温阳益气活血方对慢性心力衰竭大鼠心肌组织Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶的影响

目的观察温阳益气活血方对慢性心力衰竭大鼠心肌组织Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶的影响,探讨其治疗心力衰竭的作用机制。方法采用皮下多点注射异丙肾上腺素制备慢性心力衰竭大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、西药组和温阳益气活血方低、中、高剂量组,每组14只,另设空白组15只,给药组分别予相应药物灌胃,空白组和模型组予等量生理盐水,连续6周。超声检测大鼠心功能,ELISA检测血清脑钠肽(BNP)含量,计算心脏质量指数(HMI),HE染色观察心肌组织病理变化,酶活比色法、免疫组化及RT-PCR检测心肌组织Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶活性及表达。结果与空白组比较,模型组大鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)显著降低(P<0.01);血清BNP含量显著增加,HMI显著升高(P<0.01);心肌组织大量纤维水肿,胞质疏松,组织边缘心肌纤维溶解,伴有少量淋巴细胞浸润;心肌组织Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶活性显著减弱,蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,温阳益气活血方高剂量组大鼠LVEF、LVFS显著升高(P<0.01);血清BNP含量显著减少,HMI显著降低(P<0.05,P<0.01);心肌纤维水肿、胞质疏松、炎症浸润、细胞空泡变性及纤维溶解程度均有改善;心肌组织Na^(+)-K^(+)-ATP酶和Ca^(2+)-ATP酶活性显著增强,蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.01)。结论温阳益气活血方能通过调节心肌Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶活性及表达改善心力衰竭大鼠心功能不全,发挥治疗慢性心力衰竭的作用。

离子色谱法同时测定烟叶中的K^+、Na^+、Ca^(2+)、Mg^(2+)和NH_4^+

以5%盐酸为提取剂,超声提取30min,Dionex CS12A阳离子交换柱作分离柱、IonPacCG12A为保护柱,20.0mmol/L甲磺酸溶液为流动相,流速0.25mL/min,采用离子色谱法同时测定了烟叶样品中的K+、Na+、Ca2+、Mg2+和NH4+。结果表明,该法的RSD<6.22%,回收率为90.9%~109.9%,适合批量烟样中这5种离子的快速分析。

小鼠脑组织高能X射线照射后K^+、Na^+、Ca^(2+)、LDH的变化

以１５０Ｇｙ高能Ｘ射线１次或分２次（每次７５Ｇｙ，间隔２４ｈ）照射小鼠全脑，１周后处死小鼠，立即取出全脑称重（湿重）后测定。结果，１次与分２次照射，对脑组织靶区产生相同的放射生物学效应，即引起脑组织乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性和Ｎａ＋、Ｃａ２＋含量明显升高（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），Ｋ＋含量下降（Ｐ＜０．０５）。

复方红景天对肝纤维化大鼠肝组织Na^+/Ca^(2+)泵、TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:探索复方红景天抗实验性大鼠肝纤维化的疗效与可能的分子机制.方法:用CC l4皮下注射法诱导SD大鼠肝纤维化模型,同时给予复方红景天颗粒口服进行干预性治疗,观察大鼠血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸含量及肝组织Na+/Ca2+泵、TGF-β1,Ⅰ型前胶原α1 mRNA表达水平、肝组织病理学变化.结果:与模型组相比,复方红景天可明显降低大鼠血清PCⅢ(μg/L)(164.25±45.68vs265.54±98.21),CⅣ(96.73±14.68vs159.67±29.64),HA(289.35±75.68vs455.79±113.55)水平,(q=4.26,4.94,3.68,均为P<0.05);复方红景天可抑制NCX,TGF-β1,α1(Ⅰ)mRNA表达(半定量积分分别为1.50±0.19vs2.45±0.31,1.06±0.12vs2.47±0.37,1.26±0.17vs2.50±0.40,q值分别为3.52,3.93,4.04,均为P<0.05).肝组织纤维沉积明显减少(肝纤维化积分为2.43±0.70vs3.53±0.68,q=3.69,P<0.05).NCX,TGF-β1 mRNA表达与PCⅢ,CⅣ,HA,α1(Ⅰ)mRNA及肝组织的纤维化积分呈正相关,相关系数r分别为0.52,0.49,0.56,0.48,0.60及0.47,0.61,0.56,0.49,0.51(均为P<0.05).结论:复方红景天良好的抗肝纤维化作用,其分子机制可能与抑制NCX及TGF-β1mRNA表达从而减少胶原纤维合成有关.

影响离体大鼠心肌细胞和蛋白重组脂质体Na^+-Ca^(2+)交换的因素

本工作在离体成年大鼠心室肌细胞和狗心肌肌膜Na^+-Ca^(2+)交换蛋白重组脂质体上,发现预先用哇巴因孵育细胞使细胞内Na^+浓度升高或降低细胞外Na^+浓度均使细胞及脂质体的Na^+-Ca^(2+)交换增加。Mn^(2+)对细胞和脂质体的Na^+-Ca^(2+)交换呈剂量依赖性的抑制作用;异搏定则无明显影响;花生四烯酸对Na^+-Ca^(2+)交换有激活作用;过氧化氢引起膜脂质过氧化后,显著促进脂质体的Na^+-Ca^(2+)交换,并呈时间和剂量依赖性。

前胡香豆素对肾型高血压大鼠左室肥厚及心肌胞内钙、Na^+,K^+-ATP酶和Ca^(2+),Mg^(2+)-ATP酶活性的影响

目的 研究前胡香豆素组分对肾型高血压左室肥厚的预防和逆转作用及机制。方法 用两肾一夹肾型高血压左室肥厚大鼠 (RHR)模型 ,测定前胡香豆素组分对其血压、左室湿重、心肌细胞面积、胞内静息钙及胞膜和线粒体ATP酶活性的影响。结果 前胡香豆素组分 ( 3 0mg·kg- 1 ·d- 1 ,ig)预防组及逆转组大鼠血压、左室湿重 体重均较肥厚组明显降低 ;左室心肌细胞面积、胞内静息钙均较肥厚组降低 ;对KCl致钙浓度升高亦明显低于肥厚组 ;两组均可增加心肌细胞膜及线粒体Na+ ,K+ ATP酶和Ca2 + ,Mg2 + ATP酶活性。结论 前胡香豆素组分可预防及逆转RHR左室肥厚 ,减少心肌细胞内钙含量 。

玉米种子萌发过程中Na^＋、K^＋和Ca^2＋含量变化与耐盐性的关系

玉米耐盐品种登海9号和盐敏感品种浚单18在含0、50、100、150和200mmolL-1 NaCl的营养液中萌发生长,采用等离子质谱分别测定其萌动种子种皮、胚、胚乳和幼苗根、根颈、叶中Na+、K+、Ca2+的含量。结果表明,随着培养液中NaCl浓度的增加,玉米体内Na+含量逐渐升高,在幼苗中表现地下部(根和根颈)显著高于地上部(叶);在萌动种子中,胚中Na+积累量显著高于种皮和胚乳。根系积累Na+能力较强,胚拒Na+能力较弱,种皮具有一定的Na+累积能力。随NaCl浓度的增加,K+和Ca2+含量逐渐降低,尤其是Ca2+含量急剧减少,达38.4%～55.9%(登海9号)和65.6%～78.2%(浚单18)。玉米根、根颈、种皮的Na+积累能力、叶的拒Na+能力和幼苗选择吸收Ca2+的能力可能与品种耐盐性有关。

沸水烫伤后大鼠心、肝组织Na^+,K^+-ATPase和Ca^(2+)-ATPase活性变化及三七保护作用探讨

目的 :观察严重烫伤后大鼠心、肝组织Na+ 、K+ -ATPase和Ca2 + -ATPase活性变化及三七的保护作用。方法 :采用健康Wistar大鼠制作 40 %TBSAⅢ度烫伤模型 ,在伤后 4h、8h、2 4h和 48h取心和肝组织匀浆 ,用比色法测定Na+ 、K+ -ATPase和Ca2 + -ATPase活性变化。结果 :单烫伤组大鼠心肌组织Na+ 、K+ -ATPase在伤后 4h酶活性稍有升高 ,心、肝组织Na+ 、K+ -ATPase和Ca2 + -ATPase活性均进行下降 ,伤后48h达最低点。治疗组大鼠心和肝组织Na+ 、K+ -ATPase和Ca2 + -ATPase活性均进行性增加。结论 :Na+ 、K+ -ATPase和Ca2 + -ATPase分布存在组织的特异性 ,严重烫伤对远隔重要生命器官心和肝有损害作用 。

四肽FMRFa对大鼠心室肌Na^+/Ca^(2+)交换的抑制

目的 研究四肽FMRFa对大鼠单个心室肌细胞Na+/Ca2 +交换的作用。方法 用膜片钳全细胞记录法测定成年大鼠心室肌细胞Na+/Ca2 +交换电流 (INa+ /Ca2 + )和其他离子通道电流。结果 FMRFa对大鼠心室肌细胞INa+ /Ca2 + 呈浓度依赖性抑制 ,10 0 μmol·L-1浓度时抑制内向和外向INa+ /Ca2 + 密度分别达 6 0 1%和 5 6 5 % ,对内向电流及外向电流的IC50 分别为 2 0 μmol·L-1和 34μmol·L-1。FMRFa 5 μmol·L-1抑制INa+ /Ca2 + 内向和外向电流密度分别为 38 7%和 34 9% ,但FMRFa 5 μmol·L-1及 2 0 μmol·L-1对L型钙电流、钠电流、瞬时外向电流和内向整流钾电流均无显著抑制作用。结论 FMRFa对大鼠心室肌细胞是一个特异性Na+/Ca2 +交换抑制剂。

溶血磷脂酸对大鼠心肌细胞膜Na^+-Ca^(2+)交换的影响

本研究采用蔗糖梯度离心法制各大鼠心肌细胞膜，观察溶血磷脂酸（ ＬＰＡ）对心肌细胞膜 Ｎａ~＋－Ｃａ^(２＋)交换的影 响。结果发现ＬＰＡ（１～２０ｎｍｏｌ／Ｌ）呈剂量依赖性和时间依赖性刺激Ｎａ~＋一Ｃａ^（２＋）交换活性增加。Ｇｐｐ（ＮＨ）ｐ呈剂量依赖 性替代ＬＰＡ刺激的Ｎａ~＋－Ｃａ^(２＋)交换活性；ＰＴＸ可抑制ＬＰＡ对Ｎａ~＋－Ｃａ^(２＋)交换的激活；Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ，Ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ，Ｐｒａｚｏｓｉｎ，Ａｔｒｏｐｉｎｅ，Ｌｏｓａｒｔａｎ，ＢＱ１２３和磷脂酰胆碱对ＬＰＡ诱导的Ｎａ~＋－Ｃａ~２＋交换活性无影响，而磷脂酰丝氨酸可增加对照和ＬＰＡ 两组的 Ｎａ~＋－Ｃａ^(２＋)交换活性。这些结果表明 ＬＰＡ可通过 ＰＴＸ敏感的 Ｇ蛋白刺激大鼠心肌细胞膜 Ｎａ~＋－Ｃａ^(２＋)交换活性。

NaCl胁迫对高粱成熟叶质外体和共质体中Na^+、Ca^(2+)浓度的影响

在c（NaCl）＝200mmol／L，t＝14d胁迫条件下，盐敏感品种糖高粱（T）成熟叶生长抑制、含水量的下降和质膜透性均明显大于耐盐品种独角虎（D）；盐胁迫下，质外体和共质体中Na＋浓度明显增加，增加的幅度是质外体大于共质体，T大于D．相反，盐胁迫下质外体和共质体Ca2＋浓度均明显下降，研究结果表明：质外体Na＋浓度剧增并没有改变细胞膨压，而可能通过取代质膜上Ca2＋而破坏质膜选择透性。

淋巴细胞膜上Na^(+)/Ca^(2+)交换操纵的Eu^(3+)内流的荧光法研究

利用Fura-2荧光浓度指示剂法、通过检测360nm激发荧光强度的变化,研究了Eu能否利用人外周血淋巴细胞膜上的Na+/Ca2+交换进入细胞。结果表明:用ouabain预处理细胞无Na+介质中测试,当加入Eu3+时,360nm荧光强度发生猝灭,且随着胞外加入的Eu3+浓度的增大而猝灭增强。表明在实验条件下Eu3+可以进入细胞。电压依赖性Ca2+通道阻断剂nicardipine对Eu3+的进入无显著影响,建议了Na+/Ca2+交换是Eu3+进入细胞的主要途径。当加入不同浓度的Eu3+和Ca2+的混和组分时,在无Na+介质中测试,结果表明Eu3+与Ca2+竞争Na+/Ca2+交换位点。在模拟胞内离子组分的EGTA缓冲液中(pH7.05),测得Eu3+与Fura-2的离解常数为4.95×10-14mol·L-1。

缺血再灌注小鼠心肌细胞Na^+/Ca^(2+)交换电流的改变

目的观察缺血再灌注损伤对小鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换蛋白电流的直接影响,探讨缺血再灌注损伤中Ca2+超载的机制。方法采用全细胞打孔膜片钳技术,观察缺血再灌注损伤对急性分离的小鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换蛋白电流(INa/Ca)的影响。细胞外灌流代谢抑制剂(5 mmol/L氰化钠和10 mmol/L脱氧葡萄糖)模拟化学性心肌细胞缺血状态。结果缺血8m in明显抑制了小鼠心室肌细胞钠钙交换蛋白内向和外向电流〔在-100 mV,电流从(-0.04±0.01)nA减小到0 nA;在+50mV,电流从(0.25±0.08)nA减小到(0.11±0.03)nA〕。而随后的再灌注则导致钠钙交换蛋白电流迅速而明显的增大,尤以外向电流增大更加显著〔在+50 mV,电流从(0.25±0.08)nA增大到(0.49±0.12)nA〕。结论缺血再灌注直接影响小鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换蛋白的功能及状态,使Na+/Ca2+交换蛋白的反向转运功能明显增强,这种改变可能是导致缺血再灌注损伤中Ca2+超载的关键因素。

淫羊藿苷减轻铝诱导的大鼠学习记忆减退并增强皮质及海马Na^+-K^+-ATPase、Ca^(2+)-ATPase活性

目的:观察淫羊藿苷对铝诱导的痴呆大鼠模型学习记忆的影响,并分析其作用机制。方法:以三氯化铝溶液诱导痴呆大鼠模型,采用Morris水迷宫检测大鼠的空间辨别学习记忆能力及化学法检测大脑皮层及海马Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性。结果:淫羊藿苷可缩短痴呆大鼠在定向航行实验中逃避潜伏期及搜索距离,并增强鼠脑皮层及海马Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性。结论:淫羊藿苷对铝盐诱导的痴呆大鼠学习记忆障碍模型有保护作用,其机制至少与增加大鼠脑内Na+-K+-AT-Pase、Ca2+-ATPase活性有关。

镉对大鼠Na^+-K^+-ATPase和Ca^(2+)-ATPase影响的实验研究

目的研究不同剂量镉对大鼠钠钾ATP酶(Na+K+ATPase)和钙ATP酶(Ca+ATPase)的影响,以探讨镉中毒的细胞分子学机制。方法大鼠按体重随机分成4组,第1组为对照组,皮下注射0.9%氯化钠,第2～4组为镉染毒组,分别皮下注射3,5,7μmol/kg的氯化镉溶液,注射容量均为2ml/kg。染毒6周后,测定尿中乳酸脱氢酶(LDH)、尿蛋白、尿镉和肝、肾组织中Na+K+ATPase及Ca2+ATPase的活力。结果随着镉染毒剂量的增加,各组大鼠尿LDH、尿蛋白和尿镉含量均逐渐递增,呈现明显的剂量-效应关系;同时,肝、肾组织中的Na+K+ATPase和Ca2+ATPase活力也随之增加。结论随着镉染毒剂量的增加,大鼠肝、肾组织损伤逐渐加重,同时伴随着细胞膜上Na+K+ATPase和Ca2+ATPase的变化,这可能与细胞内钙稳态的破坏有关。

Na^+/Ca^(2+)交换体电流在兔左心室壁分布的异质性

目的 探讨 Na+ /Ca2 +交换体电流 (INa+ /Ca2 + )在左室肌不同部位的分布特征及其与跨壁复极异质性的关系。方法 采用全细胞膜片钳技术 ,分别记录兔左心室肌内膜下、中层及外膜下细胞的动作电位 (AP)、INa+ /Ca2 + 及 IK。结果 中层细胞 AP时程明显长于外膜下细胞 (P<0 .0 1 ) ;在 +40 m V时 ,外向 INa+ /Ca2 + 密度在中层细胞明显大于外膜下及内膜下细胞 (P分别 <0 .0 1 ,0 .0 5 ) ;在 - 1 0 0 m V时 ,内向 INa+ /Ca2 + 密度在中层细胞明显大于外膜下 (P<0 .0 5 ) ;在测试电压为 +5 0 m V时 ,中层细胞的 IKs尾电流密度明显小于外膜下细胞 (P<0 .0 5 ) ,内膜下、中层及外膜下细胞的 IKr尾电流密度无明显区别 (P>0 .0 5 )。结论 INa+ /Ca2 + 与 IKs在兔左室肌的分布具有异质性 。

代谢抑制处理后大鼠心室肌细胞反向Na^+/Ca^(2+)交换体转运功能的变化

目的:利用荧光标记法观察代谢抑制处理后,大鼠心肌细胞反向Na+/Ca2+交换体(NCX)转运功能的变化。方法:酶解法分离制备钙耐受心肌细胞用Fura-2/AM负载,采用双激发荧光光电倍增系统(IonOptix Photom etry Sys-tem)检测钙信号。结果:细胞置于无Na+液后,可见[Ca2+]i逐渐升高,L-型Ca2+通道阻断剂n ifed ip ine在浓度为1μmol/L时,不影响此现象;而NCX的抑制剂N i2+,在浓度为1 mmol/L时,则完全阻断[Ca2+]i的升高。采用20mmol/L乳酸加10 mmol/L脱氧葡萄糖作为代谢抑制物处理心肌细胞不同时间,正常Tyrode液灌流10 m in,之后检测无Na+液引发[Ca2+]i升高效应的变化,发现5 m in处理与对照组无显著性差异,10和30 m in处理后此效应逐渐减弱。结论:首次发现,代谢抑制处理后心肌NCX的反向转运功能被抑制,阐明其调节机制,将为心肌缺血/再灌注损伤的治疗提供新思路。

二甲基-氨氯吡咪和牛黄酸对大鼠心室肌细胞Na^+/Ca^(2+)交换电流的影响

利用全细胞膜片钳技术 ,采用胶原酶B急性分离的大鼠心室肌细胞 ,研究了牛黄酸和二甲基 -氨氯吡咪对心肌细胞膜Na+/Ca2 +交换电流的影响。结果表明 ,10 μmol,2 0 μmol和 4 0 μmol的二甲基 -氨氯吡咪可使Ni2 +敏感电流浓度依赖性地增加 ;膜电位为 +5 0mV时分别增加 ( 2 7± 7) % ,( 12 1± 4 3 ) % ,和 ( 173± 68) % ;膜电位为 - 10 0mV时分别增加 ( 110±5 2 ) % ,( 2 2 1± 88) %和 ( 2 81± 80 ) %。牛黄酸对Na+/Ca2

NaCl胁迫对南瓜幼苗Na^+及Ca^(2+)含量的影响

采用19个不同类型南瓜品种,研究了300 mmol/L NaCl下,幼苗地上部和根系Na+和Ca2+离子含量和Na+/Ca2+比值的变化。结果表明:NaCl胁迫8 d后,不同南瓜品种幼苗Na+含量均明显增加,离子平衡被打破;南瓜幼苗体内的Na+含量、地上部的Na+/Ca2+比值的变化反映植物对盐离子和营养元素相对的吸收情况;青栗(Q1)南瓜幼苗根系Na+含量和Na+/Ca2+比值明显高于黑蜜南瓜(H2)和黑籽南瓜(H3)。由此可知:不同南瓜品种幼苗体内Na+含量、地上部Na+/Ca2+比值变化趋势与NaCI胁迫下不同南瓜品种幼苗的盐害指数的结果基本一致;进一步验证了Q1耐盐性强与NaCl胁迫下地上部Na+/Ca2+比值较低,Ca2+离子含量较高有关;而品种H2和H3对盐敏感与NaCl胁迫下地上部Na+/Ca2+比值较高,Ca2+离子含量较低有关。

肥厚心肌细胞Na^+/Ca^(2+)交换活性对β-肾上腺素能药物的反应性降低

目的 探讨肥厚心肌细胞Na+ /Ca2 + 交换对 β -类肾上腺素能药物刺激的反应及发生这种改变的可能机制。方法 采用胶原酶消化的高血压大鼠单个心室肌细胞及全细胞膜片钳技术 ,记录Na+ /Ca2 + 交换电流并观察药物对它的影响。结果 (1)异丙肾上腺素可浓度依赖性地增加正常及肥厚大鼠心室肌细胞的Na+ /Ca2 + 交换电流 ,但其对肥厚心室肌细胞Na+ /Ca2 + 交换电流的增强作用要弱于正常心室肌细胞 (P <0 0 5 )。 (2 )cAMP可浓度依赖性地增加正常及肥厚大鼠心室肌细胞的Na+ /Ca2 + 交换电流 ,其对正常及肥厚大鼠心室肌细胞Na+ /Ca2 + 交换电流的增强作用无差别 (P >0 0 5 )。结论 高血压大鼠心室肌细胞Na+ /Ca2 + 交换对 β 类肾上腺素能药物的反应性降低 ,可能与肥厚心肌细胞的 β-受体数目及功能、G蛋白及腺苷酸环化酶的活性改变等环节有关 ,此种反应可能是肥厚心肌收缩及舒张功能障碍的机制之一。