非甾体类抗炎药NS398对前列腺癌动物模型中RECK基因表达的调控

目的:通过检测非甾体类抗炎药NS398对前列腺癌动物模型中RECK基因表达的调控,探讨其可能的抗肿瘤机制。方法:成瘤裸鼠分为实验组和对照组,实验组裸鼠予口咽管下喂服NS398,每天剂量0.1 mg/g体重,分别喂服10 d、20 d、30 d,对照组不予喂药,各组均在30 d后处死裸鼠;抽提各组肿瘤组织总RNA,RT-PCR检测RECK基因与MMP-9的表达;抽提各组肿瘤组织总蛋白,应用W estern印迹法检测RECK蛋白的表达。结果:实验组肿瘤组织中RECK基因的表达量较对照组明显升高,而MMP-9的表达量明显降低,且其变化与用药时间有明显的相关性。结论:NS398对前列腺癌的发生及转移有明显的抑制作用,其具体的作用机制可能与其诱导RECK基因的表达,从而抑制MMP-9的表达有关。

NS398对放射抗拒食管癌裸鼠移植瘤的放射增敏作用

目的研究COX-2抑制剂NS398对放射抗拒食管癌细胞裸鼠移植瘤的放射增敏作用。方法采用食管癌细胞悬液裸鼠皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型,比较食管Eca109细胞和放射抗拒Eca109R50Gy细胞(接受总剂量50Gy照射)的致瘤能力。选取接种Eca109R50Gy细胞荷瘤裸鼠,随机分为NS398组、放射组、NS398+放射组和对照组。在干预的14d中记录移植瘤体积、重量,计算各组肿瘤抑制率和NS398的放射增敏比值(E/O)。结果 Eca109R50Gy细胞比Eca109细胞裸鼠体内致瘤能力高出40倍。NS398+放射治疗能显著抑制裸鼠移植瘤的生长,体积缩小和瘤重减轻最为明显(P<0.05)。1.5mg/kg NS398的放射增敏比值E/O=1.61(>1.4)。结论 NS398对人食管Eca109R50Gy细胞裸鼠移植瘤具有放射增敏作用,其中更深入的信号传导机制值得进一步研究。

非甾体类抗炎药NS398对前列腺癌细胞株DU145中RECK基因表达的调控

目的:通过检测非甾体类抗炎药NS398对前列腺癌细胞株DU145中RECK基因表达的调控,探讨其可能的抗肿瘤机制。方法:实验组(3组)分别以不同浓度(10、100、1000μmol/L)NS398作用于前列腺癌细胞株DU145,而对照组则无NS398,各组均培养48h后收集细胞,抽取各组细胞总RNA,检测RECK基因与MMP9的表达;抽取各组细胞总蛋白,应用Western印迹方法检测RECK蛋白的表达。结果:实验组细胞株中RECK基因表达均较对照组明显升高,其中以100μmol/L组升高最明显,而MMP9的含量明显降低;实验组RECK蛋白的表达也较对照组明显升高(P<0.05)。结论:NS398有明显的诱导RECK基因表达的作用,是其可能的抗肿瘤作用机制。

选择性COX-2抑制剂NS398干预对HIBD新生鼠脑细胞凋亡的影响

目的研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时应用选择性COX-2抑制剂NS398干预后不同时段脑原位细胞凋亡的变化。方法于制备新生大鼠左脑的HIBD模型前30min,腹腔注射NS39820mg/kg,同时设未注射组及假手术组对照,应用TUNEL染色方法及图像分析软件研究于HI后24h、7d脑皮层及海马TUNEL染色阳性细胞百分率变化。结果假手术组组脑组织中偶见TUNEL染色阳性细胞;未注射组缺氧缺血(HI)后24hTUNEL染色阳性细胞数较多,至HI后7d明显减少;NS398干预组染色阳性细胞数较未注射组明显减少。结论应用选择性COX-2抑制剂NS398于HIBD新生鼠,可以有效减少HI后凋亡细胞,提示NS398对发育期脑组织缺氧缺血损伤存在保护作用。

NS398对放射抗拒食管鳞癌细胞的放射增敏作用

目的探讨环氧化酶-2选择性抑制药NS398对放射抗拒食管癌细胞的放疗增敏效应。方法通过γ射线反复照射EC9706细胞,每次照射剂量200cGy,再克隆培养,重复以上过程达到累计放射剂量6000cGy,筛选得到放射抗拒细胞株EC9706R,采用克隆形成实验检测EC9706R及其亲本细胞的放射敏感性。采用不同浓度的NS398处理EC9706R细胞,研究它对EC9706R细胞放射敏感性的影响。结果筛选得到的放射抗拒人食管鳞癌细胞株EC9706R较亲本细胞显示出明显的放射抗性,不同浓度的NS398对食管癌EC9706R细胞均具有放疗增敏效应,25,50,100,150μmol.L-1的NS398作用24h后均能检测到放疗增敏作用,其放射增敏比SERSF2、SERDq分别为1.05,1.10,1.15,1.23和1.14,1.28,1.36,1.67,呈剂量依赖关系。结论NS398对放射抗拒食管癌细胞EC9706R具有明显的放疗增敏作用。

NS398对胰腺癌细胞周期及其蛋白依赖性激酶抑制物p21^(Wafl/cipl)、p27^(Kipl/pic2)的影响

目的:观察选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS398对胰腺癌细胞周期及细胞周期相关蛋白p21Wafl/cipl、p27Kipl/pic2转录和表达的影响,探讨NS398的抗胰腺癌机制。方法:以NS398和前列腺素E2(PGE2)处理SW1990人胰腺癌细胞,分别采用MTT法检测细胞活力,酶联免疫分析法(ELISA)检测细胞内PGE2含量,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期变化,并以半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹检测COX-2及细胞周期相关蛋白p21Wafl/cipl、p27Kipl/pic2的mRNA和蛋白水平。结果:NS398抑制胰腺癌细胞生长,并呈剂量依赖性减少细胞内PGE2的生成;NS398诱导细胞周期相关蛋白p21Wafl/cipl和p27Kipl/pic2转录和表达的升高并诱导部分细胞阻滞在G0/G1期(较对照组升高11%);10 nmol/L的外源性PGE2可增加胰腺癌细胞的活力,但并不能拮抗NS398对细胞活力的抑制作用或细胞周期分布的改变,以及COX-2、p21Wafl/cipl、p27Kipl/pic2的转录和表达。结论:NS398可能通过增强p21Wafl/cipl和p27Kipl/pic2的表达而诱导细胞周期的阻滞,从而抑制胰腺癌细胞的生长活力。但NS398并非通过抑制COX-2的唯一机制,还可能存在其它非COX-2途径。

NS398对小鼠皮肤中TIMP-1,P53和PCNA含量变化的影响

目的探讨COX-2选择性抑制剂NS398(氮-2,环己氧-4,硝基苯甲基磺胺)是否对小鼠皮肤光老化有延缓作用。方法采用8甲氧补骨脂素及长波紫外线(8MOP/UVA)共同作用于小白鼠,进行皮肤光老化动物模型的造模,将NS398注射到实验动物真皮层干预皮肤光老化过程,免疫组织化学染色法、HE染色和弹力纤维染色(Weigert法)分别对与皮肤衰老有关的TIMP1,P53和PCNA表达、皮肤组织结构和弹力纤维的改变进行分析。结果注射NS398的实验组P53的含量减少,TIMP1和PCNA的含量增加,与皮肤光老化有关的皮肤组织结构和弹力纤维的改变明显减轻。结论NS398对小鼠皮肤光老化有延缓作用,可能为临床抗皮肤衰老提供了一条新途径。

COX-2抑制剂NS398通过抑制前列腺素E2诱导肾癌细胞的凋亡

目的:揭示环氧合酶2(COX-2)在肾癌细胞中的表达情况,通过COX-2抑制剂NS398作用肾癌细胞探讨非甾体抗炎药(NSAID)对肾癌细胞增殖作用的影响及其可能的作用机制。方法:采用标准的细胞培养方法对人肾癌786-0细胞进行培养,将NS398分别以25,50,100,150及200μmol/L的剂量加入细胞中作用24及48h后,MTT法检测NS398对肾癌细胞增殖的影响;作用24h后,流式细胞仪测定细胞凋亡的情况,EIA法测定细胞中前列腺素E(2PGE2)含量的变化,Western blotting测定COX-2蛋白表达的情况。结果:NS398对肾癌786-0细胞具有较强的抑制作用,且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增大,呈浓度依赖关系(P<0.05);NS398作用肾癌786-0细胞24h后,在细胞周期G0/G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰,随着浓度升高,凋亡峰亦越来越增高(P<0.05);NS398可抑制PGE2释放,并且这种抑制作用呈剂量效应,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);不同浓度NS398作用下的肾癌786-0细胞中,COX-2的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降。结论:NS398通过诱导凋亡来抑制肾癌786-0细胞的增殖;NS398诱导肾癌786-0细胞的凋亡作用机制可能是通过抑制COX-2的表达,降低肾癌786-0细胞PGE2的合成,减少前列腺素对肿瘤细胞增殖的刺激作用来抑制增殖和促进凋亡的。

NS398对SGC7901胃癌细胞生长及CD44V6、MMP-9基因表达的影响

目的探讨COX-2特异性抑制剂NS398对SGC7901胃癌细胞体外生长及CD44V6、MMP-9基因表达的影响。方法体外培养SGC7901胃癌细胞,应用免疫细胞化学方法,检测SGC7901胃癌细胞中COX-2、CD44V6、MMP-9蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测NS398对胃癌细胞PGE2分泌水平的影响,MTT法检测NS398对SGC7901胃癌细胞体外生长的抑制效应,半定量RT-PCR检测NS398作用后胃癌细胞株中CD44V6、MMP-9基因表达水平的变化。结果 SGC7901胃癌细胞中COX-2、CD44V6、MMP-9呈阳性表达,NS398可显著抑制SGC7901胃癌细胞PGE2的分泌,200μmol/L NS398抑制率达64.3%,NS398对胃癌细胞生长抑制作用呈时间及浓度依赖性;NS398作用24 h后胃癌细胞中CD44V6、MMP-9基因表达水平下降,200μmol/L NS398对CD44V6、MMP-9基因表达抑制率分别为45.7%、43.6%。结论 SGC7901胃癌细胞中COX-2、CD44V6、MMP-9呈阳性表达,NS398可有效抑制SGC7901胃癌细胞PGE2的分泌和胃癌细胞生长,并可抑制与胃癌转移相关的CD44V6、MMP-9基因的表达。

NS398对宫颈癌Hela细胞bcl-2表达的影响

目的探讨NS398对宫颈癌Hela细胞生长及bcl-2基因和蛋白表达的影响。方法用不同浓度的NS398(0、25、50、75和100μmol/L)处理宫颈癌Hela细胞不同时间,采用MTT比色法分析细胞生长抑制率。用不同浓度NS398处理Hela细胞24h,RT-PCR检测COX-2和bcl-2 mRNA表达的变化,Western blot检测COX-2和bcl-2蛋白表达的变化。结果随着NS398浓度及处理时间的增加,宫颈癌Hela细胞生长抑制率升高;随着NS398剂量的增加,COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平逐渐减少。结论NS398可呈剂量和时间依赖性抑制Hela细胞的生长,呈浓度依赖性减少COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达。NS398可能通过抑制COX-2和bcl-2的表达,抑制宫颈癌Hela细胞的生长。

选择性COX-2抑制剂NS398干预后对HIBD新生大鼠海马CA1区存活锥体细胞计数的变化

目的研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时应用选择性COX-2抑制剂NS398干预后海马CA1区存活锥体细胞计数的变化。方法于制备新生大鼠左脑的HIBD模型前30min,应用腹部注射NS39820mg/kg,同时建立未注射HIBD组及对照组,于HIBD后7d,测试左侧海马CA1区存活锥体细胞数。结果统计学比较,HIBD组CA1区存活锥体细胞计数显著低于对照组;NS398干预组存活锥体细胞数显著高于HIBD组。结论应用选择性COX-2抑制剂NS398可以减少新生鼠HIBD时锥体细胞缺失。

肾癌细胞中环氧合酶-2的高表达及NS398对肾癌细胞生长抑制和凋亡作用机制的研究(英文)

目的揭示COX-2选择性抑制剂NS398对肾癌细胞的增殖和凋亡作用的影响,及其可能的作用机制。方法采用标准的细胞培养方法对人肾癌786-0细胞进行培养,将NS398分别以不同浓度剂量加入细胞中作用24及48h后,应用流式细胞仪检测凋亡,应用RT-PCR和Western blotting检测COX-2和Bcl-2表达的改变。结果NS398对肾癌786-0细胞具有较强的抑制作用,且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增大,呈浓度依赖关系(P<0.05);RT-PCR和Western Blot结果表明,不同浓度NS398作用下的肾癌786-0细胞中,COX-2和Bcl-2的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降。NS398作用于肾癌786-0细胞24h后,在细胞周期G0/G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰,随着浓度的升高,凋亡峰亦越来越高(P<0.05)。结论肾癌786-0细胞中存在着COX-2的过表达;选择性COX-2抑制剂NS398通过诱导凋亡来抑制肾癌786-0细胞的增殖,其机制可能是通过抑制COX-2的表达及下调Bcl-2来完成的。

选择性环氧合酶-2抑制剂NS398对人肺癌裸鼠移植瘤生长抑制作用研究

目的探讨选择性环氧合酶-2抑制剂NS398对人肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其机制。方法建立人肺癌A549细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤后20只裸鼠随机分为4组:对照组、NS398低剂量(1.5mg/kg)组、NS398中剂量(3.0mg/kg)组和NS398高剂量(4.5mg/kg)组。各组均采用腹腔注射给药,每周3次,共4周。给药期间每隔7日测量肿瘤体积。最后一次给药次日,处死裸鼠完整剥取肿瘤,测量肿瘤重量并计算抑瘤率。TUNEL法检测各组移植瘤标本细胞凋亡情况,免疫印迹法检测survivin、XIAP和cleaved caspase-3蛋白表达情况。结果 NS398各剂量组肺癌移植瘤生长速度均慢于对照组,各剂量组肿瘤重量显著低于对照组(P<0.01,P=0.000),呈剂量依赖性。各剂量组的抑瘤率分别为30.18%、46.50%和53.87%。TUNEL法结果显示,与对照组比较,NS398各剂量组凋亡指数均显著增加(P<0.01,P=0.000),并呈剂量依赖性。免疫印迹法结果显示,与对照组比较,NS398各剂量组survivin和XIAP蛋白表达量均显著减少,cleaved caspase-3蛋白表达量均显著增加(P=0.000),也呈明显剂量依赖性。结论 NS398能明显抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长,并诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与下调survivin和XIAP蛋白表达,上调cleaved caspase-3蛋白表达有关。

NS398对白介素1α诱导兔角膜基质细胞环氧化酶2表达的抑制

目的探讨氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺(NS398)对白介素1α(IL-1α)诱导的兔角膜基质细胞环氧化酶2(COX-2)表达的影响。方法体外培养兔角膜基质细胞,实验组分别以含0、25、50、100、200μmol/L NS398的培养液孵育2 h后加入IL-1α诱导COX-2表达,24 h后实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)检测兔角膜基质细胞中COX-2基因表达的差异,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度NS398对细胞生长的影响,并与对照组进行比较。结果Real-Time PCR结果显示IL-1α诱导后24 h各组COX-2 mRNA表达量差异有统计学意义(F=988.45,P<0.01);对照组与各实验组以及各实验组之间COX-2 mRNA表达量进行多重比较可见,0μmol/LNS398浓度组与对照组之间差异无统计学意义(q=1.332 2,P>0.05),其他NS398浓度组与对照组相比差异均有统计学意义(q=34.789 6,48.329 8,65.801 0,70.813 1,P<0.01),随培养液中NS398浓度的增加,IL-1α刺激后兔角膜基质细胞中COX-2 mRNA表达量不断下降(q=36.121 8,49.662 0,67.133 2,72.145 3,13.540 2,31.011 4,36.023 5,17.471 2,22.483 3,5.012 1,P<0.01);MTT法检测结果显示,100μmol/L、200μmol/L的NS398对兔角膜基质细胞生长均有明显的抑制作用(q=12.769 3,20.908 7,P<0.01)。结论NS398能够有效抑制IL-1α诱导的兔角膜基质细胞COX-2的表达,但超过一定浓度会对细胞产生明显毒性作用。

NS398对白血病细胞K562凋亡的时间和剂量效应机制(英文)

目的探讨非甾体药物选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS398对白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的效应关系和机制。方法采用噻唑蓝还原法(MTT法)检测NS398对K562细胞增殖抑制作用,流式细胞仪(FCM)和单细胞凝胶电泳技术(cometassay)测定K562细胞的凋亡,免疫印迹实验检测相关蛋白的表达。结果 NS398抑制K562细胞增殖存在时间和剂量效应关系,各浓度间差异有显著性(P<0.05)。NS398激活caspase-3和caspase-9,促进P53蛋白的积聚、Bax蛋白表达的上调和Bcl-xL蛋白表达的下调,进而导致细胞色素C的释放,致使K562细胞凋亡。结论 NS398可抑制K562细胞增殖,其诱导细胞凋亡的途径可能经过P53介导Bax的Caspase-3、Caspase-9的激活,揭示COX-2抑制剂可能存在着一个影响细胞翻译的新机制。

NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡机制的研究

目的:研究NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制。方法:通过实验细胞培养、MTT试验、细胞形态变化、A549细胞survivin的mRNA表达、A549细胞p-AKT与survivin的蛋白表达来对NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制进行分析研究。结果:NS398对A549细胞增殖的影响受到浓度的影响,NS398浓度越大,A549细胞增殖抑制率越大;A549细胞在不同浓度的NS398试剂中表现出不同的细胞形态;survivin的mRNA表达随着NS398浓度的增加而减弱,A549细胞p-AKT与survivin的蛋白表达随着NS398浓度的增加而增强。结论:NS398对A549细胞的凋亡具有诱导作用,使肿瘤生长受到抑制,其抗肿瘤机制与AKT磷酸化的抑制、survivin蛋白表达的下调有关。

NS398通过环氧化酶-2依赖途径诱导肾癌细胞786-O凋亡

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS398对肾癌细胞786-O增殖和凋亡的影响及其机制。方法同浓度NS398作用体外培养786-O细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测24、48、72、96h后肾癌细胞786-O的增殖活性。30、180μmol/L的NS398作用786-O细胞72h后,RT-PCR法检测COX-2 mRNA表达;免疫细胞化学检测COX-2蛋白表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测前列腺素E2(PGE2)释放水平;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果NS398可以抑制786-O细胞的增殖,呈时间和剂量依赖型。RT-PCR法和免疫细胞化学检测显示NS398作用后能降低COX-2 mRNA和蛋白表达。ELISA检测显示NS398作用后PGE2释放水平呈下调趋势;流式细胞仪检测表明,30、180μmol/L NS398处理组凋亡率分别为(14.3±1.4)%、(31.5±2.1)%,与对照组凋亡率(2.1±0.4)%比较,凋亡率显著上升(P<0.05)。结论NS398可能通过COX-2依赖性途径抑制肾癌细胞增殖和诱导其凋亡。

环氧化酶-2抑制剂NS398对肾癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂NS398对肾癌细胞786-O增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度NS398作用体外培养的786-O细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测24、48、72、96h后肾癌细胞786-O的增殖活性。终浓度为30、180μmol/L的NS398作用786-O细胞72h后,免疫细胞化学检测COX-2蛋白表达;RT-PCR法检测COX-2mRNA表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:NS398可以抑制786-O细胞的增殖,呈时间和剂量依赖型。RT-PCR法检测显示NS398作用后能降低COX-2mRNA表达。免疫细胞化学结果显示NS398作用后能降低COX-2蛋白表达。流式细胞仪检测表明,30、180μmol/LNS398处理组凋亡率分别为14.3%±1.4%、31.5%±2.1%,与对照组凋亡率2.1%±0.4%比较,凋亡率显著上升(P<0.05)。结论:NS398可能通过降低COX-2表达,抑制肾癌细胞增殖和诱导其凋亡。

NS398逆转溶血磷脂酸拮抗顺铂抑制卵巢癌细胞增殖作用的研究

目的:观察环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂NS398对溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)拮抗顺铂抑制卵巢癌细胞细胞增殖作用的影响,并探讨其可能机制。方法:体外培养人卵巢癌细胞3AO,MTT法检测NS398对LPA拮抗顺铂抑制3AO细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化;RT-PCR检测LPA单独或合用NS398对3AO细胞表达COX-2的影响。结果:LPA对顺铂抑制卵巢癌细胞增殖有拮抗作用,并降低G_0/G_1期的细胞比率;联合用NS398后,卵巢癌细胞的生长显著受抑制,同时G_0/G_1期细胞比率上升;RT-PCR结果显示40μmol/L LPA能促进COX-2的表达,而合用NS398后COX-2表达降低。结论:NS398可能通过抑制COX-2表达,实现逆转LPA拮抗顺铂抑制卵巢癌细胞细胞增殖的作用。

NS398对卵巢癌细胞系CAOV3免疫杀伤作用的体外研究

目的观察和探讨COX-2选择性抑制剂NS398对卵巢癌细胞系CAOV3增殖抑制作用及对CTL细胞体外免疫杀伤作用的影响。方法放射免疫法测定CAOV3细胞及经NS398处理的CAOV3细胞培养上清液中的PGE2含量,流式细胞仪分析CTL细胞表型,MTT比色法检测CTL细胞杀伤活性。结果 NS398能抑制CAOV3细胞分泌PGE2;经NS398处理的CAOV3刺激诱导产生CTL细胞对CAOV3细胞的杀伤活性显著增加。结论 NS398可能成为卵巢癌预防与治疗的新靶点。