新疆地区人群非综合征型唇腭裂与外周血FOXN3-SIN3A复合物表达量相关性研究

目的研究FOXN3-SIN3A复合物表达量与新疆地区人群非综合征型唇腭裂(NSOC)的相关性。方法本研究选取就诊于新疆维吾尔自治区人民医院的NSOC患者60例为病例组,其中唇裂伴或不伴腭裂(NSCL/P)30例,单纯腭裂(CPO)30例,对照组为30例健康儿童。采用高通量二代测序技术及定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组外周血中FOXN3、SIN3A和NEAT1的表达量,分析受试者工作特征(ROC)曲线和曲线下面积(AUC),采用卡方检验对NSOC和对照组FOXN3、SIN3A和NEAT1的表达量进行比较。结果NSCL/P组和CPO组患者FOXN3、SIN3A、NEAT1基因表达较对照组均上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。NSCL/P组FOXN3、SIN3A、NEAT1的基因序列AUC分别为0.933[95%CI=(0.864,1.000)]、0.822[95%CI=(0.713,0.932)]、1.000[95%CI=(1.000,1.000)];CPO组FOXN3、SIN3A、NEAT1的基因序列AUC分别为0.891[95%CI=(0.806,0.976)]、0.688[95%CI=(0.552,0.824)]、1.000[95%CI=(1.000,1.000)]。结论外周血FOXN3、SIN3A、NEAT1基因表达上升与新疆地区NSOC的发生存在相关性,可以对将来进一步研究FOXN3-SIN3A复合物作为生物标记物,从而对NSOC的早期筛查、患病预测和早期预防提供理论依据。

长链非编码RNA核富集转录体1促进喉鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)NEAT1对喉鳞状细胞癌(LSCC)细胞迁移和侵袭的影响,并进一步分析miR-429/锌指E-盒结合同源异形盒1(ZEB1)轴在其中发挥的作用。方法慢病毒转染建立稳定敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞,通过RT-qPCR检测细胞lncRNA NEAT1表达以验证转染效率,通过Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,通过Western blot检测细胞上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白N-cadherin、Vimentin、Slug和Snail表达。通过生物信息学分析miR-429与lncRNA NEAT1和ZEB1 mRNA间的潜在结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-429与lncRNA NEAT1以及miR-429与ZEB1 mRNA结合。将miR-429抑制剂转染敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞,通过Western blot检测细胞ZEB1表达。进一步检查敲减ZEB1对抑制miR-429的敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞迁移、侵袭和EMT的影响。结果敲减lncRNA NEAT1降低LSCC细胞lncRNA NEAT1表达,抑制细胞迁移和侵袭并下调细胞N-cadherin、Vimentin、Slug和Snail表达。miR-429与lncRNA NEAT1和ZEB1 mRNA间存在潜在结合位点,且miR-429与lncRNA NEAT1以及miR-429与ZEB1 mRNA结合。抑制miR-429逆转了敲减lncRNA NEAT1对LSCC细胞ZEB1表达的抑制作用。此外,敲减ZEB1逆转了抑制miR-429对敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞迁移和侵袭的促进作用及EMT相关蛋白N-cadherin、Vimentin、Slug和Snail表达的上调作用。结论lncRNA NEAT1促进LSCC细胞迁移和侵袭,其机制可能与海绵化miR-429上调ZEB1表达促进LSCC细胞EMT有关。

狗脊多糖调控lncRNA NEAT1延缓椎间盘终板软骨细胞衰老的作用研究

目的:探讨狗脊多糖通过调节lncRNA NEAT1延缓椎间盘终板软骨细胞衰老的作用机制。方法:将15只C57BL/6小鼠的椎间盘终板软骨细胞进行体外培养;经10 ng·mL-1白细胞介素-1β(IL-1β)干预24 h诱导软骨细胞;将软骨细胞随机分为空白对照组、模型对照组(10 ng·mL-1IL-1β)和狗脊多糖各剂量组(100,200,400μg·mL-1);Real-time PCR及Western blot分别检测狗脊多糖对IL-1β诱导软骨细胞lncRNA NEAT1、衰老相关通路p53-p21中p53、p21水平及衰老相关分泌表型的基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、CollagenⅡ、Caspase-3蛋白表达情况;流式细胞术检测各组软骨细胞凋亡率情况。结果:Real-time PCR结果显示,经IL-1β诱导的椎间盘终板软骨细胞中lncRNA NEAT1、p21、p53水平显著增高;与模型对照组比较,狗脊多糖各剂量组lncRNA NEAT1、p21、p53水平显著降低;与空白对照组比较,经IL-1β诱导的椎间盘终板软骨细胞中MMP-13、Caspase-3蛋白表达含量显著增高,CollagenⅡ蛋白表达降低;经狗脊多糖干预后,可显著改善MMP-13、CollagenⅡ、Caspase-3蛋白表达;此外,与模型对照组比较,狗脊多糖各剂量组椎间盘终板软骨细胞凋亡率呈现下降趋势。结论:狗脊多糖通过调控lncRNA NEAT1影响p53、p21、MMP-13、CollagenⅡ、Caspase-3表达,降低软骨细胞凋亡率,进而延缓椎间盘终板软骨细胞衰老。

LncRNA NEAT1抑制细胞焦亡促进人骨髓间充质干细胞的成骨分化

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核旁斑组装转录本1(NEAT1)通过调节细胞焦亡调控人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的作用。方法培养hBMSCs 7 d诱导细胞成骨分化,并分为对照组(常规培养)、成骨分化组(成骨分化诱导)、pcD-NEAT1组(转染NEAT1过表达质粒)、pcD-null组(转染NEAT1过表达质粒阴性对照)、成骨分化+CML组[成骨分化诱导联合NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性小体激活剂(Nε)-羧甲基赖氨酸(CML)处理]、成骨分化+CML+pcD-NEAT1组(成骨分化诱导联合pcD-NEAT1与CML处理)。经茜素红染色检测细胞矿化程度;碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒检测ALP活性;CCK-8检测各组细胞存活率,高倍镜下观察细胞形态变化。TUNEL实验检测细胞凋亡率。qRT-PCR检测NEAT1的表达。Western blot检测IL-1β、IL-18、NLRP3、cleaved-caspase 1(cleaved-CASP1)、gasdermin D、Runt-相关转录因子2(RUNX2)、ALP、骨桥蛋白(OPN)的表达。结果与对照组比较,成骨分化组细胞的矿化程度增加,ALP活性升高(P<0.05),NEAT1和RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均上调(P<0.05)。与pcD-null组比较,pcD-NEAT1组细胞的矿化程度增加,ALP活性升高(P<0.05),NEAT1和RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均上调(P<0.05)。与成骨分化组比较,成骨分化+CML组细胞矿化程度减轻,ALP活性降低(P<0.05),细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),细胞膜出现破裂,细胞膨大变形,NLRP3和IL-1β、IL-18、cleaved-CASP1、gasdermin D蛋白表达均显著上调(P<0.05),而RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均显著下调(P<0.05)。与成骨分化+CML组比较,成骨分化+CML+pcD-NEAT1组细胞矿化程度增加,ALP活性升高(P<0.05),RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均显著上调(P<0.05),细胞存活率增加(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞膜较完整且细胞形态正常,NLRP3和IL-1β、IL-18、cleaved-CASP1、gasdermin D蛋白表达均显著下调(P<0.05)。结论NEAT1过表达通过抑制NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡促进hBMSCs的成骨分化。

lncRNA NEAT1通过抑制hsa-miR-450b-5p促进胃癌细胞中EZH2的表达与细胞的增殖和迁移能力

目的:筛选果蝇Zeste基因增强子同源物2(EZH2)基因上游miRNA及lncRNA,分析其在胃癌细胞中的表达并验证其间的靶向关系,探讨它们对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法:通过ENCORI、miRDB和Target Scan数据库查询并分析、筛选EZH2上游miRNA(has-miR-450b-5p),ENCORI数据库和DAINA数据库筛选has-miR-450b-5p上游lncRNA(lncRNA NEAT1),预测hsa-miR-450b-5p、lncRNA NEAT1与EZH2之间的结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证hsa-miR-450b-5p与lncRNA NEAT1的结合关系。采用q PCR和WB法检测lncRNA NEAT1和EZH2在正常胃黏膜细胞(GES-1)与胃癌细胞(MGC-803、SGC-7901和MKN-28)中的表达量。按转染物的不同将MGC-803和SGC-7901细胞分为hsa-miR-450b-5p-mimic组、mimicNC组、si-NEAT1组和si-NC组,转染36~48 h后qPCR法验证过表达及敲减效果;通过qPCR、WB法检测观察过表达hsa-miR-450b-5p对细胞中lncRNANEAT1和EZH2m RNA、蛋白表达的影响,以及敲减lncRNANEAT1对hsa-miR-450b-5p和EZH2mRNA表达的影响;CCK-8法、划痕愈合实验和流式细胞术分别检测敲减EZH2或敲减lncRNA NEAT1对细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响。结果:生物信息学分析筛选获得EZH2上游miRNA和lncRNA为has-miR-450b-5p和lncRNA NEAT1,双荧光素酶报告基因实验验证了两者间存在靶向关系。lncRNA NEAT1和EZH2 mRNA、蛋白在胃癌细胞中均呈高表达(均P<0.05)。与mimic-NC组相比,hsa-miR-450b-5p-mimic组MGC-803、SGC-7901细胞中miR-450b-5p水平均显著升高,而EZH2 mRNA、蛋白和lncRNA NEAT1的表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01);与si-NC组相比,si-NEAT1组MGC-803、SGC-7901细胞中lncRNA NEAT1和EZH2 mRNA的表达量均显著降低(均P<0.01),SGC-7901细胞中hsa-miR-450b-5p表达量显著升高(P<0.05)。敲减EZH2或敲减lncRNA NEAT1后,MGC-803、SGC-7901细胞的增殖、迁移能力均显著降低(均P<0.01)。结论:lncRNA NEAT1和EZH2在胃癌细胞中均呈高表达,lncRNA NEAT1可通过hsa-miR-450b-5p促进EZH2的表达并提高胃癌MGC-803和SGC-7901细胞的增殖和迁移能力。

LncRNA NEAT1靶向调控miR-582-5p/COL5A1信号通路对肺癌A549细胞生物学功能的影响

目的:探讨长链非编码RNA富含核的丰富转录物1(LncRNA NEAT1)调控miR-582-5p/COL5A1信号通路对肺癌A549细胞生物学功能的影响。方法:体外培养人肺癌A549细胞并随机分为对照组、si-NEAT1组(转染LncRNA NEAT1 siRNA质粒)、miR-582-5p mimics组(转染miR-582-5p mimics)、si-NC+miR-582-5p-NC组(共转染LncRNA NEAT1 siRNA阴性对照与miR-582-5p阴性对照)、si-NEAT1+miR-582-5p inhibitor组(共转染LncRNA NEAT1 siRNA质粒与miR-582-5p inhibitor),分组转染后以实时荧光定量PCR实验检测细胞LncRNA NEAT1、miR-582-5p、COL5A1表达;构建其裸鼠移植瘤模型,测量裸鼠移植瘤质量、体积。以CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖;以免疫印迹实验检测细胞及裸鼠移植瘤组织增殖相关蛋白(cyclin D1、PCNA)表达;以Transwell实验检测细胞迁移及侵袭;以免疫印迹实验检测细胞上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(Vimentin、MMP2、E-cadherin)表达;以双荧光素酶报告基因实验检测细胞中LncRNA NEAT1对miR-582-5p、miR-582-5p对COL5A1的靶向调控作用。结果:与对照组相比,si-NEAT1组、miR-582-5p mimics组细胞COL5A1 mRNA表达、细胞活力和克隆形成率、裸鼠移植瘤质量和体积、细胞及裸鼠移植瘤组织cyclin D1、PCNA蛋白表达、细胞迁移和侵袭数目、细胞Vimentin和MMP2蛋白表达均降低(P<0.05),细胞miR-582-5p表达、E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05);si-NC+miR-582-5p-NC组各指标均无显著差异(P>0.05)。与si-NEAT1组相比,si-NEAT1+miR-582-5p inhibitor组细胞COL5A1 mRNA表达、细胞活力和克隆形成率、裸鼠移植瘤质量和体积、细胞及裸鼠移植瘤组织cyclin D1、PCNA蛋白表达、细胞迁移和侵袭数目、细胞Vimentin和MMP2蛋白表达均升高(P<0.05),细胞miR-582-5p表达、E-cadherin蛋白表达均降低(P<0.05)。LncRNA NEAT1可靶向下调A549细胞miR-582-5p,且miR-582-5p可靶向下调A549细胞COL5A1(P<0.05)。结论:敲低LncRNA NEAT1可通过上调miR-582-5p表达而降低COL5A1表达,从而抑制肺癌A549细胞的体内外生长,并可减弱其侵袭与迁移活性。

长链非编码RNANEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的影响

目的:探讨LncRNA NEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的调控及对HaCaT细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用PCR、Western印迹法检测HaCat细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中LncRNANEAT1、miR-485-5p及STAT3 mRNA和蛋白表达情况。荧光原位杂交技术(FISH)和双荧光素酶报告基因检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p和STAT3之间的靶向调控关系。再通过RNA干扰技术分别沉默HaCat细胞中LncRNANEAT1、STAT3表达,以及转染miR-485-5p模拟剂(mimic)和抑制剂(inhibitor)分别上、下调miR-485-5p,然后应用PCR、Western Blot、流式细胞术、CCK8等实验技术分别检测LncRNANEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。结果:与NHEK细胞组相比,LncRNA NEAT1和STAT3在HaCaT细胞组中高表达,而miR-485-5p在HaCaT细胞中低表达;miR-485-5p与LncRNA NEAT1共定位于HaCaT细胞质,且miR-485-5p与LncRNA NEAT1 3′-UTR、STAT3 3′-UTR之间存在互补结合序列;共转染转野生型psiCHECK-LncRNA NEAT1-3′UTR-WT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-WT重组质粒时,miR-485-5pmimic组相对萤光素酶活性明显低于miR-NC组。而共转染突变型psiCHECK-LncRNANEAT1-3′UTR-MUT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-MUT重组载体质粒时,miR-485-5p mimic组和miR-NC组萤光素酶活性无明显差异;沉默LncRNA NEAT1或STAT3均可抑制HaCaT细胞增殖及促进其凋亡;下调miR-485-5p可促进HaCaT细胞增殖及抑制其凋亡,而上调miR-485-5p则与之相反;下调miR-485-5p可减弱沉默LncRNANEAT1对HaCaT细胞功能的影响。结论:LncRNANEAT1可通过充当竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)吸附miR-485-5p增强STAT3表达来促进HaCaT细胞增殖并抑制其凋亡。

长链非编码核糖核酸肺腺癌转移相关转录本1和核旁斑组装转录本1在低氧预适应小鼠海马神经保护中的作用研究

目的探索长链非编码核糖核酸(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)和核旁斑组装转录本1(NEAT1)在低氧预适应(HPC)小鼠海马细胞中的表达及其与神经保护的关系。方法(1)将36只雄性美国癌症研究所(ICR)小鼠按照随机数字表法完全随机分为3组:对照组、低氧组和低氧预处理组,每组12只。对照组小鼠不进行低氧暴露,低氧组小鼠低氧暴露1次,低氧预处理组小鼠低氧暴露4次。低氧处理结束后立即将所有小鼠脱颈椎处死并分离海马组织分组保存。(2)将HT22细胞培养于含10%胎牛血清和100 U/ml青霉素-链霉素的培养基,细胞汇合率大于90%时将其转移至24孔板中培养后分2批进行处理。通过转染试剂将6 pmol的乱序小干扰核糖核酸(siRNA)、MALAT1 siRNA(siMALAT1)、siNEAT1、siMALAT1+siNEAT1分别一一对应转染至第一批HT22细胞的阴性对照组、siMALAT1组、siNEAT1组、siMALAT1+siNEAT1组细胞中,空白组不做任何处理;然后在正常条件下(5%CO_(2)和95%空气)培养48 h;第二批HT22细胞中,利用转染试剂分别将6 pmol的乱序siRNA、乱序siRNA、siMALAT1、siMALAT1、siNEAT1、siNEAT1分别一一对应转染至阴性对照组、阴性对照+氧糖剥夺-再灌注(OGD/R)组、siMALAT1组、siMALAT1+OGD/R组、siNEAT1组、siNEAT1+OGD/R组的HT22细胞中,转染后48 h将阴性对照组、siMALAT1组、siNEAT1组HT22细胞在正常条件下(5%CO_(2)和95%空气)继续培养,将阴性对照+OGD/R组、siMALAT1+OGD/R组、siNEAT1+OGD/R组细胞进行OGD/R处理,即低氧条件下(1%O_(2)+5%CO_(2)+94%N_(2))暴露8 h,之后再进行正常条件下培养16 h。(3)通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及蛋白免疫印迹法测定各组小鼠海马组织中MALAT1、NEAT1、N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基2B(NR2B)信使核糖核酸(mRNA)、NR2B蛋白水平的相对表达量和各组HT22细胞转染处理后NR2B mRNA、NR2B蛋白水平的相对表达量及各组HT22细胞转染和OGD/R后的血影蛋白分解产物、活化半胱氨酸蛋白酶蛋白3的相对表达量,并计算各组HT22细胞存活率。结果(1)3组小鼠海马中MALAT1(F=43.92)、NEAT1(F=506.40)、NR2B mRNA(F=50.64)及NR2B蛋白(F=41.24)的相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05)。与对照组相比,低氧组MALAT1[(1.68±0.06)比(1.00±0.08)]、NR2B mRNA[(1.26±0.06)比(1.00±0.01)]及NR2B蛋白[(1.47±0.05)比(1.00±0.01)]的相对表达量均增加(均P<0.05),而NEAT1[(1.02±0.10)比(1.00±0.03)]的相对表达量组间差异无统计学意义(P>0.05),低氧预处理组中MALAT1[(1.12±0.13)比(1.00±0.08)]和NEAT1[(2.88±0.10)比(1.00±0.03)]的相对表达量增加;与低氧组比较,低氧预处理组NR2B mRNA[(0.54±0.07)比(1.26±0.06)]及NR2B蛋白[(1.17±0.07)比(1.47±0.05)]的相对表达量均降低(均P<0.05)。(2)5组HT22细胞转染后NR2B mRNA(F=36.92)及NR2B蛋白(F=56.98)的相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05)。与阴性对照组相比,siMALAT1组[NR2B mRNA:(2.04±0.08)比(0.94±0.04),NR2B蛋白:(1.72±0.13)比(0.93±0.02)]、siNEAT1组[NR2B mRNA:(2.15±0.13)比(0.94±0.04),NR2B蛋白:(1.87±0.46)比(0.93±0.02)]、siMALAT1+siNEAT1组[NR2B mRNA:(2.09±0.16)比(0.94±0.04),NR2B蛋白:(2.07±0.30)比(0.93±0.02)]的NR2B mRNA及NR2B蛋白的相对表达量均增加(均P<0.05)。(3)6组HT22细胞转染及OGD/R处理后血影蛋白分解产物(145/150 kDa蛋白;F=12.43)、血影蛋白分解产物(120 kDa蛋白;F=7.15)、活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白(F=6.61)的相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05)。与siMALAT1组比较,siMALAT1+OGD/R组的145/150 kDa[(1.42±0.48)比(0.85±0.34)]、120 kDa[(1.33±0.37)比(0.52±0.19)]的血影蛋白分解产物及活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白[(2.43±0.35)比(1.15±0.24)]相对表达量均增加(均P<0.05);与阴性对照+OGD/R组比较,siMALAT1+OGD/R组的145/150 kDa[(1.42±0.48)比(1.23±0.17)]、120 kDa[(1.33±0.37)比(0.80±0.21)]的血影蛋白分解产物及活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白[(2.43±0.35)比(1.46±0.39)]相对表达量均增加(均P<0.05);与siNEAT1组比较,siNEAT1+OGD/R组的145/150 kDa[(1.28±0.44)比(0.87±0.32)]、120 kDa[(0.81±0.36)比(0.63±0.16)]的血影蛋白分解产物及活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白[(1.51±0.45)比(1.01±0.27)]相对表达量均增加(均P<0.05)。(4)6组HT22细胞存活率差异有统计学意义(F=5.54,P<0.05)。与阴性对照组比较,siMALAT1组、siNEAT1组、siMALAT1+OGD/R组及siNEAT1+OGD/R组HT22细胞存活率均降低[(0.65±0.40)、(0.76±0.35)、(0.24±0.17)、(0.23±0.16)比(0.84±0.04),均P<0.05];与siMALAT1组比较,siMALAT1+OGD/R组细胞存活率降低[(0.24±0.17)比(0.65±0.40),P<0.05];与siNEAT1组比较,siNEAT1+OGD/R组细胞存活率降低[(0.23±0.16)比(0.76±0.35),P<0.05]。结论HPC增加了小鼠海马组织中MALAT1和NEAT1的表达,MALAT1和NEAT1可能通过影响NR2B的表达参与小鼠缺血缺氧后的神经保护作用。

LncRNA NEAT1/miR-101-3p/RAC1在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及机制研究

目的 探讨lncRNA NEAT1在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用机制。方法 采用RT-qPCR法检测宫颈腺癌细胞系HeLa、宫颈鳞癌细胞系SiHa和人子宫内膜上皮细胞系EM中lncRNA NEAT1的表达;干扰或过表达lncRNA NEAT1后,通过CCK-8和Transwell观察宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化,扫描电镜观察细胞侵袭性伪足的变化;采用双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA NEAT1与miR-101-3p的靶向关系;通过免疫荧光、Transwell、CCK-8等方法检测lncRNA NEAT1/miR-101-3p/RAC1对SiHa和HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 相比于EM细胞(0.99±0.04),宫颈癌SiHa(7.59±0.10,P<0.01)和HeLa(1.50±0.07,P<0.05)细胞中lncRNA NEAT1的表达明显升高。相比于sh-NC组,sh-NEAT1组(加入NEAT1敲低质粒)细胞增殖、迁移、侵袭及侵袭性伪足数量明显减少(P<0.05);相比于OE-NC组,OE-NEAT1组(加入NEAT1过表达质粒)SiHa、HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及侵袭性伪足数量显著增加(P<0.05)。miR-101-3p与突变的NEAT1共转染后,相比于对照组(3.10±0.16)荧光素酶活性无显著变化(2.99±0.11,P>0.05),而与野生型NEAT1共转染后,相比于对照组(2.97±0.13)荧光素酶活性显著降低(1.15±0.05,P<0.01),提示lncRNA NEAT1与miR-101-3p靶向结合。RT-qPCR结果显示,与sh-NC组(SiHa,0.97±0.09;HeLa,1.07±0.06)相比,sh-NEAT1组miR-101-3p mRNA表达明显升高(SiHa,3.86±0.39;HeLa,2.62±0.51,P<0.01);与OE-NC组(SiHa,0.98±0.20;HeLa,1.05±0.18)相比,OE-NEAT1组miR-101-3p mRNA表达显著降低(SiHa,0.35±0.05;HeLa,0.14±0.03,P<0.05),提示lncRNA NEAT1与miR-101-3p的表达呈负相关。CCK-8、Transwell结果显示,siRNA-RAC1、miR-101-3p mimic使SiHa和HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭受到抑制(P<0.05),上调lncRNA NEAT1可部分逆转以上现象,使细胞增殖、迁移和侵袭数目增加(P<0.05)。结论 宫颈癌细胞中lncRNA NEAT1的表达显著升高,它作为miR-101-3p的竞争性内源RNA(ceRNA),通过竞争性结合miR-101-3p并部分控制其对RAC1的调控,进而调节宫颈癌细胞侵袭性伪足的形成并诱导细胞增殖、迁移和侵袭。

LncRNA NEAT1通过调节miR-124-3p/KLF4轴改善过敏性鼻炎

目的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)已被证明在过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)发展中发挥重要作用。本研究旨在探究lncRNA NEAT1(nuclear enriched abundant transcript 1)在AR中的功能和分子机制。方法构建了卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)诱导的AR小鼠模型和IL-13诱导的人鼻上皮细胞(human nasal epithelial cells,HNECs)模型。结果NEAT1在AR小鼠体内高表达。敲低NEAT1显著抑制了AR小鼠和HNECs中炎性因子的产生,并减少了细胞凋亡。进一步的研究表明,NEAT1的下调能够逆转miR-124-3p的上调和KLF4的下调,进而调节了IL-13诱导的HNECs中的炎性反应和细胞凋亡。此外,miR-124-3p过表达显著提高了HNECs细胞活力,抑制了细胞凋亡、炎症因子的产生和KLF4的表达。而NEAT1过表达显著逆转了这一现象。结论本研究发现NEAT1在AR中的高表达,并揭示了其通过miR-124-3p/KLF4信号通路调控炎性反应和细胞凋亡的机制。这些发现不仅为深入理解AR的分子机制提供了新的视角,还为进一步研究和治疗AR提供了潜在的靶点。

lncRNA NEAT1促进miR-451a表达抑制AngⅡ诱导的高血压致血管重构

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)-核富集丰度转录物1(NEAT1)调控微小RNA-451a(miR-451a)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压致血管重构的影响。方法:将C57BL/6小鼠随机分作control组、model组、shRNA组、sh-NEAT1组、sh-NEAT1+inhibitor NC组、sh-NEAT1+miR-451a inhibitor组,15只/组;除control组外其余小鼠皮下埋入AngⅡ微量泵建立高血压模型,并于2周后尾静脉分别注射相应剂量shRNA、sh-NEAT1、inhibitor NC及miR-451a inhibitor慢病毒液,control组及model组注射等剂量PBS。检测小鼠血压;qRT-PCR检测胸主动脉组织lncRNA NEAT1及miR-451a表达;HE染色及Masson染色分别观察胸主动脉组织病理学及胶原纤维分布情况;免疫组化法观察胸主动脉组织Ki-67的表达;Western blot检测胸主动脉组织I型胶原蛋白(Col1)、Ⅲ型胶原蛋白(Col3)表达;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA NEAT1与miR-451a的靶向关系。结果:与control组比,model组小鼠收缩压(SBP)、胸主动脉组织lncRNA NEAT1表达、中膜厚度(MT)/主动脉管腔内径(LD)、胶原沉积、Ki-67阳性表达、Col1、Col3蛋白表达显著增加,miR-451a表达显著减少(P<0.05);与shRNA组相比,sh-NEAT1组SBP、lncRNA NEAT1表达、MT/LD、胶原沉积、Ki-67阳性表达、Col1、Col3蛋白表达显著降低,miR-451a表达显著增加(P<0.05);与sh-NEAT1+inhibitor NC组相比,sh-NEAT1+miR-451a inhibitor组SBP、MT/LD、胶原沉积、Ki-67阳性表达、Col1、Col3蛋白表达显著增加(P<0.05),miR-451a表达显著减少(P<0.05),lncRNA NEAT1表达无明显变化(P<0.05);lncRNA NEAT1与miR-451a间存在靶向关系。结论:lncRNA NEAT1沉默对AngⅡ所致高血压大鼠血管重构的改善可能与其促进miR-451a表达有关。

lncRNA NEAT1调节miR-424-5p/ELK4轴对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤、Lp-PLA2和CRP水平的影响

目的:探讨长链非编码RNA核旁斑组装转录本1(lncRNA NEAT1)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤中的分子机制和功能。方法:收集健康人和动脉粥样硬化(AS)病人血液标本并通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清中lncRNA NEAT1、微小RNA-424-5p(miR-424-5p)和ETS域蛋白4(ELK4)mRNA表达水平。体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞中lncRNA NEAT1、miR-424-5p和ELK4表达情况;细胞计数试剂盒(CCK-8)法和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)法检测HUVEC细胞增殖活力和凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定HUVEC中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β含量、脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)和C反应蛋白(CRP)水平;采用双荧光素酶报告基因测定lncRNA NEAT1、miR-424-5p和ELK4之间的靶向相互作用。进行动物实验以评估lncRNA NEAT1在体内AS进展中的作用。结果:lncRNA NEAT1在AS病人血清和ox-LDL诱导的HUVEC中显著上调(P<0.05)。lncRNA NEAT1的沉默可削弱ox-LDL引发的细胞毒性,降低Lp-PLA2和CRP水平,并减少ApoE^(-/-)小鼠的脂质异常分泌(P<0.05)。miR-424-5p是lncRNA NEAT1在调节ox-LDL诱导的HUVEC损伤中的功能介质,ELK4是miR-424-5p的直接靶标(P<0.05)。miR-424-5p的抑制或ELK4的过表达逆转了lncRNA NEAT1沉默对ox-LDL诱导的HUVEC细胞损伤的影响(P<0.05)。结论:沉默lncRNA NEAT1可通过调控miR-424-5p/ELK4轴保护HUVEC免受ox-LDL触发的细胞毒性,降低Lp-PLA2和CRP水平。

灯盏花素调节lncRNA NEAT1/miR-9-5p/SLC26A2轴抑制哮喘模型小鼠气道炎症

目的探究灯盏花素通过长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1/microRNA(miR)-9-5p/SLC26A2轴对哮喘模型小鼠气道炎症的抑制作用及分子机制。方法15只6~8周雄性C57BL/6J小鼠,按照随机数字表法分为三组,即对照组、哮喘模型组和灯盏花素组。灯盏花素组小鼠在哮喘模型构建完成后每天1次灌胃10 mg/kg灯盏花素,连续7 d;对照组及哮喘模型组则使用等体积0.9%生理盐水进行灌胃处理。采用苏木素-伊红(HE)染色和过碘酸雪夫(PAS)染色对小鼠肺组织进行组织病理学观察。采用Wright-Giemsa对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行染色及细胞学检测。酶联免疫吸附实验检测BALF及血清中炎性因子的水平。荧光原位杂交检测NEAT1的表达。实时荧光定量PCR检测lncRNA-NEAT1、miR-9-5p和SLC26A2 mRNA的表达。蛋白免疫印迹检测SLC26A2的蛋白表达。结果与对照组比较,哮喘模型组小鼠的BALF炎性细胞总数[(68.32±7.25)×10^(4)/mL比(17.71±3.14)×10^(4)/mL,P<0.01]、中性粒细胞数[(5.50±0.58)×10^(4)/mL比(0.72±0.15)×10^(4)/mL,P<0.01]、巨噬细胞数[(13.02±1.04)×10^(4)/mL比(2.70±0.61)×10^(4)/mL,P<0.01]、淋巴细胞数[(23.07±2.90)×10^(4)/mL比(4.13±0.53)×10^(4)/mL,P<0.01]、嗜酸性粒细胞数[(22.13±2.21)×10^(4)/mL比(1.63±0.22)×10^(4)/mL,P<0.01]增加;肺组织炎性细胞浸润水平增加[(2.49±0.25)分比(0.26±0.04)分,P<0.01],PAS评分升高[(2.24±0.16)分比(0.26±0.08)分,P<0.01];血清IgE[(3.52±0.32)IU/mL比(1.02±0.08)IU/mL,P<0.01]及BALF中白细胞介素-5(IL-5)[(154.48±9.27)pg/mL比(54.56±3.35)pg/mL,P<0.01]、白细胞介素-13(IL-13)[(96.86±6.45)pg/mL比(79.18±3.34)pg/mL,P<0.05]、白细胞介素-17(IL-17)[(185.24±7.24)pg/mL比(73.32±4.15)pg/mL,P<0.01]表达上升,干扰素-γ(INF-γ)表达下降[(48.46±3.81)pg/mL比(84.76±2.91)pg/mL,P<0.01]。与哮喘模型组比较,灯盏花素组小鼠BALF炎性细胞总数[(52.10±7.59)×10^(4)/mL比(68.32±7.25)×10^(4)/mL,P<0.05]、中性粒细胞数[(4.21±0.54)×10^(4)/mL比(5.50±0.58)×10^(4)/mL,P<0.05]、巨噬细胞数[(3.61±0.28)×10^(4)/mL比(13.02±1.04)×10^(4)/mL,P<0.01]、淋巴细胞数[(9.52±1.23)×10^(4)/mL比(23.07±2.90)×10^(4)/mL,P<0.01]、嗜酸性粒细胞数[(8.87±1.33)×10^(4)/mL比(22.13±2.21)×10^(4)/mL,P<0.01]降低;肺组织炎性细胞浸润水平[(1.46±0.15)分比(2.49±0.25)分,P<0.01]及PAS评分降低[(0.58±0.07)分比(2.24±0.16)分,P<0.01];血清IgE[(1.83±0.14)IU/mL比(3.52±0.32)IU/mL,P<0.01]及BALF中IL-5[(78.25±4.44)pg/mL比(154.48±9.27)pg/mL,P<0.01]、IL-13[(59.34±5.32)pg/mL比(96.86±6.45)pg/mL,P<0.01]、IL-17[(125.60±5.88)pg/mL比(185.24±7.24)pg/mL,P<0.01]表达下降,INF-γ[(65.48±4.49)pg/mL比(48.46±3.81)pg/mL,P<0.05]表达上升。与对照组比较,哮喘模型组小鼠肺组织中NEAT1[(3.96±0.32)比(1.00±0.15),P<0.01]、SLC26A2相对表达上升[(3.91±0.32)比(1.00±0.08),P<0.01],miR-9-5p相对表达量显著下降[(0.48±0.07)比(1.00±0.09),P<0.01]。与哮喘模型组比较,灯盏花素组小鼠NEAT1[(1.82±0.28)比(3.96±0.32),P<0.01]、SLC26A2相对表达降低[(2.00±0.23)比(3.91±0.32),P<0.01],miR-9-5p相对表达增加[(0.67±0.06)比(0.48±0.07),P<0.05]。结论灯盏花素可能通过调节lncRNA NEAT1/miR-9-5p/SLC26A2轴抑制哮喘小鼠的气道炎症。

LncRNA NEAT1在恶性肿瘤中的研究进展

近年来,越来越多的研究显示长链非编码RNA(lncRNA)与恶性肿瘤的发生、发展过程密切相关。因此,lncRNA成为目前肿瘤研究的新热点。lncRNA NEAT1在许多恶性肿瘤中呈异常表达,发挥着重要的作用。本文就lncRNA NEAT1在各种恶性肿瘤中的表达、作用以及调控机制作一综述。

长链非编码RNA NEAT1对非小细胞肺癌增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨长链非编码RNA NEAT1在NSCLC增殖和凋亡中的作用及其信号传导机制。方法:应用qRT-PCR法测定NSCLC组织和细胞中NEAT1和miR-101-3p的表达。Transwell实验检测细胞的转移和浸润,MTT法检测细胞凋亡。通过免疫印迹实验检测NSCLC细胞中SOX9、β-catenin和c-Myc的表达情况。结果:NEAT1在NSCLC组织和细胞中较正常对照均呈高表达,并与NSCLC的临床分期密切相关。NEAT1沉默抑制了NSCLC细胞的增殖、迁移和浸润。miR-101-3p是NEAT1的抑制靶标,NEAT1沉默抑制NSCLC进展需要miR-101-3p的活化,SOX9通过激活Wnt/β-catenin信号通路在NSCLC中具有致癌作用。结论:NEAT1在NSCLC组织和细胞中的表达增高,NEAT1/miR-101-3p/SOX9/Wnt/β-catenin轴可能是一种潜在的新的肺癌治疗方向。

lncRNA NEAT1/miR-103a/STAMBPL1轴对胃癌细胞增殖和侵袭的调控作用

目的探讨长链非编码RNA NEAT1(lncRNA NEAT1)在胃癌组织和细胞中的表达,以及其通过调控miR-103a/STAMBPL1轴对胃癌细胞增殖和侵袭的影响。方法采用qRT-PCR法检测胃癌组织及癌旁组织中lncRNA NEAT1的表达水平;采用qRT-PCR法检测人正常胃上皮GES-1细胞及胃癌细胞SGC-7901和BGC-823中lncRNA NEAT1的表达水平。胃癌细胞SGC-7901和BGC-823中分别转染si-NEAT1(si-NEAT1组)和si-NC(si-NC组)。采用CCK-8法和Transwell检测细胞增殖和侵袭;采用qRT-PCR和Western blot法分别测定胃癌细胞中miR-103a mRNA和STAMBPL1蛋白的表达变化。结果与癌旁正常组织或正常细胞GES-1相比,lncRNA NEAT1在胃癌组织及胃癌SGC-7901和BGC-823细胞中表达水平明显增加(P<0.05)。与si-NC组相比,si-NEAT1组中胃癌SGC-7901和BGC-823细胞增殖和侵袭能力明显减少(P<0.05),miR-103a mRNA水平增高以及STAMBPL1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论lncRNA NEAT1在胃癌中可能通过调控miR-103a/STAMBPL1信号途径改变胃癌细胞增殖及侵袭的能力。

下调lncRNA Neat1表达通过减少NF-κB P65的细胞核转位保护大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:探究下调长链非编码RNA核内富集转录物1(lncRNA Neat1)表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:将48只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、shRNA NC组和sh-Neat1组,采用左前降支结扎法构建心肌缺血再灌注损伤大鼠模型,采用ELISA检测血清心损伤标志物肌红蛋白(Mb)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,检测大鼠心率(HR)和左心室射血分数(LVEF),生化试剂盒检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,HE染色和MASSON染色观察大鼠心肌病理变化,Western blot检测心肌组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β(TGF-β)、纤维连接蛋白(FN)、核因子NF-κB P65的表达,荧光定量PCR检测心肌组织中lncRNA Neat1、IL-6和TNF-αmRNA的表达,免疫荧光检测NF-κB P65细胞核转位情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠lncRNA Neat1、Mb、cTnⅠ、CK-MB、MDA、IL-6 mRNA、TNF-αmRNA、HR、α-SMA、TGF-β、FN、p-NF-κB P65/NF-κB P65水平升高,LVEF和SOD水平降低(P<0.05);与模型组比较,sh-Neat1组lncRNA Neat1、Mb、cTnI、CK-MB、MDA、IL-6 mRNA、TNF-αmRNA、HR、α-SMA、TGF-β、FN、p-NF-κB P65/NF-κB P65水平降低,LVEF和SOD水平升高(P<0.05)。结论:lncRNA Neat1在心肌缺血再灌注损伤中高表达,干扰lncRNA Neat1后可保护大鼠心肌缺血再灌注损伤,改善心肌纤维化,可能与减少NF-κB P65细胞核转位有关。

长链非编码RNA NEAT1在骨质疏松症中的表达水平及对成骨细胞和破骨细胞分化的影响研究

目的研究长链非编码RNA NEAT1(lncRNA-NEAT1)在骨质疏松症中的表达水平及对破骨细胞与成骨细胞分化的影响。方法通过鼠尾悬吊法制备小鼠骨质疏松症模型,设置实验组与对照组。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测lncRNA-NEAT1在小鼠成骨细胞系MC3T3-E1向成骨分化过程中的表达量,测定lncRNA-NEAT1在小鼠巨噬细胞系RAW264.7向破骨分化过程中的表达量;取敲低lncRNA-NEAT1慢病毒感染的前成骨细胞系MC3T3-E1,通过碱性磷酸酶染色观察成骨细胞的活性情况;取敲低lncRNA-NEAT1慢病毒感染的巨噬细胞系RAW264.7,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色明确破骨细胞的活性情况。结果实验组小鼠股骨组织中lncRNA-NEAT1的相对表达量明显高于对照组(P<0.01),巨噬细胞系RAW264.7破骨分化过程中的lncRNA-NEAT1表达量较对照组显著上调(P<0.01),前成骨细胞系MC3T3-E1向成骨分化过程中的lncRNA-NEAT1表达量较对照组显著下调(P<0.01)。经碱性磷酸酶染色可知,通过敲低NEAT1的表达可明显提高成骨细胞活性;经抗酒石酸酸性磷酸酶染色可知,通过敲低NEAT1的表达可明显抑制破骨细胞的活性。结论lncRNA-NEAT1在成骨分化过程中的表达显著下调,而在破骨分化过程中的表达显著上调,提示干扰lncRNA-NEAT1的表达可通过诱导破骨细胞分化和阻滞成骨细胞分化,从而而导致骨质疏松症的发生。

LncRNA NEAT1通过miR-339-5p/ITGA3轴调控舌鳞状细胞癌增殖、迁移及侵袭的分子机制

目的:探讨LncRNA NEAT1通过miR-339-5p/ITGA3轴调控舌鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制.方法:采用qRT-PCR和Western免疫印迹检测25例人舌鳞状细胞癌组织、与其对应的癌旁组织、人正常口腔黏膜细胞株HOK和人舌鳞状细胞癌细胞株Tscca、CAL27、SCC15、HN13中NEAT1、miR-339-5p、ITGA3 mRNA和ITGA3蛋白的表达.分别构建抑制NEAT1和过表达miR-339-5p的CAL27细胞株.利用MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,Western免疫印迹检测CyclinD1和MMP-9蛋白的表达.采用双荧光素酶报告基因验证NEAT1、miR-339-5p和ITGA3的靶向关系,通过Western免疫印迹和qRT-PCR检测其调控关系.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:与人正常口腔黏膜细胞株HOK相比,人舌鳞状细胞癌细胞株中NEAT1和ITGA3表达上调,miR-339-5p表达下调.抑制NEAT1或过表达miR-339-5p均可显著抑制CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭,显著抑制CyclinD1和MMP-9蛋白的表达.双荧光素酶报告基因证实NEAT1靶向作用miR-339-5p并下调其表达水平,miR-339-5p可靶向负调控ITGA3的表达.抑制NEAT1可逆转抑制miR-339-5p表达对CAL27细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论:LncRNA NEAT1通过下调miR-339-5p/ITGA3轴,进而促进舌鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭.

卵巢癌患者组织中lncRNA NEAT1和CTBP2表达水平及其与临床病理特征的关系

目的探讨卵巢癌患者组织中长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1和羧基末端结合蛋白2(CTBP2)表达水平及其与临床病理特征的关系。方法采集2013年1月至2016年1月收治的60例卵巢癌患者的癌组织及其配对的癌旁组织。采用实时荧光定量PCR方法检测lncRNA NEAT1和CTBP2在癌组织及癌旁组织的表达,并分析二者表达与卵巢癌患者临床病理特征及预后的关系。结果 lncRNA NEAT1和CTBP2在卵巢癌组织中的表达量明显高于癌旁组织(P<0.05);lncRNA NEAT1和CTBP2表达与年龄、组织学类型、肿瘤直径均无相关性(P>0.05);与FIGO分期、肿瘤分级、淋巴结转移密切相关(P<0.01);随着癌组织中lncRNA NEAT1表达水平升高,CTBP2表达呈明显升高趋势,lncRNA NEAT1与CTBP2表达呈显著正相关(r=0.562,P=0.001);lncRNA NEAT1高表达组预后2年存活率为55.50%,lncRNA NEAT1低表达组预后2年存活率为70.00%,lncRNA NEAT1高表达组存活率显著低于低表达组存活率,两组比较差异有统计学意义(χ~2=5.00,P=0.025);CTBP2高表达组预后2年存活率为51.70%,CTBP2低表达组预后2年存活率为68.30%,CTBP2高表达组存活率显著低于低表达组存活率,两组比较差异有统计学意义(χ~2=6.106,P=0.013)。结论 lncRNA NEAT1和CTBP2在卵巢癌患者组织中高表达,两者具有相关性,且与FIGO分期、肿瘤分级、淋巴结转移以及预后密切相关,可作为卵巢癌的早期诊断标记与治疗靶点。