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基于Au-g-C_(3)N_(4)NS纳米复合材料的分子印迹电化学发光传感器检测叶酸
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作者 向莉 刘意明 杨敏丽 《上海师范大学学报(自然科学版中英文)》 2024年第1期17-27,共11页
近年来,作为一种新型的二维半导体纳米材料,石墨相氮化碳纳米薄片(g-C_(3)N_(4)NS)因其优异的电化学发光(ECL)性能和良好的成膜特性在ECL传感领域备受关注。然而,g-C_(3)N_(4)NS在较高的工作电压下产生的ECL信号不稳定,而金纳米粒子(Au ... 近年来,作为一种新型的二维半导体纳米材料,石墨相氮化碳纳米薄片(g-C_(3)N_(4)NS)因其优异的电化学发光(ECL)性能和良好的成膜特性在ECL传感领域备受关注。然而,g-C_(3)N_(4)NS在较高的工作电压下产生的ECL信号不稳定,而金纳米粒子(Au NPs)的引入可明显改善其发光稳定性.基于这个特点,采用原位生长法将Au NPs引入g-C_(3)N_(4)NS中,制备了一种金-石墨相氮化碳纳米复合材料(Au-g-C_(3)N_(4)NS),以其作为ECL物质固定在电极上.同时,引入具有专一识别能力的分子印迹聚合物(MIP),构建了一种检测叶酸(FA)的分子印迹-电化学发光(MIP-ECL)传感器.该传感器对FA表现出良好的选择性和灵敏响应,在优化的条件下,信号变化与FA物质的量浓度在1.0×10^(-10)~1.0×10^(-3) mol·L^(-1)的范围内呈良好的线性关系,检出限(LOD)达到0.07 nmol·L^(-1).并且探讨了检测机理,考察了传感器的稳定性和重现性,将传感器用于实际样品中FA的检测,获得满意结果. 展开更多
关键词 电化学发光(ECL) 金-石墨相氮化碳纳米复合材料(Au-g-C_(3)N_(4)ns) 分子印迹聚合物(MIP) 叶酸(FA)
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慢性丙型肝炎患者NS3/4A蛋白酶抑制剂预存耐药的临床研究 被引量:4
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作者 李展翼 严颖 +2 位作者 刘莹 蔡庆贤 赵志新 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期437-441,448,共6页
【目的】了解我国华南地区从未接受任何抗病毒治疗的慢性丙型肝炎(慢丙肝)患者NS3/4A蛋白酶抑制剂相关耐药位点的流行情况、临床特点包括其对干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗的影响。【方法】在接受抗病毒治疗前对183例慢丙肝患者的NS3/4... 【目的】了解我国华南地区从未接受任何抗病毒治疗的慢性丙型肝炎(慢丙肝)患者NS3/4A蛋白酶抑制剂相关耐药位点的流行情况、临床特点包括其对干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗的影响。【方法】在接受抗病毒治疗前对183例慢丙肝患者的NS3/4A蛋白酶抑制剂相关的耐药位点采用自行设计型别特异性引物行巢式PCR,PCR产物纯化后直接测序法鉴定,有变异的患者为变异组(125例),无变异的患者为野生组(37例),对两组患者的临床资料包括干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗后的持续病毒应答率等进行分析。【结果】183例患者中162例患者样本的NS3区扩增成功,其中125例(77.16%)患者检出耐药相关的变异位点266个,其中HCV 1b型A156S变异率为18.33%(11/60),T54S为5.00%(3/60);HCV 2a型V36L变异率为100.00%(14/14),A156S为64.29%(9/14);HCV 6a型Q80K变异率为95.45%(84/88),V36L为4.55%(4/88),D168E为2.27%(2/88),变异组患者经干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗后的持续病毒性应答率为81.60%(102/125),而野生组的为81.03%(30/37),两者比较无明显差异(P=0.943)。【结论】我国不同基因型的慢丙肝患者对NS3/4A蛋白酶抑制剂存在不同的预存耐药,耐药变异对慢丙肝患者疾病状态包括干扰素联合利巴韦林的疗效无影响。预存耐药的存在警示我们未来在使用此类药物时需分析病毒基因型及预存耐药变异情况,从而为患者提供最好的病毒学监测及最优的治疗方案。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns3/4a蛋白酶抑制剂 预存耐药 基因型
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丙型肝炎病毒NS4B蛋白调控Hep3B细胞非折叠蛋白质反应研究 被引量:3
3
作者 张艳妮 张庆华 +3 位作者 陈瑶 刘好桔 刘志文 孔令保 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期165-169,共5页
研究表达的丙型肝炎病毒(HCV)NS4B对Hep3B细胞非折叠蛋白质反应的影响。NS4B重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)NS4B通过脂质体转染Hep3B细胞,G418筛选和Western blot鉴定稳定转染细胞;RT-PCR检测稳定转染细胞内XBP1 mRNA剪接,Western blot鉴... 研究表达的丙型肝炎病毒(HCV)NS4B对Hep3B细胞非折叠蛋白质反应的影响。NS4B重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)NS4B通过脂质体转染Hep3B细胞,G418筛选和Western blot鉴定稳定转染细胞;RT-PCR检测稳定转染细胞内XBP1 mRNA剪接,Western blot鉴定ATF6蛋白切割,荧光素酶试验检测稳定转染细胞内GRP78和XBP1启动子活性。G418筛选和Western Blot鉴定证实获得稳定表达NS4B的Hep3B细胞;在该细胞内,XBP1 mRNA剪接、ATF6切割、XBP1和Grp78启动子激活均被检测到。NS4B在Hep3B的稳定表达诱导了非折叠蛋白质反应。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns4B HEP3B 非折叠蛋白质反应
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ULBP1启动子报告质粒的构建及NS3/4A蛋白对ULBP1基因转录的作用 被引量:3
4
作者 马红芳 何湘 +5 位作者 王可 王芳 焦新安 张艳红 章金刚 钟辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期483-485,489,共4页
目的:构建含有ULBP1基因启动子的报告质粒,并初步研究NS3/4A对ULBP1转录的影响。方法:将ULBP1启动子核心区序列连接在pGL3-enhance载体上构建ULBP1报告质粒pGL3-ULBP1质粒;将HCV的蛋白酶NS3/4A基因亚克隆到pcDNA3-Flag载体上(pcDNA3-Fla... 目的:构建含有ULBP1基因启动子的报告质粒,并初步研究NS3/4A对ULBP1转录的影响。方法:将ULBP1启动子核心区序列连接在pGL3-enhance载体上构建ULBP1报告质粒pGL3-ULBP1质粒;将HCV的蛋白酶NS3/4A基因亚克隆到pcDNA3-Flag载体上(pcDNA3-Flag-NS3/4A),Western blot检测其表达。用荧光分度计检测NS3/4A对ULBP1转录水平的影响。结果:成功构建了含有ULBP1启动子的报告质粒pGL3-ULBP1和FLAG-NS3/4A真核表达质粒,并检测到NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。结论:HCV的蛋白酶NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。 展开更多
关键词 丙肝病毒 ns3/4a基因 ULBP1 报告基因
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民族药野梦花基源及提取物抗丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶活性研究 被引量:4
5
作者 危英 马超美 +3 位作者 梁光义 魏升华 危莉 服部征雄 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1661-1663,共3页
目的研究民族药野梦花基源及提取物体外抗丙型肝炎病毒(HCV NS3/4A)蛋白酶活性。方法采用生药学常用鉴别方法确定野梦花基源,利用系统溶剂萃取法提取和初步分离野梦花,经荧光法测试野梦花提取物抗HCV NS3/4A蛋白酶活性。结果野梦花为瑞... 目的研究民族药野梦花基源及提取物体外抗丙型肝炎病毒(HCV NS3/4A)蛋白酶活性。方法采用生药学常用鉴别方法确定野梦花基源,利用系统溶剂萃取法提取和初步分离野梦花,经荧光法测试野梦花提取物抗HCV NS3/4A蛋白酶活性。结果野梦花为瑞香科植物(Daphne papyracea Wall.ex Steud.var.crassiuscula Rehd.),其乙酸乙酯和正丁醇提取物,在浓度为100μg.ml-1时,对HCV NS3/4A蛋白酶的抑制率分别为70.5%和65.4%。结论民族药野梦花的乙酸乙酯和正丁醇部位为抗HCV NS3/4A蛋白酶的有效部位。 展开更多
关键词 野梦花 基源 丙型肝炎病毒ns3/4a蛋白酶抑制剂
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HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的临床研究进展 被引量:4
6
作者 汪桦 薛小平 雷迎峰 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第25期2595-2600,共6页
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA依赖的RNA聚合酶是病毒蛋白前体加工成熟和复制过程中十分重要的两个酶,是抗HCV治疗的理想靶点.近年来,关于HCV NS3/4A蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的研究是抗HCV研... 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA依赖的RNA聚合酶是病毒蛋白前体加工成熟和复制过程中十分重要的两个酶,是抗HCV治疗的理想靶点.近年来,关于HCV NS3/4A蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的研究是抗HCV研究最为活跃的方向,本文综述了他们在临床试验中的最新研究进展. 展开更多
关键词 丙型肝炎 ns3/4a丝氨酸蛋白酶 ns5B RNA依赖的RNA聚合酶 酶类抑制剂
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活体荧光成像监测HCV NS3/4A蛋白在小鼠体内的瞬时表达 被引量:1
7
作者 段相国 付秋霞 +3 位作者 苏春霞 阎少多 詹林盛 丁剑冰 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期247-250,共4页
目的建立HCV NS3/4A蛋白酶在小鼠体内可视化表达模型。方法利用水动力转染技术将融合基因NS3/4A-Fluc转染至小鼠肝脏,建立目的基因的瞬时表达模型,通过RT-PCR方法检测目的基因Fluc及NS3/4A的RNA表达水平,以及通过Western blot方法检测... 目的建立HCV NS3/4A蛋白酶在小鼠体内可视化表达模型。方法利用水动力转染技术将融合基因NS3/4A-Fluc转染至小鼠肝脏,建立目的基因的瞬时表达模型,通过RT-PCR方法检测目的基因Fluc及NS3/4A的RNA表达水平,以及通过Western blot方法检测目的基因NS3/4A-Fluc的蛋白表达水平。结果建立了通过报告基因Fluc反映HCV NS3/4A蛋白酶的瞬时表达可视化小鼠模型。结论成功建立了可用于评价NS3/4A蛋白酶的可视化小鼠模型。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns3 4a蛋白酶 荧火虫荧光素酶 小鼠模型
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丙型肝炎病毒NS3-NS4基因的表达及鉴定 被引量:1
8
作者 寇小格 李荣 +2 位作者 袁育康 杨广笑 王全颖 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期430-432,442,共4页
目的 构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3 NS4全长基因重组质粒并诱导表达 ,鉴定NS3 NS4蛋白的抗原性。方法 应用PCR技术从pUC19/HCV中扩增目的基因 ,构建重组表达质粒 ,进行原核表达 ,用SDS PAGE、ELISA技术对表达产物的抗原性进... 目的 构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3 NS4全长基因重组质粒并诱导表达 ,鉴定NS3 NS4蛋白的抗原性。方法 应用PCR技术从pUC19/HCV中扩增目的基因 ,构建重组表达质粒 ,进行原核表达 ,用SDS PAGE、ELISA技术对表达产物的抗原性进行鉴定。结果 成功构建、表达了重组质粒pBV2 2 0 /NS3 NS4 ,用 5 0份质控标准血清对表达蛋白质进行抗原性检测 ,与第二代诊断试剂相比 ,总符合率为 96 %。结论 全长NS3 NS4蛋白是一个优势免疫原性区 ,应该是HCVEIA诊断试剂的有效成分。 展开更多
关键词 HCV ns3-ns4全长基因 重组质粒 表达 抗原性
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HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在大肠杆菌中表达、纯化 被引量:2
9
作者 雷迎峰 尹文 +4 位作者 杨敬 吕欣 韦三华 安群星 徐志凯 《科学技术与工程》 2008年第5期1151-1155,共5页
在大肠杆菌中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶获得表达并进行纯化。根据NS3与NS4A两者形成异源二聚体的结构要求,并参照文献,通过基因拼接的方法设计了单链NS3/4A丝氨酸蛋白酶的基因。合成相应引物,利用反转录PCR从HCV患者血液中扩增出该蛋白酶... 在大肠杆菌中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶获得表达并进行纯化。根据NS3与NS4A两者形成异源二聚体的结构要求,并参照文献,通过基因拼接的方法设计了单链NS3/4A丝氨酸蛋白酶的基因。合成相应引物,利用反转录PCR从HCV患者血液中扩增出该蛋白酶的编码基因,克隆入原核表达载体pRSET-A,将重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a转化BL211(DE3)大肠杆菌,并诱导表达与纯化。成功地构建了重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a;重组质粒转化的BL21工程菌经IPTG诱导表达后,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot证实为NS3/4A丝氨酸蛋白酶,并用镍离子亲和层析方法获得纯化蛋白酶。获得的纯化NS3/4A丝氨酸蛋白酶为建立其酶活性测定系统奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns3/4a丝氨酸蛋白酶 大肠杆菌 蛋白表达
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丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶瞬时表达小鼠模型的建立 被引量:2
10
作者 闫虎 路遥 +5 位作者 杜娟 贾帅争 付秋霞 彭剑淳 周勇 詹林盛 《生物技术通讯》 CAS 2011年第4期527-531,共5页
目的:建立丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶体内活性评价模型。方法:利用NS4A/B是NS3/4A丝氨酸蛋白酶作用底物的特性,构建融合基因NS3/NS4A/B-SEAP,底物片段NS4A/B插在NS3/4A和人分泌性碱性磷酸酶(SEAP)之间,融合基因表达后SEAP的分泌依... 目的:建立丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶体内活性评价模型。方法:利用NS4A/B是NS3/4A丝氨酸蛋白酶作用底物的特性,构建融合基因NS3/NS4A/B-SEAP,底物片段NS4A/B插在NS3/4A和人分泌性碱性磷酸酶(SEAP)之间,融合基因表达后SEAP的分泌依赖于有活性的NS3/4A在NS4A/B位点的切割。将含融合基因的质粒NS3/4A(△4AB)SEAP通过水动力转染技术转染到小鼠体内,检测小鼠血清中SEAP的活性,高活性的SEAP是该评价体系成立的证据。结果与结论:在瞬时表达NS3/4A的小鼠血清中检测到了高活性的SEAP,建立了可用于评价抗NS3/4A的小鼠体内瞬时模型。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns3/4a丝氨酸蛋白酶 分泌性碱性磷酸酶 体内模型
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Tet-on和Cre/loxP系统双重调控表达丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶三转基因小鼠的建立 被引量:2
11
作者 兰海云 孙梦宁 +9 位作者 马玉 赵亚 吕欣 杨敬 雷迎峰 姚敏 黄小军 张建敏 康健 尹文 《生物技术通讯》 CAS 2012年第3期342-346,共5页
目的:建立Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法:选择适龄并经鉴定的在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与在Tet-on系统调控下肝脏... 目的:建立Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法:选择适龄并经鉴定的在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达萤光素酶(Luc)的双转基因小鼠Lap/NS3/4A交配,子代小鼠经PCR检测、筛选基因组中NS3/4A、Lap、LC-1等3个转基因片段均阳性的小鼠。三阳性的NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经多西环素(Dox)诱导1周后,以在体生物发光成像系统(BLI)检测报告基因Luc的表达,免疫组化检测小鼠体内Cre重组酶、HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的表达状况。结果:NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经Dox诱导后,BLI结果显示仅在小鼠肝脏部位有强烈的发光信号,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达;免疫组化结果证实Cre重组酶、NS3/4A蛋白酶仅在经诱导后的小鼠肝细胞中特异性表达。结论:建立了Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控下表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的三转基因小鼠模型,为进一步研究HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在HCV感染后与宿主相互作用的机制,以及抗NS3/4A丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂的筛选奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns3/4a丝氨酸蛋白酶 三转基因小鼠
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丙型肝炎病毒CS,NS3 NS4区抗原融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达
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作者 李铭 沈小川 +6 位作者 林矫矫 倪振亚 苑纯秀 刘金明 杨冠珍 蔡幼民 吴祥甫 《中国病毒学》 CSCD 2001年第3期283-285,共3页
DNA fragments of Core(300bp)and NS4(400bp),encoding the nucleocapsid region(Core)protein CS and nonstructural region(NS4)protein NS4a of HCV,have been obtained from HCV genome by PCR,both of the two fragments were lik... DNA fragments of Core(300bp)and NS4(400bp),encoding the nucleocapsid region(Core)protein CS and nonstructural region(NS4)protein NS4a of HCV,have been obtained from HCV genome by PCR,both of the two fragments were liked with C33c(700bp)and formed a chineric gene C33c-Core-NS4(HCV-CCN).The chimeric gene was recombined with expression vector pET24a(+)and was expressed in Escherichia coli.The expressed protein was purified by Ni(+)NTB affinity chromatography.Its molecular weight was about 58kD.Western blotting analysis showed that the chimerical antigen had good antigenicity,which could play an important role in anti-HCV assay. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 抗原融合基因 蛋白表达 免疫印迹试验 CS区 ns3 ns4
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基因枪法和肌内注射法免疫HCV NS3/4A诱导小鼠免疫应答的比较
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作者 姚敏 尹文 +4 位作者 雷迎峰 杨敬 黄小军 康健 吕欣 《微生物学免疫学进展》 2012年第4期15-20,共6页
目的比较肌内注射法和基因枪法对免疫效果的影响。方法将携带HCV NS3/4A基因的质粒pcDNA3.1-NS3/4A,分别肌内注射和基因枪免疫BALB/c小鼠。基因枪免疫采用2μg/只和10μg/只两种剂量,肌内注射免疫的剂量为100μg/只,共免疫3次。分别于第... 目的比较肌内注射法和基因枪法对免疫效果的影响。方法将携带HCV NS3/4A基因的质粒pcDNA3.1-NS3/4A,分别肌内注射和基因枪免疫BALB/c小鼠。基因枪免疫采用2μg/只和10μg/只两种剂量,肌内注射免疫的剂量为100μg/只,共免疫3次。分别于第3次免疫后10 d和20 d,收集小鼠血清、分离脾细胞;ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体水平;ELIspot检测小鼠IFN-γI、L-2和IL-4;非放射性细胞毒性试验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用,从而比较肌内注射和基因枪法激发小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答的影响。结果免疫后第10 d检测结果表明,2μg/只和10μg/只基因枪法免疫产生的抗体效价分别为1∶500和1∶1 000,100μg/只肌内注射免疫产生的抗体效价为1∶1 000。第20 d再次检测,基因枪法产生的抗体效价仍为1∶500和1∶1 000,肌内注射降低为1∶500。2μg/只和10μg/只基因枪免疫产生的IFN-γ和IL-2均高于100μg/只肌内注射免疫。但这两种免疫方法均未激发IL-4的水平。在不同的效靶比情况下,10μg/只和2μg/只基因枪免疫激发的CTL细胞杀伤活性均高于100μg/只肌内注射免疫。结论基因枪法免疫小鼠诱导的体液免疫和细胞免疫应答均显著高于肌内注射免疫。 展开更多
关键词 基因枪 肌内注射 丙型肝炎病毒 ns3/4a 免疫应答
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丙型肝炎病毒NS3-4A蛋白对MMP-9及天然免疫的影响
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作者 逯艳艳 孔鑫磊 +1 位作者 刘芝兰 马颖才 《广东医学》 CAS 北大核心 2015年第20期3132-3136,共5页
目的探讨HCV编码的NS3-4A蛋白对MMP-9表达的调节作用。方法利用Primer Premier5.0软件设计相关引物,构建在相应的载体上;使用PCR扩增目的基因;PCR产物以及双酶切产物的胶回收;冷氯化钙法制备感受态细胞;YC法转化感受态细胞;进行细胞培... 目的探讨HCV编码的NS3-4A蛋白对MMP-9表达的调节作用。方法利用Primer Premier5.0软件设计相关引物,构建在相应的载体上;使用PCR扩增目的基因;PCR产物以及双酶切产物的胶回收;冷氯化钙法制备感受态细胞;YC法转化感受态细胞;进行细胞培养基的配制;之后进行RT-PCR反应。结果在Huh7.5.1细胞内,内源性的MMP-9可以被NS3-4A蛋白上调表达;转染了p CMV-tag2A-NS3-4A质粒的Huh7.5.1细胞与未转染的细胞相比,其内源性MMP-9的表达可以明显被NS3-4A蛋白上调。在Huh7.5.1细胞中,IFN-α可以增促进MMP-9基因mRNA的表达,且这种增强作用呈现出剂量依赖性;在转染了p CMVtag2B-MMP-9质粒的Huh7.5.1细胞中,其内源性IFN-α及其受体IFNAR1和IFNAR2的表达可以被MMP-9蛋白抑制,且对IFN-α及IFNAR1的抑制作用具有较明显的剂量依赖性;向转染了p CMV-tag2B质粒的Huh7.5.1细胞中加入IFN-α可以上调其内源性的PKR和OAS2的表达,而MMP-9又可以抑制这些基因的表达,这反过来也说明MMP-9可以抑制IFN-α及其受体IFNAR1和IFNAR2的表达,进而抑制IFN-α下游PKR和OAS2的表达;IFN-α可以上调Huh7.5.1细胞中内源性的PKR和OAS2的表达,而MMP-9又可以抑制这些基因的表达,这与之前mRNA水平的检测结果相一致。结论在HCV的感染过程中,NS3-4A蛋白可以促进细胞内源性IFN-α的表达,而IFN-α的高表达又会导致MMP-9的高表达,MMP-9反过来又会抑制IFN-α及其受体IFNAR1和IFNAR2的表达水平,进而抑制IFN-α下游的PKR及OAS2基因。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 基质金属蛋白酶-9 非结构蛋白ns3-4a Α干扰素
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酶联免疫吸附试验检测HCV NS3-4A蛋白酶活性 被引量:5
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作者 陈湘红 郭巨涛 +1 位作者 陈鸿珊 王琳 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期300-302,共3页
目的 建立一种检测丙型肝炎病毒 (HCV) NS3- 4A丝氨酸蛋白酶的酶联免疫吸附试验 (EL ISA)方法 ,用于筛选 HCV蛋白酶抑制剂。方法 将质粒 p MAL- c2 / NS3- 4A转化到大肠杆菌 K1 2 TB1 中 ,经 IPTG诱导表达 ,亲和层析柱纯化后得到麦芽... 目的 建立一种检测丙型肝炎病毒 (HCV) NS3- 4A丝氨酸蛋白酶的酶联免疫吸附试验 (EL ISA)方法 ,用于筛选 HCV蛋白酶抑制剂。方法 将质粒 p MAL- c2 / NS3- 4A转化到大肠杆菌 K1 2 TB1 中 ,经 IPTG诱导表达 ,亲和层析柱纯化后得到麦芽糖结合的 NS3/ NS3- 4A融合蛋白 ,用 Western blot分析其免疫学活性 ,并以酶联免疫吸附试验检测其生物学活性。结果  SDS- PAGE电泳分析并用考马斯亮蓝染色 ,显示相对分子质量 112 0 0 0和116 0 0 0处有麦芽糖结合的 NS3及 NS3- 4A融合蛋白带出现 ;Western blot分析表明 ,表达的产物可与抗 NS3蛋白的单克隆抗体发生阳性反应。EL ISA证实 HCV NS3- 4A蛋白酶能使特异底物裂解。正交实验获得 EL ISA的最佳实验条件 ,其 P/ N值为 3.6 3,批内和批间变异系数 (CV)分别为 4.16 %和 7.5 2 %。此方法测定 1,4萘醌对 HCV蛋白酶活性 5 0 %抑制浓度 (IC5 0 )为 8.36 μm ol/ L。结论 建立的 EL ISA方法 ,用于测定 HCV蛋白酶活性 ,具有简便、快速、重复性好等特点 ,为以 HCV NS3- 4A蛋白酶为靶酶的抑制剂筛选及抗 HCV药物的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ELISA ns3/ns3-4a 融合蛋白酶
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Eu原子4f^76p_(3/2)ns自电离态的光谱的研究(英文) 被引量:3
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作者 王靖 沈礼 +1 位作者 杨玉娜 戴长建 《发光学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1611-1616,共6页
采用孤立实激发技术,对铕原子4f^76p_(3/2)ns(n=7,8)自电离态的光谱进行了系统的研究,同时是首次在不同激光偏振组合下进行的研究。首先,用前两束激光分步将铕原子从基态4f^76s^2经中间4f^76s6p态激发至4f^76sns里德堡态,然后再用第三... 采用孤立实激发技术,对铕原子4f^76p_(3/2)ns(n=7,8)自电离态的光谱进行了系统的研究,同时是首次在不同激光偏振组合下进行的研究。首先,用前两束激光分步将铕原子从基态4f^76s^2经中间4f^76s6p态激发至4f^76sns里德堡态,然后再用第三束激光通过离子实4f^76s^+→4f^76p^+_(3/2)的跃迁将其进一步激发至4f^76p_(3/2)7s自电离态或4f^76p_(3/2)8s自电离态。对铕原子4f^76p_(3/2)ns(n=7,8)自电离态复杂的光谱分别给出了详细的解释,从中我们可以获得一些重要的光谱信息,比如自电峰的能级位置和线宽等,同时还可以观察到收敛于不同离子限的自电离系列之间的组态相互作用。最后,通过比较不同激光偏振组合下的自电离光谱,确定了一些自电离态的总角动量的值。 展开更多
关键词 Eu原子 4f^76p3/2ns自电离态 光谱 孤立实激发 激光偏振
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第二代丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 被引量:3
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作者 王路 陆涛 +1 位作者 王海勇 王振 《国际药学研究杂志》 CAS CSCD 2013年第1期14-19,25,共7页
本文综述了近年来基于特拉匹韦(telaprevir)、波西匹韦(boceprevir)和BILN-2061等第一代HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂的第二代抑制剂的结构改造。第二代抑制剂可有效提高抑制效力,显著改善药代动力学参数,可在一定程度上克服由第一代... 本文综述了近年来基于特拉匹韦(telaprevir)、波西匹韦(boceprevir)和BILN-2061等第一代HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂的第二代抑制剂的结构改造。第二代抑制剂可有效提高抑制效力,显著改善药代动力学参数,可在一定程度上克服由第一代抑制剂诱导产生的耐药性。同时探讨了各类抑制剂的构效关系。 展开更多
关键词 HCV ns3 4a丝氨酸蛋白酶抑制剂 丙型肝炎病毒 药代学参数 耐药性 构效关系
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HPLC同时测定山辣子皮中3种抗HCV NS3/4A蛋白酶香豆素的含量 被引量:2
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作者 蒋太白 张洪 +4 位作者 危英 王霞 蔡桂兰 钱金姝 徐宏喜 《中药材》 CAS 北大核心 2017年第12期2895-2898,共4页
目的:建立HPLC同时测定山辣子皮中3种抗HCV NS3/4A蛋白酶香豆素(瑞香素、瑞香新素、7-羟基-8-甲氧基香豆素)的含量。方法:采用Waters symmetry shield^(TM)RP 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗... 目的:建立HPLC同时测定山辣子皮中3种抗HCV NS3/4A蛋白酶香豆素(瑞香素、瑞香新素、7-羟基-8-甲氧基香豆素)的含量。方法:采用Waters symmetry shield^(TM)RP 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱;流速1.0 mL/min;柱温35℃;检测波长322 nm;进样量:10μL。结果:3种成分的分离度良好,瑞香素、瑞香新素、7-羟基-8-甲氧基香豆素分别在8.22~164.40μg/mL(r_1=0.9999)、1.44~28.80μg/mL(r_2=0.9999)和0.77~15.52μg/mL(r_3=0.9999)浓度范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为102.66%(RSD=0.31%)、100.46%(RSD=0.74%)和102.39%(RSD=0.63%)。结论:该结果表明建立的方法简单,稳定性和重复性好,可用于山辣子皮的质量控制。 展开更多
关键词 HPLC 山辣子皮 香豆素 抗HCV ns3/4a 含量测定
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Eu原子4f^76p_(3/2)ns自电离衰变分支比和弹射电子角分布 被引量:2
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作者 王靖 沈礼 +1 位作者 杨玉娜 戴长建 《原子与分子物理学报》 CAS 北大核心 2018年第3期374-382,共9页
首先运用孤立实激发技术将Eu原子从基态4f^76s^(28)S_(7/2)经中间态4f^76s6p共振激发到4f^76sns Rydberg态,然后再将其进一步激发至4f^76p_(3/2)ns(n=7,8)自电离态.其次,采用速度影像技术对Eu原子自电离弹射出的电子进行探测,以便来研... 首先运用孤立实激发技术将Eu原子从基态4f^76s^(28)S_(7/2)经中间态4f^76s6p共振激发到4f^76sns Rydberg态,然后再将其进一步激发至4f^76p_(3/2)ns(n=7,8)自电离态.其次,采用速度影像技术对Eu原子自电离弹射出的电子进行探测,以便来研究自电离衰变分支比和弹射电子角分布.在研究自电离衰变分支比时,重点讨论了粒子数反转的可能性,并依据此现象可为实现自电离激光器提供有价值的信息.另外,还探讨了各向异性参数对弹射电子角分布的影响;以及在Eu原子不同自电离几率位置处,讨论了弹射电子角分布形状的变化情况. 展开更多
关键词 Eu原子 4f76p3/2ns自电离态 分支比 角分布
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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3/4A的研究进展
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作者 陆瑶 宋玉国 《北华大学学报(自然科学版)》 CAS 2007年第5期424-427,共4页
丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3共有631个氨基酸组成,具有丝氨酸蛋白酶、三磷酸核苷酶(NTpase)和螺旋酶(Helicase)的功能,在HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥着重要作用.非结构蛋白NS4A,其主要功能就是作为NS3丝氨酸... 丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3共有631个氨基酸组成,具有丝氨酸蛋白酶、三磷酸核苷酶(NTpase)和螺旋酶(Helicase)的功能,在HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥着重要作用.非结构蛋白NS4A,其主要功能就是作为NS3丝氨酸蛋白酶的辅助因子,在HCV多氨酸成熟过程中发挥着不可替代的调节作用.此外,NS3/4A还参与NS5A的超磷酸化修饰过程. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns3 ns4a 进展
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