Na^+/HCO_3^- cotransporter is expressed on β and α cells during rat pancreatic development

AIM To determine the expression and localization of the electrogenic Na^+/HCO_3^- cotransporter(NBC1) in rat pancreas during development. METHODS The rat pancreas from postnatal and embryos removed from the uterus of pregnant rats that had been sacrificed by CO2 asphyxiation were used. Rat pancreas from embryonic day(E) 15.5 and E18.5 rat embryos was isolated under a stereomicroscope. Rat pancreas from postnatal(P) days 0, 7, 14, 21 and adult was directly isolated by the unaided eye. The RT-PCR analysis of the NBC1 specific region on rat pancreastissues from different developmental stages. The two antibodies which target the NBC1 common COOHterminal region and NH2-terminal region detected a clear band of about 145 k Da in the Western blot analysis. The localization of NBC1 was examined by immuno-fluorescence detection. RESULTS The results revealed the first peak of NBC1 expression at E18.5 and the second peak at P14. Meanwhile, the low NBC1 expression occurred at P7 and adult stages. Our results demonstrated, for the first time, the presence of NBC1 in the plasma membrane of β and α cells, as well as in the basolateral membrane of acinar cells of the rat pancreas at different stages of development. CONCLUSION The data strongly suggests that NBC1 is diversely expressed in the pancreas at different developmental stages, where it may exert its functions in pancreatic development especially islet cell growth through HCO_3^- transport and pH regulation.

盐碱胁迫对尼罗罗非鱼鳃Na^+/HCO_3^-共转运子、碳酸酐酶基因表达的影响

为了探讨盐碱胁迫条件下鱼类渗透生理调节机制,以尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)为实验材料,PCR扩增得到了Na^(+)/3HCO^(-)共转运子(NBCe1)基因c DNA部分序列,比较了单盐(盐度10、盐度15)、单碱(1.5 g/L、3 g/L Na HCO3)、盐碱混合(盐度10,碱度1.5 g/L;盐度15,碱度3 g/L)胁迫后不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h)血清渗透压、离子浓度(Na^(+)、K^(+)、Cl–、Ca2^(+))以及鳃碳酸酐酶(CA)活性、CA与NBCe1基因m RNA表达变化。结果显示,不同胁迫条件下,血清渗透压、离子浓度、鳃组织CA酶活、CA与NBCe1基因m RNA表达变化均与胁迫强度呈正相关。随时间推移,血清渗透压、离子浓度呈现先上升后下降的变化趋势,单盐、盐碱混合组血清渗透压值较单碱组高。单盐、单碱、盐碱混合组中,NBCe1基因m RNA在鳃中均呈略微上调,但不显著(P>0.05)。单碱组和盐碱混合组鳃CA活性较单盐组高,低盐碱胁迫(盐度10,碱度1.5 g/L)下CA活性较晚达最高值;不同胁迫条件下,CA基因m RNA表达均表现上调,单碱、盐碱混合组更为显著(P<0.05),推测CA较NBCe1对体内3HCO^(-)转运作用更为显著。研究结果为尼罗罗非鱼盐碱适应生理调节提供了基础资料。

绿色荧光蛋白与人肾脏NaDC3融合基因的构建及其在肾小管上皮细胞中的定位

本文采用RT-PCR方法从人的正常肾组织中扩增出hNaDC3基因全长cDNA序列,采用基因重组技术将hNaDC3基因和绿色荧光蛋白基因融合,通过真核表达质粒-脂质体介导,导入LLG-PK1细胞系,激光共聚焦显微镜动态观察GFP-hNaDC3的定位情况。结果显示pEGFP-C3空白质粒转染的LLC-PK1细胞表达了GFP,GFP在胞内分布以核浆为主,呈均匀致密的细颗粒荧光,胞核染色强,核仁荧光稀少,界线清楚。而pEGFP-C3-hNaDC3转染细胞株的绿色荧光蛋白,转染后第1天混合分布于细胞浆和细胞膜,以粗颗粒荧光为主,两者界限不清楚,胞浆中可见未染色的圆形空洞,未见胞核染色;第3天主要聚集于细胞膜,核周的胞浆中可见粗颗粒荧光物质,胞浆和胞膜界线清楚,胞核亦未见绿色荧光蛋白;第5天清晰聚集于细胞膜,细胞膜连接呈网状。因此hNaDC3蛋白在细胞质中生成后,定位于细胞膜并稳定表达。

钠依赖二羧酸转运蛋白3和葡萄糖对肾小管上皮细胞琥珀酸转运的影响

目的 探讨钠离子依赖的二羧酸转运蛋白 3(NaDC3)对细胞能量代谢的作用以及NaDC3不同表达和不同葡萄糖浓度对肾小管上皮细胞琥珀酸转运的影响。方法 应用Westernblot明确正义转染、反义转染、空质粒转染 (pcDNA3)及未转染的人近曲肾小管上皮细胞 (HKC)中细胞hNaDC3蛋白表达的差异 ,用毛细管电泳技术测定不同时间点或同一时间不同葡萄糖浓度时细胞摄取缓冲液中琥珀酸的量。结果 正义转染细胞hNaDC3蛋白表达增强 ,约是未转染HKC细胞的 1 5倍 ,缓冲液中琥珀酸含量下降较快 ,琥珀酸摄取增快。反义转染细胞hNaDC3蛋白表达下降 ,约是未转染HKC细胞的 2 / 3,但两者缓冲液中琥珀酸含量下降差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。空质粒转染对hNaDC3蛋白表达和琥珀酸摄取无明显影响。随葡萄糖浓度增加 ,缓冲液中琥珀酸含量下降增快。结论 hNaDC3蛋白过表达可加速三羧酸循环中间代谢产物的转运 。

大鼠双侧输尿管梗阻后肾脏钠通道的改变

目的 :探讨泌尿系梗阻后肾脏功能的改变机制。方法 :2 0只大鼠随机分为实验组 (n =10 )及对照组 (n =10 )。实验组双侧输尿管梗阻 2 4h后解除梗阻 ,对照组手术同实验组 ,但不结扎。所有大鼠于术前 3d及术后 4d测量饮水量、食量、体重及尿量 ;术后 4d抽取动脉血化验 ,同时取出双侧肾脏 ;右肾全肾快速放入液氮冰冻备份 ,左肾分离出内髓 (IM)、外髓内带 (ISOM)、外髓外带加肾皮质 (OSOM +C) ,免疫杂交法检测 3型钠氢交换通道 (NHE3)、钠钾ATP酶 (Na -K -ATPase)和钠 -钾 - 2氯协同转运通道蛋白 (BSC - 1)。结果 :实验组输尿管梗阻 2 4h后引起肾脏水钠排泄异常 ,机体水电解质紊乱 ;肾脏不同部位NHE3、Na-K -ATPase及BSC - 1表达均较对照组降低 (P均<0 .0 1)。结论 :NHE3、Na-K -ATPase及BSC - 1水平降低可能是泌尿系梗阻后肾小管性钠回吸收障碍。