脑络通颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠凋亡及PRMT5、p53的影响

目的:探讨脑络通颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠凋亡、蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)和p53蛋白的影响。方法:将SD成年雄性大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO/R)、脑络通组(20.2 g/kg)。采用改良线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO/R)模型。脑络通组给予脑络通颗粒(20.2g/kg)灌胃,每天1次,持续7天;假手术组和模型组按同样的方法同时灌胃同体积生理盐水。观察脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损评分及脑梗死体积,检测大鼠脑组织细胞凋亡率及PRMT5、p53、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠有明显的神经功能缺损症状,脑梗死体积和脑组织中细胞凋亡率明显增加,Caspase-3、p53、PRMT5蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,脑络通组神经功能缺损症状明显减轻,脑梗死体积和脑组织中细胞凋亡率明显减少,Caspase-3、p53、PRMT5蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:脑络通颗粒可改善脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损症状,缩小脑梗死体积,可能是通过抑制PRMT5、p53基因表达,下调Caspase-3蛋白和上调Bcl-2蛋白表达水平抑制神经细胞凋亡,从而对脑缺血再灌注损伤大鼠起到神经保护作用。

脑络通颗粒对大脑中动脉闭塞型急性脑梗死患者侧枝循环影响

目的:观察脑络通颗粒对大脑中动脉闭塞型脑梗死患者侧支循环、神经功能缺损、认知功能的影响及临床疗效,探索其临床价值。方法:选取符合入组标准60例进行随机分组,对照组、治疗组各30例。对照组予以阿司匹林、硫酸氢氯吡格雷、阿托伐他汀以及其他常规基础治疗,治疗组在此基础加用脑络通颗粒,共治疗90天,对比两组患者治疗前后侧支循环评分,美国国立卫生研究院卒中量表评分、改良Rankin评分量表评分、蒙特利尔认知评估量表评分变化。结果:治疗后治疗组侧支循环评分优于对照组(P<0.05),同时治疗组在降低美国国立卫生研究院卒中量表评分、改良Rankin评分量表评分,和提高蒙特利尔认知评估量表评分方面均优于对照组(P<0.05),而治疗组也具有更好的疗效。结论:脑络通颗粒可以改善大脑中动脉闭塞型脑梗死患者侧支循环,改善神经功能损伤,以及认知功能,且疗效明确。

脑络通对脑缺血损伤防治作用的实验观察

目的 :探讨脑络通防治缺血性脑损伤的作用机制。方法 :采用多因素病证结合的气虚血瘀证脑缺血动物模型。观察脑络通对血浆 t- PA(tissue plasminogen activator组织型纤溶酶原激活物 )、PAI(plas-minogen activator inhibitor组织型纤溶酶原激活物抑制物 )及血清 IL- 1β(interleukin- 1β白细胞介素 - 1β)、IL- 6(interleukin- 6白细胞介素 - 6)含量的影响。结果 :与缺血模型组比较 ,脑络通可显著提高血浆 t- PA活性(p<0 .0 1 ) ,降低 PAI活性 (p<0 .0 1 ) ,降低血清 IL- 1 β水平 (p<0 .0 1 )及 IL- 6水平 (p<0 .0 5) ,且优于药物对照组。结论 :在脑缺血急性期 ,脑络通可通过改善血浆纤维蛋白溶解系统活性 ,调节炎性介质释放 ,从多个病理环节阻断缺血性脑损伤 ,为益气活血的中药复方制剂脑络通防治缺血性脑血管疾病提供了进一步的实验证据。

脑络通对大鼠急性脑缺血-再灌流损伤保护作用的实验研究

应用大鼠急性脑缺血－再灌流模型，观察了脑络通胶囊对模型鼠局部脑血流量（ｒＣＢＦ）、脑水分含量、血中和脑组织一氧化氮（ＮＯ）及内皮素（ＥＴ）的影响。结果表明，脑络通可明显增加模型鼠脑缺血－再灌流损伤低灌注期ｒＣＢＦ，减轻脑水分含量（Ｐ＜０．０５），改善血和脑组织中ＮＯ及ＥＴ的异常升高。提示脑络通对脑缺血－再灌流损伤有明显的保护作用。

脑络通对大鼠局灶性脑缺血脑细胞超微结构的影响

采用大脑中动脉阻断所致大鼠脑缺血模型，观察了具有益气活血功效的脑络通对脑梗塞范围、白细胞计数、脑细胞超微结构的变化。结果发现，脑络通能显著缩小脑梗塞范围，抑制脑缺血后脑实质白细胞的浸润。在电镜下观察缺血边缘区的病理变化，脑络通组细胞器形态基本正常，而模型组则细胞器溶解，细胞变性、坏死。

脑络欣通对脑缺血再灌注损伤模型鼠神经细胞凋亡及相关基因的影响

目的 :研究脑络欣通对脑缺血再灌注半暗带神经细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法 :采有气虚血瘀局灶性脑缺血再灌注模型鼠 ,大脑中动脉阻断 2h ,再灌注 1d、3d ,用TUNEL法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和凋亡相关基因bcl 2、bax蛋白表达。结果 :与模型组比较 ,脑络欣通组缺血半暗带的凋亡细胞显著减少 ,bcl 2蛋白表达显著增加 ,bax蛋白表达显著减少。结论 :脑络欣通可能通过促进bcl 2基因的表达 ,抑制bax基因的表达对半暗带的细胞凋亡产生抑制作用。

HPLC测定脑络通胶囊中盐酸托哌酮的含量

目的建立测定脑络通胶囊中盐酸托哌酮含量的RP—HPLC法。方法采用ODS柱为固定相，甲醇-水-三乙胺（160：39：1，冰醋酸调pH7．5）为流动相，检测波长261nm。结果盐酸托哌酮在0．1—0．6mg·ml^-1范围内有良好的线性关系（r=0．9999），平均回收率为100．04％，RSD=0．90％（n=9）。结论方法操作简便，结果准确可靠。

脑络通颗粒对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化血管重构的影响

目的观察脑络通颗粒(制首乌、黄精、海藻等)对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型的影响。方法高脂饲料饲养30只ApoE-/-小鼠10个月,随机分为模型组、脑络通组(6.67 g/kg)、辛伐他汀组(6.67 mg/kg),每组10只。给药后小鼠取血清,生化法检测血脂;取主动脉,Masson染色法观察血管胶原/面积比;Wetern blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)、基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)的水平。结果脑络通能调整血脂水平,使血管胶原/面积比增加(P<0.01),明显降低MMP2、MMP9、MT1-MMP水平(P<0.05),明显升高TIMP1、TIMP2水平(P<0.05)。与辛伐他汀组相当。结论脑络通具有改善血管重构的作用,其机制可能与降低MMP2、MMP9、MT1-MMP水平,增加TIMP1、TIMP2的表达有关。

中药脑络通对大鼠脑缺血再灌注损伤血清与脑组织TNF-α、IL-1_β含量影响的分期观察

目的 :探讨中药脑络通改善脑缺血损伤的作用机制。方法 :多因素复合制作气虚血瘀证大鼠脑缺血动物模型 ,采用放免法测定血清与脑组织匀浆肿瘤坏死因子 (TNF α)和白细胞介素 1β(IL 1β)含量。结果 :(1)预防治疗组血清和脑匀浆TNF α、IL 1β 含量明显降低 ;(2 )急性治疗组脑匀浆TNF α 含量明显降低 ;(3)慢性治疗组血清TNF α 含量明显降低。结论 :(1)具有益气活血功效的中药脑络通不同时期的给药 ,可以不同程度降低大鼠脑缺血后病理性升高的TNF α、IL 1β 等指标 ;(2 )脑络通对于脑缺血损伤的全过程均有较好的治疗作用 ,尤其是对于发病前高危状态的预防性治疗。

脑络通对气虚血瘀证脑缺血大鼠作用机理研究

目的：探讨脑络通对气虚血瘀证脑缺血大鼠作用机理，为脑络通的临床应用提供实验依据。方法：采用多因素病证结合气虚血瘀脑缺血大鼠模型，观察了局部脑组织血流量（ｒＣＢＦ） 、脑水肿、血液流变性、血浆血栓素Ａ２（ＴＸＡ２） 及前列环素（ＰＧＩ２） 的变化。结果：脑络通能显著增加模型鼠ｒＣＢＦ、减轻脑水肿程度（ Ｐ＜ ０ ．０１） ；能显著改善模型鼠血流变性；能显著降低模型鼠血浆ＴＸＢ２水平、升高ＰＧＩ２ 水平（ Ｐ ＜ ０ ．０５） ，改善其平衡状态。结论：脑络通对气虚血瘀证脑缺血大鼠具有显著治疗作用，其作用机理主要与改善血液流变性，恢复ＴＸＡ２／ＰＧＩ２ 动态平衡有关。

脑络通对麻醉犬脑血流量的影响

目的研究脑络通对麻醉犬脑血流量的影响。方法将麻醉犬随机分为脑络通高、中、低剂量组和阳性对照药桂利嗪、脑血康组及空白对照组,每组6只。给药后不同时间点分别记录、比较颈内动脉血流量、血压、心电图、心率的变化。结果与空白对照组比较,脑络通高、中剂量可显著增加犬脑血流量、降低脑血管阻力,且对动脉血压、心率及心电图无明显影响。结论脑络通具有改善脑血液循环的作用。

脑络通对急性脑缺血再灌注大鼠TXB_2、PGI_2及TNF含量的影响

目的探讨中药复方制剂脑络通抗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法采用急性全脑缺血再灌注模型鼠，观察脑络通对局部脑组织血流量、脑含水量、血中血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、前列环素（ＰＧＩ２）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）含量的影响。结果脑络通可明显改善脑缺血后局部脑组织血流量（ｒＣＢＦ），脑组织含水量亦较病理组显著减少（Ｐ＜０．０５），ＴＸＢ２／ＰＧＩ２、ＴＮＦ的异常升高得到明显改善（Ｐ＜０．０１）。结论脑络通对急性脑缺血再灌注损伤有显著保护作用。

脑络通胶囊质量标准的完善

目的:完善脑络通胶囊的质量标准,以更好控制产品质量。方法:用理化方法对脑络通胶囊中维生素B_6和TLC法对丹参、黄芪、甲基橙皮苷、川芎进行鉴别;采用HPLC法测定原儿茶醛、甲基橙皮苷及维生素B_6的含量。结果:理化方法能检出维生素B_6,用TLC法均能检出丹参、黄芪、甲基橙皮苷、川芎。原儿茶醛在0.08～0.49μg范围内线性关系良好,r= 0.9999,平均回收率为101.6%,RSD为1.7%(n=6);甲基橙皮苷在0.22～2.16μg范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为99.6%,RSD为1.6%(n=6);维生素B_6在0.04～0.4μg范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为99.9%,RSD为3.1%(n=6)。结论:方法操作简单,可以用来控制脑络通胶囊的质量。

脑络通对大鼠脑缺血再灌注损伤血清与脑组织NO含量及NOS活性影响的分期观察

目的 :探讨中药脑络通改善脑缺血损伤的作用机制。方法 :多因素复合制作气虚血瘀证大鼠脑缺血动物模型 ,采用化学比色法测定血清与脑组织匀浆一氧化氮 (NO)浓度及脑组织匀浆一氧化氮合酶 (NOS)活性。结果 :预防治疗组可以显著升高缺血急性期病理性降低的血清NO含量 ,降低缺血急性期病理性升高的脑匀浆NO含量、NOS活性。结论 :具有益气活血功效的中药脑络通对于缺血性中风具有预防和治疗作用。

HPLC法测定脑络通胶囊中甲基橙皮苷的含量

目的:建立高效液相色谱法测定脑络通胶囊中甲基橙皮苷含量的检测方法。方法:Dikma C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:冰醋酸-水-甲醇-乙腈(4:66:28:2);流速:1.0ml·min-l;检测波长:283nm;柱温:40℃。结果:甲基橙皮苷在0.03～0.17μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系,回收率为98.5%,RSD为2.4%(n=6)。结论:本方法简便、快速、准确,可用于脑络通胶囊的质量控制。

脑络通激活L-arg-No通路对缺血性脑损伤保护作用

本文通过建立四动脉夹闭所致大鼠急性全脑缺血—再灌注模型，以脑含水量、局部脑组织血流量（ｒＣＢＦ）、血清和脑组织中一氧化氮（ＮＯ）含量为观察指标，初步研究了脑络通过对缺血性脑损伤保护作用的机理。结果表明：脑络通对缺血性脑损伤具有明显的保护作用，且其作用主要是通过激活Ｌ－ａｒｇ——Ｎｏ通路来实现的。

脑络通激活L-arg-NO通路对缺血性脑损伤保护作用

通过建立四动脉夹闭所致大鼠急性全脑缺血再灌注模型，以脑含水量、局部脑组织血流量、血清和脑组织中一氧化氮含量为观察指标，初步研究了脑络通对缺血性脑损伤保护作用的机理。结果表明：脑络通对缺性脑损伤具有明显的保护作用。

HPLC测定脑络通胶囊中盐酸托哌酮的含量

目的：用高效液相色谱法测定脑络通胶囊中盐酸托哌酮的含量。方法：采用ODSC18柱（5μm，4．6mm×250mm），乙腈旬．05mol／L磷酸二氢钾（30：70）（用磷酸调节pH值至3．0）为流动相，检测波长256nm，流速为1．0ml／min，柱温：室温。结果：盐酸托哌酮在0．204-1．530μg范围内线性关系良好（r=0．9996），回收率为97．96％，RSD为1．01％（n=5）。结论：该方法能准确、可靠地进行该制剂中盐酸托哌酮的含量测定，能够有效地控制该制剂的质量。

脑络通胶囊对大鼠局灶性脑缺血模型的影响

目的观察脑络通胶囊对大鼠大脑中动脉缺血模型的影响。方法通过线栓法建立大鼠大脑中动脉(MCA)局灶性脑缺血模型,动物经给药3次,观察脑络通胶囊对脑缺血大鼠的行为状态、脑缺血面积、脑组织形态学的作用。结果脑络通胶囊1.72、0.86、0.43g/kg剂量均能明显改善大鼠脑缺血后的行为状态,缩小缺血范围,降低缺血程度,使病变的脑组织得到明显地改善。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定脑络通胶囊中黄芪甲苷含量

目的采用高效液相色谱-蒸发光散射检测（ELSD—HPLC）法测定脑络通胶囊中黄芪甲苷的含量。方法采用HypersilODS2色谱柱（150mm×4．6mm，5μm），流动相为乙腈-水（30：70），流速为1．0mL／min，柱温为25℃；蒸发光散射检测器条件，漂移管温度50cc。结果黄芪甲苷质量浓度在0．0667～0．4668g／L（r=0．9999）范围内与峰面积呈良好线性关系，平均加样回收率为100．70％（n=9），RSD=1．28％。结论该方法操作简便、准确、稳定、灵敏度高，可作为该制剂的质量控制方法。