卵睾性发育障碍病例，并复习2016年7月以来国外报道的11例类似病例。结果 社会性别为女性的5.6岁患儿，因发现阴蒂肥大5年余就诊。患儿性腺分别位于右侧腹腔内和左侧腹股沟区，组织学均为卵睾。经探查，患儿阴道呈盲端伴子宫缺如。外院2次染色体检查均为46，XX，血SRY基因阴性，NR5A1基因c.274C〉T（p.Arg92Trp）杂合突变，父母均不携带此突变。结论 本文在国内首次报道了由NR5A1基因c.274C〉T（p.Arg92Trp）杂合突变所致的新表型——46，XX卵睾性发育障碍。结合文献复习，该突变呈不完全外显，在46，XX和46，XY个体均可致病，轻重程度不一。致病机制可能与突变蛋白与DNA结合障碍，导致卵巢拮抗睾丸发育因子的表达异常有关。

雄蚕益肾方对肝郁肾虚阳痿大鼠性腺轴及睾丸P450scc、StAR、NR5A1表达的影响

目的:探讨雄蚕益肾方对肝郁肾虚阳痿大鼠性腺轴及睾丸P450scc、StAR、NR5A1表达的影响。方法:50只8周龄SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、他达拉非组、疏肝益肾组和雄蚕益肾方低、中、高剂量组,采用氢化可的松注射液肌注加束缚四肢复合造模方法连续14d诱发肝郁肾虚阳痿模型。造模成功后,他达拉非组给予他达拉非片溶液0.52mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,疏肝益肾组给予疏肝益阳胶囊溶液0.3125g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,雄蚕益肾方低、中、高剂量组给予10.4、20.8、41.6g·kg^(-1)·d^(-1)雄蚕益肾方溶液灌胃,空白组、模型组给予等体积蒸馏水灌胃,各组每日均早、晚各灌胃1次,连续28d。ELISA法测定血清中睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)含量,HE染色光镜下观察睾丸微细结构,免疫组化法测定睾丸P450scc、StAR、NR5A1表达情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清中T含量及睾丸中P450scc、StAR、NR5A1表达均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,疏肝益阳组和雄蚕益肾方各剂量组血清T及睾丸中P450scc表达均显著升高(P<0.05);雄蚕益肾方各剂量组大鼠睾丸中StAR表达均显著升高(P<0.05),血清FSH水平均显著降低(P<0.05);雄蚕益肾方高、中剂量组大鼠睾丸中NR5A1表达显著升高(P<0.05)。结论:雄蚕益肾方可调节性腺轴和提高P450scc、StAR、NR5A1表达。

特发性低促性腺激素性腺功能低下患者NR5A1基因突变分析

目的 研究特发性低促性腺激素性腺功能低下（idiopathic hypogonadotropic hypogonadism,IHH）患者NR5A1基因新的突变位点.方法 收集病例组IHH患者61例,该组患者核型正常,头颅MRI扫描正常,同时排除其他内分泌疾病,正常对照组100名.提取两组实验对象外周血白细胞DNA,分别设计NR5A1基因2～7号外显子引物,聚合酶链式反应扩增其编码序列和剪接位点,采用双脱氧末段终止法测序.将测序结果与正常人基因组进行比对,同时对患者进行家系调查,收集临床资料,并对阳性患者基因型和临床表型进行分析.结果 61例IHH患者中6例患者出现了NR5A1基因的碱基改变.通过对100个种族及年龄匹配的对照组进行分析,没有发现NR5A1基因突变位点.结论 病例组NR5A1基因检测出1种有意义的碱基改变,该突变可能与核型正常同时肾上腺功能正常的IHH男性患者发病有关.

四川地区46,XY女性性逆转患者的NR5A1基因突变分析

目的探究46,XY女性性逆转患者与核受体亚家族5组A成员1(nuclear receptor subfamily 5 group A member 1,NR5A1)基因突变的相关性。方法通过染色体核型分析选取符合条件的样本,提取外周血全基因组DNA,对NR5A1基因的6个(2~7)外显子进行PCR扩增,所得产物经过电泳后直接测序,并进行重复实验验证检测到的突变,同时以102名正常人群作为对照组,排除基因多态性的影响。结果在7例样本中未检出新的突变,在样本1,4,5中检出1个多态突变(p.G146A),该突变在正常对照人群中检出了43.14%的突变率;在样本1和3的5号外显子中发现Q314Q(C.942G>A,rs201103618),在样本2的4号外显子发现了P130P(C.390G>C),在其他外显子中没有发现突变。结论分析本研究的实验结果并结合国内外的相关资料报道,在四川地区,NR5A1基因突变和46,XY女性性逆转的发生可能存在相关性,进一步的深入研究是有必要的。

NR5A1基因突变的研究进展

NR5A1基因突变是46,XY性发育异常(46,XY disorder of sex development,46,XYDSD)常见的病因之一,为常染色体显性遗传病,其临床表型多样。46,XY性腺发育不良是最常见的临床表现,特定位点突变的患儿可出现肾上腺功能不良,一些患儿的身高可受影响。近年来越来越多的研究证明,NR5A1基因突变可以导致46,XX卵睾型DSD和46,XX睾丸型DSD。该病可以导致高促性腺性性腺功能不良,故LH和FSH升高,尤其是FSH升高明显,故LH/FSH降低是其特点。NR5A1基因突变的治疗主要是对症治疗,性别认定需要结合多方面的因素,患儿在青春期前可以使用GnRHa抑制性腺发育以避免性腺功能早衰。该文就NR5A1的研究进展进行综述。

过硫谷胱甘肽可改善高脂食物导致的雄鼠低睾酮水平状态

目的探究过硫谷胱甘肽(glutathione persulfate,GSSH)是否可以改善雄性肥胖小鼠的低睾酮水平,并探讨其作用机制。方法将45只小鼠平均分为3组,低脂饮食(low-fat diet,LFD)组:喂LFD 10周,随后45 d继续LFD同时每天腹腔注射生理盐水(normal saline,NS),记为LFD+NS组(n=15);高脂饮食(high-fat diet,HFD)组:喂HFD 10周,随后45 d继续HFD同时每天腹腔注射NS,记为HFD+NS组(n=15);HFD+GSSH组(n=15):HFD 10周,随后45 d HFD同时每天腹腔注射GSSH(200 mg/kg)。处理结束后所有小鼠眼眶取血,断颈处死小鼠并解剖取出睾丸,分别用ELISA、qPCR以及Western blotting的方法检测小鼠血清睾酮和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平、睾酮关键合成酶(StAR、3β-HSD、Cyp11a1、Cyp17a1)以及抗氧化蛋白(StAR、3β-HSD、NR5A1、EHD3)表达水平等。此外,用100μmol/L的GSSH处理小鼠睾丸碎片后检测睾酮合成酶表达水平。最后用50μmol/L和100μmol/L的GSSH分别处理小鼠睾丸间质TM3细胞株24 h后,加入100μmol/L的H_(2)O_(2),继续培养TM3细胞24 h,然后收集细胞检测NR5A1、SOD与Nrf2蛋白表达水平。结果①给药结束后,LFD+NS组、HFD+NS组与HFD+GSSH组小鼠的体质量分别是(30.67±1.22)g、(40.43±1.56)g、(33.30±0.95)g;HFD+NS组体质量增加了24.53%,给药前后差异有统计学意义(P=0.002),而LFD+NS组、HFD+GSSH组的体质量在给药前后差异均无统计学意义(均P>0.05)。②HFD+NS组小鼠睾酮浓度为(12.9±1.7)μg/L,显著低于LFD+NS组[(18.3±1.2)μg/L],差异有统计学意义(P=0.020);HFD+GSSH组小鼠睾酮浓度为(25.4±2.1)μg/L,显著高于HFD+NS组,差异有统计学意义(P=0.030)。RT-PCR检测结果显示,与LFD+NS组小鼠相比,HFD+NS组小鼠睾丸所有被检测的睾酮合成关键基因(StAR、3β-HSD、Cyp11a1及Cyp17a1)表达水平都显著下降(P=0.003、P=0.007、P<0.001、P<0.001)。这些基因的表达水平则在HFD+GSSH组小鼠睾丸中得到了恢复(P=0.002、P<0.001、P<0.001、P=0.006)。③与LFD+NS组小鼠[(9.00±1.59)nmol/mL]相比,HFD+NS组小鼠血清MDA水平[(10.61±1.73)nmol/mL]显著升高(P=0.016);与HFD+NS组小鼠相比,HFD+GSSH组小鼠血清MDA水平[(9.23±0.94)nmol/mL]下降,且具有统计学意义(P=0.048)。④HFD+NS组的肥胖小鼠睾丸中NR5A1、EHD3、StAR与3β-HSD蛋白水平与LFD+NS组小鼠相比明显下调(P=0.002、P=0.012、P=0.004、P=0.043),HFD+GSSH组小鼠睾丸中NR5A1、EHD3、StAR与3β-HSD蛋白水平与HFD+NS组的肥胖小鼠相比则显著上升(P<0.001、P=0.017、P=0.004、P<0.001)。⑤TM3细胞在H_(2)O_(2)的存在下,NR5A1、Nrf2与SOD的表达水平皆发生显著下调(P<0.001、P=0.002、P=0.004)。结论GSSH通过提高睾酮合成所需关键基因表达而改善HFD喂养的雄鼠睾酮水平。

利用 cut&tag 技术探究 LHX9 基因在颗粒细胞的调控机制

目的:在人卵巢颗粒细胞癌细胞株KGN中探索转录因子LHX9下游主要的靶基因及其调控。方法:首先我们采用实时荧光定量PCR观察KGN细胞在卵泡刺激素(FSH)干预前后性腺分化和性激素合成过程中重要基因的表达情况,同时我们利用cut&tag测序技术在两组细胞中识别LHX9下游靶基因,并采用双荧光素酶报告实验对重要靶基因NR5A1的调控进行了验证。结果:实时荧光定量PCR结果显示,通过加FSH处理12小时后,LHX9和NR5A1基因的mRNA水平表达降低,相反的,StAR和CYP19A1基因的mRNA水平表达增高;通过cut&tag测序技术和生物信息学分析,我们发现LHX9下游基因主要分布在内吞作用、细胞衰老、肿瘤相关通路、细胞周期、凋亡、卵母细胞减数分裂、雌激素信号转导等通路上。LHX9可以转录调控性腺分化以及类固醇激素合成的一些重要基因,其中包括NR5A1和SOX9等,荧光素酶报告基因证实了LHX9可以直接结合NR5A1基因的启动子区。结论:本研究利用cut&tag测序技术,发现转录因子LHX9对性腺分化和性激素合成的关键基因有转录调控作用,对深入理解LHX9基因对生殖系统的作用具有重要意义。

类固醇生成因子-1基因突变及其相关临床表型研究进展

类固醇生成因子(SF-1,NR5A1)是在性腺及肾上腺发育过程中起关键调控作用的转录因子。NR5A1基因突变是性发育异常(disorders of sex development,DSD)常见病因之一,目前临床报道的病例多为杂合突变。该基因突变患者临床表型复杂,早期报道的患者表现为不同程度的46,XY性腺发育不良,近年发现该基因突变与男性无精症或女性的卵巢早衰有关,多数患者无肾上腺皮质功能不全。目前认为患者临床表型异质性,可能与不同基因突变对转录活性的功能影响、下游靶基因(如SOX9等)基因剂量效应以及寡基因突变等的遗传背景等相关。通过对NR5A1突变的基因型和相关表型开展研究,有助于人们深入理解性腺发育的过程及其调控机制。