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猪流行性腹泻病毒nsp1、nsp5和N蛋白的重组腺病毒载体的构建及免疫原性比较 被引量:1
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作者 杨霞 王爽云 +8 位作者 于林洋 徐舸 郑继豪 王志朋 张歆明 刘燕玲 张乐宜 徐铮 宋长绪 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第3期73-78,共6页
为研究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)nsp1、nsp5和N蛋白的免疫原性,试验以复制缺陷型人腺病毒5型(AdMax系统)为载体,利用PEDV-GDgh毒株(登录号为MG983755),通过PCR方法扩增出GDgh毒株nsp1、nsp5、N基因,并将... 为研究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)nsp1、nsp5和N蛋白的免疫原性,试验以复制缺陷型人腺病毒5型(AdMax系统)为载体,利用PEDV-GDgh毒株(登录号为MG983755),通过PCR方法扩增出GDgh毒株nsp1、nsp5、N基因,并将其连接到腺病毒穿梭载体上,构建重组穿梭质粒。将3个重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体共转染至HEK-293A细胞中获得第1代重组腺病毒,分别命名为rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N。用第1代3株重组腺病毒接种HEK-293A细胞,连续传代,通过RT-PCR和Western-blot方法鉴定第3代重组腺病毒,并采用Reed-Muench法计算病毒半数组织培养感染剂量(TCID_(50))。以3株重组腺病毒的第3代病毒液免疫小鼠,收集血清并检测特异性IgG抗体水平。结果表明:试验成功构建出带有nsp1、nsp5、N基因的重组穿梭质粒;分别用重组腺病毒rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N感染正常HEK-293A细胞,可产生典型的细胞病变并观察到荧光信号;目的基因正常转录后得到的目的蛋白可正确表达;3株重组腺病毒rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N的TCID_(50)依次为1×10^(-8.35)/mL、1×10^(-8.50)/mL、1×10^(-7.66)/mL;免疫小鼠后均可产生针对目的蛋白的特异性抗体。说明试验成功构建的3株正常表达目的蛋白的重组腺病毒均具有免疫原性。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) nsp1基因 nsp5基因 N基因 重组腺病毒 免疫原性 构建 鉴定
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PRRSV Nsp4基因突变株对β2M表达的影响
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作者 康磊 刘珂 +8 位作者 王建忠 尹才 邱亚峰 魏建超 李蓓蓓 邵东华 李宗杰 粟硕 马志永 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期507-514,共8页
[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp... [目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测,在其DomainⅡ和DomainⅢ分别筛选出3个和5个不同的氨基酸位点,并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变,再将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒,将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞,并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M表达方面发挥作用。[结果]成功拯救出PRRSV D2-5(Nsp4-A80L)突变毒株,并且在Marc-145细胞上的生长动力学特性与野生毒株SH2020相似;而Nsp4基因其余位点突变则会导致PRRSV生长受到显著抑制从而无法进行试验。Western blot和RT-qPCR试验结果证实PRRSV D2-5毒株能够显著促进β2M在Marc-145和PAM细胞的表达,而野生毒株SH2020则表现出了对β2M表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M表达方面发挥重要作用,并且Nsp4-A80L突变能够显著促进β2M的表达。 展开更多
关键词 PRRSV NSP4 Β2M 反向遗传平台 突变毒株
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利用反向遗传技术产生表达外源基因的重组SA11轮状病毒
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作者 柴萨萨 蔡昊 +6 位作者 刘夏飞 赵静 宋敬东 李金松 裴银辉 李利利 段招军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期140-146,共7页
目的利用反向遗传技术产生NSP1基因插入和表达外源基因的重组SA11轮状病毒,构建可表达外源基因的轮状病毒载体。方法本研究将轮状病毒SA11株的NSP1基因片段的223位(5端)至1388位的核苷酸删除,并直接插入连接了终止-再启动元件(P2A)的增... 目的利用反向遗传技术产生NSP1基因插入和表达外源基因的重组SA11轮状病毒,构建可表达外源基因的轮状病毒载体。方法本研究将轮状病毒SA11株的NSP1基因片段的223位(5端)至1388位的核苷酸删除,并直接插入连接了终止-再启动元件(P2A)的增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因,采用已建立的“12质粒”轮状病毒反向遗传系统拯救NSP1基因插入和表达EGFP的重组SA11轮状病毒。通过观察细胞病变效应和插入基因(EGFP)的荧光表达初步确定重组病毒的成功拯救,再结合电镜的形态学观察、RT-PCR的测序结果及病毒基因组的检测结果,进一步证明重组轮状病毒的成功拯救和传代扩增。利用TCID 50法和qRT-PCR法,测定了rSA11和rSA11/NSP1-EGFP的病毒滴度并绘制了基因组复制动力曲线。结果基于“12质粒系统”成功拯救了重组轮状病毒rSA11/NSP1-EGFP,证明NSP1片段截短并插入外源基因后病毒仍可正常复制,且具有良好的遗传稳定性,但病毒滴度低于其亲本株。结论基于NSP1基因插入和表达EGFP的重组轮状病毒能够实现稳定遗传,为利用反向遗传学构建表达外源基因的轮状病毒载体的深入探索提供了基础。 展开更多
关键词 A组轮状病毒 反向遗传 外源基因 NSP1基因
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猪丁型冠状病毒NSP14蛋白截短表达及其间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 刘思雨 何颖 +6 位作者 卢冰霞 赵武 赵硕 许心婷 全琛宇 秦毅斌 欧阳康 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1238-1248,共11页
【目的】进行猪丁型冠状病毒(PDCoV)NSP14蛋白截短原核表达,制备PDCoV NSP14蛋白的多克隆抗体,并建立检测PDCoV抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),为探究PDCoV NSP14蛋白的生物学功能及进行PDCoV监测和诊断提供参考依据。【方法】以PDC... 【目的】进行猪丁型冠状病毒(PDCoV)NSP14蛋白截短原核表达,制备PDCoV NSP14蛋白的多克隆抗体,并建立检测PDCoV抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),为探究PDCoV NSP14蛋白的生物学功能及进行PDCoV监测和诊断提供参考依据。【方法】以PDCoV 1468B毒株为模板,构建NSP14截短基因原核重组质粒pET32a-NSP14,经双酶切和测序鉴定后,通过原核表达系统获得NSP14融合蛋白,将其纯化后免疫新西兰大白兔获得NSP14蛋白的多克隆抗体,进行Western blotting验证,并用间接ELISA测定其效价。以NSP14融合蛋白为抗原包被酶标板,采用方阵滴定法优化一系列反应条件,构建检测PDCoV抗体的间接ELISA。【结果】在构建的pET32a-NSP14重组质粒中,NSP14蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,其大小约40.2 kD;制备的NSP14蛋白多克隆抗体效价在1∶512000以上,经Western blotting验证,能与纯化的NSP14融合蛋白发生特异性反应。经过筛选,确定所构建检测PDCoV抗体间接ELISA的最佳反应条件:NSP14融合蛋白最佳包被浓度为4.0μg/mL,包被条件为37℃、2.0 h;封闭条件为5%脱脂奶粉封闭1.0 h;待检血清按1∶400稀释,孵育2.0 h;酶标二抗1∶2500稀释,孵育60.0 min;TMB底物显色时间为30.0 min。特异性试验结果表明,猪病阳性血清PRRSV、JEV、PCV2、PPV、PEDV和CSFV的OD450均小于0.235,说明优化的间接ELISA检测的病原与其他猪病毒阳性血清无反应,特异性良好。重复性试验结果表明,优化的间接ELISA检测猪病阳性血清的批内和批间变异系数均小于10.000%,说明优化的ELISA具有较好的重复性。【结论】成功制备具有高效价和良好免疫反应性的PDCoV NSP14蛋白多克隆抗体,并建立检测该抗体的特异性、敏感性和重复性良好的间接ELISA,可供进一步研究PDCoV NSP14蛋白的生物学功能及进行PDCoV监测和诊断参考应用。 展开更多
关键词 猪丁型冠状病毒 NSP14蛋白 原核表达 多克隆抗体制备 间接ELISA
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猪流行性腹泻病毒Nsp6蛋白的分段表达及多克隆抗体制备
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作者 陈东奇 郑殿重 +11 位作者 魏志颖 王莹 李佳璇 崔文 姜艳平 王晓娜 周晗 王丽 乔薪瑗 李一经 唐丽杰 单智夫 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第1期91-97,共7页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域,本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域,本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大肠杆菌Rosetta感受态中,经IPTG诱导并纯化后,所得蛋白用于小鼠免疫,制备抗Nsp6蛋白的多克隆抗体。再将Nsp6及其3个分段基因分别构建至真核表达载体pCMV-HA,并将其转染至IPEC-J2细胞进行真核表达,通过Western blot和双荧光标记法来确定蛋白表达情况。结果:Nsp6蛋白在Rosetta中成功表达,并通过免疫小鼠获得了效价为1∶10240的多克隆抗体,该抗体具有与PEDV和Nsp6蛋白特异性结合的能力;免疫荧光及Western blot结果表明,Nsp-6及其截短基因在IPEC-J2细胞中成功表达,且与制备的Nsp6多克隆抗体发生特异性结合。综上,本研究原核表达了Nsp6蛋白并制备了相应的特异性抗体,验证了Nsp6及其分段基因的在细胞中的真核表达,为进一步研究Nsp6蛋白的特性和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 Nsp6基因 多克隆抗体 分段表达 真核表达
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PRRSV非结构蛋白NSP4及其3个主要结构域过表达慢病毒载体的构建及鉴定
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作者 李子镛 任金瑞 +6 位作者 吴香菊 丛晓燕 李均同 齐静 王晓晔 胡悦 杜以军 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第12期74-80,共7页
旨在构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NSP4蛋白及其3个主要结构域的过表达慢病毒载体,包装慢病毒并检测4种慢病毒在人单核细胞白血病细胞THP-1和猪肺泡巨噬细胞PAM中的表达。试验以质粒pXJ41-HA-NSP4为模板,分别扩增NSP4全长及其3个... 旨在构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NSP4蛋白及其3个主要结构域的过表达慢病毒载体,包装慢病毒并检测4种慢病毒在人单核细胞白血病细胞THP-1和猪肺泡巨噬细胞PAM中的表达。试验以质粒pXJ41-HA-NSP4为模板,分别扩增NSP4全长及其3个结构域NSP4-DⅠ、NSP4-DⅡ、NSP4-DⅢ片段,连接到pCD513B慢病毒表达载体中,构建重组质粒pCD513B-NSP4、pCD513B-NSP4-DⅠ、pCD513B-NSP4-DⅡ、pCD513B-NSP4-DⅢ;将慢病毒重组质粒与包装质粒pLP1、pLP2、pLP/VSVG共转染HEK-293T细胞,包装获得4种重组慢病毒rLV-NSP4、rLV-NSP4-DⅠ、rLV-NSP4-DⅡ、rLV-NSP4-DⅢ,并感染HEK-293T细胞测定病毒滴度;分别将4种重组慢病毒感染THP-1细胞、PAM细胞,荧光显微镜观察目的蛋白表达,荧光定量PCR(qPCR)检测目的基因转录水平,Western blot检测不同感染时间目的蛋白表达水平。结果:4种慢病毒rLV-NSP4、rLV-NSP4-DⅠ、rLV-NSP4-DⅡ、rLV-NSP4-DⅢ感染HEK-293T细胞的病毒滴度分别为2.2×10^(6)、2.8×10^(6)、2.5×10^(6)和2.5×10^(6) TU/mL;荧光显微镜观察显示4种慢病毒感染THP-1细胞和PAM细胞后阳性细胞数均随时间的增加而增多;qPCR结果表明目的基因转录水平在慢病毒感染后60 h内随着感染时间增加而升高;Western blot表明4种慢病毒能够成功感染THP-1细胞和PAM细胞并稳定表达相应的目的蛋白,且蛋白表达水平随着感染时间增加而升高。综上,本研究成功包装PRRSV NSP4及其3个主要结构域重组过表达慢病毒,为进一步研究PRRSV NSP4及其3个结构域的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP4 慢病毒载体 鉴定
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因研究进展 被引量:1
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作者 张航 沙惠阳 +1 位作者 黄良宗 赵孟孟 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期214-221,共8页
猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种烈性传染病。PRRSV的非结构蛋白2(NSP2)编码一个多功能蛋白,具有广泛生物学作用。本文对NSP2遗传变异分析,与自身病毒蛋白互作,与宿主蛋白互作,影响PRRSV复制、毒力、细... 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种烈性传染病。PRRSV的非结构蛋白2(NSP2)编码一个多功能蛋白,具有广泛生物学作用。本文对NSP2遗传变异分析,与自身病毒蛋白互作,与宿主蛋白互作,影响PRRSV复制、毒力、细胞噬性,调节宿主免疫以及在疫苗应用等相关研究进行综述,为深入研究PRRSV致病机理和疫苗设计提供重要理论基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因 致病机理 疫苗研究
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猪流行性腹泻病毒Nsp7基因真核表达载体的构建及表达
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作者 魏佳琪 高振秋 +6 位作者 郑亮 牛欣雨 武峰峰 吴春宇 王志昊 张华 曹宏伟 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第1期91-97,共7页
PEDV Nsp7蛋白是猪流行性腹泻病毒的一种非结构蛋白,它在病毒复制过程中表达,并与感染细胞的内质网和细胞膜相关,是病毒基因组翻译的两个大型复制酶的关键辅助因子。为了对PEDV Nsp7蛋白进行更加深入的研究,试验从病变猪小肠中提取总RNA... PEDV Nsp7蛋白是猪流行性腹泻病毒的一种非结构蛋白,它在病毒复制过程中表达,并与感染细胞的内质网和细胞膜相关,是病毒基因组翻译的两个大型复制酶的关键辅助因子。为了对PEDV Nsp7蛋白进行更加深入的研究,试验从病变猪小肠中提取总RNA,并通过RT-PCR扩增获取PEDVNsp7基因,最终将其连接到pCMV-Myc载体上。试验结果显示,成功构建了pCMV-Myc-Nsp7的重组质粒,并通过Western Blot技术和免疫荧光技术在真核细胞中验证了其蛋白表达情况,为后续研究PEDV Nsp7的生物学功能奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 Nsp7基因 真核表达载体 蛋白表达
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猪流行性腹泻病毒解旋酶Nsp13表达纯化及其RNA解旋活性鉴定
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作者 沈熹涓 姬晶晶 +3 位作者 金慧琴 李宇哲 刘斐 单衍可 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第1期33-38,共6页
旨在可溶性表达并纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)解旋酶Nsp13,并验证表达纯化得到的PEDV Nsp13蛋白具有RNA解旋活性。将pET28a(+)-PEDV Nsp13重组质粒转化到大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞中,利用终浓度0.5 mmol/L的IPTG在18℃条件下诱... 旨在可溶性表达并纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)解旋酶Nsp13,并验证表达纯化得到的PEDV Nsp13蛋白具有RNA解旋活性。将pET28a(+)-PEDV Nsp13重组质粒转化到大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞中,利用终浓度0.5 mmol/L的IPTG在18℃条件下诱导16 h,收集诱导后的菌体,超声破碎并收集其上清液,通过镍亲和层析技术获得纯化后的PEDV Nsp13;设计RNA底物,并建立体外解旋反应体系,验证蛋白的RNA解旋活性,并在相同时间内探究不同温度条件下PEDV Nsp13蛋白对RNA的解旋情况,进一步验证其活性。结果表明,在大肠杆菌系统中可溶性表达了PEDV Nsp13蛋白,纯化后蛋白浓度可达0.9 mg/mL;通过体外解旋试验,验证了PEDV Nsp13蛋白具有ATP依赖的RNA解旋酶活性,并发现PEDV Nsp13蛋白的RNA解旋酶活性在一定范围内随解旋温度的升高而提高。本研究结果为进一步深入研究PEDV Nsp13的RNA解旋作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 PEDV Nsp13 可溶性表达 蛋白纯化 RNA解旋活性
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新型冠状病毒Nsp1基因真核表达载体的构建及对宿主蛋白质翻译的影响
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作者 王宏宇 田志飘 +8 位作者 刘红线 郑亮 于雯 吴志军 Matthew Kay 高振秋 曹宏伟 耿荣庆 张华 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第1期84-90,共7页
非结构蛋白1(Non-structural protein 1,Nsp1)作为新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)的毒力决定因子,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为更有效地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的生物学功能,成... 非结构蛋白1(Non-structural protein 1,Nsp1)作为新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)的毒力决定因子,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为更有效地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的生物学功能,成功构建SARS-CoV-2Nsp1基因的真核表达载体,并验证其抑制宿主及外源蛋白质翻译的功能。通过PCR技术扩增SARS-CoV-2Nsp1基因后,利用同源重组技术将其连接至pEGFP-N1载体上。经双酶切和测序结果鉴定,SARS-CoV-2Nsp1基因成功克隆至pEGFP-N1载体上。将重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1转染至HEK-293T细胞和HeLa细胞中,经嘌呤霉素标记后,利用Western Blot和考马斯亮蓝染色检测重组质粒的表达以及嘌呤霉素信号。结果表明,重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1在HEK-293T细胞和HeLa细胞中成功表达,并验证其抑制宿主蛋白质和外源转入细胞蛋白质的翻译,为更深入研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的功能奠定基础。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 Nsp1基因 真核载体构建 蛋白翻译
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Anti-Jamming Null Space Projection Beamforming Based on Symbiotic Radio
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作者 Baofeng Ji Yifan Liu +6 位作者 Tingpeng Li Ling Xing Weixing Wang Shahid Mumtaz Xiaolong Shang Wanying Liu Congzheng Han 《Computer Modeling in Engineering & Sciences》 SCIE EI 2024年第1期679-689,共11页
With the development of information technology,more and more devices are connected to the Internet through wireless communication to complete data interconnection.Due to the broadcast characteristics ofwireless channe... With the development of information technology,more and more devices are connected to the Internet through wireless communication to complete data interconnection.Due to the broadcast characteristics ofwireless channels,wireless networks have suffered more and more malicious attacks.Physical layer security has received extensive attention from industry and academia.MIMO is considered to be one of the most important technologies related to physical layer security.Through beamforming technology,messages can be transmitted to legitimate users in an offset direction that is as orthogonal as possible to the interference channel to ensure the reception SINR by legitimate users.Combining the symbiotic radio(SR)technology,this paper considers a symbiotic radio antijamming MIMO system equipped with a multi-antenna system at the main base station.In order to avoid the interference signal and improve the SINR of the signal received by the user.The base station is equipped with a uniform rectangular antenna array,and using Null Space Projection(NSP)Beamforming,Intelligent Reflecting Surface(IRS)can assist in changing the beam’s angle.The simulation results show that NSP Beamforming could make a better use of the null space of interference,which can effectively improve the received SINR of users under directional interference,and improve the utilization efficiency of signal energy. 展开更多
关键词 Symbiotic radio ANTI-JAMMING MIMO NSP Beamforming physical layer security
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like株的分离鉴定及基因组分析
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作者 毛丽萍 潘晓梅 +5 位作者 曹剑 李俊辉 周涛 侯红娟 郑学功 贺笋 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期11-17,共7页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)呈现全球流行,对养猪行业造成巨大的经济损失。为增加PRRSV分离细胞种类的多样性,同时了解新疆地区猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)遗传变异的现状,采用新鲜制备猪骨髓细胞诱导分化成猪骨髓源巨噬细胞,对新疆地... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)呈现全球流行,对养猪行业造成巨大的经济损失。为增加PRRSV分离细胞种类的多样性,同时了解新疆地区猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)遗传变异的现状,采用新鲜制备猪骨髓细胞诱导分化成猪骨髓源巨噬细胞,对新疆地区某猪场疑似患有PRRS的肺脏,接种至猪骨髓源巨噬细胞,分离获得1株PRRSV毒株,命名为XJYQ-2021。通过测序得到全基因组序列,对该毒株NSP2氨基酸序列缺失、ORF5及全基因组序列进行同源性、遗传进化及重组分析;利用间接免疫荧光试验进行鉴定,同时对第10、15、20代病毒液绘制生长曲线。结果显示,诱导分化的猪骨髓源巨噬细胞纯度高达90%以上,XJYQ-2021分离株在该细胞生长良好,可见明显细胞病变;通过生长曲线可观察到病毒含量随代次增加而递增,感染48 h左右病毒滴度达到峰值;该分离株基因组全长15030 nt,与美洲型NADC30同源性为90%;XJYQ-2021分离株与VR2332相比,NSP2氨基酸序列与美洲型NADC30具有相同不连续缺失(111+1+19);全基因重组分析结果表明,XJYQ-2021分离株是重组病毒,有一个重组片段,其中NADC30是亲本毒株,与JXA1之间发生重组获得。研究结果可为PRRSV的病毒分离提供优选细胞种类,同时掌握了新疆地区PRRSV流行毒株的遗传进化现状。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类NADC30 猪骨髓源巨噬细胞 NSP2 重组分析
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Innovative COVID-19 Screening: RT-LAMP Assay for Spike and NSP1 Proteins
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作者 Muhammad Yousaf Amber Khan 《Journal of Clinical and Nursing Research》 2024年第6期256-265,共10页
Coronavirus disease(COVID-19)is a serious respiratory disease that spreads through the coronavirus globally.It soon became a pandemic after its appearance in 2019 and demanded new techniques for its identification and... Coronavirus disease(COVID-19)is a serious respiratory disease that spreads through the coronavirus globally.It soon became a pandemic after its appearance in 2019 and demanded new techniques for its identification and detection.Owing to this situation,RT-LAMP appears to be a novel method for the identification of COVID-19 because of its vast applications,including cost-effectiveness and time-saving.This research highlights the use of RT-LAMP,a more sensitive test than RT-PCR,for the assessment of SARS-CoV-2,the severe acute respiratory illness.To identify the spike(S)and NSP1 protein using RT-LAMP,170 total samples of coronavirus-suspected patients were served in this research.Health certifications and bioethical considerations were taken into consideration.After the sample was extracted from the patient's swabs,RNA was isolated,extracted,and purified.The response was then run on the RT-LAMP at the ideal temperature,and the outcomes could be observed with the unaided eye as they changed from pink to yellow.It is a simple method of determining if the test is positive or negative.For this purpose,both RT-LAMP and RT-PCR tests are used during these procedures.Genes linked with COVID-19 testing including S,nspl,and ORF are suited to coronavirus testing;they have 100%specificity and low sensitivity,but S has more specificity and sensitivity than nspl and ORF,respectively.Out of the 95 positive samples,89(93.68%)samples yielded favorable outcomes utilizing RT-LAMP,while 55 negative samples yielded 100%positive results.The present research demonstrates that RT-LAMP is less sensitive yet more selective for coronavirus detection. 展开更多
关键词 COVID-19 NSP1 SPIKE RT-LAMP
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基于音频多模态研究的信号分析系统设计
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作者 武雅琴 邓林强 +2 位作者 杨晨艺 吕嘉 公徐路 《山西电子技术》 2024年第1期95-98,共4页
通过统计分析NSP模态文件准确定位真实数据,解析WAV模态文件结构、编码特征和影响因素,充分考虑声道数、采样频率、PCM采样位数,实现不同模态格式转换,设计基于音频多模态研究的信号分析系统。实验从文件内码、文件参数信息、信号声波... 通过统计分析NSP模态文件准确定位真实数据,解析WAV模态文件结构、编码特征和影响因素,充分考虑声道数、采样频率、PCM采样位数,实现不同模态格式转换,设计基于音频多模态研究的信号分析系统。实验从文件内码、文件参数信息、信号声波波形和主观听觉感受方面进行综合对比分析,验证该系统的有效性和实用性。 展开更多
关键词 音频多模态 信号分析 NSP WAV
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基于NSP联合Mini-CEX模式对精神科护生实习能力和自我效能感的影响
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作者 温萌 王佳佳 《中文科技期刊数据库(文摘版)教育》 2024年第4期0024-0027,共4页
探究基于护士标准化病人(NSP)联合迷你临床演练评估(Mini-CEX)模式对精神科护生实习带教和自我效能感的影响效果。方法 采用随机抽样法,选取徐州医科大学护理学院2022年3月-2023年4月期间在本院实习的护生共67人,对照组34人采用传统精... 探究基于护士标准化病人(NSP)联合迷你临床演练评估(Mini-CEX)模式对精神科护生实习带教和自我效能感的影响效果。方法 采用随机抽样法,选取徐州医科大学护理学院2022年3月-2023年4月期间在本院实习的护生共67人,对照组34人采用传统精神科教学模式实习带教,研究组33人采用NSP联合Mini-CEX模式实习带教,实习结束后对两组从教学目标完成度、理论知识掌握度及技术操作提升度进行综合考核评价,两组采用一般自我效能感量表评估执行能力等指标。结果 研究组护理问诊、查体、诊断、措施、健康咨询、人文关怀、组织效能和整体评价考核成绩均高于对照组(P<0.05),研究组自我效能感较对照组显著提升(P<0.01),其中健康咨询、人文关怀以及组织效能与自我效能感有显著正相关性(P<0.01)。结论 基于护士标准化病人联合Mini-CEX模式可以实现教学、考核与评估的一体化,提高精神科护生实习带教质量,提升其综合临床护理服务能力;利用护士标准化病人基本杜绝传统标准化病人的伦理问题,更具实用性和科学性,提高实习带教整体满意度,值得持续推广与应用。 展开更多
关键词 NSP MINI-CEX 精神科护生 实习能力 自我效能感
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陕西省与河南省猪场猪繁殖障碍与呼吸综合征流行病学调查与序列分析
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作者 黄雄挺 郭紫晶 +3 位作者 周泷 陈劲松 张志东 李彦敏 《畜禽业》 2024年第3期1-10,共10页
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是影响全球养猪业的主要疾病之一。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的突变率是RNA病毒中最高的。为了解其分子特征和遗传变异,对陕西和河南地区猪场采集的252份... 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是影响全球养猪业的主要疾病之一。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的突变率是RNA病毒中最高的。为了解其分子特征和遗传变异,对陕西和河南地区猪场采集的252份疑似样本采用RT-PCR检测技术和生物信息学软件进行了ORF5基因和Nsp2基因序列比对和遗传变异分析。结果显示:252份样本中阳性样品为39份,阳性率为15.6%。对39份阳性样品克隆测序获得10条Nsp2基因阳性样品序列和5条ORF5基因阳性品序列;5株PRRSV ORF5基因毒株与GenBank中26株PRRSV参考毒株的ORF5基因之间的核苷酸序列同源性为79.7%~99.7%,10株PRRSV毒株Nsp2基因的核苷酸序列同源性为38.2%~92.2%,其中5株ORF5基因的GP5-5、GP5-7、GP5-10毒株为PRRSV-2型谱系1的毒株,99L、100L毒株为PRRSV-2型谱系5的毒株,分别与代表株NADC30和VR-2332亲缘关系最近;10株PRRSV毒株Nsp2基因均为PRRSV-2型谱系1的毒株,与代表株NADC30亲缘关系最接近。GP5蛋白与NSP蛋白均发生不同程度的变异,说明PRRSV毒株变异频繁,因此,实时监测PRRSV株系的遗传变异动态,探索其遗传变异模式,可为疫病防控提供科学参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 ORF5基因 序列分析 NSP2基因 遗传进化分析
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高致病性PRRSV的分离及其Nsp2和ORF5基因的序列分析 被引量:29
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作者 马静云 李浩波 +4 位作者 王玲玲 何晓明 王连想 谢青梅 毕英佐 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期650-657,共8页
从广东省不同地区疑似高致病性猪生殖与呼吸综合征病料中分离出能引起Marc-145细胞病变的病毒,经RT-PCR检测,确定分离物中存在美洲型猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),将此细胞病毒液命名为GDBl,用其感染回归5头40日龄健康仔猪,采... 从广东省不同地区疑似高致病性猪生殖与呼吸综合征病料中分离出能引起Marc-145细胞病变的病毒,经RT-PCR检测,确定分离物中存在美洲型猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),将此细胞病毒液命名为GDBl,用其感染回归5头40日龄健康仔猪,采集发病及死亡猪组织,重新用Marc-145细胞进行病毒分离,将再次分离到的病毒命名为GDB1F。对GDB1、GDBIF的Nsp2、ORF5基因序列进行测定分析。结果表明,单独感染猪2/2发病死亡,同居感染的3头猪全部发病,2头死亡;感染后2~4d所有感染猪均出现体温升高。死亡猪表现为严重的出血性、间质性肺炎,肢体远端皮表出血。序列分析结果表明,GDB1和GDB1F株的Nsp2基因与国内高致病性PRRSV分离株JXA1、HN2Nsp2、HNXT1、HNyz、HUB2、HUN1的同源性很高,达98.4%~99.0%。GDB1和GDB1F株的ORF5基因存在部分突变,没有缺失,与国内高致病性PRRSV分离株JXA1、HUB2、JX0612、GDZC1的同源性高达97.5%~99.8%。 展开更多
关键词 高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒 分离 NSP2基因 ORF5基因 序列分析
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高致病性猪蓝耳病病毒GS/LZh/07株的分离、鉴定及其非结构蛋白Nsp2基因特性分析 被引量:19
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作者 吴锦艳 田宏 +9 位作者 尚佑军 刘湘涛 郑海学 靳野 尹双辉 满自萍 赵娜 蔡承茹 蔺芳 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期438-443,共6页
将高致病性猪蓝耳病疑似病料接种Marc145细胞,发现该病料可使Marc145细胞产生CPE,应用猪蓝耳病病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,命名为Gs/Lzh/07株。同时应用RT-PCR方法扩增该分离毒株的非结构蛋白Nsp2基因,并进行了序列测定,... 将高致病性猪蓝耳病疑似病料接种Marc145细胞,发现该病料可使Marc145细胞产生CPE,应用猪蓝耳病病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,命名为Gs/Lzh/07株。同时应用RT-PCR方法扩增该分离毒株的非结构蛋白Nsp2基因,并进行了序列测定,发现所扩增到的Nsp2基因有90个核苷酸的缺失。序列比对结果表明:该分离病毒Nsp2基因与经典毒株PRRSV-ch-1a核苷酸同源性为83.0%,氨基酸同源性为72.7%;与高致病性变异毒株NX和SD核苷酸同源性为95.5%,氨基酸同源性为90.9%,可见该毒来源于2006-2007年流行毒株,说明高致病性猪蓝耳病变异病毒已经在甘肃省存在。该毒株的成功分离为高致病性猪蓝耳病流行病学调查分析提供数据,也为预防控制该病积累了资料。Nsp2的特性分析为揭示高致病性猪蓝耳病PRRSV在甘肃省的流行特点提供参考。 展开更多
关键词 高致病性猪蓝耳病病毒 分离 鉴定 NSP2 特性分析
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查 被引量:43
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作者 侯丽丽 赵铁柱 +7 位作者 遇秀玲 曹振 邓小雨 乔明明 张硕 王斌 陈西钊 田克恭 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期677-682,共6页
2006年6月份以来,我国多个省份暴发高致病性猪繁殖与呼吸综合征,给我国养猪业造成了巨大经济损失。为全面了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在我国的流行情况以及遗传变异规律,本研究采用RT-PCR的方法,对从2006年8月至2007年10月期间... 2006年6月份以来,我国多个省份暴发高致病性猪繁殖与呼吸综合征,给我国养猪业造成了巨大经济损失。为全面了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在我国的流行情况以及遗传变异规律,本研究采用RT-PCR的方法,对从2006年8月至2007年10月期间,来自于19省(市)共474份样品进行高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸的检测,结果检出阳性样品294份。在各省不同时期样品中均有阳性样品检出。通过对阳性样品进行Nsp2基因和ORF5基因扩增,序列分析发现所有检测的猪繁殖与呼吸综合征病毒株高度同源,为同一毒株遗传变异而来,所有猪繁殖与呼吸综合征毒株与HB-1株遗传关系最近;且Nsp2均缺失30个氨基酸。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2 ORF5
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中国部分地区2005-2007年猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株ORF5基因和Nsp2基因遗传变异分析 被引量:15
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作者 薛青红 张彦明 +4 位作者 刘湘涛 郎洪武 邹敏 高金源 邓永 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1805-1812,共8页
【目的】为分析2005-2007年间中国部分省区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子生物学特征,了解其遗传演化规律,查明中国目前PRRSV流行毒株现状。【方法】应用病毒分离方法从中国4个省份在2005-2007年间采集的81份疑似蓝耳病... 【目的】为分析2005-2007年间中国部分省区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子生物学特征,了解其遗传演化规律,查明中国目前PRRSV流行毒株现状。【方法】应用病毒分离方法从中国4个省份在2005-2007年间采集的81份疑似蓝耳病病料中分离到36株猪繁殖与呼吸综合征病毒,应用RT-PCR方法对36株PRRSV现地分离株的ORF5基因和Nsp2基因进行扩增和序列分析。【结果】36株现地分离株均属于美洲型PRRSV,ORF5基因全长均为603bp,未发现有基因缺失或插入,编码约200个氨基酸,分离株推导氨基酸序列变异主要发生在9~39位;36个分离株中有15株PRRSVNsp2基因全长为2940bp,21株PRRSVNsp2基因全长为2850bp;发生Nsp2缺失的PRRSV在Nsp2基因第481位、532~560位发生了不连续缺失,共缺失30个氨基酸。与GeneBank中收录的14个PRRSVORF5、Nsp2基因进行核苷酸及氨基酸序列比较和分析,系统进化关系显示,除B02-2005株可能与疫苗株有关外,多数现地分离株与Ch-1a株遗传距离较近,不同年份分离到的毒株与早期PRRSV分离株的同源性逐年降低。【结论】根据氨基酸变异情况对PRRSV现地分离株进行亚群聚类分析,发现36株现地分离株分别归属于以VR-2332为代表的4亚群,以BJ-4为代表的1亚群和以Ch-1a为代表的2亚群。进化关系表明PRRSVORF5、Nsp2基因及其推导的氨基酸序列均发生了较大变异,不同地区PRRSV分离株的遗传关系存在交叉现象,地域特征不明显。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 病毒分离 ORF5基因 NSP2基因 遗传变异
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