曲妥珠单抗联合NSC 74859对曲妥珠耐药的乳腺癌细胞的抑制作用研究

目的:观察曲妥珠单抗(Trastuzumab)与转录信号转导子与激活子3蛋白(STAT3)抑制剂NSC 74859联用对曲妥珠耐药细胞株SK-BR-3R的生长抑制作用及机理研究。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法鉴定曲妥珠耐药的SK-BR-3R细胞株并检测曲妥珠单药处理、NSC 74859单药处理以及两药联用处理对SK-BR-3R细胞的生长抑制程度。建立SK-BR-3R的皮下肿瘤模型,观察两药联用对肿瘤生长的抑制效果;通过免疫印迹(Western Blot)实验检测SK-BR-3R细胞中磷酸化HER2(p-HER2),磷酸化STAT3(p-STAT3)及磷酸化AKT(p-AKT)的水平。结果:当曲妥珠浓度在50 nmol/L及NSC 74859的浓度在50μmol/L联用时,较之两药单用显示了显著的抑制效果,其差异具有统计学意义;进一步在建立的SK-BR-3R小鼠肿瘤模型中观察到了曲妥珠联合NSC74859治疗组显示了比曲妥珠或NSC 74859单独使用时更显著的抑瘤效果。最后,免疫印迹实验显示了曲妥珠和NSC74859联合处理显著降低了SK-BR-3R细胞的HER2,STAT3及AKT的磷酸化水平。结论:曲妥珠单抗联合NSC 74859使用可显著抑制曲妥珠耐药的乳腺癌细胞SK-BR-3R的生长,其机制可能是药物协同抑制了对肿瘤生长重要的PI3K/AKT信号通路。本研究可为临床上治疗曲妥珠耐药的乳腺癌提供参考。

NSC74859对食管鳞状细胞癌人源肿瘤异种移植模型的抗肿瘤作用研究

目的观察小分子抑制剂NSC74859对食管鳞状细胞癌(ESCC)人源肿瘤异种移植模型(patient-derived tumor xenograft,PDX)的抗肿瘤作用及其机制。方法首先利用UALCAN分析信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在肿瘤及正常样本中的表达。其次将临床手术切除的新鲜的ESCC组织经无菌条件处理后移植到高度免疫缺陷小鼠的皮下,建立ESCC皮下移植肿瘤模型,并将第零代PDX模型(F0)肿瘤组织在裸鼠体内传代至第4代(F4),将F4代ESCC PDX小鼠随机分为两组:NSC74859治疗组,5 mg/kg,每天腹腔注射1次,共给药7 d;溶媒对照组,等体积溶媒注射,每天腹腔注射1次,共给药7 d。每周2次测量裸鼠体重、肿瘤体积,计算相对肿瘤体积和相对肿瘤抑制率,绘制肿瘤生长曲线。观察28 d后脱颈椎处死各组小鼠,摘取肿瘤组织,称量肿瘤湿重。运用Western blot和免疫组织化学方法检测两组瘤体组织中STAT3及p-STAT3蛋白的表达。结果STAT3在多种肿瘤中高表达,在食管癌中表达量最高。ES0172模型在给药开始后第28天时,相对肿瘤抑制率TGI(%)为49.96%(P<0.05);ES0195模型在给药开始后第26天时,相对肿瘤抑制率TGI(%)为53.88%(P<0.05)。ES0172模型和ES0195模型中NSC74859治疗组瘤重都显著低于溶媒对照组瘤重(P<0.05)。p-STAT3在NSC74859治疗组中的表达水平显著低于溶媒对照组(P<0.05)。结论NSC74859能减轻ESCC肿瘤负荷,其抗肿瘤机制可能与下调STAT3的磷酸化水平有关。

信号转导及转录激活因子3抑制剂增强肺癌细胞对多柔比星的敏感性

目的研究信号转导及转录激活因子3(STAT3)活化水平在肺癌细胞对多柔比星药物敏感性上的作用,明确STAT3抑制剂和化疗药物对肺癌增殖的协同抑制作用。方法通过c-Src重组表达载体质粒转染A549细胞获得过表达c-Src的A549-c-Src细胞;应用CCK8试验分析不同浓度的NSC 74859、多柔比星或两药联合应用对细胞增殖能力的影响;应用蛋白质印迹法检测不同处理后胞内总STAT3、活化STAT3或Src的表达水平。结果 A549细胞经过NSC 74859作用后其胞内的p STAT3表达水平明显低于未经NSC 74859处理的对照组细胞(t=5.90,P<0.05),STAT3活化水平下调导致多柔比星的IC50降低(F=186.50,P<0.05),增强A549细胞对多柔比星的敏感性。c-Src过表达促进了STAT3活化,A549-c-Src细胞中多柔比星的IC50值明显高于A549-pcDNA3细胞(F=17.26,P<0.05)。联合应用NSC 74859和多柔比星可通过抑制A549-c-Src细胞的STAT3活化水平,恢复其对化疗药物的敏感性。结论 STAT3活化水平下调可增强肺癌细胞对多柔比星的敏感性,STAT3抑制剂和多柔比星联合治疗对抑制肺癌细胞生长具有高度协同作用。

母乳中瘦素预防低胎龄新生雌鼠成年期肥胖作用机制研究

目的:观察阻断哺乳期瘦素-OBRb-JAK2/信号转导与转录活化因子(STAT)3-细胞因子信号转导抑制蛋白(SOCS)3信号通路对低胎龄(SGA)SD雌鼠成年期代谢的影响。方法:建立SGA新生鼠模型。予SGA新生雌鼠皮下注射STAT3抑制剂(NSC74859)(0.5μg·g^(-1)·d^(-1),qd,共18 d),于生后第18、30、90、180 d测雌鼠体质量、腹围、体重指数(BMI)。Western blot检测雌鼠下丘脑组织的阿黑皮素原(POMC)、SOCS3蛋白表达水平变化。结果:SGA组雌鼠体质量、腹围、BMI在成年期均大于对照组(P<0.05)。SGA组18 d时POMC、SOCS3蛋白表达水平比对照组明显降低(P<0.05),30 d时无统计学意义,90、180 d又明显降低(P<0.05)。结论:哺乳期SGA雌鼠皮下注射NSC74859后出现成年期肥胖,其主要是通过下调POMC蛋白表达水平而实现。