米扎格列净通过抑制钠-葡萄糖共转运体1的功能抑制常染色体显性多囊肾细胞增殖和纤维化

目的探究钠-葡萄糖共转运体1(SGLT1)抑制剂米扎格列净(MIZA)在常染色体显性多囊肾病(ADPKD)中的作用。方法用蛋白质印迹法、qPCR、免疫荧光染色测定PKD1^(-/-)小鼠和PKD1^(+/+)小鼠肾脏组织、人肾癌旁组织和人ADPKD组织中SGLT1的表达和分布。用MIZA处理囊肿衬里上皮细胞OX161和肾小管上皮细胞UCL93,37℃孵育24、48和72 h后通过MTT实验和集落形成实验观察细胞增殖情况。以100μmol/L MIZA处理OX161细胞48 h后,通过qPCR测定细胞中α1-Ⅰ型胶原蛋白、α1-Ⅲ型胶原蛋白和纤连蛋白1的mRNA表达量。用犬肾细胞MDCK 3D囊肿形成实验验证MIZA对囊肿形成的作用。通过mRNA-seq数据分析筛选UCL93细胞和OX161细胞、OX161细胞和100μmol/L MIZA处理48 h后的OX161细胞的差异表达基因,利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行通路富集分析。结果SGLT1在ADPKD患者和PKD1^(-/-)小鼠多囊肾组织中的表达水平较正常肾脏组织升高(P<0.05,P<0.01),免疫荧光染色发现SGLT1主要表达在囊肿衬里上皮细胞。在体外实验中,MIZA呈浓度和时间依赖性地抑制多囊肾细胞的增殖和纤维化,3D形成实验表明MIZA抑制了囊肿的形成。mRNA-seq数据分析和KEGG富集分析结果显示,OX161细胞和100μmol/L MIZA处理48 h的OX161细胞的差异表达基因主要富集在PI3K-Akt、MAPK等信号通路,与OX161细胞和UCL93细胞的差异表达基因富集通路相同。结论SGLT1抑制剂MIZA可能通过PI3K-Akt、MAPK等通路抑制多囊肾细胞的增殖和纤维化,延缓多囊肾的生长,是ADPKD的一个潜在治疗靶点。

木聚糖酶对尼罗罗非鱼钠葡萄糖共转运载体(SGLT_1)mRNA表达的影响

以尼罗罗非鱼[体重(106.16±16.77)g]为实验对象,小麦基础饲料为对照,小麦基础饲料中分别添加不同水平的木聚糖酶(0.05%、0.10%、0.15%)作为试验饲料。每个处理设5个重复,每个重复放养40尾雄性尼罗罗非鱼,旨在研究木聚糖酶对尼罗罗非鱼前肠和中肠钠葡萄糖共转运载体(SGLT_1)mRNA表达的影响,从分子水平揭示木聚糖酶促进尼罗罗非鱼生长的机理。饱食投喂,饲养75 d后,每饲料组分别取10尾鱼,尾静脉取血制备血清,测定血糖含量;采用离心柱型总RNA提取试剂金提取前肠和中肠总RNA,通过RT-PCR对前肠和中肠SGLT_1mRNA的表达进行相对定量。结果表明,0.05%组、0.10%组和0.15%组前肠SGLT_1 mRNA的相对表达量分别比对照组提高19.28%(P<0.05)、42.17%(P<0.01)和16.87% (P<0.05);对照组尼罗罗非鱼在摄食后2 h血糖仅为5.56 mmol·L^(-1),0.10%组极显著高于对照组(P<0.01);0.05%组和0.10%组的增重率较对照组分别提高8.29%、17.45%(P<0.01),0.15%组的增重率与对照组相比没有统计学差异(P>0.05)。研究结果表明,在小麦基础饲料中适量添加木聚糖酶能显著上调前肠SGLT_1mRNA的表达,促进葡萄糖吸收,从而提高尼罗罗非鱼的生长速度。

鲤肠道sglt1基因的表达与抗体制备

钠/葡萄糖共转运载体1(sodium/glucose cotransporter 1,Sglt1)是协助葡萄糖吸收的主要蛋白。实验首先采用RT-PCR获取sglt1基因全长,克隆至PGME-T载体进行序列及免疫原性分析,选择长度为92个氨基酸(544～637)的多肽作为目的片段(sglt1-P)),扩增sglt1-P,引入双酶切位点EcoRⅠ和HindⅢ后,连接至pET-32a(+)上,构建表达载体pET-32a(+)-sglt1-P,转化至E.coli Rosetta中,获得重组基因工程菌,通过IPTG诱导表达,获得目标多肽,并以此为抗原制备Sglt1特异性抗体。SDS-PAGE电泳分析表明,目标多肽分子量约为30 ku。采用耳缘静脉结合皮下注射,免疫新西兰长耳兔,免疫总时长为38 d。制备了鲤Sglt1抗体,ELISA测得效价为1∶105;免疫组化结果表明,抗体具有较高亲和力和特异性,可以应用于鲤Sglt1的表达定位研究。该抗体的获得为鲤肠道Sglt1表达及转运活性的系统研究奠定了基础,同时,获取的Sglt1抗体亦可用于其它鱼类Sglt1转运蛋白表达定位和定量研究。

SGLT2抑制剂联合GLP-1受体激动剂治疗2型糖尿病合并心血管疾病的研究进展

目前糖尿病患病率越来越高,且相当大一部分合并心血管疾病,SGLT2抑制药及GLP-1受体激动药可从降糖、减重、降压、保护肾功等多个角度间接及直接地减少糖尿病患者的心血管不良事件和心血管病病死率。

2018 ADA/EASD 2型糖尿病高血糖管理共识声明解读——新策略、新理念、新挑战

美国糖尿病协会(American Diabetes Association,ADA)和欧洲糖尿病研究协会(European Association for the Study of Diabetes,EASD)刚刚发布了更新版的《2018年2型糖尿病高血糖管理共识声明》(以下简称"新共识"),概述了2型糖尿病高血糖的管理,更新了以患者为中心的决策和支持,提出在制订降糖方案时应综合考虑2型糖尿病患者心血管与慢性肾脏病等合并症的新理念。同时,新共识也提出了关于钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂与胰高血糖素样肽-1受体激动剂的新挑战。

GLP-1RA联合SGLT2i治疗超重/肥胖T2DM患者效果及安全性的临床观察性研究

目的:观察联合使用胰高血糖素样肽-1受体激动剂(glucagons-like peptide-1 receptor agonist,GLP-1RA)与钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂(sodium glucose cotransporter 2 inhibitor,SGLT2i)治疗超重/肥胖2型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)的效果及安全性。方法:将T2DM合并超重/肥胖患者随机分为GLP-1RA组(A组,n=39)、SGLT2i组(B组,n=37)、GLP-1RA+SGLT2i组(C组,n=38),对照组(D组,n=36),观察12周。收集患者治疗前后的体质量、腰围、血压、血糖谱、空腹胰岛素、血脂。计算体质量指数(body mass index,BMI)、稳态模型的胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(homeostasis model assessment of beta cell function index,HOMA-β)。比较各组组内及组间临床疗效及安全性。结果:4组糖化血红蛋白、空腹血糖和餐后2 h血糖较治疗前均显著下降(均P<0.001),C组降幅最大。A、B和C组的体质量、腰围和BMI均显著下降(均P<0.001),下降幅度从高到低依次为C组、A组、B组(P<0.01)。治疗后A、B和C组的HOMA-IR均显著改善(P<0.01)。治疗后,B和C组患者收缩压降低(均P<0.05),A、C组的高密度脂蛋白胆固醇升高(均P<0.05),C组低密度脂蛋白胆固醇下降(P<0.05)。不良反应:A、C组以胃肠道的症状为主,B组以泌尿道感染多见。结论:GLP-1RA与SGLT2i联合治疗在降糖、减重、减少胰岛素抵抗、改善心血管风险因素方面有优势。GLP-1RA主要不良反应为胃肠道反应,SGLT2i主要为尿路感染。

钠-葡萄糖共转运蛋白1在心血管疾病中作用的研究进展

钠-葡萄糖共转运蛋白1(SGLT-1)是钠-葡萄糖共转运家族的一员,主要参与机体葡萄糖的重吸收。近年来,多项研究发现,SGLT-1蛋白可在心脏中表达,且表达水平与心血管疾病的发生发展密切相关,抑制SGLT-1过度表达可能对心血管疾病有保护作用。文章主要就SGLT-1在病理性心肌肥厚、缺血性心脏病、糖尿病心肌病、心律失常和心力衰竭等疾病过程中的作用进行综述,并探讨SGLT-1作为心血管疾病新的治疗靶点的潜力。

钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂对沉默信息调节因子1信号通路的调控作用及其在糖尿病肾病中发挥肾脏保护作用的机制研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病主要并发症之一,是导致终末期肾病的主要原因。钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂是一种新型降糖药物,与其他降糖药物相比,SGLT2抑制剂的降糖优势并不明显,但其肾脏保护作用却很突出。SGLT2抑制剂可以激活沉默信息调节因子1(SIRT1)信号通路促进肾脏细胞自噬,降低氧化应激,改善肾脏缺氧从而保护肾脏,延缓糖尿病肾病进展。SGLT2抑制剂发挥肾脏保护作用的机制可能与其对SIRT1信号通路的影响有关。本文对SGLT2抑制剂通过调控SIRT1发挥肾脏保护作用的研究进展进行综述,旨在总结SGLT2抑制剂对糖尿病肾脏保护作用的机制。

达格列净对动脉粥样硬化的影响以及与钠氢交换体1相关机制

目的 探讨达格列净对载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)形成的影响以及与钠氢交换体1(NHE1)相关的机制。方法 6周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠24只,随机分为普通饮食组、高脂饮食组、高脂饮食+达格列净组(10 mg/(kg·d))以及高脂饮食+格列美脲组(0.5 mg/(kg·d))。8周后,HE染色检测小鼠主动脉的AS斑块情况,定量PCR及免疫印迹法检测主动脉钠葡萄糖协同转运蛋白2(SGTL2)表达,免疫组化法检测主动脉NHE1表达。进而给予达格列净(10μmol/L)、阿米洛利(20μmol/L)以及脂多糖(100 ng/mL)干预小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞处理24 h,免疫印迹法检测NHE1蛋白表达以及SNARF-1/AM荧光法检测NH_(4)Cl诱导pH值回复率(NHE1活性);酶联免疫吸附法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10分泌情况。结果 高脂饮食+达格列净组主动脉的AS斑块面积显著低于高脂饮食组(P<0.05);各组主动脉斑块内均极低表达SGLT2(P<0.05);高脂饮食+达格列净组内斑块NHE1表达较高脂饮食组下降(P<0.05)。LPS+达格列净组RAW.7细胞的NHE1蛋白水平明显低于LPS组(P<0.05);SNARF-1荧光法提示达格列净处理后细胞内pH值降低(P<0.05),细胞NHE1活性显著降低(P<0.05);与LPS组相比,LPS+达格列净组细胞上清TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著减少(P<0.05),IL-10含量显著增加(P<0.05)。结论 达格列净通过抑制NHE1表达及其活性抑制AS斑块发展及细胞因子释放。

胰高糖素样肽-1激动剂联合钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂对2型糖尿病的影响

近年来,全球糖尿病患病率逐年增加,其中2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)占糖尿病总患病人数的90%~95%。胰高糖素样肽-1(glucagon-like peptide 1,GLP-1)激动剂联合钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂(sodium-glucose co-transporter 2 inhibitor,SGLT2)是治疗T2DM的新型降糖药物。本文讨论在给予规范的生活方式(饮食和运动)干预下,GLP-1激动剂联合SGLT2抑制剂对T2DM的安全性和有效性。

GLP-1受体激动剂与SGLT-2抑制剂在2型糖尿病中安全性的研究进展

胰高糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)受体激动剂、钠-葡萄糖共转运蛋白2(sodium glucose cotransporter 2,SGLT2)抑制剂作为2型糖尿病降糖治疗的新药,目前已广泛用于临床。本文总结了这两类药物的安全性,即对低血糖与糖尿病酮症酸中毒的影响,以及对各个系统,即心血管系统、消化系统、泌尿生殖系统、骨骼系统及甲状腺等可能产生的影响,可在临床中指导安全用药,最大限度地发挥这两类药物在2型糖尿病治疗中的优势。

钠-葡萄糖共转运蛋白-2抑制剂联合胰高血糖素样肽-1受体激动剂治疗超重/肥胖2型糖尿病患者的研究进展

钠-葡萄糖共转运蛋白-2抑制剂(SGLT-2i)和胰高血糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)是近年来降糖药物的热点研究方向。随着临床的广泛应用,SGLT2抑制剂及GLP-1受体激动剂已不限于用来治疗2型糖尿病(T2DM)的患者血糖,还能从减重、降脂、保护心脏等多个方面间接或直接地改善超重/肥胖2型糖尿病患者的血脂、体重及降低心血管事件发生风险。然而,由于超重/肥胖2型糖尿病的发病机制尚未明确,目前临床关于超重/肥胖2型糖尿病缺少彻底有效的治疗方案,主要为使用传统的不增加体重的降糖药,不能达到良好的治疗效果。因此,本文总结了SGLT2抑制剂及GLP-1受体激动剂降糖减重、调脂、保护心脏的机制及两者联合使用对超重/肥胖2型糖尿病患者的作用效果及安全性,为临床提供可靠的用药参考。

改善2型糖尿病患者的不良心血管结局:GLP-1RA与SGLT-2i可联合应用吗?

心血管疾病是糖尿病患者死亡最常见的原因,预防心血管并发症是糖尿病患者治疗的一个关键目标,现有证据表明,钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂和胰高血糖素样肽-1受体激动剂是两类可改善2型糖尿病患者的不良心血管结局的降糖药物,联合应用是否可在预防糖尿病患者心血管并发症上取得更大获益,现就其最新进展进行总结概括。

缺血缺氧中心区星形胶质细胞死亡方式与钠钾ATP酶活性及NKCC1表达的关系

目的通过改良的糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型,探讨缺血缺氧中心区星形胶质细胞损伤后的细胞死亡途径与细胞膜损伤中钠钾ATP酶(Na+-K+-ATPase)活性及钠-钾-氯共转运体1(Na+-K+-2Cl--cotransporter 1,NKCC1)表达的关系。方法取出生24h内的SD大鼠海马星形胶质细胞进行体外培养,鉴定其纯度,应用改良的OGD模型,将星形胶质细胞进行OGD(0、1、2、3、4、6h)处理后检测不同时间点细胞的胀亡率、凋亡率、ATP含量、钠钾ATP酶的活性及NKCC1的表达水平。结果星形胶质细胞存活率随OGD时间的延长而降低,OGD 3h后胀亡细胞率超过凋亡细胞率。ATP含量和钠钾ATP酶活性随OGD时间的延长而下降,NKCC1的表达随着OGD时间的延长先增加后减少,在OGD 3h后明显减少。结论缺血缺氧中心区星形胶质细胞死亡在OGD 3h内以凋亡为主,OGD3h后胀亡是细胞死亡的主要方式,这种转化或许与Na+,K+-ATPase活性及NKCC1表达的激活有关。

索格列净治疗慢性心力衰竭的研究进展

心力衰竭是一种严重的慢性进展性心脏疾病,有较高的发病率及死亡率。索格列净是一种新型的钠葡萄糖共转运蛋白-1/2抑制剂,可以同时抑制消化道及肾小管对葡萄糖的吸收。多项研究证实索格列净不仅在降低心力衰竭患者心血管死亡率及再住院率方面与钠葡萄糖共转运蛋白-2抑制剂同样有效,同时也可以降低心力衰竭患者卒中及心肌梗死的发生率。本文综述索格列净在治疗心力衰竭中的作用机制及研究进展,以期在未来心衰患者的临床治疗中提供帮助。

恩格列净对糖尿病小鼠肾脏保护作用的机制研究

目的探究恩格列净对肾脏保护作用的新机制。方法将8周龄雄性SPF级C57/BL6J小鼠随机分为两组,正常对照(NC)组(n=7)和高脂(HFD)组(n=23)。NC组常规饲料喂养,高脂组60%HFD喂养。HFD小鼠喂养12周后,腹腔注射0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液稀释的链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg);NC组小鼠,腹腔注射等容积的0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液。将造模成功的小鼠随机分为糖尿病(DM)组(n=8)、DM+利格列汀干预(DM+Lina)组(10 mg/kg,n=7)、DM+恩格列净干预(DM+Empa)组(25 mg/kg,n=8)。药物干预12周后留取血尿标本,生化仪检测小鼠肝肾功能、ELISA法检测血β-羟丁酸(β-HB)及生化试剂盒检测尿微量白蛋白(MAU)、视黄醇结合蛋白(RBP)、β2微球蛋白(β2-MG)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)等尿生化指标,留取肾脏组织,观察各组小鼠肾脏病理结构变化,并应用Western blot检测相关蛋白的表达。结果DM+Empa组的随机血糖、体重、总胆固醇、低密度脂蛋白水平、游离脂肪酸、肌酐低于DM组,DM+Empa组的血β-HB高于NC组、DM组及DM+Lina组,差异有统计学意义(P<0.05)。DM+Empa组的RBP、NAG、MAU低于DM组,差异有统计学意义(P<0.05),同时DM+Empa组的尿β-HB与NC组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病小鼠肾脏钠-偶联单羧酸转运蛋白1(SMCT1)低表达,恩格列净干预后可上调其表达水平;糖尿病小鼠存在肾脏超微结构损伤,恩格列净干预后可改善其病理损伤。结论恩格列净对肾脏保护作用之一可能是通过增加肾脏SMCT1的表达,SMCT1可能是治疗糖尿病肾脏病的一个新靶点。

桃胶多糖对Caco-2细胞模型吸收葡萄糖的影响

目的:通过Caco-2体外细胞模型研究桃胶多糖影响葡萄糖吸收的机制。方法:以培养的Caco-2单层细胞为葡萄糖吸收模型,观察在桃胶多糖影响下,葡萄糖吸收量随时间的变化关系,从而推断桃胶多糖对葡萄糖跨膜转运过程的影响。结果:一定浓度桃胶多糖作用下,不同浓度葡萄糖的吸收量与对照组相比,均有显著差异(P<0.05),表明葡萄糖吸收受到桃胶多糖的抑制,且葡萄糖浓度越低,桃胶多糖抑制葡萄糖吸收的效果越显著(P<0.05);不同浓度的桃胶多糖作用下,相同浓度葡萄糖的吸收量与对照组相比,均有显著差异(P<0.05),且桃胶多糖浓度越高,抑制葡萄糖吸收的效果越好(P<0.05)。结论:桃胶多糖能够竞争性抑制葡萄糖的吸收,其是否可能通过影响或者占据肠道刷状缘侧钠葡萄糖共转运载体1(SGLT-1)上葡萄糖的吸收位点达到降血糖目的,其机制尚有待进一步研究。

新型降糖药在2型糖尿病合并慢性肾脏病患者中的临床应用及卫生经济学评价

糖尿病是慢性肾脏病(CKD)的首要病因,血糖控制不佳会加速CKD进展至终末期肾脏病(ESKD)。慢性肾脏病也是糖尿病的重要合并症,肾功能损伤进一步增加糖尿病患者心血管事件的发生风险,最终带来繁重的社会经济负担。一系列新型降糖药的涌现有望为糖尿病,尤其是2型糖尿病(T2DM)合并CKD患者带来心血管和肾脏保护作用。本文结合改善全球肾脏病预后组织(KDIGO)于2020年发布的《慢性肾脏病患者的糖尿病临床管理实践指南》对新型降糖药的临床应用和卫生经济学价值做一述评,以期指导临床个体化用药提供科学依据。

非反刍动物小肠内葡萄糖的吸收与调控

营养性碳水化合物被非反刍动物摄入后,在消化道内逐渐降解成葡萄糖等单糖以及少量的双糖。小部分葡萄糖在门静脉回流组织(PDV)中进行供能代谢,大部分被小肠绒毛吸收而进入门静脉。葡萄糖吸收是由小肠黏膜上的Na+依赖型葡萄糖协同转运1(SGLT1)、Na+/K+ATP酶、葡萄糖转运子2(GLUT2)以及与吸收有关的调控因子共同完成。

改善心血管和肾脏结局的新型抗高血糖药物临床应用中国专家建议

动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)和(或)慢性肾脏疾病(CKD)不但是2型糖尿病(T2DM)常见合并疾病,也是T2DM患者致残和致死的首要原因。近年来一系列临床研究证据表明,新型抗高血糖药物胰高糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1 RA)和钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(SGLT2i)类药物能显著改善心血管和肾脏结局的临床获益,且安全性良好。为促使T2DM的治疗模式从单纯控制血糖转移到改善心血管和肾脏临床结局,中国心血管病学、内分泌学、肾脏病学和神经病学专家组成的专家组梳理了GLP-1 RA或SGLT2i的心血管保护的临床证据、可能机制和常见不良反应,提出了对这两类药物在临床实践中的合理定位、应用建议和注意事项,鼓励临床医师在临床实践中对T2DM患者及早启动并长期维持能够改善心血管和肾脏结局的新型抗高血糖药物治疗。