NGX6基因转染对鼻咽癌细胞基因表达谱的影响

鼻咽癌是我国南方的常见肿瘤 .NGX6是新近克隆的定位于 9p2 1 2 2 ,在鼻咽癌组织中表达下调的基因 .初步的研究结果显示 ,NGX6基因转染鼻咽癌细胞HNE1能够延缓其生长速度 ,使肿瘤细胞更多地停留在G0 G1期 .为探索NGX6基因在鼻咽癌发病机制中的作用 ,建立了高表达NGX6的鼻咽癌细胞系 .利用包含 14 0 0 0个基因的cDNA微阵列分析了NGX6基因转染对HNE1细胞基因表达谱的影响 ,发现NGX6基因的转染能够上调p2 9、APC7、NEU1、RNasek6、αE catenin和TFⅡEα等基因的表达 ;同时也下调properdinP因子、G0S2、BAZ2B、ZHX1,OS4和PBX3等基因的表达 .研究结果提示 ,NGX6基因对鼻咽癌细胞的生物学行为的影响可能与它对一些细胞周期调控因子和转录调控因子的影响相关 .作为一种高通量的分析技术 。

NGX6基因抑制高转移鼻咽癌细胞的侵袭运动能力

NGX6基因是我室利用定位候选克隆策略,在鼻咽癌的高频杂合性缺失区9p21-22克隆的新基因.前期研究结果提示,它与鼻咽癌细胞的侵袭转移密切相关.为了进一步阐明其作用的结构基础,本研究成功构建了含NGX6基因及突变体的pCMV-myc瞬时和pcDNA3.1-his-myc(-)B稳定表达载体.通过脂质体转染技术,构建了NGX6及突变体的稳定表达细胞系5-8F.用免疫荧光试验和免疫电镜观察了NGX6在5-8F细胞中的亚细胞定位主要位于胞膜、核膜以及胞浆中的膜质结构,缺失突变的功能域对其定位没有明显的影响.基质胶侵袭试验和划痕试验研究了NGX6及突变体对细胞运动的影响.NGX6能抑制高转移潜能的鼻咽癌细胞5-8F的运动和侵袭能力,缺失胞内区(CYTO)后NGX6不能抑制5-8F细胞的运动和侵袭,提示CYTO可能是其发挥作用的重要功能域.

上调BRMS1基因抑制IL-6受体表达调控鼻咽癌细胞增殖和转移的机制研究

目的:探讨上调乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1)抑制IL-6受体对鼻咽癌细胞增殖、转移的影响。方法:将人鼻咽癌SUNE-1细胞分为空白组、pcDNA3.1组和pcDNA3.1-BRMS1组,Western blot检测BRMS1、IL-6、IL-6R、PCNA、E-cadenin、Vimentin、STAT3和p-STAT3的蛋白表达。MTT法及Transwell小室检测细胞活力和迁移能力。小鼠注射pcDNA3.1-BRMS1的细胞悬液,检测4周后肿瘤体积大小及肿瘤组织PCNA、E-cadenin、Vimentin、STAT3和p-STAT3蛋白表达。结果:与空白组比较,pcDNA3.1-BRMS1组鼻咽癌细胞BRMS1和E-cadenin蛋白表达明显升高,IL-6、IL-6R、PCNA、Vimentin和p-STAT3的蛋白表达明显降低,细胞活力明显降低,细胞迁移能力明显降低(P<0.05)。从第3周起,pcDNA3.1-BRMS1组小鼠肿瘤体积与空白组肿瘤体积相比有较大变化,差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠肿瘤组织PCNA、E-cadenin、Vimentin和p-STAT3的蛋白表达明显低于空白组,E-cadenin表达高于空白组(P<0.05)。结论:BRMS1可抑制IL-6受体,下调STAT3信号,进而抑制鼻咽癌细胞的增殖和转移能力。

抑瘤基因NGX6对结肠癌血管形成的影响

目的:探讨抑瘤基因NGX6对结肠癌血管形成的影响.方法:将HT-29细胞分为3组:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组(稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞)、pcDNA3.1(+)/HT-29组(转染空白质粒的HT-29细胞)及HT-29对照组.通过鸡胚绒毛尿囊膜血管形成实验检测结肠癌细胞接种鸡胚血管形成情况.裸鼠成瘤实验观测种植瘤及其对裸鼠的影响,然后对种植瘤进行免疫组织化学实验检测其内部血管生成.RT-PCR检测NGX6基因及VEGF基因在各组细胞中的表达.结果:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组鸡胚血管形成平均数量较HT-29与pcDNA3.1(+)/HT-29组明显减少(6.2±0.2vs8.6±0.2,8.4±0.3,P<0.05);HT-29组裸鼠明显消瘦且pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组与HT-29和pcDNA3.1(+)/HT-29组种植瘤平均质量、种植瘤微血管密度明显降低(1.83±0.25gvs4.06±0.20g,4.16±0.4g;1.83±0.52vs7.36±1.12vs6.96±1.43,均P<0.05);VEGF在pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29细胞及种植瘤中较其余两组明显降低,而pcDNA3.1(+)/HT-29细胞与未转染的HT-29细胞与种植瘤中呈高表达;且HE染色切片显示HT-29组及PcDNA3.1(+)/HT-29组种植瘤血管内都有癌栓,而PcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组种植瘤内未见有癌栓形成.结论:NGX6基因能抑制结肠癌细胞HT-29血管的形成,抑瘤基因NGX6的抑癌能力部分是通过抑制血管形成来实现的.

肝细胞癌中NGX6表达与超声造影特征的关系

目的:探讨NGX6mRNA表达与肝细胞癌超声造影特征的关系。方法:45例病理证实的肝细胞癌患者术前行超声造影,应用RT-PCR检测NGX6在癌组织中的表达,分析NGX6表达和超声造影灌注时间变化以及声像特征的关系。结果:肝细胞癌NGX6mRNA表达阳性组与阴性组之间造影时间变化差异不明显;NGX6mRNA表达与肿瘤强化边缘(χ2=10.499,P<0.01,列联系数C=0.435),强化范围面积变化(χ2=5.867,P<0.05,列联系数C=0.34),癌栓强化发生(χ2=6.749,P<0.01,列联系数C=0.361)有关。与廓清模式、放射状滋养动脉、强化是否完全等特征无关。结论:NGX6低表达与肝细胞癌浸润、转移关系密切,超声造影可提供影像学依据,对于指导基因靶向治疗有重要作用。

鼻咽癌相关基因6在人结肠癌Wnt/β-catenin信号转导通路中的作用

目的:探讨鼻咽癌相关基因6(NGX6)对结肠癌Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子的影响,明确NGX6与Wnt通路之间是否存在反馈调节。方法:将pCMV-myc-NGX6真核表达载体及pCMV-myc空白载体瞬时转染结肠癌细胞系SW620,Western印迹检测转染NGX6前后Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子c-Jun,c-myc,细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达。构建LEF1缺失突变体(缺乏N末端,即β-catenin结合区域)pcDNA3.1(+)-LEF1DN瞬时转染SW620细胞,阻断Wnt通路,并通过Western印迹及T细胞转录因子4(TCF-4)荧光素酶报告质粒检测确定阻断效果。通过RT-PCR检测Wnt通路阻断后NGX6的表达。结果:NGX6基因瞬时转染结肠癌细胞系SW620后,可明显下调Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子c-Jun,c-myc,cyclin D1的表达。成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-LEF1DN,Western印迹及TCF-4荧光素酶报告质粒均证实pcDNA3.1(+)-LEF1DN能够下调Wnt通路下游靶分子c-Jun,c-myc,cyclin D1的表达及TCF/LEF的转录活性,对Wnt通路具有阻断作用。瞬时转染pcDNA3.1(+)-LEF1DN抑制Wnt通路后,NGX6在转录水平的表达有上升。结论:NGX6对Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子具有抑制作用。阻断Wnt通路对NGX6的表达有影响,Wnt通路与NGX6之间可能存在反馈调节作用。

鼻咽癌相关基因6在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨鼻咽癌相关基因6(NGX6)在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌临床病理特征之间的关系。方法应用实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测26例结肠癌组织及对应癌旁正常组织中NGX6的表达,并分析NGX6表达与结肠癌临床病理特征的关系。结果 NGX6蛋白在结肠癌组织和正常结肠组织中的阳性表达率分别为15.4%(4/26)和100.0%(26/26),结肠癌组织中NGX6蛋白的阳性表达率显著低于正常结肠组织(P<0.01)。NGX6蛋白在结肠癌组织中的表达与患者的性别、年龄、肿瘤组织类型、Ducks分期、淋巴结转移无相关性(P>0.05),而与肿瘤分化程度有关(P<0.01),分化程度越高,NGX6的表达水平越高。NGX6 mRNA在结肠癌组织和正常结肠组织中的表达分别为1.983±0.479和2.741±1.245,NGX6 mRNA在结肠癌组织中的表达显著低于正常结肠组织(P<0.05)。结论 NGX6与结肠癌的发生发展有关,NGX6可以作为评估结肠癌进展程度的一种指标。

miR-153-3p靶向结合BCL2基因调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的实验研究

目的探讨miR-153-3p调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的作用。方法利用生物信息学软件对miR-153-3p的候选靶基因进行预测。实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测miR-153-3p对细胞内mRNA和蛋白表达的影响。用密理博MUSETM细胞检测仪对细胞周期和细胞凋亡情况进行检测。用CCK8法和克隆技术形成实验检测细胞增殖能力。结果生物信息学预测结果显示,miR-153-3p与BCL2分子之间存在一个高可信度的结合区。miR-153-3p mimic能上调miR-153-3p的表达,降低BCL2蛋白的表达。与对照组相比,过表达miR-153-3p的6-10B细胞的凋亡明显增加,增殖能力受到显著抑制。结论miR-153-3p通过下调BCL2的表达,能够促进鼻咽癌细胞凋亡,抑制其增殖。

鼻咽癌中Axl及其配体GAS6的表达研究

目的探讨Axl及其配体GAS6在鼻咽癌中的表达及其与鼻咽癌增生、浸润和转移的关系。方法 26例鼻咽癌患者的鼻咽癌组织(鼻咽癌组)及相应癌旁组织(癌旁组)、10例可疑鼻咽部病变患者的正常鼻咽部黏膜组织(对照组),3组采用RT-PCR方法检测Axl及其配体GAS6mRNA表达情况。结果鼻咽癌组Axl mRNA和GAS6mRNA均呈高表达,癌旁组和对照组均呈低表达;鼻咽癌组Axl mRNA和GAS6 mRNA平均相对吸光度值(0.882 3±0.037 2、0.850 4±0.026 3)均高于癌旁组(0.231 9±0.048 2、0.193 6±0.024 8)和对照组(0.237 3±0.039 7、0.187 5±0.042 6),差异有统计学意义(P<0.05),癌旁组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);鼻咽癌组无淋巴结转移者Axl mRNA和GAS6mRNA平均相对吸光度值分别为0.863 9±0.051 3、0.834 7±0.058 2,有淋巴结转移者分别为0.900 1±0.057 4、0.891 7±0.018 1,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Axl及其配体GAS6与鼻咽癌的生长、浸润及转移有密切关系。

NGX6在肿瘤中的表达及作用

NGX6基因是近年来发现的肿瘤抑制基因，它通过抑制肿瘤的血管生成及淋巴管生成等作用机制来抑制肿瘤的侵袭及转移。NGX6基因的表达与鼻咽癌、肺癌、大肠癌等多种肿瘤的侵袭及转移存在负相关关系。因此NGX6水平的测定对于预测肿瘤患者的预后有着重要的意义。