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轮状病毒NSP5结构与功能的研究进展 被引量:2
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作者 刘洋 林晓晨 李鸿钧 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期72-74,共3页
轮状病毒(RV)是世界范围内导致婴幼儿胃肠道疾病的主要病原体,RV基因组由11个分节段的双链RNA组成,分别编码6个结构蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4、VP6和VP7)和6个非结构蛋白(NSP1、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5和NSP6),其中第11基因片段编码非结... 轮状病毒(RV)是世界范围内导致婴幼儿胃肠道疾病的主要病原体,RV基因组由11个分节段的双链RNA组成,分别编码6个结构蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4、VP6和VP7)和6个非结构蛋白(NSP1、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5和NSP6),其中第11基因片段编码非结构蛋白NSP5。NSP5蛋白较大,NSP5在病毒感染细胞中以二聚体形式存在,是一个高度磷酸化的蛋白,可与轮状病毒其他非结构蛋白或结构蛋白相互作用,具有RNA结合活性,在病毒复制过程中主要通过与NSP2的一系列相互作用发挥功能。对轮状病毒的相关结构与功能的研究十分必要,近年来,对轮状病毒的非结构蛋白进行了大量研究,主要集中在其结构、表达、功能及免疫学性质方面,现就目前国内外对轮状病毒NSP5结构与功能的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 轮状病毒 结构蛋白 非结构蛋白 nsp5
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传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp5在真核细胞中的重组表达及鉴定 被引量:1
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作者 耿阳 牟小东 +3 位作者 刘然 边葶苈 廖敏 周继勇 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第2期11-16,共6页
本文以嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)毒株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得IBV非结构蛋白5(non-structural protein,nsp5)基因片段后,构建了杆状病毒重组质粒IBVnsp5-Bacmid。IBVnsp5-Bacmid转染Sf9细胞... 本文以嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)毒株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得IBV非结构蛋白5(non-structural protein,nsp5)基因片段后,构建了杆状病毒重组质粒IBVnsp5-Bacmid。IBVnsp5-Bacmid转染Sf9细胞,获得nsp5重组杆状病毒,经(immunofluorescence assay,IFA)和Western blot检测到转染细胞表达的nsp5蛋白。进一步从感染的细胞中纯化重组蛋白,并用纯化的蛋白免疫小鼠制备了抗nsp5的多抗血清,该多抗血清可检测到IBV四川株SC021202感染的DF-1细胞中特异性的nsp5蛋白。结果表明IBV nsp5在Bac-to-Bac真核表达系统中获得了成功表达,而且具有良好的免疫原性和反应原性。 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 非结构蛋白5 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统
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A群轮状病毒NSP5蛋白在细胞器中定位特性 被引量:1
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作者 谷凤丽 石达 +6 位作者 时洪艳 陈建飞 张鑫 袁婧 徐天 董慧 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期143-145,共3页
为研究A组猪轮状病毒(Po RV)非结构蛋白NSP5在MA-104细胞中的定位情况,本研究将NSP5蛋白基因克隆于表达载体p EGFP-C2中构建重组质粒p EGFP-NSP5,将其转染于MA-104细胞中进行NSP5瞬时表达,并于转染48 h后利用激光共聚焦显微镜分析NSP5... 为研究A组猪轮状病毒(Po RV)非结构蛋白NSP5在MA-104细胞中的定位情况,本研究将NSP5蛋白基因克隆于表达载体p EGFP-C2中构建重组质粒p EGFP-NSP5,将其转染于MA-104细胞中进行NSP5瞬时表达,并于转染48 h后利用激光共聚焦显微镜分析NSP5表达蛋白在细胞中的定位情况。结果表明,表达蛋白在MA-104细胞中的线粒体、内质网、高尔基体中均有分布,主要定位于细胞质。本研究为进一步分析病毒的复制和致病机理提供依据。 展开更多
关键词 A组猪轮状病毒 nsp5蛋白 MA-104细胞 共定位
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轮状病毒NSP5克隆、鉴定、表达及其条件优化
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作者 林家锋 陶晓莉 +5 位作者 陆恒章 于美玲 李婷婷 李藤菲 程美慧 李永刚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期703-708,共6页
目的为制备NSP5多克隆抗体及进一步研究NSP5的功能和在轮状病毒复制中的作用奠定基础。方法利用分子克隆的技术构建出原核表达蛋白质粒NSP5-pGEX-6P-1和真核表达质粒NSP5-pFLAG-CMV-3,其中NSP5-pFLAG-CMV-3转染细胞后通过Western Blot... 目的为制备NSP5多克隆抗体及进一步研究NSP5的功能和在轮状病毒复制中的作用奠定基础。方法利用分子克隆的技术构建出原核表达蛋白质粒NSP5-pGEX-6P-1和真核表达质粒NSP5-pFLAG-CMV-3,其中NSP5-pFLAG-CMV-3转染细胞后通过Western Blot和间接免疫荧光法观测NSP5在293T细胞里的表达和定位;NSP5-pGEX-6P-1经转化E.coli BL21(DE3)后从IPTG浓度、温度及历经时间3个方面摸索出最优化的诱导蛋白表达条件,并经GST琼脂糖树脂纯化蛋白且用SDS-PAGE和Western Blot进行鉴定。结果构建了真核表达载体NSP5-pFLAG-CMV-3和原核表达载体NSP5-pGEX-6P-1。经NSP5-pFLAG-CMV-3转染后的293T细胞通过Western Blot验证NSP5蛋白在细胞中成功表达,间接免疫荧光观察到重组蛋白在细胞质中富集。37℃、8 h、0.4 mmol/L IPTG诱导是NSP5-pGEX-6P-1蛋白表达的最适条件,且以包涵体形式汇聚在沉淀中进行表达。SDS-PAGE和Western Blot表明重组蛋白纯化成功。结论成功构建NSP5重组表达系统,成功优化了NSP5蛋白诱导表达的条件并纯化蛋白。 展开更多
关键词 轮状病毒 nsp5 基因重组 蛋白表达 蛋白纯化
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猪流行性腹泻病毒结构与非结构蛋白诱导细胞凋亡的研究 被引量:1
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作者 欧芳玲 朱慧欣 +2 位作者 李紫彤 刘星 王先炜 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第1期60-68,共9页
为了弄清猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染后诱导细胞凋亡的关键蛋白,采用基因克隆技术构建PEDV相关病毒蛋白的真核表达质粒,转染至HEK-293T细胞,通过流式细胞术检测其细胞凋亡率。结果显示:PEDV非结构蛋白Nsp3和Nsp5以及结构蛋白M的重组质... 为了弄清猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染后诱导细胞凋亡的关键蛋白,采用基因克隆技术构建PEDV相关病毒蛋白的真核表达质粒,转染至HEK-293T细胞,通过流式细胞术检测其细胞凋亡率。结果显示:PEDV非结构蛋白Nsp3和Nsp5以及结构蛋白M的重组质粒转染细胞后显著诱导细胞凋亡,且诱导的细胞凋亡呈现时间和剂量依赖性,提示Nsp3、Nsp5和M蛋白可能是PEDV的关键促凋亡因子。该结果为进一步研究PEDV诱导细胞凋亡的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 细胞凋亡 Nsp3 nsp5 M蛋白
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Analysis of molecular variation in porcine reproductive and respiratory syndrome virus in China between 2007 and 2012 被引量:2
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作者 Yuhang Cao Hongsheng Ouyang +4 位作者 Mingjun Zhang Fuwang Chen Xin Yang Daxing Pang Linzhu Ren 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2014年第3期183-188,共6页
In the present study, 89 porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) isolates in China during 2007 to 2012 were randomly selected from the GenBank genetic sequence database. Evolutionary characteristics... In the present study, 89 porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) isolates in China during 2007 to 2012 were randomly selected from the GenBank genetic sequence database. Evolutionary characteristics of these isolates were analyzed based on the sequences of non-struc-tural protein 2(Nsp2) and glycoprotein 5(GP5). The genetic variations of the isolates were also compared with six representative strains. The results showed that a high degree of genetic diversity exists among the PRRSV population in China. Highly pathogenic PRRSV isolates, with a discon-tinuous deletion of a 30 amino acid residue in the Nsp2 region, remained the most dominant virus throughout 2007–2012 in China. Owing to the extensive use of representative vaccine strains, natu-ral recombination events occurred between strains. Three isolates – HH08, DY, and YN-2011 – were more closely related to vaccine strains than the other isolates. Both YN-2011 and DY were the evolu-tionary products of recombination events between strains SP and CH-1R. The results of the present study provide useful information for the epidemiology of PRRSV as well as for vaccine development. 展开更多
关键词 porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) open reading frame(ORF) non-structural protein 2(Nsp2) glycoprotein 5(GP5) recombination
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