创伤性肌筋膜触发点的形成对大鼠骨骼肌肌梭内NT-3及受体TrkC的表达影响

目的:确定创伤性肌筋膜触发点的形成对其周围肌梭组织内部蛋白和基因表达水平的影响,并分析触发点牵涉痛临床特点和针刺“打跳”的分子生物学依据。方法:32只7周龄雄性SD大鼠随机均分为实验组和对照组,实验组采取对腓肠肌定点钝性打击结合离心运动的模式进行连续8 w造模。造模结束后两组均正常饲养4w。12 w结束后,检测造模成功指标,并在此基础上提取各组腓肠肌触发点组织和非触发点组织,以及各组比目鱼肌、胫骨前肌和跖肌处骨骼肌分别进行NT-3和NT-3的受体TrkC蛋白的免疫印迹学实验和基因的聚合酶链式反应实验。结果:与对照组相比,NT-3蛋白在触发点大鼠内外侧腓肠肌中的含量均表现为降低(P<0.05),而NT-3 mRNA在触发点大鼠内外侧腓肠肌、趾肌、胫骨前肌和比目鱼肌中的含量均表现为降低(P<0.05);TrkC蛋白在触发点大鼠内侧腓肠肌、趾肌和胫骨前肌中的含量也均表现为降低(P<0.05),而TrkC mRNA在触发点大鼠内外侧腓肠肌和趾肌含量也均表现为降低(P<0.05)。结论:慢性肌筋膜触发点的形成诱发了受累肌和多块关联肌肌梭内NT-3、受体TrkC蛋白和基因的下调。

NT-3对耳蜗螺旋神经节发育的调控机制研究进展

耳蜗螺旋神经元(spiral ganglion neurons,SGN)的存活和增殖依赖于各种神经营养因子的调节。SGN的损伤和发育异常均可导致感音神经性耳聋,但SGN无再生能力,听力下降往往很难恢复。因此,对听力下降进行早期干预,防止其不可逆的损伤尤为重要。神经营养素3(neurotrophin-3,NT-3)在耳蜗中高表达并促进SGN的存活、轴突的生长和损伤的修复,这已得到广泛的共识,但对其如何将信息传递到细胞内,从而调节SGN的发育仍然不清楚。本文就NT-3在SGN发育期中作用机制的研究进展作一综述。

丁苯酞联合舍曲林对帕金森病合并抑郁症患者认知功能及血清NT-3、BDNF、5-HT水平的影响

目的分析丁苯酞联合舍曲林对帕金森病合并抑郁症患者认知功能及血清神经营养因子-3(NT-3)、脑源性神经营养因子(BDNF)、5-羟色胺(5-HT)水平的影响。方法158例帕金森病合并抑郁症患者均分为联合组(79例,丁苯酞联合舍曲林口服)和舍曲林组(79例,盐酸舍曲林口服),均治疗12周;于治疗前及治疗12周时,检测2组患者血清NT-3、BDNF及5-HT水平,采用帕金森病统一评分量表(UPDRS)、39项帕金森病调查表(PDQ-39)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评价治疗效果;于治疗前、治疗第4及12周时,采用简易智能状态检查量表(MMSE)评估两组患者的认知功能。结果治疗12周时,联合组患者总有效率(94.94%)高于舍曲林组(81.01%,P<0.05),UPDRS、PDQ-39、HAMD及HAMA评分低于治疗前,且联合组低于舍曲林组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前、治疗4、12周时,2组患者MMSE评分逐渐升高,且治疗4和12周时联合组高于舍曲林组,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者治疗12周时的血清NT-3、BDNF、5-HT水平高于治疗前,联合组高于舍曲林组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丁苯酞联合舍曲林可改善帕金森病合并抑郁症患者帕金森、抑郁、焦虑症状及认知功能,其机制可能与联合治疗提高患者血清NT-3、BDNF、5-HT水平有关。

部分去背根猫备用背根节和脊髓Ⅱ板层NT-3及其mRNA的表达变化

采用免疫组化和原位杂交技术探讨了部分去背根猫备用背根节 (L6 )和 L3、L5脊髓 II板层 NT-3及其 m RNA的表达变化。结果发现 ,正常组 NT-3及其 m RNA阳性产物主要分布于背根节的大型神经元和少数中、小型神经元。部分去背根后 ,3 d和10 d两时相 NT-3 m RNA大型神经元阳性数明显减少 ,而 NT-3阳性大型神经元数术后 10 d时方明显减少 (P<0 .0 1) ;NT-3及其 m RNA阳性小型细胞数在术后两时相均较正常组者增多 (P<0 .0 1) ;而在中型神经元只有 NT-3阳性神经元数有增加。相对地 ,在脊髓 板层 ,两时相 NT-3阳性神经元及胶质细胞百分数均较正常者明显增加 (P<0 .0 1) ,且以 3 d组者为最明显 ,但均未见 NT-3 m RNA阳性信号。结果表明 ,部分去背根不仅导致背根节各类神经元中 NT-3的表达发生了变化 ,且对 板层 NT-3阳性神经元及胶质细胞数量也有明显影响。提示 NT-3可能在脊髓

APP17肽对D-半乳糖性脑老化模型小鼠学习、记忆功能和海马神经元NT-3、NGF表达的影响

目的与方法 :用D -半乳糖 (D -gal)复制脑老化模型 ,给模型小鼠皮下注射 β -淀粉样肽前体蛋白 319- 335肽段 (APP17p) ,8周后应用水迷宫实验、神经免疫组化法 ,观察APP17肽对D -gal脑老化模型小鼠学习、记忆功能及海马神经元中神经营养因子 3(NT - 3)、神经生长因子 (NGF)表达的影响。结果 :(1)水迷宫实验D-gal组小鼠游完全程时间及错误反应次数明显高于对照组 ;APP17肽组小鼠游完全程时间及错误反应次数明显低于对照组和D -gal组。 (2 )APP17肽组海马神经元NT - 3、NGF表达高于C组和D -gal组 (P <0 0 1)。结论 :D-半乳糖性脑老化模型小鼠存在学习、记忆功能障碍 ,其海马神经元NT - 3、NGF表达降低 ;APP17肽有保护模型小鼠学习、记忆功能的作用 ,并能促进其海马神经元NT - 3、NGF表达的增加。

挤压伤后脊髓神经元NT-3和NT-4的表达变化

为了研究脊髓挤压伤后 ,脊髓神经元 NT-3和 NT-4的早期变化 ,本研究采用免疫组织化学 ABC法和阳性神经元计数 ,结果在大鼠脊髓证明了 NT-3免疫阳性反应产物主要在胞核着色 ,NT-4则胞浆及胞核均着色。腹角的 NT-3阳性神经元数在脊髓挤压伤后 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组明显增高 ( P<0 .0 1) ;背角的 NT-3阳性神经元仅 2 1d组较正常组有显著增加 ( P<0 .0 1)。腹角的 NT-4阳性神经元数在损伤后 2 4h组、7d组和 2 1d组均较正常组有显著增加 ( P<0 .0 5 ) ,且随时间的延长呈增加趋势 ( P<0 .0 5 ) ;背角的 NT-4阳性神经元数 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组显著增加 ( P<0 .0 1) ,随时间延长仍有增加趋势 ( P<0 .0 1)。结论 :在脊髓挤压伤后的早期腹、背角 NT-3和 NT-4阳性神经元数均有增多 ,提示内源性 NT-3和

推拿对坐骨神经损伤大鼠NT-3、TrkC的影响

目的研究推拿对坐骨神经损伤大鼠感觉功能及NT-3、TrkC表达的影响。方法采用夹持法建立坐骨神经损伤模型,将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组,以按摩推拿手法模拟仪进行干预,通过热痛阈实验观察各组大鼠行为学变化;通过免疫组织化学染色观察各组大鼠背根节内NT-3、TrkC表达情况。结果模型组、模型对照组大鼠的PWL值与正常组相比明显延长,推拿组与模型组相比PWL值明显缩短,与正常组相比无显著差异。模型组、模型对照组及推拿组NT-3免疫组化表达与正常组比较均有明显提高,推拿组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论中医推拿可以改善神经损伤大鼠的行为学表现,通过促进NT-3及其受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,对神经元胞体和突起的生长产生积极的影响,促进损伤神经的修复,改善坐骨神经损伤大鼠的感觉功能。

稳定过表达BDNF和NT-3基因的脂肪干细胞系的建立及其意义

目的建立稳定过表达脑源性神经营养因子(BDNF)和神经营养因子(NT-3)的脂肪干细胞系并探讨其意义。方法采用胶原酶消化联合差速贴壁法获取大鼠脂肪干细胞,向成骨方向诱导2周、4周后,行碱性磷酸酶染色和茜素红染色。采用Lenti-BDNF-GFP重组慢病毒液和Lenti-NT-3-RFP重组慢病毒液转染第3代脂肪干细胞,确定最佳感染复数值,按照最佳感染复数值感染脂肪干细胞,建立稳定过表达BDNF和NT-3基因的脂肪干细胞系。结果成功分离和培养的大鼠脂肪干细胞具有多向分化潜能,向成骨方向诱导后,碱性磷酸酶和茜素红染色呈阳性。Lenti-BDNF-GFP重组慢病毒液和Lenti-NT-3-RFP重组慢病毒液转染脂肪干细胞的最佳感染复数值为100,感染时间72 h,共转染组BDNF和NT-3在基因水平和蛋白水平均呈稳定高表达。结论成功建立稳定过表达BDNF和NT-3基因的脂肪干细胞系,这对脊髓损伤的治疗有重要意义,可以解决脂肪干细胞移植治疗脊髓损伤过程中神经因子分泌数量少和半衰期短等问题,为进一步研究脊髓损伤的修复机制提供了实验基础。

APP17肽对卵巢去势大鼠学习、记忆功能和海马神经NT-3、NF表达的影响

目的 探讨APP1 7肽是否能提高去卵巢大鼠学习、记忆功能及作用机制。方法 雌性大鼠分三组 :①正常组 ,②去卵巢组 ,③用APP1 7肽保护去卵巢组。通过水迷宫测试 ,观察行为学的改变。而后灌注固定 ,取大脑组织冰冻切片 ,做NT 3、NF免疫组化染色。结果 (1 )行为学检查 :给予APP1 7肽的卵巢去势大鼠游完全程的时间及错误反应次数均较未给予APP1 7肽的卵巢去势大鼠少 (P<0 0 5)。 (2 )用APP1 7肽保护的卵巢去势大鼠海马区神经元神经营养素 3(NT 3)、神经丝蛋白 (NF)的表达与正常大鼠相似 ,阳性细胞计数及平均灰度 (反映染色强度 )与卵巢去势大鼠比较差异显著 (P <0 0 5)。结论 卵巢去势大鼠存在学习、记忆障碍 ,APP1

Lactuside B对缺血性脑损伤大鼠海马和纹状体NT-3 mRNA表达的影响

目的探讨Lactuside B对缺血性脑损伤大鼠海马和纹状体NT-3 mRNA表达的影响。方法 SD雄性大鼠,体重280～320g,随机分为假手术组、模型组、阳性药物对照组、Lactuside B低剂量组、中剂量组和高剂量组,共6组,8只/组。采用大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,各组动物均按5ml/kg的容量腹腔注射相应的实验药物,每天给药一次。动物持续脑缺血2h,在再灌注24h和72h对其神经系统体征进行客观评分后分别处死4只动物,采用RT-PCR技术检测大鼠海马和纹状体不同时间段NT-3 mRNA的表达。结果研究发现Lactuside B各剂量组均可降低神经缺损症状评分,提高海马和纹状体NT-3 mRNA的表达,且低、中剂量组作用较好,与模型组和阳性对照药比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01),用药72h后两部位的NT-3mRNA表达更多,与24h比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论 Lactuside B可通过上调海马和纹状体NT-3 mRNA的表达起到抗缺血性脑损伤的作用,两部位升高的NT-3 mRNA对目标蛋白的合成具有积极的导向性质。

神经干细胞与NT-3基因修饰雪旺细胞联合移植促进全横断脊髓损伤大鼠功能修复的实验研究

目的:探讨神经干细胞(NSCs)与神经营养素-3(NT-3)基因修饰雪旺细胞(SCs)联合移植对全横断脊髓损伤大鼠的后肢运动及神经传导功能修复的作用。方法:将NSCs与NT-3基因修饰SCs或未基因修饰SCs联合移植,或NSCs单独移植到大鼠全横断性脊髓损伤处,60d后进行爬网格测验和BBB评分检测运动功能。第67d,进行皮质运动诱发电位(CMEP)和皮质感觉诱发电位(CSEP)检测脊髓的神经传导功能。结果:脊髓损伤大鼠后肢的运动功能及CMEP和CSEP的修复程度依次为NSCs与NT-3基因修饰SCs联合移植组,NSCs与未基因修饰SCs联合移植组,NSCs单独移植组和实验对照组。结论:NSCs与NT-3基因修饰SCs联合移植能够促进脊髓损伤后大鼠的后肢运动及神经传导功能的修复。

BDNF,NT-3在猫背根神经元的自分泌和旁分泌作用初探——原位杂交和免疫组织化学研究

探讨脑源性神经营养因子 (BDNF)、神经营养因子 3 (NT- 3)在成年猫背根节 (DRG)神经元是否存在自分泌或旁分泌作用方式。用特异的 trk B、 trk C抗体及 BDNF、 NT- 3的 c RNA探针 ,以免疫组化及原位杂交双标法观察了成年猫 L6DRG神经元 BDNF m RNA与 trk B、 NT- 3 m RNA与 trk C的关系 ,以了解 BDNF、 NT- 3在成年猫 L6 DRG神经元有无自分泌或旁分泌作用。结果表明 ,在成年猫 L6 DRG BDNFm RNA阳性细胞主要是部分中、小神经元 (4 2～ 5 7μm,<42μm) ,而 trk B阳性细胞则主要是部分大神经元 (>5 7μm)。未见双标的 BDNF m RNA和 trk B阳性神经元 ,但见一些双标的卫星细胞。与BDNF者比较 ,大多数大神经元既表达 NT- 3 m RNA,又表达 trk C。这表明在成年猫 L6 DRG神经元 ,NT- 3可能存在自分泌方式。但本文的结果未证明 BDNF在成年猫 L6 DRG神经元存在自分泌。

BDNF和NT-3对体外培养胎鼠脊髓神经元生长发育的影响

目的:观察脑源性神经生长因子(BDNF)和神经营养因子-3(NT-3)单独及联合应用对体外培养胚胎大鼠脊髓神经元存活和生长发育的影响。方法:胚胎大鼠脊髓神经细胞原代培养,倒置相差显微镜下进行细胞记数和显微测量,观察神经元存活和生长分化的状况。结果:BDNF和NT-3均能促进培养胚胎大鼠脊髓神经元的存活,BDNF的作用效果更好。BDNF主要促进胞体发育;NT-3主要促进突出分化和伸长,二者有互补作用。结论:BDNF和NT-3能促进体外培养大鼠发育期脊髓神经元存活、分化和生长,其作用具有选择性。

体外树突状细胞通过NT-3上调P-ERK1/2的表达促进神经干/祖细胞分化

目的观察树突状细胞(dendritic cells,DCs)对神经干/祖细胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)分化的影响,探讨神经营养素-3(Neurotrophin-3,NT-3)在DCs调控NSPCs分化中可能的作用机制。方法实验共设5组,分别为NSPCs组、NSPCs/DCs组、NSPCs+NT-3组、NSPCs/DCs+抗NT-3组和DCs组。共培养24、48、72 h后,ELISA法检测各组上清液中NT-3含量;7 d后荧光免疫细胞化学法检测各组NSPCs分化情况。Western blot检测各组NSPCs磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)表达。结果 NSPCs/DCs组上清液中NT-3含量较NSPCs组、NSPCs/DCs+抗NT-3组和DCs显著升高(P<0.05)。NSPCs/DCs组和NSPCs+NT-3组β-tubulin-Ⅲ阳性细胞数较NSPCs组和NSPCs/DCs+抗NT-3组显著增高(P<0.05),而NSPCs组和NSPCs/DCs+抗NT-3组GFAP阳性细胞较NSPCs/DCs组和NSPCs+NT-3组显著增高(P<0.05)。NSPCs/DCs组和NSPCs+NT-3组NSPCs中的p-ERK1/2的表达较其余两组增高(P<0.05)。结论 NSPCs与DCs共培养能显著促进NSPCs分化为神经元,可能与共培养后NT-3表达量增高,通过其特异性受体TrkC激活下游信号通路MEK-ERK有关。

慢性应激对大鼠海马NGF、NT-3表达的影响及应激停止后的变化

目的探讨慢性应激对大鼠海马神经元NGF、NT-3蛋白表达的影响及其应激停止后的变化。方法采用慢性强迫游泳和孤养制作动物模型。运用Open-field法观察大鼠行为学的变化，运用免疫组织化学方法观察大鼠海马DG区、CA3区NGF、NT-3的表达。结果与对照组相比，实验组1大鼠海马CA3、DG区NGF、NT-3的平均灰度值显著增加[灰度值分别为（187．25±0．87），（169．67±0．94），（183．49±0．21），（157．33±0．39），P〈0．05和P〈0．01]，实验组2平均灰度值与对照组2相比同样增加[灰度值分别为（186．31±0．68），（170．30±1．22），（187．79±1．01），（162．79±0．98），P〈0．05]。结论慢性应激使大鼠海马NGF、NT-3表达降低，应激30d后，其表达仍低于对照组。

NT-3-HUMSCs联合基因沉默SOCS3治疗SD大鼠脊髓损伤后的神经再生修复

目的 NT-3-HUMSCs联合基因沉默SOCS3治疗SD大鼠脊髓损伤,以期促进损伤神经再生修复.方法 (1)用贴壁法体外培养人脐带间充质细胞(HUMSC),同时进行分离,提纯和鉴定;(2)构建NT-3基因真核表达载体,利用基因转染技术将其转入HUMSC,构建NT-3-HUMSC细胞,体外检测其存活情况及NT-3表达情况;(3)筛选作用于SOCS3的特异性靶点,进行序列同源性分析,设立阴性对照,设计并合成SOCS3-siRNA,同时在体外检测功能;(4)建立SD大鼠脊髓损伤模型分为为:I.假手术组10只;Ⅱ.T12全脊髓横断损伤模型40只,随机分为4组,生理盐水治疗组10只;siRNA+NT-3-HUMSCs治疗组10只;NT-3-HUMSCs治疗组10只;SOCS3-siRNA治疗组10只.以上各组造模成功后,分别存活12周进行神经电生理监测;(5)对SD大鼠进行灌注固定和取材,观察局部胶质疤痕降解情况和轴突再生情况,同时运用生物素化葡聚糖(BDA)荧光顺行追踪取损伤移植区-宿主交界处头尾侧脊髓组织,镜下观察皮质脊髓束再生的情况.结果(1)siRNA+NT-3-HUMSCs治疗组较生理盐水治疗组横断脊髓空洞明显缩小,差异有统计学意义(P<0.05);(2)BDA顺行追踪结果表明siRNA+NT-3-HUMSCs治疗组较生理盐水治疗组神经轴突生长明显;(3)神经电生理检测损伤12周后治疗组P40潜伏期较假手术组缩短,siRNA+NT-3-HUMSCs治疗组较生理盐水治疗组比较潜伏期缩短明显,波幅升高明显,差异有统计学意义(P<0.05).结论 NT-3-HUMSCs联合基因沉默SOCS3治疗SD大鼠脊髓损伤,可以促进损伤神经再生修复.

APP17肽对糖尿病视网膜神经元表达NT-3和星形胶质细胞增殖的影响

目的 观察糖尿病早期视网膜神经元表达 NT- 3和星形胶质细胞增殖情况 ,并观察 APP17肽的作用。方法 用链脲佐菌素 (streptozotocin,STZ)复制 Wistar大鼠糖尿病模型 ,于模型建立 2周后 ,皮下注射 APP17肽 ,1月后处死大鼠取视网膜 ,进行神经免疫组化 ,观察 APP17肽对糖尿病早期视网膜神经元中神经营养因子 3(neurotrophin- 3,NT- 3)和星形胶质细胞中胶质原纤维酸性蛋白 (glial fibrillary acidi protein,GFAP)表达的影响。结果 同正常对照组相比模型组 (DM组 )视网膜神经元 NT- 3阳性细胞数明显减少 ,但APP17+DM组阳性细胞数多于 DM组 (P<0 .0 1) ,并且对照组与 APP17+DM组中星形胶质细胞 GFAP阳性数少于 DM组 (P<0 .0 1)。结论 在糖尿病视网膜病变早期存在视网膜神经细胞 NT- 3表达减少及星形胶质细胞增生 ,APP17肽可明显改善早期糖尿病大鼠视网膜神经元的表达 。

NGF,BDNF和NT-3在培养鸡胚背根节神经元的表达

目的 探讨NGF ,BDNF ,NT - 3在体外培养鸡胚背根节神经元中的表达变化。方法 采用NGF ,BDNF ,NT - 3的兔抗血清分别对培养前后的鸡胚背根节神经元以免疫组化ABC法染色。观察NGF、BDNF和NT - 3在培养前、后鸡胚背根节神经元的表达情况 ,计数并比较培养前、后三种因子免疫阳性神经元百分数。结果 未培养的神经元 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :10 %± 3%,2 7%± 5 %,2 9%± 7%。培养 48小时后 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :77%± 6 %,6 4%± 7%,2 4%± 7%。结论 培养后NGF ,BDNF的表达较未培养者增加 (P <0 0 1) ,而NT - 3者则有减少 (P <0 0 5 )。提示在体外培养的鸡胚背根节神经元NT - 3的表达有不同于NGF和BDNF的调节方式。

大鼠脊髓挤压伤后NT-3、NT-4在腹角运动神经元表达的变化

我们前面的研究已证实 ,神经生长因子和脑源性神经营养因子与成年大鼠挤压性脊髓损伤修复有关。在本研究中 ,通过免疫组织化学 ABC法 ,我们探讨了挤压伤后不同时间脊髓腹角神经元 NT- 3和 NT- 4的表达。结果显示 :在对照组 ,NT- 3和 NT- 4的阳性反应主要分布在脊髓腹角神经元。挤压性脊髓损伤后 7天和 2 1天 ,NT- 3阳性神经元的数量较对照组和 2 4小时组明显增加。比较之 ,损伤后 2 4小时和 7天 ,NT- 4阳性神经元的数量已较正常者增多 ,且 NT- T的反应强度 2 1天者较 2 4小时和 7天者有增多。结果表明 NT- 3和 NT- 4的表达在挤压性损伤后的脊髓腹角神经元被不同程度地上调。提示NT- 3和 NT-