SYBR荧光实时定量PCR检测子宫颈鳞癌组织NRDR及其选择性剪接亚型mRNA表达

目的检测子宫颈鳞癌组织中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)-dependent retinol dehydrogenase/reductase,NRDR]及其选择性剪接亚型NRDRB1 mRNA的表达,建立SYBR实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测NRDR及其选择性剪接亚型mRNA的方法,为准确、快速分析NRDR、NRDRB1基因表达奠定基础。方法根据子宫颈鳞癌组织中NRDR、NRDRB1基因序列,设计并合成引物,将逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增的基因片段克隆至pGEM-T easy载体,重组质粒经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后,作为阳性克隆标准品,用于标准曲线的制备,由此可定量检测出每一样品模板中NRDR、NRDRB1起始拷贝数。结果阳性克隆标准品制作的标准曲线可显示循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系(NRDR:r=0.994,NRDRB1:r=0.997),可用于NRDR及其选择性剪接亚型基因表达的起始拷贝数定量测定。结论 RQ-PCR方法较常规PCR技术更为准确、特异、灵敏,对定量检测及研究NRDR及其选择性剪接亚型表达有积极意义。

一种从动物组织中提取高质量总RNA的方法

RNA提取技术是分子生物学研究中经常应用的最重要的实验技术.简要介绍了一种高纯度、高产量的从动物组织中提取总RNA的方法.该方法具有实用性强、重复性好的特点.提取的RNA无DNA等污染物,并且其产量、纯度完全能满足分子克隆和基因表达研究的需要.利用此方法提取牛组织的总RNA,进行了NRDR基因在牛组织中的表达分布研究.