Nelfinavir损害鼠胰岛素瘤INS-1细胞内IRS-2信号传导

目的 :探讨 HIV- 1蛋白酶抑制剂 nelfinavir对胰岛 β细胞内胰岛素信号传导蛋白磷酸化的影响。方法 :体外观察鼠胰岛素瘤 INS- 1细胞经 nelfinavir治疗 4 8h后 ,用 10 0 nmol/ L胰岛素刺激 2 min,细胞裂解产物中的胰岛素信号传导蛋白磷酸化采用免疫沉淀和 Western印迹方法测定。用台盼蓝染色细胞计数和 MTT衰减试验 ,评估nelfinavir对 INS- 1细胞活力的影响。结果 :nelfinavir降低胰岛素刺激的胰岛素受体底物 IRS- 2和 Akt- Thr3 0 8磷酸化 ,并呈剂量依赖关系。nelfinavir浓度为 10 μmol/ L时 ,分别降低 IRS- 2和 Akt- Thr3 0 8磷酸化达 5 2 %和 5 5 % ,在这个浓度下 nelfinavir没有细胞毒性作用。结论 :nelfinavir治疗可以损害胰岛 β细胞内 IRS-

HIV-1蛋白酶抑制剂Nelfinavir降低大鼠胰岛素瘤INS-1细胞胰岛素释放

HIV 1蛋白酶抑制剂Nelfinavir处理 48h ,显著降低大鼠INS 1细胞基础胰岛素分泌和葡萄糖刺激的胰岛素释放 ,Nelfinavir对后者的抑制作用更强 ,提示Nelfinavir长期治疗可能导致胰岛 β细胞功能损害。

奈非那韦的新法合成及其光谱表征

以"一锅煮"方法合成了奈非那韦中间体-(3S,4aS,8aS)-2-((2R,3R)-3-氨基-2-羟基-4-(苯硫)丁基)-N-tert-丁基-十氢异喹啉-3-羧酰胺(Ⅶ),并以活泼酯新方法连接中间体Ⅶ得到了奈非那韦(Ⅸ)。在不同浓度和温度氢氧化钾的催化下,环合氯醇化合物(2R,3S)-4-氯-3-羟基-1-苯基硫丁基-2-氨基甲酸苄酯(Ⅲ),然后与(3S,4aS,8aS)-N-叔丁基-十氢异喹啉-3-羧酰胺(Ⅴ)反应,再脱去苄氧羰基保护基得中间体Ⅶ,收率89.0%。以2-甲基-3-乙酰氧基苯甲酸琥珀酰亚胺酯(Ⅱ)连接Ⅶ,再以浓氨水脱去乙酰基得奈非那韦(Ⅸ),收率86.0%。讨论了奈非那韦的红外光谱特征吸收峰所对应的官能团的振动形式,以MALDI-TOFMS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱)得到了其分子离子及准分子离子峰,利用一维(1HNMR,13CNMR)和DEPT(不失真极化转移增强谱)及HMBC(1H检测的异核多键相关谱)、HSQC(1H检测的异核单量子相干谱)、DQF-COSY(双量子过滤相干谱)等二维核磁共振波谱手段对奈非那韦的分子结构进行了表征,并对其核磁谱线进行了归属分析。这对奈非那韦的结构鉴定及质量控制均有重要的参考价值。

抗艾滋病细胞株的交叉耐性及抑制细胞凋亡

目的 体外研究奈非那韦耐性细胞株对其它抗艾滋病药及抗癌药的反应及与细胞凋亡的关系。方法 通过将成人T细胞白血病细胞株Jurkat培养于含有奈非那韦浓度不断增加直至 14 μm的培养液中培养 50d以获得耐奈非那韦的亚系细胞株JurkatrN。药敏试验用四唑嗡染色法 (类似XTT法 )并用流式细胞仪检测抗凋亡蛋白Bcl -2在母本和耐性Jurkat细胞中的表达。结果 发现JurkatrN细胞对d4T及新近报道的抗艾滋病药K -3 7的交叉耐性与母本细胞相比提高到 5倍左右。对抗肿瘤药CDDP ,VCR ,DOX和VP -16的交叉耐性也提高到 2 5倍以上。并且耐性细胞中心Bcl -2蛋白的荧光密度增加。结论 在用HIV -1蛋白酶抑制物奈非那韦作用后 。

奈非那韦耐性细胞株对其它抗艾滋病药、抗肿瘤药的交叉耐性及多药耐药表型分析

目的 在体外进行细胞对抗艾滋病药产生耐性的相关因子研究。方法 通过将成人T细胞白血病细胞系MT-4培养于含有奈非那韦浓度不断增加直至14μmol/L的培养液中培养30天以获得耐奈非那韦的亚系细胞株MT-4rN。用细胞增殖分析系统四唑嗡染色法测定存活细胞数并用流式细胞仪及荧光化合物罗丹明-123和P-糖蛋白阻遏物维拉帕米分析多药耐药蛋白P-gp的存在。结果 发现MT-4rN细胞对新近报道的抗艾滋病药K-37产生出比母本细胞多20倍的耐性。对其它抗肿瘤药的交叉耐性也有不同程度的提高。并且,耐性细胞的荧光密度在维拉帕米存在下有些不同,意味着P-gp在MT-4rN中的表达略有增多。结论 在用HIV-1蛋白酶抑制物奈非那韦作用后,MT-4细胞对其它抗艾滋病药及抗肿瘤药产生了交叉耐性并且多药耐药蛋白P-gp的表达有所增加。

生物化学和分子生物学

人核受体Nurrl基因的克隆和表达及产物纯化；小鼠3T3-L1前脂肪细胞系的特异性标记；肿瘤-睾丸-脑抗原家族新成员PNMA5的克隆和表达谱分析；人yonWillebrand因子A1和A3功能结构域嵌合体的表达及生物学功能；p75NTR-Fc融合蛋白在毕赤酵母中的表达、鉴定和活性分析；微丝相关新基因hHBrk1的克隆及功能鉴定；人SDCT2基因的两种不同转录产物选择性转录机理分析；醛缩酶A可与人蛋白激酶CK2α’亚基发生特异相互作用；人Collectrin同源基因的分离克隆及其在人肾集合管和远曲小管的特异表达；两种人粒酶B嵌合基因的表达及对肿瘤的杀伤作用；切割Fas mRNA核酶的构建及其体内外切割活性的鉴定；甲氧基聚乙二醇（mPEG）修饰遮蔽人ABO血型抗原；白血病抑制因子受体细胞内区对HL-60细胞表达CD14和CD15的影响；Rho GTPases对肿瘤血管生成相关分子的作用；促凋亡蛋白Bid诱导肝细胞凋亡的机制；中心体异常在咖啡因增聋顾铂杀伤入肝癌细胞系中的作用；四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠的胰岛素原基因治疗；HBx-siRNA快速筛选体系的建立和应用；Nelfinavir损害鼠胰岛素瘤INS-1细胞内IRS-2信号传导。

艾滋病药可抑制非典病毒增殖

日本东京医科齿科大学和东京大学研究人员最近在实验中发现,用于治疗艾滋病的抗病毒药NELFINAVIR可以抑制非典病毒增殖。 据《朝日新闻》电子版日前报道,实验中,研究人员先让猴子感染上非典病毒,然后施用各种浓度的NELFINAVIR,48小时后的检测结果表明,虽然这种药物对细胞有一些不良影响,但即使少到浓度只有三百分之一,也可以100％控制非典病毒增殖。研究人员认为。

超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中4种蛋白酶抑制剂

建立了鸡肉中4种蛋白酶抑制剂(沙奎那韦、利托那韦、奈非那韦、茚地那韦)的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法。样品经30%(v/v)乙腈水溶液(含1%(v/v)三氯乙酸)振荡提取、混合型阳离子交换MCX柱净化,采用Luna~? C8色谱柱(150 mm×2 mm, 3μm),以0.2%(v/v)甲酸水溶液(含5 mmol/L乙酸铵)和乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾电离(ESI^+)源和多反应监测(MRM)模式检测。结果表明,在0.1~20.0μg/L范围内,4种目标化合物呈良好的线性关系,相关系数(r^2)大于0.99,方法的定量限(S/N=10)为0.20~0.90μg/kg;鸡肉组织中4种目标化合物在1.0、2.0和10.0μg/kg 3个水平下的平均加标回收率为69.0%~106.0%,日内和日间相对标准偏差(RSD)为2.2%~13.8%(n=6)和3.6%~14.6%(n=3)。该法简单、高效、灵敏、准确,可用于鸡肉中沙奎那韦、利托那韦、奈非那韦、茚地那韦残留量的测定。

磁珠法解析奈非那韦抗多发性骨髓瘤作用蛋白

目的采用磁珠法捕获与奈非那韦抗多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)相关作用蛋白,并对其进行分析,为探明奈非那韦抗MM作用机制提供理论依据。方法将环氧基磁珠和奈非那韦偶联,然后与MM.1S细胞蛋白裂解产物共孵育,结合奈非那韦作用蛋白,通过缓冲溶液解离奈非那韦偶联蛋白,进行SDS-PAGE(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis)电泳和银染分析,对胶上蛋白进行高分辨质谱鉴定,再通过GO(Gene Ontology)数据库和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库预测蛋白质参与的生物学意义。结果奈非那韦捕获蛋白中可信度较高的蛋白:L-乳酸脱氢酶、核糖体蛋白S3和电压依赖性阴离子选择性通道蛋白1。上述蛋白与肿瘤细胞增殖关系密切。生物信息学分析发现奈非那韦可能和其他潜在生物学功能相关,例如:碳水化合物代谢、脂代谢以及嘌呤代谢等。结论采用一种简单、高效的捕获靶蛋白新方法,为挖掘奈非那韦抗MM作用靶点奠定了理论基础,为药物新靶标筛选和潜在生理功能提供新的思路和方法。