重组轮状病毒NSP4蛋白对大鼠神经元细胞内钙离子的干扰及损伤作用

目的研究轮状病毒非结构蛋白4的86～175位氨基酸肽段（amino acid residues86to 175 of nonstructural protein4，NSP486-175）对大鼠神经元细胞内钙离子的干扰及损伤作用。方法利用前期制备好的活性NSP486-175蛋白处理原代培养的大鼠神经元细胞，观察蛋白质处理后细胞的形态变化，检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性；Fluo-3AM标记细胞内游离的钙离子．蛋白质处理细胞后，用激光共聚焦显微镜检测神经元细胞内钙离子浓度变化。结果正常生长的神经元细胞胞体丰满，呈不规则形或梭形，细胞突起数量较多并且较长，纯化的NSP4 86-175 蛋白刺激后的大鼠神经元细胞出现明显的细胞病变效应，细胞密度稀疏，细胞胞体皱缩，细胞突起数量减少；蛋白质处理组细胞培养液中的LDH活性均增大；外源性添加NSP4 86-175 能引起神经元细胞内荧光强度和分布改变。结论NSP4 86-175 对大鼠神经元细胞具有损伤作用，这可能与它导致细胞内钙库释放引起的钙离子浓度升高有关，为轮状病毒肠道外播散感染和致病提供了一定的理论依据。