丹参酮ⅡA对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤后神经细胞凋亡的保护作用及机制研究

新生儿缺血缺氧性脑损伤（hypox iaischemic brain dam-age，HIBD）是引发新生儿死亡及神经系统功能障碍的主要原因之一，发病率高，严重影响患儿的生存质量。目前国内外治疗HIBD的主要方法为亚低温治疗胆，但该法在降温和复温幅度、方式等方面差异较大，患儿在治疗后死亡率仍高达50％，且伴严重神经系统受损、心肺功能下降及肝肾损害，因此，亚低温疗法存在较大的争议和挑战。目前其他单一措施也不能达到完全保护，治疗HIBD的研究就显得十分必要。

姜黄素对高氧致新生大鼠肺纤维化的保护作用及机制探讨

目的:支气管肺发育不良(BPD)从肺发育停滞和肺间质纤维化为主要病理改变,姜黄素(Cu)具有抗氧化、抗纤维化等生物活性。观察Cu对高氧致新生大鼠肺纤维化胶原沉积、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:出生12 h内的足月新生大鼠160只,随机分成4组(每组40只):空气组、空气+Cu组、高氧组和高氧+Cu组。高氧组、高氧+Cu组置于氧箱中,氧浓度维持在90%左右,空气组、空气+Cu组吸人空气。空气+Cu组、高氧+Cu组新生鼠每日腹腔注射溶于亚麻油的Cu[200mg/(kg×d)],空气组、高氧组每日腹腔注射等量亚麻油。各组分别于3、7、14、21 d随机处死5只,取肺组织进行苏木精-伊红和M asson染色、应用免疫组化技术测定TGF-β1表达水平。结果:高氧组支气管黏膜下、血管壁及周围、肺泡壁、肺间质均有胶原大量沉积;高氧+Cu组胶原沉积明显轻于高氧组;空气组、空气+Cu组胶原沉积不明显。免疫组化发现高氧组TGF-β1表达最强,高氧+Cu组较弱,空气组、空气+Cu组微弱表达。结论:Cu可抑制高氧致新生大鼠的肺纤维化,其作用机制可能是通过抑制TGF-β1的表达来实现。

新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改进

探讨更为简单的SD大鼠心肌细胞原代培养的方法,使分离的心肌细胞达到理想的存活率和纯度,为临床应用建立心肌细胞模型.取出生24 h内SD大鼠的左心室,剪碎、消化、分离和纯化,进行培养,0.1 g/L胰酶消化,可以分离到形态完整、贴壁生长的心肌细胞.进一步通过离心、差速贴壁和化学试剂抑制非心肌细胞生长,纯化得到95%以上的心肌细胞.成功建立了心肌细胞体外培养模型,获得了高纯度的心肌细胞.

不同时机应用促红细胞生成素对感染所致新生大鼠脑损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素（EPO）对感染致新生大鼠脑损伤保护作用的最佳应用时机及其相关机制。方法2日龄（P2）新生sD大鼠按随机数字表法分为4组，分别为对照组（A组）、脂多糖（LPS）感染组（B组）、早期EPO干预组（c组）、晚期EPO干预组（D组）。A、B、C组P2新生大鼠连续5d（132-P6）分别腹腔注射相应药物：等容积9g／L盐水＋等容积EPO空白对照品、0．6mg／kgLPS＋等容积EPO空白对照品、0，6rag／kgLPS＋5000IU／kgEPO；D组P2新生大鼠连续5d（1）2-P6）腹腔注射0．6rag／kgLPS，P7开始连续腹腔注射5000IU／kgEPO5d（即P7-P11）。A、B2组分别于P2（腹腔注射第1次药物后6h）、P7、P12，各随机数字表法抽取10只新生大鼠取脑，以矢状缝为标志分为左右半脑，右侧脑应用酶联免疫吸附法柃测脑组织EPO受体（EPOR）水平，左侧脑应用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测EPORmRNA水平；A、B、C3组于P7随机数字表法选取10只新生大鼠灌注取脑，余续养，4组均于P12灌注取脑，应用免疫组织化学方法检测髓鞘碱性蛋白（MBP）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及EPOR的表达，采用HE染色观察各组大鼠脑组织的病理改变。结果1.HE染色示B组海马锥体细胞界限不清、层次紊乱，细胞数目减少，脑室扩张，周围白质有囊性软化区域形成；EPO干预组较B组病理改变减轻，早期干预组更明显。2．B组较A组EPOR蛋白及mRNA表达增加，随日龄的增加EPOR与EPORmRNA表达有下降趋势。3．B组MBP表达（107．46±3．65）较A组（146．78±3．13）明显减少（P＜0．05），EPO干预组较B组表达增加，且C组（126．25±4．42）较D组（117．35±3．42）增加更明屁（P＜0．05）。4．B组GFAP表达（P7、P12分别为141．46±11．92、149．48±13．59）较A组（P7、P12分别为120．63-4-13．32、119．74±12．48）增加（P＜0．05），P12时EPO干预组表达较B组降低，C组（134．59±12．19）与D组（137．27±13．87）差异无统计学意义（P＞0．05）。结论EPO对出生后感染所致的脑白质损伤有保护作用，且早期应用优于晚期，其机制可能与感染可使新生大鼠脑组织EPOR表达增加及EPOR表达随日龄增加而降低有关。

双歧杆菌对新生鼠坏死性小肠结肠炎肠道黏膜Toll样受体表达的影响

目的:研究双歧杆菌对新生鼠坏死性小肠结肠炎模型中肠道组织Toll样受体(TLR)2、4、9表达的影响。方法:出生24 h内Sprague-Dewley新生鼠随机分为对照组、实验组、治疗组,每组12只。对照组由母鼠喂养,实验组采取人工喂养+缺氧冷刺激进行造模,治疗组采用人工喂养+缺氧冷刺激并添加喂养双歧杆菌处理(2次/日,1×108cfu/次)。每日定时称体重做记录,在实验第3天处死新生鼠。用HE染色病理切片观察新生鼠肠道病理变化,RT-PCR方法检测肠道黏膜TLR2、TLR4、TLR9的mRNA表达量。结果:3组小鼠体重比较均具有统计学意义,对照组体重增长高于实验组及治疗组,治疗组体重增长高于实验组(P<0.05);实验组病理评分高于对照组及治疗组,治疗组高于对照组(P<0.05);TLR4 mRNA相对表达量实验组高于对照组及治疗组(P<0.05),治疗组的TLR2 mRNA、TLR9 mRNA相对表达量均高于实验组,TLR4 mRNA相对表达量低于实验组,这两组的3种受体mRNA相对表达量比较均具有统计学意义(P<0.05)。结论:双歧杆菌可减轻新生鼠坏死性小肠结肠炎肠道组织病理变化,作用机制可能与双歧杆菌能降低肠道黏膜的TLR4表达及增加TLR2、TLR9表达有关。