血清NY-ESO-1自身抗体和MMP1联合检测对食管鳞状细胞癌的诊断价值

目的:探讨血清基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP1)和纽约食管鳞状细胞癌抗原-1(New York esophageal squamous cell carcinoma 1,NY-ESO-1)自身抗体联合检测在食管鳞状细胞癌中的诊断意义。方法:应用酶联免疫吸附实验检测120例食管鳞状细胞癌患者和120例正常对照血清中MMP1和NY-ESO-1自身抗体的表达水平,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价诊断效能。结果:血清MMP1和NY-ESO-1自身抗体在食管鳞状细胞癌患者中的表达均明显高于正常对照[(8.070±5.738)ng/mL vs(4.331±3.137)ng/mL,Z=6.214,P<0.001;0.463±0.571 vs 0.156±0.086,Z=5.210,P<0.001]。ROC曲线显示,当血清MMP1为最佳诊断临界值10.586 ng/mL时,其在诊断食管鳞状细胞癌的曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)为0.732(95%CI:0.671~0.787),敏感度为24.2%,特异度为95.0%。NY-ESO-1自身抗体诊断食管鳞状细胞癌AUC为0.695(95%CI:0.632~0.752),敏感度为33.0%,特异度为95.0%。MMP1和NY-ESO-1自身抗体联合检测诊断食管鳞状细胞癌的AUC为0.800(95%CI:0.744~0.849),敏感度为47.5%,特异度为95.0%。结论:血清MMP1和NY-ESO-1自身抗体联合检测可能有助于提高食管鳞状细胞癌的诊断效能。

NY-ESO-1致敏树突状细胞诱导的CTL对肝癌细胞株的特异性杀伤作用

目的:探讨肿瘤睾丸抗原NY-ESO-1(New York-esophageal-1)致敏树突状细胞体外诱导特异性CTL对肝癌细胞株的杀伤作用。方法:重组质粒pGEX-ESO1经原核诱导表达并纯化GST-ESO1融合蛋白肽。重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素4(rhIL-4)诱导培养人外周血来源的树突状细胞(dendritic cells,DCs),经GST-ESO1融合蛋白肽致敏后诱导特异性CTL增殖。以此CTL为效应细胞,分别以NY-ESO-1阳性表达的肝癌细胞株HepG2和不表达NY-ESO-1的肝癌细胞株H2P为靶细胞,MTT法检测CTL对肝癌细胞株的杀伤作用。结果:重组质粒pGEX-ESO1经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达相对分子质量约36 000的GST-ESO1融合蛋白肽,纯化后的质量浓度为50μg/ml;经rhGM-CSF和rhIL-4联合诱导成功培养人外周血DCs,其表型分子HLA-DR为91.4%、CD86为70.5%、CD83为71.2%、CD80为55.3%。NY-ESO-1致敏的DCs能明显诱导CTL增殖,此CTL对肝癌细胞株HepG2的杀伤率显著高于GST刺激组、未致敏DC组和无DC刺激组(均P<0.05),效靶比为50∶1时杀伤效应达到最高峰[(53.23±3.78)%,P<0.01];相同条件下CTL对H2P细胞无特异性杀伤作用。结论:NY-ESO-1抗原致敏的DCs在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对NY-ESO-1阳性肝癌细胞株具有特异性杀伤效应,该方法为肝癌免疫治疗提供了一条新思路。

人NY-ESO-1基因的原核表达、纯化和初步应用

目的:克隆人NY-ESO-1基因,进行原核表达和分离纯化,并初步应用于肝癌患者血清NY-ESO-1抗体的检测。方法:通过RT-PCR技术从人肝癌组织中扩增NY-ESO-1基因片段,插入原核表达载体pGEX4T-1(+)中,构建重组表达质粒pGEX/ESO1,导入大肠杆菌BL21(DE3),诱导目的蛋白表达,经包涵体透析复性和GSTrap亲和层析纯化目的蛋白,Westernblot鉴定。应用间接ELISA方法初步检测50例肝癌患者血清和20例正常人血清NY-ESO-1抗体的表达。结果:扩增得到NY-ESO-1基因3'端276bp片段,与GeneBank公布序列一致,构建的pGEX/ESO1原核表达质粒经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达分子量约36kD的GST-ESO1融合蛋白,纯化后蛋白纯度为90%。50例肝细胞癌患者血清中4例检测到NY-ESO-1抗体(8%),正常人血清均为阴性。结论:成功构建pGEX/ESO1重组表达质粒,得到有活性的NY-ESO-1融合蛋白,对肝癌患者血清NY-ESO-1抗体的检测有一定的应用价值。

NY-ESO-1与MAGE-A1在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨NY-ESO-1与MAGE-A1在乳腺癌组织中的表达及意义。方法健康对照者乳腺组织20例,不同病理类型及分级的病例90例,标本进行免疫组织化学SP法染色;采用Tanaka改良定量记分法测阳性率。结果 NY-ESO-1与MAGE-A1在正常乳腺组织中不表达;乳腺癌组织中NY-ESO-1与MAGE-A1阳性表达率分别为37.78%和23.33%;阳性表达与临床病理各参数不具有相关性(P>0.05)。结论NY-ESO-1和MAGE-A1在乳腺癌组织中呈高特异性表达,对乳腺癌的早期诊断有一定的临床意义。

5-Aza-CdR诱导肿瘤细胞NY-ESO-1抗原的表达

目的:探讨甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对肿瘤细胞中NY-ESO-1抗原表达的诱导作用。方法:常规培养人胃癌细胞株SGC-7901、人肝癌细胞株H2P和MHCC97-H、人结肠癌细胞株HT-29和LoVo及人脑胶质瘤细胞株U251,RT-PCR和免疫细胞化学法检测5-Aza-CdR作用前后肿瘤细胞中NY-ESO-1 mRNA和蛋白的表达。结果:RT-PCR与免疫细胞化学检测仅见胃癌SGC-7901细胞阳性表达NY-ESO-1,其余5株肿瘤细胞不表达NY-ESO-1。NY-ESO-1阴性的肝癌细胞株H2P、结肠癌细胞株LoVo及脑胶质瘤细胞株U251经5-Aza-CdR(终浓度分别为1、5和10μmol/L)处理6 d后,细胞形态和生长速度均无明显改变,而NY-ESO-1 mRNA和蛋白均被诱导为阳性表达,并随5-Aza-CdR浓度增加而阳性表达逐渐增强。结论:5-Aza-CdR能诱导肝癌、结肠癌、脑胶质瘤等肿瘤细胞中NY-ESO-1抗原的表达,为肿瘤免疫治疗提供了一条新思路。

NY-ESO-1基因在人食管癌中的表达及其基因克隆

背景与目的:NY-ESO-1是从食管癌cDNA文库中筛选到的肿瘤抗原,但是该基因在食管癌组织中的表达情况尚未见报道。本文研究NY-ESO-1基因在食管癌中的表达率,以便于确定食管癌患者是否可以使用以NY-ESO-1抗原为基础的疫苗治疗。方法:采用RT-PCR方法检测了NY-ESO-1基因在30例食管癌组织和相应癌旁正常组织中的表达;采用分子克隆的方法从食管癌组织中克隆了NY-ESO-1cDNA。结果:NY-ESO-1基因在食管癌组织中的表达率为50%(15/30),在30例相应癌旁正常组织中未见表达;克隆的NY-ESO-1cDNA序列与GenBank报道一致。结论:NY-ESO-1基因在食管癌中高频率表达,NY-ESO-1抗原可以被具有HLA-I类分子限制性CTL识别。

肝细胞肝癌患者肿瘤/睾丸抗原SSX-1及NY-ESO-1mRNA的表达意义

目的:检测SSX-1及NY—ESO-1mRNA在肝细胞性肝癌(HCC)患者的外周血及肝癌组织中的表达情况及其临床意义. 方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)方法对26例HCC患者的外周血、癌组织、相应的癌旁组织及20例对照研究标本进行SSX-1和NY—ESO-1mRNA检测. 为验证结果的可靠性,对SSX-1和NY—ESO-1的RT—PCR产物进行了DNA测序. 结果:SSX-1及NY-ESO-1 mRNA在26例HCC组织中的表达率分别为61.5%和11.5%,在相应的外周血中的表达率分别为46.2%和3.8%.外周血中表达SSX-1或NY—ESO-1 mRNA的HCC患者,其组织标本中也表达上述基因.所有的癌旁组织,作为对照的肝硬化和正常肝组织以及非肿瘤患者的外周血中均未发现这两种基因的表达.测序结果表明所得到的cDNA确为要扩增的目的基因.SSX-1和NY—ESO-1基因的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清AFP水平、肝炎病毒感染等临床指标无显著相关性(P>0.05).37.5% 的AFP正常(<20 ng/L)的HCC患者外周血中有SSX-1基因表达.外周血中表达SSX-1mRNA的患者的短期(6 mo) 复发率为50%(4/8),不表达者的复发率为25%(3/12). 结论:在HCC患者及癌组织中SSX-1和NY-ESO-1基因高特异性表达,在检查AFP的同时检测外周血SSX-1 mRNA的表达,有助于提高HCC的检出率.表达SSX-1 mRNA的HCC患者的短期复发率明显增高,可作为监测HCC复发、转移和预后的指标.

NY-ESO-1抗原与肿瘤免疫治疗进展

NY-ESO-1抗原是肿瘤-睾丸抗原家族中的重要成员,在多种类型的肿瘤中广泛表达,并且是迄今发现的最具免疫原性的肿瘤抗原,可以在NY-ESO-1表达阳性的肿瘤患者体内引起自发性体液免疫反应和特异性T细胞免疫反应。因此,NY-ESO-1被认为是最好的肿瘤候选疫苗,在肿瘤免疫治疗中最具发展潜力。本文主要介绍了近年来有关NY-ESO-1抗原以及相关疫苗的研究进展。

人类NY-ESO-1基因编码在肝癌中的表达(英文)

目的研究NY-ESO-1在肝细胞肝癌中的表达情况并探索其表达与肝癌预后的相关性。方法我们收集了124例肝癌患者的肝癌组织和相应的癌旁组织,37例肝硬化患者的肝组织,以及43例非肝硬化的肝组织。应用实时荧光定量聚合酶链技术(RT-PCR)检测了上述组织中NY-ESO-1基因的表达水平,并利用DNA免疫杂交技术和测序技术检测RT-PCR产物。收集健康志愿者外周血基因组DNA作为正常对照。结果在124例肝癌组织中,56例(45.2%)检测到有NY-ESO-1基因的表达,而在癌旁组织中未检测到表达。NY-ESO-1基因的RT-PCR产物长度为329 bp,利用测序方法检测NY-ESO-1基因突变。在56例表达NY-ESO-1的肝癌组织中,有4例检测到位点2的突变。该突变导致一个氨基酸的变异,这种氨基酸的变异对蛋白结构和功能具有决定性的影响。NY-ESO-1基因的表达与临床特征如肿瘤标志物(甲胎蛋白,半乳糖酸苷酶)、转移、复发和肿瘤的大小无显著关联性。结论 NY-ESO-1在肝癌组织中呈高表达,但是与预后无相关性。NY-ESO-1蛋白能否作为肝癌治疗的候选疫苗有待进一步研究。

NY-ESO-1在肿瘤中的表达及其临床意义研究进展

纽约食管鳞状上皮癌抗原1（NY-ESO-1）是肿瘤睾丸抗原（CTA）亚家族之一,编码基因最早发现于食管癌组织cDNA表达文库中。NY-ESO-1在细胞内经加工产生抗原肽,与人类白细胞抗原（HLA）分子结合形成复合物,经CD4＋T淋巴细胞及细胞毒性T淋巴细胞（CTL）识别,可诱导机体产生针对相应肿瘤细胞的较强的特异性免疫应答[1-2]。

转染NY-ESO-1特异性TCR增强人PBMC对NY-ESO-1阳性肿瘤细胞的特异性细胞毒性

目的探讨体外转导NY-ESO-1特异性T细胞受体至人外周血淋巴细胞中,是否可增强转导后细胞体外特异性识别并杀伤肿瘤细胞的能力。方法将NY-ESO-1特异性TCR质粒(pCDNA3.1-ESO-TCR)体外电转入新分离的正常人PBMC中,RT-PCR法鉴定转导是否成功;采用流式细胞仪分析转导后PBMC表型;用特异性NY-ESO-1b抗原肽(p157-165)刺激转导PBMC后,用ELISPOT法检测PBMC分泌IFN-γ的能力,用实时无标记动态细胞分析仪检测PBMC特异性细胞毒性作用。结果电转后PBMC能够扩增出特异性TCR片段;电转pCDNA3.1-ESO-TCR质粒的PBMC细胞表面特异性TCR表达率高于电转空载体的PBMC的表达率(P<0.05);经多肽刺激后,电转目的质粒的PBMC分泌IFN-γ的斑点数明显多于电转空载体的PBMC(P<0.05);转导后PBMC特异性细胞毒性作用明显强于电转空载体的PBMC。结论经NY-ESO-1特异性TCR基因修饰的PBMC对NY-ESO-1阳性HepG2细胞的体外特异性杀伤作用有明显提高,为进行下一步肝癌过继性免疫研究提供了基础资料。

NY-ESO-1抗原的基础与临床研究进展

NY-ESO-1是癌-睾丸抗原家族中的重要一员,在多种肿瘤组织中广泛表达,但在正常组织中几乎不表达。目前已经发现了20多个抗原表位,并在多种肿瘤患者体内检测到自发性免疫反应,包括体液和细胞免疫反应,NY-ESO-1的表达及体内自发性免疫应答被证实与肿瘤的诊断和预后有重要关联。NY-ESO-1被认为是肿瘤免疫治疗的理想靶抗原,以NY-ESO-1抗原为靶点的肿瘤治疗性疫苗、TCR基因修饰的T细胞、CAR修饰的T细胞等临床研究相继开展,展示了良好的前景。

AKAP-4、NY-ESO-1在肺癌中的表达及意义

目的:探索AKAP-4、NY-ESO-1在原发性肺癌组织中的表达及意义。方法:应用间接酶免疫组化技术检测AKAP-4、NY-ESO-1在72例肺癌组织中的表达情况,并分析其与肺癌分型和淋巴结转移的关系。结果:AKAP-4、NY-ESO-1阳性表达率分别为63.9%、11.1%;2种抗原在肺腺癌和肺鳞癌中的表达差异无显著性(P>0.05);2种抗原与淋巴结转移无相关性。结论:AKAP-4、NY-ESO-1在部分肺癌中表达,与肺癌分型及转移不相关。

肿瘤-睾丸抗原SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在胰腺癌中的表达及其生物学意义

目的检测肿瘤-睾丸抗原(CTA)SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在正常胰腺组织、慢性胰腺炎以及胰腺癌中的表达情况,寻找胰腺肿瘤中高表达的CTA。方法应用免疫组织化学SP法检测8例正常胰腺组织、15例慢性胰腺炎组织、52例胰腺癌组织中SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1的表达。Western blotting检测52例胰腺癌组织中SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1的表达。结果正常胰腺组织、慢性胰腺炎中SSX、MAGE-A1和NY-ESO-1均不表达,SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在52例胰腺癌的阳性表达率分别为48.08%(25/52)、7.69%(4/52)、5.77%(3/52);经相关分析,SSX、NY-ESO-1和MAGE-1的阳性表达与患者的年龄、性别、病变部位、分化程度均未见明显相关关系(P>0.05);SSX的表达与肿瘤的浸润转移呈负相关(r=-0.306,P=0.028);52例胰腺癌病例中55.77%(29/52)有1种以上的CTA表达。结论不同种类的CTA在胰腺癌中的表达存在显著差异,SSX的阳性表达率最高;胰腺癌中SSX的高表达与肿瘤的转移呈明显的负相关关系;CTA在胰腺癌中的表达呈现簇生现象。

食管鳞癌中癌-睾丸抗原NY-ESO-1及MAGE-1的表达

目的研究NY-ESO-1及MAGE-1蛋白在食管鳞癌中的表达,分析其与肿瘤临床病理参数的关系,为食管癌的免疫治疗提供理论依据。方法构建组织芯片并结合免疫组化的方法,检测NY-ESO-1及MAGE-1蛋白在113例食管鳞癌及10例正常食管黏膜中的表达。结果10例正常食管黏膜均不表达NY-ESO-1及MAGE-1蛋白,而其在食管鳞癌组织芯片109例有效标本中的阳性率分别为29.4%和37.4%(32/109,41/109),阳性部位均位于细胞质。其中,59例至少表达1种CT抗原,占总数的54.1%(59/109),13例同时表达2种CT抗原,占11.9%(13/109);NY-ESO-1及MAGE-1蛋白的表达主要集中在肿瘤细胞分化较好的I级和II级食管鳞癌,阳性率有显著性差异(P<0.01),与肿瘤的大小,浸润深度及有无淋巴结转移无关(P>0.05)。结论NY-ESO-1及MAGE-1可作为食管癌免疫治疗的靶标之一,含有CT抗原的疫苗可用于食管癌患者的免疫治疗。

MAGE-A家族与NY-ESO-1在乳腺癌中的表达及免疫治疗前景

以肿瘤特异性抗原为基础的肿瘤免疫治疗已经成为乳腺癌的新的治疗模式,癌睾丸抗原(CTA)是肿瘤免疫治疗研究的热点。MAGE-A家族与NY-ESO-1作为癌睾丸抗原家族的重要成员,在乳腺癌的诊断、治疗、预后等各个方面发挥重要作用。MAGE-A家族不同成员在乳腺癌组织中有不同程度的阳性表达,其表达机制可能和DNA甲基化和组蛋白去乙酰化相关。目前MAGE-A的肿瘤疫苗研究尚处于起步阶段,而且其应用也有一定的局限性。有人认为通过去甲基化药物激活MAGE-A表达,可以增加MAGE-A的免疫原性,增强免疫治疗疗效。NY-ESO-1在不同类型肿瘤组织中均有阳性表达,它也是判断肿瘤预后的重要指标。基因甲基化可能是调控NY-ESO-1在肿瘤中表达的机制。以NY-ESO-1为基础的多种疫苗已相继进入临床研究阶段。综上,MAGE-A和NY-ESO-1可成为现在以及将来免疫治疗的理想靶标。

NY-ESO-1基因在膀胱癌中的表达及临床意义的研究

目的探讨NY-ES0-1的表达与膀胱癌分期分级的关系以及临床意义。方法回顾性研究2001～2002年膀胱癌组织32例,其中男性24例,女性8例。正常膀胱粘膜对照取自耻骨上经膀胱前列腺切除术的良性前列腺增生的患者。阳性对照为正常睾丸组织。常规行RT-PCR方法检测膀胱癌组织及对照组等NY-ESO-1基因的表达,分析其表达与膀胱癌分期分级的关系以及临床意义。结果 NY-ESO-1 mRNA在32例膀胱癌组织中12例表达(37.5%),在正常膀胱粘膜上没有表达。肿瘤组织中PCR反应的产物与正常睾丸的表达产物一致。NY-ES0-1 mRNA的表达和膀胱癌的病理分级相关,有统计学差异(P<0.05)。NY-ESO-1 mRNA的表达率随着肿瘤病理分级的增高而升高:G1期是0/3(0%);G2期是4/16(25%);G3期是8/13(61.54%)。浸润性膀胱癌中NY-ESO-1 mRNA的表达与表浅性肿瘤的表达无显著性差异。结论 NY-ESO-1 mRNA在正常膀胱组织上没有表达,仅在正常睾丸组织和病理膀胱癌组织上有表达。NY-ESO-1 mRNA的表达率随着膀胱癌病理分级的增高而升高。