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2022-2023年山东省A(H1N1)pdm09流感病毒HA、NA基因变异特征分析
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作者 吴巨龙 张淑 +4 位作者 何玉洁 孙林 宋绍霞 孙文魁 刘倜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期471-477,共7页
目的 了解山东省2022-2023流感监测年度分离的A(H1N1)pdm09亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的变异特征,为流感的防控提供科学依据。方法 从流感监测网络实验室分离的流感毒株中按地市随机选取1... 目的 了解山东省2022-2023流感监测年度分离的A(H1N1)pdm09亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的变异特征,为流感的防控提供科学依据。方法 从流感监测网络实验室分离的流感毒株中按地市随机选取14株A(H1N1)pdm09亚型流感毒株,以WHO推荐的当季疫苗株为参考进行全基因组测序,并采用荧光法开展神经氨酸酶抑制(neuraminidase inhibition,NI)实验以评估药物敏感性。结果 山东省2022-2023年度分离的A(H1N1)pdm09流感病毒属于6B.1A分支中的5a.2a进化簇,核苷酸序列比对分析显示,HA和NA基因与2021-2023年度北半球疫苗株A/Victoria/2570/2019的亲缘关系较为接近,同源性分别为98.5%~98.7%和98.8%~99.1%。氨基酸序列分析显示,HA蛋白有20个位点发生了氨基酸序列变异,并发现1株病毒可能发生抗原漂移,有3株病毒发生了HA蛋白糖基化位点的缺失。NA酶相关重要位点未发生变异。NI实验显示,所测流感毒株均对抗流感病毒药物敏感。结论 所监测毒株与疫苗株整体同源性很高,但氨基酸存在一定程度变异,今后有必要持续开展流感病毒基因变异特征监测以了解流感流行的风险,以及评价基因变异对流感疫苗和治疗药物效果的影响。 展开更多
关键词 甲型h1N1pdm09流感 hA基因 na基因 基因变异
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H9N2亚型禽流感病毒M1和NA基因在昆虫细胞中的表达
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作者 王粲 张民秀 +6 位作者 谢芝勋 李孟 罗思思 李丹 阮志华 谢丽基 谢志勤 《中国动物检疫》 CAS 2024年第4期103-110,共8页
为通过昆虫细胞表达出H9N2亚型禽流感病毒M1和NA蛋白,并鉴定其免疫活性,利用PCR技术扩增H9N2亚型禽流感病毒M1和NA基因,以pFastBacDual为转移载体构建重组转移载体pFastBacDual-M1和pFastBacDual-NA;将阳性重组转移载体分别转化至DH10Ba... 为通过昆虫细胞表达出H9N2亚型禽流感病毒M1和NA蛋白,并鉴定其免疫活性,利用PCR技术扩增H9N2亚型禽流感病毒M1和NA基因,以pFastBacDual为转移载体构建重组转移载体pFastBacDual-M1和pFastBacDual-NA;将阳性重组转移载体分别转化至DH10Bac感受态细胞,得到重组杆粒rBacmid-M1和rBacmid-NA;将重组杆粒分别转染Sf9昆虫细胞,获得含M1和NA基因的重组杆状病毒rBV-M1和rBV-NA;运用IFA和Western-blot鉴定M1和NA蛋白的表达情况,同时以NA蛋白为包被抗原,运用间接ELISA方法鉴定NA蛋白的反应活性。结果显示,IFA鉴定均出现特异性绿色荧光,Western-blot检测M1和NA蛋白大小分别约为28和52 ku,ELISA检测NA蛋白对抗H9N2阳性血清有很高的反应值。结果表明,M1和NA蛋白可在昆虫细胞中特异性表达且具有反应原性。本试验为进一步研发H9N2亚型禽流感诊断技术和疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h9N2亚型 M1蛋白 na蛋白 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统
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Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 may cause liver injury via Na^(+)/H^(+) exchanger
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作者 Medine Cumhur Cure Erkan Cure 《World Journal of Virology》 2023年第1期12-21,共10页
The liver has many significant functions,such as detoxification,the urea cycle,gluconeogenesis,and protein synthesis.Systemic diseases,hypoxia,infections,drugs,and toxins can easily affect the liver,which is extremely... The liver has many significant functions,such as detoxification,the urea cycle,gluconeogenesis,and protein synthesis.Systemic diseases,hypoxia,infections,drugs,and toxins can easily affect the liver,which is extremely sensitive to injury.Systemic infection of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 can cause liver damage.The primary regulator of intracellular pH in the liver is the Na+/H+exchanger(NHE).Physiologically,NHE protects hepatocytes from apoptosis by making the intracellular pH alkaline.Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 increases local angiotensin II levels by binding to angiotensinconverting enzyme 2.In severe cases of coronavirus disease 2019,high angiotensin II levels may cause NHE overstimulation and lipid accumulation in the liver.NHE overstimulation can lead to hepatocyte death.NHE overstimulation may trigger a cytokine storm by increasing proinflammatory cytokines in the liver.Since the release of proinflammatory cytokines such as interleukin-6 increases with NHE activation,the virus may indirectly cause an increase in fibrinogen and D-dimer levels.NHE overstimulation may cause thrombotic events and systemic damage by increasing fibrinogen levels and cytokine release.Also,NHE overstimulation causes an increase in the urea cycle while inhibiting vitamin D synthesis and gluconeogenesis in the liver.Increasing NHE3 activity leads to Na+loading,which impairs the containment and fluidity of bile acid.NHE overstimulation can change the gut microbiota composition by disrupting the structure and fluidity of bile acid,thus triggering systemic damage.Unlike other tissues,tumor necrosis factor-alpha and angiotensin II decrease NHE3 activity in the intestine.Thus,increased luminal Na+leads to diarrhea and cytokine release.Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2-induced local and systemic damage can be improved by preventing virus-induced NHE overstimulation in the liver. 展开更多
关键词 LIVER hEPATOCYTE Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 COVID-19 na+/h+exchanger Sodium-proton pump
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三疣梭子蟹Na^+/H^+-exchanger基因克隆鉴定及在盐度胁迫下的表达分析 被引量:8
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作者 马金武 吕建建 +2 位作者 刘萍 高保全 李健 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期902-907,共6页
为研究Na^+/H^+-exchanger基因在三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)盐度胁迫过程中的功能作用,克隆了三疣梭子蟹Na^+/H^+-exchanger基因并进行表达分析。结果显示,Na^+/H^+-exchanger基因(Gen Bank:KU519329)全长4233 bp,5?和3?非... 为研究Na^+/H^+-exchanger基因在三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)盐度胁迫过程中的功能作用,克隆了三疣梭子蟹Na^+/H^+-exchanger基因并进行表达分析。结果显示,Na^+/H^+-exchanger基因(Gen Bank:KU519329)全长4233 bp,5?和3?非编码区(UTR)长分别为519和753 bp,开放阅读框(ORF)长2961 bp。编码986个氨基酸,预测蛋白质分子量和等电点分别为110.8 k D和7.42,具有信号肽和典型的Na^+/H^+-exchanger蛋白结构域,含12个跨膜α螺旋;三疣梭子蟹Na^+/H^+-exchanger基因与普通滨蟹(Carcinus maenas)同源性最高,达到87.2%,系统进化分析也显示该序列与普通滨蟹聚为一支;表达分析显示,三疣梭子蟹Na^+/H^+-exchanger基因在鳃中表达量最高;在低盐(盐度5、10和20)胁迫过程中,Na^+/H^+-exchanger基因在0—12h上调表达明显,在24—168h间表达量呈下降趋势;在高盐(盐度50)胁迫初期(0—12h),该基因表达量相对稳定,之后(24—168h)显著下调表达。研究表明低盐显著诱导Na^+/H^+-exchanger基因的高表达,推测三疣梭子蟹Na^+/H^+-exchanger基因在低盐环境下发挥重要的渗透调节功能。 展开更多
关键词 三统梭子蟹 na^+/h^+-exchanger 基因克隆 盐度胁迫 表达分析
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癌组织中NHERF1表达与术前血清CEA联合检测对结直肠癌预后的预测价值研究
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作者 叶婷 崔琦 《实验与检验医学》 CAS 2024年第1期58-62,共5页
目的 探讨联合检测癌组织中Na~+/H~+交换器调节因子1(NHERF1)表达与术前血清癌胚抗原(CEA)对结直肠癌预后的预测价值。方法 选取2017年1月至2018年10月商丘市第四人民医院收治的88例结直肠癌患者为研究对象。采集癌组织及癌旁组织标本,... 目的 探讨联合检测癌组织中Na~+/H~+交换器调节因子1(NHERF1)表达与术前血清癌胚抗原(CEA)对结直肠癌预后的预测价值。方法 选取2017年1月至2018年10月商丘市第四人民医院收治的88例结直肠癌患者为研究对象。采集癌组织及癌旁组织标本,应用免疫组化法测定结直肠癌组织、癌旁组织中NHERF1蛋白表达水平,应用化学发光免疫法测定血清CEA水平。通过χ^(2)检验分析NHERF1、CEA表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系,多因素Cox回归模型探讨结直肠癌预后相关因素。结果 结直肠癌组NHERF1蛋白阳性率明显高于癌旁组(P<0.05)。肿瘤最大径≥2 cm、TNM分期越高、浸润深度越深、病理级别越低、有脉管癌栓、有复发的结直肠癌患者NHERF1蛋白阳性表达率、术前血清CEA高水平表达率越高(P<0.05)。NHERF1阳性、血清CEA高水平、NHERF1阳性+血清CEA高水平的结直肠癌患者3年生存率均显著缩短(P<0.05)。肿瘤最大径≥2 cm、TNM分期Ⅲ-Ⅳ、浸润深度越深、有脉管癌栓、病理级别低、有复发、NHERF1阳性、血清CEA高水平的结直肠癌患者3年生存率均显著缩短(P<0.05)。TNM分期Ⅲ/Ⅳ期、有脉管癌栓、NHERF1阳性、血清CEA高水平是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 结直肠癌患者癌组织中NHERF1高表达、术前血清CEA升高,HERF1阳性联合血清CEA高水平与结直肠癌患者不良预后密切相关,NHERF1阳性与血清CEA高水平是结直肠癌患者预后的危险因素。 展开更多
关键词 结直肠癌 na+/h+交换器调节因子1 癌胚抗原 临床病理 预后
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Na^(+)/H^(+)交换体1在肾脏疾病中的作用
6
作者 陈安南 丁小强 宋娜娜 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期721-729,共9页
细胞内稳态的维持是细胞正常生命活动的前提。分布广泛的钠氢交换体1(Na^(+)/H^(+)exchanger 1,NHE1)是调节细胞内pH和细胞体积的重要机制,还能进一步影响细胞周期、细胞增殖和物质代谢等一系列生理过程。作为NHE家族中发现最早,研究甚... 细胞内稳态的维持是细胞正常生命活动的前提。分布广泛的钠氢交换体1(Na^(+)/H^(+)exchanger 1,NHE1)是调节细胞内pH和细胞体积的重要机制,还能进一步影响细胞周期、细胞增殖和物质代谢等一系列生理过程。作为NHE家族中发现最早,研究甚广的亚型,NHE1还是一种重要的结构蛋白,锚定于细胞骨架并定位在特定质膜区域,通过独立于离子转运的机制影响细胞粘附、迁移,生存和凋亡,成为众多信号通路的交汇点。NHE1相关的研究主要集中在各种肿瘤和心血管疾病,在肾脏疾病中的作用尚不明确。目前肾脏疾病大多缺乏有效的治疗药物,尽管众多研究试图从现有治疗药物中探索促进再生或抑制凋亡等肾脏保护的新机制,但鲜有新药能登上KIDGO指南的推荐药物之列。 展开更多
关键词 钠氢交换体1 肾脏疾病 急性肾损伤
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拟穴青蟹Na^+/H^+-exchanger基因克隆及其在盐度胁迫下的表达分析 被引量:2
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作者 刁乐 张凤英 +7 位作者 宋炜 马春艳 王伟 谌微 马凌波 赵明 乔振国 蒋科技 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2020年第2期214-224,共11页
克隆了拟穴青蟹(Scylla paramamosain)Na^+/H^+-exchanger基因,其cDNA序列全长3624 bp,开放阅读框(ORF)长2886 bp,可编码961个氨基酸,预测蛋白质分子量和等电点分别为110.8 kDa和7.42,具有信号肽和典型的Na^+/H^+-exchanger蛋白结构域,... 克隆了拟穴青蟹(Scylla paramamosain)Na^+/H^+-exchanger基因,其cDNA序列全长3624 bp,开放阅读框(ORF)长2886 bp,可编码961个氨基酸,预测蛋白质分子量和等电点分别为110.8 kDa和7.42,具有信号肽和典型的Na^+/H^+-exchanger蛋白结构域,含12个跨膜α螺旋。拟穴青蟹Na^+/H^+-exchanger的氨基酸序列与三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的一致度最高,达到84.9%;该基因在卵巢中表达量最高,其次是精巢、鳃等;该基因在受精卵时期表达水平最高,大眼幼体时期次之。拟穴青蟹大眼幼体在低盐(盐度7和17)胁迫过程中,Na^+/H^+-exchanger基因在20 min表达水平最高,之后基本恢复到正常表达水平;在高盐(盐度37)胁迫(20 min^2 h)期间,该基因表达水平先下降再逐渐上升。Na^+/H^+-exchanger基因在拟穴青蟹大眼幼体阶段盐度适应中发挥着重要作用,且低盐显著诱导Na^+/H^+-exchanger基因的高表达,推测拟穴青蟹Na^+/H^+-exchanger基因在低盐环境下发挥重要的渗透调节功能。 展开更多
关键词 拟穴青蟹 na^+/h^+-exchanger 盐度胁迫 表达分析
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Decrease in Cation Exchange Capacity of Zeolites at Neutral pH: Examples and Proposals of a Determination Method
8
作者 Moses Wazingwa Munthali Ponyadira Kabwadza-Corner +1 位作者 Erni Johan Naoto Matsue 《Journal of Materials Science and Chemical Engineering》 2014年第8期1-5,共5页
Cation exchange capacity (CEC) is an important characteristic of zeolites, especially when they are used as adsorbents in the aqueous system. However, no international standard method exists for the determination of C... Cation exchange capacity (CEC) is an important characteristic of zeolites, especially when they are used as adsorbents in the aqueous system. However, no international standard method exists for the determination of CEC of zeolites. We determined CEC of Linde-type A and Na-P1 type zeolites at various pH (4 to 10) with a simple method, where Na+-saturated zeolites were prepared, and then various amounts of HCl were added. CEC was simply calculated by subtracting the amount of Na+ in the final supernatant from the content of Na+ of the Na+-saturated zeolites. CEC of the zeolites decreased with decreasing pH and with decreasing Na+ concentration of the final supernatant. The concentration of Na+ of the supernatant, CEC of the zeolites began to decrease at weakly alkaline or neutral pH, and that of the Linde-type A zeolite became about half at pH around 6. When CEC was plotted against pH-pNa;where pNa is negative logarithm of the activity of Na+;CEC of each zeolite was expressed by a curve. It indicates that the CEC or the amount of Na+ retention is univocally determined by the ratio of activities of Na+ and proton. 展开更多
关键词 CATION exchange Capacity na+ Retention ph Dependence Linde-Type A ZEOLITE na-P1 TYPE ZEOLITE
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新型甲型H_1N_1流感毒株NA基因特征和进化 被引量:4
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作者 钟静 黄平 +3 位作者 倪汉忠 李昕洁 张欣 廖家政 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第15期1675-1677,共3页
目的通过对新型甲型H1N1流感毒株神经氨酸酶(NA)基因序列的变异分析,揭示毒株NA基因变异与进化。方法检测广东地区分离毒株NA基因核苷酸序列,同时对全球新型甲型H1N1流感毒株NA基因进行检索下载,采用Lasergene 7.1软件比对和分析NA基因... 目的通过对新型甲型H1N1流感毒株神经氨酸酶(NA)基因序列的变异分析,揭示毒株NA基因变异与进化。方法检测广东地区分离毒株NA基因核苷酸序列,同时对全球新型甲型H1N1流感毒株NA基因进行检索下载,采用Lasergene 7.1软件比对和分析NA基因核苷酸和氨基酸序列,结合临床资料分析变异基因进化,同时分析糖基化位点。结果 2009年4-12月69株毒株NA基因16个氨基酸位点置换,占3.41%(16/469);NA蛋白主要置换位点在V106I/H和N248D。毒株GD-801-2009(H1N1)和GD-1202-2009的NA基因明显受到的感染宿主选择性作用,而毒株GD-1-2009的NA基因明显受到的感染宿主负选择性作用。与毒株GD-1-2006(H5N1)NA基因比较,毒株GD-801-2009的NA基因插入Nt145-204,导致H1N1NA蛋白增加第49~68位氨基酸(CNQSVITYENNTWVNQTYVN),其中包括4个糖基化位点。结论广东新型甲型H1N1流感毒株NA基因正向不同方向进化;新型甲型H1N1流感NA蛋白新增4个糖基化位点。 展开更多
关键词 新型甲型h1N1 毒株 na基因 特性 进化 糖基化
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福建省2009年甲型H1N1流感病毒NA基因特征及对达菲的耐药性 被引量:4
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作者 谢剑锋 沈晓娜 +6 位作者 王美爱 杨式芹 陈炜 林元波 周朝晖 郑奎城 严延生 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期904-906,911,共4页
目的监测福建省甲型H1N1流感病毒NA基因的变化以及对达菲的耐药情况,为临床诊疗和疾病控制提供参考依据。方法从福建省流感监测网络中随机选取23株甲型H1N1流感病毒,经病毒核酸提取和一步法RT-PCR扩增,获得NA基因片段,双向测定核苷酸序... 目的监测福建省甲型H1N1流感病毒NA基因的变化以及对达菲的耐药情况,为临床诊疗和疾病控制提供参考依据。方法从福建省流感监测网络中随机选取23株甲型H1N1流感病毒,经病毒核酸提取和一步法RT-PCR扩增,获得NA基因片段,双向测定核苷酸序列,分析NA基因序列和重要氨基酸位点特征。结果 23株甲型H1N1流感病毒NA片段基因与A/California/07/2009(H1N1)代表株的核苷酸序列进行比较,同源性高达98.1%以上;23株毒株NA蛋白第275位氨基酸均为组氨酸。结论随机选取的23株甲型H1N1流感病毒NA基因片段保持高度同源并且对达菲仍然敏感。随着国内外达菲耐药株的不断出现,应加强耐药性监测,为制定应对甲型H1N1流感流行措施提供参考。 展开更多
关键词 2009甲型h1N1流感病毒 na基因特征 达菲耐药性
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G蛋白、蛋白激酶C和Na^+-H^+交换在内皮素-1诱导培养心肌细胞肥大反应中的作用 被引量:7
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作者 吴滨 王庭槐 +2 位作者 潘敬运 朱小南 詹澄扬 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期87-93,共7页
内皮系-1(ET-1)是一种强的生长因子,并诱导心肌细胞肥大反应。在本实验中,我们探讨了G蛋白、蛋白激酶C(PKC)和Na+-H+交换在ET-1诱导的培养新生大鼠心肌细胞肥大反应中的作用。ET-1(10-10~10-7mol/L)促进3H-亮氨酸掺入... 内皮系-1(ET-1)是一种强的生长因子,并诱导心肌细胞肥大反应。在本实验中,我们探讨了G蛋白、蛋白激酶C(PKC)和Na+-H+交换在ET-1诱导的培养新生大鼠心肌细胞肥大反应中的作用。ET-1(10-10~10-7mol/L)促进3H-亮氨酸掺入,增加细胞蛋白质的含量和心肌细胞的表面积,且呈剂量依赖性,它们的EC50分别为5.2×10-10,5.2×10-10和7.3×10-10mol/L。用蛋白激酶C(PKC)抑制剂,Staurosporin(2nmol/L)预处理心肌细胞,可完全阻断ET-1诱导的心肌细胞的这些肥大反应,而蛋白激酶C激动剂,佛波酸酯(PMA)(10-8~10-6mol/L)呈剂量依赖性促进心肌细胞的肥大反应。用Na+-H+交换抑制剂,氨氯毗咪(10-4mol/L)预处理心肌细胞,可抑制ET-1诱导的心肌细胞肥大反应,但不影响PMA诱导的心肌细胞肥大反应。百日咳毒素(150ng/ml)预处理心肌细胞,可明显抑制ET-1诱导的心肌细胞肥大反应。这些结果提示,ET-1诱导的培养新生大鼠心肌细胞肥大反应是与百日咳毒素敏感的G蛋白相耦联,蛋白激酶C和Na+.H+交换可能在ET-1诱导的心肌细胞肥大反应中是重要的细胞内信使转导途径。 展开更多
关键词 内皮素 蛋白激酶 G蛋白 心肌细胞 肥大反应
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H1N2亚型猪流感病毒HA、NP、NA、M和NS基因的克隆与序列分析 被引量:3
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作者 蒙雪琼 陈义祥 +3 位作者 刘棋 郑敏 施开创 胡杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期221-227,共7页
对3株H1N2亚型猪流感病毒(SIV):Sw/GX/17/05、Sw/HN/I/05和Sw/GX/13/06的血凝素(HA)、核蛋白(NP)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白(M)和非结构蛋白(NS)基因进行克隆和序列分析。结果显示:3株分离毒株HA、NP、NA、M和N... 对3株H1N2亚型猪流感病毒(SIV):Sw/GX/17/05、Sw/HN/I/05和Sw/GX/13/06的血凝素(HA)、核蛋白(NP)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白(M)和非结构蛋白(NS)基因进行克隆和序列分析。结果显示:3株分离毒株HA、NP、NA、M和NS基因之间核苷酸同源性分别为91.3%~98.0%、98.4%~98.8%、97.4%~98.3%、98.8%~99.8%和98.1%~98.4%。遗传进化分析显示:分离毒株与美国分离的三源基因重排HIN2sIV具有较近的亲缘关系;在HA、NP、M和NS基因进化树中,3株分离毒株均位于古典H1N1亚型SIV群,在NA基因进化树中,3株分离毒株则位于人流感病毒群。HA和NA基因推导氨基酸序列分别与代表毒株古典H1N1SIVA/swine/Maryland/23239/1991(H1N1)和人H3N2流感病毒A/BuenosAires/4459/96(H3N2)比较分析显示:HA(95.4%~96.1%)和NA(96.6%~97.2%)具有较高的氨基酸同源性;糖基化位点、抗原位点和受体结合位点(HA)处氨基酸存在一定的差异,这些氨基酸差异对病毒生物学特性的影响有待于进一步研究。 展开更多
关键词 h1N2亚型SIV hA基因 NP基因 na基因 M基因 NS基因 克隆 序列分析
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禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)NA基因克隆及序列分析 被引量:5
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作者 乔传玲 于康震 +3 位作者 孟庆文 邓国华 田国斌 唐秀英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期100-103,共4页
采用RT_PCR技术扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/ 3/ 96 (H5N1) (GD3/ 96 )NA基因 ,并对其进行了克隆与测序 ,该苷酸序列测定结果表明 :NA基因全长为 1410bp ,共编码 46 9个氨基酸。其序列与A/Hongkong/ 15 6 / 97(H5N1)、A/Chicken/... 采用RT_PCR技术扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/ 3/ 96 (H5N1) (GD3/ 96 )NA基因 ,并对其进行了克隆与测序 ,该苷酸序列测定结果表明 :NA基因全长为 1410bp ,共编码 46 9个氨基酸。其序列与A/Hongkong/ 15 6 / 97(H5N1)、A/Chicken/HongKong/ 2 2 0 / 97(H5N1)、A/Goose/Guangdong/ 1/ 96 (H5N1)及A/teal/Hongkong/W312 / 97(H6N1)分离株核苷酸序列的同源性在88.4%~ 99.0 %之间 ,其相应氨基酸序列的同源性在 89.8%~ 99.2 %之间。氨基酸序列与香港流感分离株氨基酸序列相比 ,在茎部没有出现 19个氨基酸残基的缺失 。 展开更多
关键词 禽流感病毒 A/Goose/Guangdong/3/96(h5N1) na 序列分析 神经氨酸酶基因
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Fas和FasL在Na^+/H^+交换器-1抑制诱导缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用 被引量:2
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作者 陆俊羽 姚伟 +3 位作者 钱桂生 吴国明 陈维中 李淑平 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期515-518,F0005,共5页
目的探讨Fas、FasL在Na+/H+交换器1(NHE1)抑制所诱导的缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡中的作用。方法将转染NHE1特异性核酶基因的大鼠PASMCs置于缺氧条件下(O2的体积分数低于1%)培养。缺氧培养2、6、12、24和48h后用原位末端标记... 目的探讨Fas、FasL在Na+/H+交换器1(NHE1)抑制所诱导的缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡中的作用。方法将转染NHE1特异性核酶基因的大鼠PASMCs置于缺氧条件下(O2的体积分数低于1%)培养。缺氧培养2、6、12、24和48h后用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况;半定量逆转录聚合酶链反应(sqRTPCR)方法检测细胞内fas和fasLmRNA表达变化;免疫细胞化学法检测细胞内Fas和FasL蛋白表达变化。结果转染NHE1特异性核酶基因的大鼠PASMCs在缺氧培养时,其细胞凋亡率随缺氧时间的延长而逐渐升高,但细胞内fas、fasLmRNA及Fas、FasL蛋白表达与对照组细胞比较差异均无显著性。结论Fas/FasL死亡通路可能不参与NHE1抑制而诱导缺氧大鼠PASMCs凋亡的调控。 展开更多
关键词 na^+/h^+交换器-1 FAS/FASL 细胞凋亡 基因表达 蛋门表达 平滑肌 血管 na^+/h^+交换器 平滑肌细胞凋亡 FASL蛋白
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siRNA沉默NHE1基因对MHCC97-H肝癌细胞侵袭迁移的影响 被引量:2
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作者 孙伟 王德盛 +6 位作者 杨薛康 周亮 张勇 苟泽鹏 祝普利 张福琴 窦科峰 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2011年第23期2437-2442,共6页
目的:探讨RNA干扰沉默NHE1基因后对人肝癌细胞株MHCC97-H细胞侵袭迁移的影响.方法:应用NHE1基因小干扰RNA(small interferingRNA,siRNA)转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,同时设立空白对照组和无关对照组.转染成功后采用RT-PCR和Westernblo... 目的:探讨RNA干扰沉默NHE1基因后对人肝癌细胞株MHCC97-H细胞侵袭迁移的影响.方法:应用NHE1基因小干扰RNA(small interferingRNA,siRNA)转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,同时设立空白对照组和无关对照组.转染成功后采用RT-PCR和Westernblot分别从基因和蛋白水平检测RNA干扰沉默NHE1基因的效果.MTT法测定转染后三组细胞的增殖状况,Transwell小室检测沉默NHE1基因对MHCC97-H细胞侵袭、转移能力的影响,进一步采用免疫荧光观察其对MHCC97-H细胞骨架和伪足的影响.结果:与两对照组比较,转染NHE1-siRNA组NHE1mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);细胞侵袭、迁移实验结果显示,NHE1-siRNA组穿透人工基底膜的细胞数(34.1±5.2,120.2±12.8)较空白对照组(56.9±6.1,235.2±16.8)和转染无关对照组(57.2±6.1,231.9±14.7)均明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05),而空白对照组与无关对照组比较差异无统计学意义;MTT结果显示,转染后48h和72h三组细胞间增殖活性差异无统计学意义;NHE1基因沉默后与两对照组相比,MHCC97-H细胞膜伪足形成减少,细胞内肌动蛋白网排列紊乱.结论:siRNA沉默NHE1基因后可能通过影响MHCC97-H细胞骨架的重组和伪足的形成,从而抑制MHCC97-H细胞的侵袭和迁移能力. 展开更多
关键词 肝癌 钠氢交换蛋白1 Rna干扰 细胞骨架
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人NHE-1基因miRNA干扰载体构建、鉴定及干扰效应评价 被引量:6
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作者 黄美风 方伯言 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第18期2721-2724,2728,共5页
目的构建人钠氢交换蛋白-1(NHE-1)基因的miRNA特异性干扰表达载体并转染293细胞,筛选其有效性。方法设计4对miRNA oligo,依次通过退火、连接,构建含NHE-1前体miRNA的重组干扰质粒pcDNATM 6.2-GW/NHE-miR和阴性对照质粒pcDNATM 6.2-GW/ne... 目的构建人钠氢交换蛋白-1(NHE-1)基因的miRNA特异性干扰表达载体并转染293细胞,筛选其有效性。方法设计4对miRNA oligo,依次通过退火、连接,构建含NHE-1前体miRNA的重组干扰质粒pcDNATM 6.2-GW/NHE-miR和阴性对照质粒pcDNATM 6.2-GW/neg-miR,并转染293细胞,经Re-al-Time PCR评价干扰效应,筛选出干扰效应最佳的靶序列。结果测序证实目的片段正确插入载体中,成功构建4个人NHE-1基因miRNA干扰载体;Real-Time PCR证实完成干扰效应评价,并根据NHE-1基因转录调控区及其蛋白分子结构功能区评价结果,得到NHE1-4是最佳干扰片段。结论成功构建针对人NHE-1基因的miRNA特异性有效干扰质粒,为后续NHE-1基因腺病毒miRNA表达载体的构建及其在调控APP裂解相关酶类的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 钠氢交换蛋白-1 干扰载体 干扰效应
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赣州市2014年新型甲型H1N1流感病毒NA基因特征及耐药性分析 被引量:3
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作者 熊衍峰 李如 +3 位作者 李健雄 施勇 胡晓军 龙彩云 《实验与检验医学》 CAS 2016年第4期458-460,465,共4页
目的分析江西省赣州市2014年新型甲型H1N1流感病毒NA基因的特点,掌握其耐药情况,为临床治疗和疾病控制提供参考依据。方法随机选择17株新型甲型H1N1流感病毒,经核酸提取和one-step RT-PCR扩增NA基因片段,双向序列测定,采用DNAStar5.0和M... 目的分析江西省赣州市2014年新型甲型H1N1流感病毒NA基因的特点,掌握其耐药情况,为临床治疗和疾病控制提供参考依据。方法随机选择17株新型甲型H1N1流感病毒,经核酸提取和one-step RT-PCR扩增NA基因片段,双向序列测定,采用DNAStar5.0和Mage4.0序列分析软件分析NA基因特征以及耐药性位点。结果 17株毒株的NA基因片段与代表株A/California/07/2009(H1N1)的序列核苷酸序列进行比对,核苷酸序列同源性高达98.4%以上,氨基酸的同源性也高达97.0%以上。17株毒株的NA活性中心位点氨基酸及周围的辅助位点氨基酸均未发生氨基酸替换。结论 17株毒株的NA基因片段保持高度的同源性并均对流感病毒神经氨酸酶抑制剂药物敏感,但仍应加强对流感病毒的耐药性监测,为制定新型甲型H1N1流感的防制措施提供技术支持。 展开更多
关键词 新型甲型h1N1流感病毒 na 耐药性
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NHE1 mRNA在肝癌组织的表达及意义 被引量:2
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作者 李杰 窦科峰 +4 位作者 张洪涛 张超 李韧 张福琴 王德盛 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2009年第2期121-122,共2页
目的探讨钠氢交换蛋白1(NHE1)mRNA在原发性肝细胞肝癌组织及癌旁组织的表达及意义。方法采用RT-PCR检测诊断为HCC患者34例的肝癌及癌旁组织中NHE1 mRNA的表达情况。结果所有肝癌组织和癌旁组织NHE1均有表达,相对表达量分别为2.892±... 目的探讨钠氢交换蛋白1(NHE1)mRNA在原发性肝细胞肝癌组织及癌旁组织的表达及意义。方法采用RT-PCR检测诊断为HCC患者34例的肝癌及癌旁组织中NHE1 mRNA的表达情况。结果所有肝癌组织和癌旁组织NHE1均有表达,相对表达量分别为2.892±0.882和0.802±0.206,两者存在显著性差异(P<0.001)。作为对照的21例肝组织NHE1的相对表达量为0.872±0.186。肝癌组织与对照肝组织比较存在显著性差异(P<0.001);癌旁组织与对照肝组织比较差异无统计学意义(P>0.10)。将从同一患者取材的肝癌组织和癌旁组织检测到的NHE1 mRNA的表达量进行配对t检验,两者间存在显著性差异(P<0.001)。结论NHE1 mRNA在肝癌组织的表达增高,可能在肝癌的发生中起一定的作用。 展开更多
关键词 肝细胞癌 钠氢交换蛋白1
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黄瓜质膜型Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(SOS1)的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 王澍 任晴雯 樊国盛 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2012年第3期6-10,共5页
采用RACE(rapid-amplification of cDNA ends)方法从黄瓜Cucumis sativusL.中克隆出质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因的cDNA(CsSOS1),该cDNA全长3 638bp,其中开放阅读框为3 435bp,编码1 145个氨基酸。氨基酸同源性分析表明,CsSOS1氨基酸序列... 采用RACE(rapid-amplification of cDNA ends)方法从黄瓜Cucumis sativusL.中克隆出质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因的cDNA(CsSOS1),该cDNA全长3 638bp,其中开放阅读框为3 435bp,编码1 145个氨基酸。氨基酸同源性分析表明,CsSOS1氨基酸序列与水稻OsSOS1和拟南芥AtSOS1的氨基酸序列同源性较高,分别为64%和58%,而与液泡型的Na+/H+逆向转运蛋白氨基酸序列亲缘关系较远。蛋白质跨膜结构分析表明CsSOS1包含11个完全跨膜片段。激光共聚焦显微镜显示CsSOS1基因的编码区与YFP基因融合后,定位在细胞膜上。酵母功能互补试验结果显示CsSOS1参与Na+与H+的转运,表明该基因转化酵母后可以补充酵母SOS1的缺失。 展开更多
关键词 黄瓜 质膜型na+/h+逆向转运蛋白基因(SOS1) CDna克隆 亚细胞定位 酵母功能互补
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人肺癌组织细胞Na^+/H^+交换蛋白-1基因的表达与其抗凋亡的关系 被引量:4
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作者 厉为良 钱桂生 +1 位作者 黄桂君 吴国明 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2000年第2期147-149,共3页
目的 :通过对临床人肺癌组织Na+/H+交换蛋白 1(NHE 1)mRNA的表达的检测 ,探讨肿瘤治疗新的特异靶点。方法 :采用RNA原位分子杂交法 (RNA IMH)检测了 2 7例人肺癌组织和正常肺组织NHE 1mRNA的表达。结果 :人肺癌组织细胞NHE 1mRNA的表... 目的 :通过对临床人肺癌组织Na+/H+交换蛋白 1(NHE 1)mRNA的表达的检测 ,探讨肿瘤治疗新的特异靶点。方法 :采用RNA原位分子杂交法 (RNA IMH)检测了 2 7例人肺癌组织和正常肺组织NHE 1mRNA的表达。结果 :人肺癌组织细胞NHE 1mRNA的表达显著增强 ,呈过表达 ,而各病理类型间无显著差异。结论 :人肺癌组织细胞中NHE 1mRNA过表达这一区别于正常组织细胞的分子生物学特征与肿瘤细胞的抗凋亡特性的形成密切相关 。 展开更多
关键词 肺肿瘤 酸碱平衡 na^+/h^+交换蛋白
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