抗人NRP1单克隆抗体的活性鉴定及初步应用

目的鉴定抗人神经菌毛素1(neuropilin1,NRP1)单克隆抗体的生物活性并利用该抗体检测常见肿瘤细胞株NRP1蛋白的表达情况。方法腹水法制备4株抗NRP1单克隆抗体并用rProtein A亲和柱纯化抗体,间接ELISA检测4株抗体的滴度水平,Western blot分析4株抗体结合NRP1蛋白的特异性,流式细胞术分析4株抗体结合NRP1蛋白的亲和力,共聚焦免疫荧光实验进一步验证抗体结合NRP1蛋白的能力;细胞免疫组织化学染色检测14株肿瘤细胞表达NRP1蛋白的情况。结果 4株抗体均能特异结合NRP1蛋白,其中A6结合NRP1能力最强,能结合在表达NRP1蛋白的细胞膜表面。细胞免疫组织化学染色结果显示NRP1在HepG2、C6、HEK293、BEL-7402、MDA-MB-453呈高水平表达,在U87、MGC803、MCF7、MDA-MB-231中表达水平相对较弱,而在U251、BGC823、H6、HT-29的表达介于两者之间,在SMMC-7721细胞中未检测到表达。结论 4株抗NRP1单克隆抗体均能特异结合NRP1蛋白,多种肿瘤细胞株均不同程度表达NRP1蛋白,为进一步探讨NRP1蛋白与肿瘤发生发展的关系奠定了基础。

胃癌中VEGF、NRP1和干细胞标志物CD44的表达及相关性

目的探讨VEGF、NRP1和干细胞标志物CD44在胃癌组织中的表达及三者间的相关性。方法应用高通量组织芯片技术和免疫组化SP法检测72例胃癌和52例正常胃组织中VEGF、NRP1和CD44蛋白的表达,并分析三者之间的相关性以及与胃癌临床病理特征的关系。结果 (1)胃癌组织中VEGF、NRP1和CD44蛋白阳性率分别为76.4%、66.7%、83.3%,三者在胃癌组织中的表达显著高于正常胃组织,差异均具有统计学意义(P均<0.01)。(2)VEGF、NRP1蛋白表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移、临床分期有关(P均<0.05);CD44表达与Lauren分型、分化程度、淋巴结转移、临床分期有关(P均<0.05)。(3)胃癌组织中VEGF、NRP1和CD44蛋白的表达均呈正相关(rs=0.578,rs=0.278,rs=0.316,P均<0.05)。结论 VEGF、NRP1和干细胞标志物CD44在胃癌中均呈高表达,且与胃癌的恶性生物学行为密切相关。VEGF与NRP1之间可能存在协同作用,二者均与干细胞标志物CD44的表达密切相关,其具体机制有待进一步研究。

Nrp1、Nrp2及SEMA3F在口腔癌组织及TCa、ACC细胞系中的表达及其可能的作用

目的研究SEMA3F及其受体Nrp1和Nrp2在口腔癌组织和细胞(ACC2,ACCM和TCa)中的表达情况,并推测其在口腔癌生成中的可能意义。方法应用RT-PCR和Western bloting以及免疫组化法检测SEMA3F、Nrp1及Nrp2在口腔癌(ACC2,ACCMand TCa)组织和细胞中的表达情况。结果在所有口腔癌组织和癌细胞中均可检测到Nrp1和Nrp2的表达,但Nrp2相对表达较弱。Western bolting、RT-PCR提示Nrp1呈高表达,Nrp2及SEMA3F均表达较低。在免疫组织化学中显示癌及癌周组织中Nrp1均呈高表达,且癌巢中的表达明显高于癌间隙组织,Nrp2及SEMA3F呈较弱表达。结论提示在肿瘤的发展进程中,Nrp1可能对肿瘤本身的发生,增殖及肿瘤的血管生成均可能起到了重要的作用。

Sema3A/Nrp1信号轴在慢性牙周炎牙周组织中的表达及在牙周骨质破坏中的作用

目的:研究轴突导向蛋白3A(semaphorins3A,Sema3A)及其受体神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,Nrp1)在慢性牙周炎发生发展中的作用。方法:20只SD大鼠随机分为2组(n=10),实验组建立慢性牙周炎模型,对照组常规饲养,8周后处死。micro-CT测量大鼠釉牙骨质界到牙槽嵴顶距离(CEJ-ABC),免疫组化染色计算Sema3A/Nrp1阳性染色积分光密度,并进行相关性分析。门诊收集慢性牙周炎样本及正常样本各10例,进行免疫荧光和qRT-PCR检测。结果:实验组釉CEJ-ABC明显高于对照组(P<0.05),Sema3A/Nrp表达强度明显低于对照组(P<0.05),CEJ-ABC与Sema3A/NrP呈负相关(p<0.05)。人牙周炎样本Sema3A/Nrp1荧光强度及mRNA相对表达量均低于对照组(P<0.05)。结论:Sema3A/Nrp1表达量的减少参与了慢性牙周炎骨破坏进程。

胃癌中神经纤毛蛋白-1(NRP1)表达及其与肿瘤微环境免疫细胞浸润关系的研究

目的采用生物信息学分析,探讨神经纤毛蛋白-1(NRP1)在胃癌中的表达与肿瘤免疫微环境中免疫细胞浸润的相关性及其对患者预后的影响。方法应用TIMER数据库分析NRP1在胃癌中的差异性表达,分析NRP1表达与免疫细胞浸润之间的相关性,进一步分析NRP1基因的不同体细胞拷贝数变化与免疫细胞浸润之间的关系,多因素生存分析NRP1表达与肿瘤免疫细胞浸润对胃癌患者预后的影响,最后应用Kaplan-Meier plotter数据库计算不同NRP1表达水平胃癌患者的至第一次进展时间(FP)和总生存期(OS)。结果TIMER数据库基因差异表达分析显示,NRP1在胃癌肿瘤组织中较正常组织中特异性高表达(P<0.001)。其次,Kaplan-Meier plotter生存分析显示高表达NRP1的胃癌患者显示较短的至第一次无进展时间(24.3月对比49.5月,P=0.0059)和总生存期(34.7月对比70.4月,P=0.0036)。进一步分析显示NRP1表达与胃癌肿瘤微环境中的肿瘤纯度呈负相关(r=-0.173,P=7.21e-04),其表达与胃癌微环境中CD8+T细胞、巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞呈正相关,且差异具有统计学意义。再次,在胃癌中NRP1的体细胞拷贝数变化中的臂及获得与6种免疫细胞的浸润均相关。最后,多因素生存分析显示,在胃癌患者中,NRP1表达(HR:1.43,95%置信区间:1.13-1.82,P=0.003)和巨噬细胞浸润(HR:76.53,95%置信区间:3.43-1705.40,P=0.004)是影响其预后的独立的影响因素。结论NRP1在胃癌中特异性高表达,其高表达是胃癌预后不佳的影响因素,NRP1表达与肿瘤免疫微环境中免疫细胞浸润相关,巨噬细胞浸润和NRP1表达是影响胃癌预后的因素。

miR-212通过靶向NRP1调节结肠癌SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答

目的:探讨miR-212在SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答中的调控作用,并初步分析其调控机制。方法:结肠癌SW480细胞分别转染mimic、miR-NC或miR-212-5p,RT-PCR检测神经纤毛蛋白1(NRP1)和miR-212-5p表达水平并进行相关性分析;TargetScan预测miR-212-5p潜在靶向基因NRP1,荧光素酶实验验证靶向关系;SW480细胞单独或联合转染miR-212-5p和pcDNA-NRP1,RT-PCR检测miR-212-5p和NRP1 mRNA表达水平,Western blot检测NRP1蛋白表达水平;流式细胞术分选干细胞阳性标记(CD44+)比例,Western blot检测性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体5(LGR5)蛋白表达;ELISA测定SW480细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL-4蛋白含量,RT-PCR检测IL-6和IL-4 mRNA表达水平。结果:与Control组相比,miR-212-5p显著上调SW480肿瘤干细胞miR-212-5p表达(P<0.05),下调NRP1表达(P<0.05),抑制CD44+、SOX2、LFR5表达(P<0.05),促进炎症反应和免疫应答(P<0.05);与NRP1组相比,miR-212-5p明显抑制因NRP1上调的CD44+、SOX2和LGR5表达(P<0.05),促进因NRP1下调的炎症因子表达(P<0.05)。结论:miR-212-5p靶向抑制NRP1表达,调节结肠癌SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答。

超声检测老年前列腺癌患者血流分级与术后组织中NRP1和NRP2的关系

临床常通过血清学中前列腺特异抗原（PSA）等肿瘤相关标志物的检测以早期发现肿瘤，但由于其特异性差，使其在临床中的应用并不理想。研究显示前列腺癌发生中血管生成相对于正常组织来说明显增多。临床上观察血流最简便而无创的是彩色多普勒超声检测血流分级。神经纤毛蛋白（NRP）1和NRP2是内皮细胞表面的一种受体，其对肿瘤的进展和血管形成均有促进作用。在超声检测中的血流分级提示器官内的血液流量，由于超声检测的无创性，早期通过超声将血流分级与肿瘤组织中的NRP1和NRP2联系起来，可能对早期判断肿瘤的生物学行为有一定意义。本文关注血流分级与术后组织中NRP1和NRP2的关联性。

温阳化浊通络方对系统性硬化病小鼠Sema3A/Nrp1信号通路的影响

目的研究温阳化浊通络方(WYHZTLF)对系统性硬化病(systemic sclerosis,SSc)小鼠信号素3A(semaphorin 3A,Sema3A)/神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,Nrp1)信号通路的影响,探讨其治疗SSc的作用机制。方法构建SSc小鼠模型,分为对照组、模型组、温阳化浊通络方低(21 g·kg^(-1))、中(42 g·kg^(-1))、高(84 g·kg^(-1))剂量组和Sema3A抑制剂表没食子儿茶素没食子酸酯组(epigallocatechol gallate,EGCG),连续灌胃给药4周,对照组和模型组给予生理盐水处理。HE染色观察皮肤病理损伤及真皮厚度;免疫组织化学法检测皮肤组织血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)表达水平;Western blot检测皮肤组织Sema3A、Nrp1及VEGFA的表达水平;ELISA法检测小鼠血清Sema3A表达水平。结果与模型组相比,温阳化浊通络方明显缓解了SSc小鼠的皮肤病变,对真皮厚度有明显的抑制作用,降低了皮肤组织VEGFA的蛋白表达水平,同时抑制了皮肤组织及血清中Sema3A/Nrp1信号通路的蛋白表达水平。结论温阳化浊通络方可能通过抑制Sema3A/Nrp1信号通路蛋白表达水平,降低VEGFA的表达,改善SSc血管损伤。

非小细胞肺癌中NRP1和C-MET的表达与血管生成的关系

目的检测非小细胞肺癌中(NRP1)和(C-MET)的表达及对CD34阳性的微血管密度(MVD)的作用。方法选择93例非小细胞肺癌术后留取的蜡块及临床资料作为观察组,选择72例正常的肺组织作为对照组,应用免疫组织化学技术检测两组中NRP1、C-MET和CD34蛋白的表达,观察NRP1、C-MET和MVD在不同临床病理特征中的表达差别。结果观察组中NRP1、C-MET蛋白表达的阳性率和MVD明显高于对照组,观察组中NRP1、C-MET蛋白表达的阳性率和MVD的表达均与肿瘤的胸膜侵犯、淋巴结转移、分化程度、脉管浸润及Ki67的表达密切相关;观察组中NRP1和C-MET、NRP1和MVD、C-MET和MVD的表达具有正相关性。结论非小细胞肺癌组织中NRP1及C-MET高表达参与肿瘤的进展,二者对CD34阳性的血管生成可能有一定促进作用。

NRP1和TGF-β1 在涎腺腺样囊性癌组织中的表达与意义

目的:检测NRP1、TGF-β1在涎腺腺样囊性癌(SACC)组织的表达水平,分析NRP1、TGF-β1与SACC的癌症机制可能存在的相关性。方法:以免疫组化SABC法分别检测NRP1和TGF-β1在51例SACC组织、20例涎腺正常组织中的表达水平。结果:在SACC组织中,NRP1和TGF-β1的阳性细胞表达率(62.7%和58.8%)均高于涎腺正常组织(35.0%和30.0%)(P<0.05)。NRP1和TGF-β1在SACC组织中的表达水平与肿瘤的组织学类型、临床分期、肿瘤细胞是否侵犯到颈部淋巴结以及是否侵犯到周围神经有关(P<0.05),而与患者的性别、患病年龄相关性无统计学意义(P>0.05)。NRP1和TGF-β1在SACC组织中的表达呈正相关(r_(s)=0.344,P=0.014)。结论:NRP1、TGF-β1与SACC的病情发展相关。

pcDNA3.1(+)-NRP1真核表达载体的构建与鉴定

[目的]从人角质形成细胞系HaCaT中克隆NRP1(Neuropilin-1)基因全长cDNA,构建含NRP1基因的重组真核表达载体,为下一步的NRP1基因功能研究奠定基础。[方法]采用RT-PCR法从人角质形成细胞系HaCaT中扩增NRP1基因全长cDNA,扩增产物通过TA克隆连接到pMD18-T载体进行测序鉴定,然后通过双酶切将全长cDNA克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),最后得到pcDNA3.1(+)-NRP1重组质粒。[结果]成功克隆NRP1基因全长cDNA,并成功构建了pcDNA3.1(+)-NRP1真核表达载体。[结论]pcDNA3.1(+)-NRP1真核表达载体的成功构建可以为NRP1基因功能的进一步研究及其临床基因治疗奠定实验基础。

VEGF/VEGFR2/NRP1与胶质瘤干细胞血管微环境及其靶向分子成像

血管内皮生长因子(VEGF)/血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)/神经纤毛蛋白1(NRP1)信号通路与胶质瘤干细胞(GSC)血管生成过程具有密切的关系。对VEGF/VEGFR2/NRP1进行靶向分子成像,可以对肿瘤血管生成在肿瘤生长、浸润、迁移等过程中的作用有更好的理解,从而有利于肿瘤的早期诊断、合理治疗及判断预后。就VEGF/VEGFR2/NRP1信号通路与胶质瘤干细胞血管微环境的关系以及对其靶向分子成像作一综述。

Sema3A/Nrp1信号轴在慢性牙周炎牙周组织中的表达及在牙周骨质破坏中的作用

目的探究Sema3A/Nrp1信号轴在慢性牙周炎牙周组织中的表达及在牙周骨质破坏中的作用。方法选择2015年4月-2016年12月收治的已确诊慢性牙周炎患者53例作为研究组,另选同期来我院进行健康体检无口腔疾病的健康志愿者41例作为对照组。采用聚合酶链式反应法检测牙周组织中Sema3A和Nrp1的m RNA相对表达量,采用酶联免疫吸附法测定两组研究对象牙周组织中脑信号蛋白3A(Sema3A)、神经纤毛蛋白1(Nrp1)、炎性分子、骨代谢分子、骨代谢产物的含量。结果研究组中Sema3A,Nrp1,β-连环蛋白(β-catenin),破骨细胞形成抑制因子(OPG)含量明显低于对照组(P<0.05);几丁质酶3样蛋白1(YKL-40),CXC趋化因子配体16(CXCL16),相关粘附分子1(ICAM1),高迁移率蛋白1(HMGB1),核因子κB受体活化因子配体(RANKL),5-脂氧合酶(5-LOX),白三烯B4(LTB4),Ⅰ型原胶原羧基末端前肽(PICP),Ⅰ型胶原交联C端肽(CTX),Ⅰ型胶原交联N端肽(NTX)的含量明显高于对照组(P<0.05)。YKL-40、CXCL16、ICAM1、HMGB1、RANKL、5-LOX、LTB4、ICTP、NTX、CTX在CP患者牙周组织中的含量与Sema3A和Nrp1表达量呈负相关,β-catenin、OPG、PICP含量与Sema3A和Nrp1表达量呈正相关。结论 Sema3A/Nrp1信号轴在慢性牙周炎牙周组织中的表达受到抑制,进而对牙周骨质破坏有抑制作用。

慢病毒介导Nrp1过表达促进卵巢癌细胞增殖

目的研究神经纤毛蛋白1(neuropilin 1,Nrp1)在卵巢癌中的作用,探讨其作为治疗靶点的可行性。方法克隆Nrp1基因,采用慢病毒包装体系包装过表达Nrp1的重组慢病毒,感染卵巢癌SKOV3细胞,嘌呤霉素筛选稳定高表达Nrp1的SKOV3细胞,通过细胞计数检测其增殖能力的改变。结果成功包装了过表达Nrp1重组慢病毒,筛选得到了稳定高表达Nrp1的SKOV3细胞,其增殖能力显著高于对照细胞(t>t_(0.05(4)),P<0.05)。结论 Nrp1促进卵巢癌SKOV3细胞增殖,可能在卵巢癌发生发展过程中起促进作用。

PLC／PIP2信号通路在辐射诱导NRP1＋Treg细胞中的作用机制

目的观察X射线照射后小鼠胸腺细胞中CD4＋CD25＋NRP1＋Treg细胞数量及TGF—β1分泌量的变化，并探索PLC／PIP2信号通路在其中的作用机制。方法36只ICR小鼠按随机数字表法分为假照组、0．5、1．0、2．0、4．0和6．0Gy的不同剂量组，x射线深部治疗机进行全身照射，于照射后16h应用流式细胞仪分析小鼠胸腺细胞中CD4＋CD25＋NRP1＋Treg细胞的变化，ELISA法检测胸腺细胞TGF—β1含量的变化。EL-4细胞株经PKC激动剂（PMA）、Ca2＋阻断剂（TMB-8）作用2h后并经4Gyx射线照射，于照射后48h应用流式细胞术及ELISA法分别检测CD4＋CD25＋NRP1＋Treg细胞及TGF-β1含量的变化。结果小鼠胸腺细胞中NRP1＋Treg在0．5GyX射线作用后稍有下降，于1．0Gy降至最低（t=6．96，P〈0．01），而后呈剂量依赖性升高，于6．0Gy升至最高（t=6．70，P〈0．01）；胸腺细胞TGF—B1在0．5GyX射线照射后显著下降（t=12．53，P〈0．01），而1．0～4．0Gy照射后则呈剂量依赖性升高，于6．0Gy仍保持高水平（t=10．40-15．30，P〈0．01）。PMA作用后，与假照组相比，单独PMA组NRP1＋Treg细胞表达显著降低（t=3．06，P〈0．01），而联合照射后表达则明显上调（t=8．27，P〈0．01），TGF-β1无论受照与否，其含量均明显降低（t=10．46—39．69，P〈0．01）；而TMB-8作用后，无论受照与否CD4＋CD25＋NRP1＋Treg的表达及TGF-β1的分泌量均显著上调（t=5．53～44．26，P〈0．01）。结论高剂量电离辐射可以诱导小鼠胸腺细胞中NRP1＋Treg细胞表达并增加TGF—B1的含量，此现象可能与启动PLC／PIP2信号通路有关。

青蒿素调节Tregs中NRP1/PTEN/Foxp3信号通路减轻系统性红斑狼疮小鼠炎性反应的研究

目的分析青蒿素(ART)对调节性T淋巴细胞(Tregs)功能的影响及机制,并评估其在系统性红斑狼疮(SLE)小鼠模型中的治疗潜力。方法(1)使用生物信息学方法分析叉状头/翅膀状螺旋转录因子3(Foxp3)基因缺失的Tregs与Foxp3+Tregs中差异性表达基因(DEGs)并行DEGs富集通路分析。利用String数据库进一步明确神经纤毛蛋白-1(NRP1)、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN)、Foxp3之间的关系。同时使用ZDOCK进行PTEN与NRP1物理对接。(2)体内实验中将降植烷诱导的SLE小鼠分别使用0.4%甲基纤维素(对照组)、PTEN抑制剂(SF1670)和ART腹腔注射28 d。比较各组外周血清双链DNA(dsDNA)、抗核抗体(ANA)、促炎因子[白细胞介素(IL)-6、IL-1、IL-23、IL-17]及抗炎因子(IL-10)的表达水平及脾脏淋巴细胞中Tregs占比。另将纯化的外周血Tregs予0.1%二甲基亚砜、SF1670和ART分别干预24 h,比较不同组细胞中磷酸化PTEN(pPTEN)表达水平。结果通过生物信息学分析发现,Foxp3基因表达与NRP1和PTEN有关,且这3个蛋白之间存在相互作用,且NRP1与PTEN具有物理接触。体外实验结果显示:与对照组相比,ART组的NRP1(P>0.05)和pPTEN(P<0.05)表达上调;ART明显降低了SLE小鼠体内促炎症因子、ANA和dsDNA表达水平,并明显提高了Tregs占比,降低了效应性T淋巴细胞占比,而使用PTEN抑制剂(SF1670)则出现与ART相反的结果。结论ART对Tregs的诱导作用与NRP1、PTEN活性升高有关,ART可能通过调节NRP1/PTEN/Foxp3信号通路减轻SLE小鼠的炎性反应。

siRNA-NRP1对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用

目的探讨神经纤毛蛋白1(Neuropilin 1,NRP1)基因小干扰RNA(siRNA)质粒对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用。方法设计靶向人NRP1基因的siRNA序列,合成一对互补的寡核苷酸,退火后克隆至质粒pGenesil-1.1上,构建重组质粒siRNA-NRP1;将人胃癌细胞SGC7901注入裸鼠右臀部皮下,构建移植瘤模型,成瘤后将重组质粒siRNA-NRP1注入瘤内,观察裸鼠临床表现,并测定裸鼠移植瘤的体积及重量;病理切片观察肿瘤组织及血管生长情况;免疫组化方法观察裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度。结果酶切分析及测序鉴定证实目的寡核苷酸片段已克隆至质粒pGenesil-1.1中;siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤的体积及重量均小于对照组(P<0.01);病理切片显示siRNA-NRP1组肿瘤细胞坏死较对照组明显;免疫组化显示siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度均低于对照组(P<0.01)。结论通过siRNA-NRP1抑制裸鼠胃癌移植瘤中NRP1的表达,可影响裸鼠移植瘤中血管的生成,最终抑制肿瘤的生长。

靶向NRP1单克隆抗体对黑色素瘤细胞B16F10的增殖、迁移和凋亡的影响

目的研究靶向神经菌毛素1(neuropilin1,NRP1)单克隆抗体(NRP1 mAb)对黑色素瘤细胞B16F10增殖、迁移和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 SDS-PAGE检测神经菌毛素1单克隆抗体的纯度;蛋白质印迹法、免疫荧光和免疫组化检测神经菌毛素1单克隆抗体的特异性和B16F10细胞及其移植瘤上神经菌毛素1的表达;四甲基偶氮唑蓝法、划痕实验、Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术等方法检测不同浓度神经菌毛素1单克隆抗体对黑色素瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响;蛋白质印迹法检测神经菌毛素1单克隆抗体作用后细胞内相关信号蛋白的表达。结果纯化的神经菌毛素1单克隆抗体具有高纯度和特异性,同时B16F10细胞及其移植瘤上神经菌毛素1高表达。神经菌毛素1单克隆抗体能有效抑制B16F10细胞的增殖和迁移,抑制作用呈时间和浓度依赖性(P<0.05)。神经菌毛素1单克隆抗体能显著诱导B16F10细胞凋亡,并呈剂量依赖关系(P<0.05)。抗体作用后B16F10细胞中磷酸化的Akt和ERK1/2表达下调,Bcl-2和Caspase 3蛋白表达下调,Bax蛋白的表达上调。结论纯化的神经菌毛素1单克隆抗体能有效地抑制B16F10增殖,迁移并明显诱导凋亡,其可能通过抑制膜上神经菌毛素1与相关细胞因子结合而减少其介导的PI3K/Akt和MEK/ERK1/2信号转导途径的活化来抑制细胞增殖和迁移,并通过Bcl-2/Bax/Caspase3途径诱导细胞凋亡,从而发挥其抗肿瘤作用。

神经菌毛蛋白1的研究进展

神经菌毛蛋白1(NRP1)是NRP家族的重要一员,其作为多种细胞外基质配体的共受体在神经发育、血管生成、肿瘤侵袭转移和免疫等方面发挥重要作用。NRP1可通过多种机制促进肿瘤的血管生成和肿瘤增殖转移,同时在免疫系统中可调节初级免疫反应并且是抗肿瘤免疫的关键因素。NRP1的进一步研究将为神经系统、血管系统及肿瘤的治疗提供新的方向和机遇。

沉默NRP-1基因对人T细胞白血病Jurkat细胞株增殖与凋亡的影响

目的:探讨RNAi沉默NRP-1基因对人T细胞白血病细胞株增殖与凋亡的影响。方法:将我们前期构建好的p LB-NRP-1/shRNA重组慢病毒质粒,感染至Jurkat细胞中,用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况及化疗药物表柔比星(EPI)处理后细胞增殖情况;用AV/PI法结合流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期。结果:细胞增殖结果:在48、72、96 h时间点NRP-1/shRNA干扰组的OD值均低于相应对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05);细胞凋亡率结果:与对照组比较,NRP-1/shRNA干扰组细胞的凋亡率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);对化疗药物表柔比星(EPI)敏感性检测结果:EPI浓度为0.025、0.05、0.1、0.2、0.4μg/ml时,NRP-1/shRNA干扰组的细胞生长抑制率较相应对照组高,差异皆有统计学意义(P<0.05),并且选择IC50进行EPI诱导后,NRP-1/shRNA干扰组的细胞凋亡率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);WB结果显示:与对照组相比,NRP-1/shRNA干扰组Bcl-2蛋白的表达水平明显下降,Bax的表达水平明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞周期结果:与对照组比较,NRP-1/shRNA干扰组G0/G1期细胞的比例增高,S期细胞的比例明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:RNAi沉默NRP-1基因可抑制Jurkat细胞增殖,促进其凋亡,提高对化疗药物的敏感性,其机制可能涉及Bcl-2/Bax途径的调节;并可将细胞周期阻滞在G0/G1期,降低细胞的增殖水平,诱导细胞进入凋亡期。