基于nuc基因的环介导等温核酸扩增可视化技术检测食源性金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌食物中毒主要是由食用被金黄色葡萄球菌及其所产生的肠毒素污染的奶、肉、蛋、糕点、剩饭等蛋白或淀粉含量丰富的食品引起,快速精准的金黄色葡萄球菌检测技术对于保障人们的健康和食品安全具有重要意义。本研究以nuc基因作为检测靶基因,建立了一种检测金黄色葡萄球菌的环介导等温核酸扩增(LAMP)技术。该方法检测金黄色葡萄球菌基因组DNA样品为阳性,而对单细胞增生李斯特菌、鼠伤寒沙门菌、肠出血性大肠杆菌、空肠弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌和产气荚膜梭菌等食源性致病菌和猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆菌等猪源细菌基因组DNA检测结果均为阴性,表明建立的LAMP方15法具有较好的特异性。灵敏度的检测结果表明,LAMP的检测限可达5.6×10^(1) CFU/mL,而常规PCR的检测限为5.6×10^(5) CFU/mL,即LAMP的检测灵敏度比常规PCR高出10000倍。临床样品的检测结果表明,50份猪肉样品中有4份检出金黄色葡萄球菌。本研究为食源性金黄色葡萄球菌提供了一种快速、可视化、特异性好、灵敏度高、成本低的LAMP检测方法。

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌nuc基因LAMP检测方法的建立

为了快速鉴定因金黄色葡萄球菌感染引起的奶牛乳房炎,采用环介导等温扩增(LAMP)技术和传统PCR技术,针对金黄色葡萄球菌nuc基因设计特异性引物并进行扩增鉴定,同时对两种鉴定方法的最适反应条件、灵敏度和特异性进行了研究。结果显示,LAMP和传统PCR均能成功扩增金黄色葡萄球菌的nuc基因,但通过优化LAMP反应条件,在62℃时对nuc基因呈现最佳扩增效果,与传统PCR鉴定方法相比,LAMP对金黄色葡萄球菌nuc基因最低检测浓度为50 fg/μL,其检测灵敏度是PCR的10~4倍。说明LAMP能精准鉴定因金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳房炎,且针对nuc基因的鉴定操作简单、特异性强、灵敏度高。

基于NUC970系列芯片的CNC控制器设计与实现

当前市面上多数主流CNC控制器仍然沿用三星S3C2440+FPGA硬件设计架构,而此款芯片早在2010年就已停产,市面上现有的S3C2440A芯片大多数是拆机翻新品。因此,基于S3C2440A芯片的CNC控制器迫切需要使用新一代量产芯片进行升级换代。选用新塘科技NUC970系列芯片来替代现有的S3C2440A芯片,详细介绍了基于NUC970芯片的CNC控制器的设计与实现方法以及CNC控制器的硬件原理和控制软件流程,同时根据该芯片的性能特点优化了CNC控制器的ARM+FPGA硬件平台。

金黄色葡萄球菌核酸酶基因缺失突变株RN4220 Δnuc1的构建

金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcal nuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一个编码基因nuc1,为了进一步研究nuc2基因的功能,首先要将金黄色葡萄球菌nuc1基因缺失。研究目的就是通过构建同源重组质粒pBT2Δnuc1,将其电转入金黄色葡萄球菌菌株RN4220中,获得nuc1基因缺失突变株。经过了7轮培养和筛选,同源重组几率为2%(7/345),筛选出的nuc1突变株用PCR方法和RT-PCR进行了验证,从而获得了nuc1基因缺失突变株RN4220Δnuc1。

关于K-NUC空间与LK-NUC空间的研究

对Ｋ－ＮＵＣ空间的乘积空间和ＬＫ－ＮＵＣ空间的乘积空间进行了讨论，证明了：（１）若Ｘ、Ｙ 分别是 Ｋ１－ ＮＵＣ空间，Ｋ２－ ＮＵＣ空间，１＜Ｐ＜＋∞，则（Ｘ■Ｙ）ｐ为（Ｋ１＋ Ｋ２－ １）－ ＮＵＣ空间。（２）引 入了ＬＫ－ＷＨ性质，并得到具有ＬＫ－ＷＨ性质的ＬＮＵＣ空间与ＬＫ－ＮＵＣ空间等价．

金黄色葡萄球菌核酸酶基因缺失突变株RN4220 △nuc1的构建

金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcalnuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一个编码基因nuc1,为了进一步研究nuc2基因的功能,首先要将金黄色葡萄球菌nuc1基因缺失。研究目的就是通过构建同源重组质粒pBT2△nuc1,将其电转入金黄色葡萄球菌菌株RN4220中,获得nuc1基因缺失突变株。经过了7轮培养和筛选,同源重组几率为2%(7/345),筛选出的nuc1突变株用PCR方法和RT-PCR进行了验证,从而获得了nuc1基因缺失突变株RN4220△nuc1。

Nuc和mecA基因在金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性检测中的初步应用

目的为获得金黄色葡萄球菌对甲氧西林的耐药信息,评估通过PCR扩增nuc基因、mecA基因检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。方法收集获得63株临床分离鉴定的金黄色葡萄球菌,采用传统药敏检测方法进行菌株药敏测试;再用PCR方法检测菌株是否携带nuc基因和mecA基因,以传统药敏检测结果为参照,评估用PCR扩增技术检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。结果 1.样本菌株中有24株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphyococcus aureus,MRSA),39株为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive Staphyococcus aureus,MSSA)。来自重症医学科的分离株中MRSA数量较多。2.样本菌株nuc基因携带率为85.7%,其中nuc基因在MRSA菌株中的携带率为87.50%,在MSSA菌株中携带率为84.62%;3.样本菌株mecA基因的携带率为19.05%,其中MRSA菌株的mecA基因携带率为50.0%,MSSA中均不携带mecA基因。来自重症医学科的MRSA中同时携带mecA基因和nuc基因的比例为77.78%。结论用PCR技术检测nuc基因、mecA基因来快速鉴定金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性可能存在一定比例的误诊结果。

Journal of Viral Hepatitis|血清HBV RNA可预测经NUC治疗的慢性乙型肝炎患者的HBeAg清除和转换

HBV感染一直是全球公共卫生挑战。HBeAg阳性CHB接受NUC治疗后实现HBeAg清除或转换,提示患者获得部分免疫控制,是HBsAg清除或血清转换的先决条件。寻找可精准预测NUC治疗下HBeAg清除或转换的标志物,有重要临床意义。首都医科大学附属北京佑安医院郑素军教授团队联合北京大学基础医学院鲁凤民教授团队发现基线、NUC治疗6及12个月时低水平血清HBV RNA可精准预测CHB接受长期NUC治疗的HBeAg清除和转换。

金黄色葡萄球菌nuc基因特异性核酸探针的制备及应用

目的 建立核酸探针检测实验动物金黄色葡萄球菌的方法。方法 将重组质粒pGEM NUC中金黄色葡萄球菌nuc基因特异性片段酶切回收 ,经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验探针 ,对细菌菌株及临床样品进行了检测。结果 核酸探针与金黄色葡萄球菌DNA呈杂交阳性 ,而与表皮葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌等其他细菌DNA呈杂交阴性 ,斑点杂交检测的灵敏度为 1pg基因组DNA。用斑点杂交试验和PCR对 32 2份SPF小鼠的临床样品进行了检测 ,检出率为 3 1% (10 /32 2 ) ,符合率为 10 0 % ,与细菌学检查的结果相一致。结论 建立的DNA探针检测金黄色葡萄球菌方法具有高度的特异性和敏感性 ,且较快速 ,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的监测。

MecA、Nuc基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测中的应用

目的通过对180株金黄色葡萄球菌临床分离株MecA、Nuc基因的检测,以期选择出一种适合临床的并能简便、快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的方法。方法细菌鉴定及药敏采用全自动细菌鉴定和药敏分析仪。MecA、Nuc基因检测采用荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)法。结果 FQ-PCR对180株金黄色葡萄球菌MecA、Nuc基因检出率为75.0%,全自动细菌鉴定和药敏分析仪对180株金黄色葡萄球菌的MRSA检出率为72.8%,2种检测方法比较差异无统计学意义(P>0.05)。全自动细菌鉴定和药敏分析仪对MRSA的检测正确率为94.8%。结论 FQ-PCR检测MRSA正确率高,只需要1~2 h即可完成。该方法快速、简便、准确,值得推广应用。

基于NUC472的超声波测距匹配算法的研究

为了使超声波测距系统中的换能器智能识别自身发出去的信号,以及避免其他设备换能器回波的干扰,提出了一种基于NUC472系列ARM芯片的超声波回波匹配算法的实现方案。详细介绍了各步算法的工作原理和实现过程,构建了发送码元序列的结构,阐述了编解码方式,并利用主控MPU内部ADC单元、FPU计算单元以及DSP指令库完成匹配算法的设计,最后将算法用于板级实验进行性能测试。实验结果表明:此算法不仅能识别多组不同换能器设备,而且方便对于嵌入式系统的移植,具有很强的通用性。

胎儿丢失、输卵管妊娠、盆腔炎性疾病者NUC感染研究

为了解无锡地区胎儿丢失、输卵管妊娠、盆腔炎性疾病者NUC感染状况 ,我们应用NG PCR法、UU nPCR和CT nPCR法对以上三种疾病者以及对照组的宫颈脱落细胞NUC特异性DNA进行了检测。结果发现 :胎儿丢失、输卵管妊娠、盆腔炎性疾病者NG、UU、CT均有着较高的阳性检出率 ,相对危险性分析提示本文研究的三种疾病与NUC感染相关 !并发现胎儿丢失者以高NUC总阳性率 (5 7 0 % )和低合并感染构成比 (9 6 % )为模式 ,而输卵管妊娠者和盆腔炎性疾病者以较高NUC总阳性率 (30 4% ,35 1% )和高合并感染构成比 (5 9 5 % ,5 8 0 % )为模式。结论 :无锡地区以上三种疾病者NUC感染情况严重。控制NUC感染可能有助于降低胎儿丢失等疾病的发病率。

PCR扩增nuc基因快速检测金黄色葡萄球菌

为快速检测标本中金黄色葡萄球菌（以下简称金葡菌）。应用聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增金葡菌ｎｕｃ基因，并与培养法进行比较分析。结果只有金葡菌扩增出一条特异的ＤＮＡ条带，平行对照的其它菌株均为阴性。说明用ＰＣＲ检测金葡菌的方法简便、快速、特异、敏感。

提高围产期NUC感染诊断技术，促进母婴健康水平

提高围产期ＮＵＣ感染诊断技术，促进母婴健康水平无锡市妇幼保健院（２１４００２）江苏省苏南片遗传医学诊断中心糜祖煌ＮＵＣ感染是指淋病奈瑟菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ，ＮＧ）、解脲脲原体（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ，ＵＵ）...

高湿地区不同海拔人群鼻腔nuc—mecA基因定植研究

目的：调查高湿地区不同海拔高度世居人群鼻腔内 nuc-mecA基因定植情况，为高原高湿地区金黄色葡萄球菌及甲氧西林耐药病原菌的防治和抗生素的合理使用提供数据。方法收集1000 m，1200 m和1400 m三个不同海拔高度人群鼻拭子样本，采用多通道实时荧光 PCR技术检测其鼻腔 nuc-mecA基因，比较不同海拔高度人群鼻腔 nuc 基因及mecA基因差异。结果1000 m，1200 m和1400 m三个不同海拔高度地区人群鼻腔内nuc基因定植率分别为4.878％，2.899％和7.143％，差异无统计学意义（P均＞0.05）。1000 m，1200m和1400 m三个海拔高度地区人群鼻腔 mecA基因定植率分别为：14.634％，31.884％和41.837％。海拔1000 m人群与海拔1200 m人群相比，其鼻腔内mecA基因定植率差异有统计学意义（P＜0.05）；海拔1000 m人群与海拔1400 m人群相比，其鼻腔内mecA基因定植率差异有统计学显著性意义（P＜0.01）。1000 m，1200 m 和1400 m 三个海拔高度地区人群鼻腔 nuc-mecA 基因定植率分别为：0％，1.449％和3.061％，差异无统计学意义（P均＞0.05）。结论随着海拔的升高，耐甲氧西林mecA基因在鼻腔内的定植显著增多。较高海拔地区居民应注意保持鼻腔等病原菌易定植部位的清洁，患病后应及时去医院就诊，不擅自使用抗生素；医务人员应合理谨慎使用抗菌药物，避免抗生素的滥用和过度医疗。

西安地区不同时期女性生殖道感染标本中NUC-DNA检测研究

本文用NUC DNA检测对近年来本院妇科和妇保科门诊拟诊为女生殖道感染者 ,年龄 4 6 2岁 ,共 6 0 0例 ,采用阴道分泌物同步扩增特异性NUC DNA、NUC淋菌、解脲支原体、沙眼衣原体、其结果NG DNA阳性率为 18 3% (110 / 6 0 0 ) ,UU DNA阳性率为 2 8 8% ,(173/ 6 0 0 ) ,CT DNA阳性率为 10 5 % (6 3/ 6 0 0 ) ,NUC总阳性率为 45 5 % (2 73/ 6 0 0 )。患者按不同时间分 2组 ,其结果后一组较前一组NG、UU、NG +UU、NUC总阳性率明显升高 ,均有高度显著性差异 (P≤ 0 0 0 5 )。结果提示 :西安地区近年女性生殖道感染有上升的趋势。

LK-NUC空间的一个几何性质

本文引入ＬＫ－ＷＨ性质．

On the WA_ε Property and g-NUC_ε Banach Spaces

The WA ε property and g NUC ε, g NUC Banach spaces are introduced. We prove that the WA ε property is equivalent to the WBS property and the g NUC ε (resp., g NUC) spaces are equivalent to the NUC ε (resp., NUC) spaces possessing the BS property. So we obtain a characterization of the NUC ε (resp., NUC) spaces possessing the BS property.

100例异位妊娠患者生殖道NUC感染情况分析

近年来,随着性生活年轻化、复杂化的影响,流产率的升高,感染因素导致的异位妊娠发生率也呈明显增多趋势。临床研究发现女性生殖道NUC（N=淋球菌,U=解脲脲原体,C=沙眼衣原体）感染并发盆腔炎可致宫外孕[1,2],本研究选取在我院妇科诊治的异位妊娠患者100例,了解和分析这些患者的生殖道NUC感染情况,研究本地区生殖道NUC感染与异位妊娠的相关性,现报道如下。

基于nuc基因的奶牛乳房炎性金黄色葡萄球菌PCR检测方法的建立

基于PCR扩增的高效性,建立了以耐热核酸酶基因(nuc)为靶标基因特异性检测奶牛乳房炎性金黄色葡萄球菌的PCR方法。本实验从分离获得的205株染色为革兰阳性、形态为葡萄串状的菌株中随机选取50株进行16S rRNA基因测序和nuc基因扩增。结果显示,其中有40株葡萄球菌均可扩增出约279 bp的条带,其余10株葡萄球菌均未扩增出预期大小的条带。传统生化鉴定及16S rRNA基因测序结果表明,40株扩增出约279 bp条带的分离株均为金黄色葡萄球菌,未扩增出预期大小条带的10株菌均是葡萄球菌属的其它种。这一结果表明,nuc基因的PCR扩增可作为金黄色葡萄球菌特异性检测的分子标记。