Effect of adenoviral vector-mediated rat antisense AT1B gene transfer on neointima proliferation after rat carotid injury

Objective: Angiotensin Ⅱ is a growth-promoting factor for vascular smooth muscle cells in culture andin the intact animal. The biological effects of angiotensin Ⅱ are manifested only by binding to specific receptors oncell membranes. In the study, we observed that the effect of rat antisense AT1B gene transfer mediated by adenoviral vector-on neointimal proliferation following rat carotid injury. Methods: Antisense AT1B gene was transductedinto the carotid by adenoviral vector after carotid bal1oon injury and the restenosis model was established in SD rat.We measured neointima/media area ratio in local artery at day 21 after gene transfer. Results: Rat antisense AT1Bgene was successfully transducted into local carotid after the carotid balloon injury. Neointima/media area ratiowas significantly reduced (47 %, P<0. 01) at day 21 after gene transfer compared with the control group. Conclusion: The results suggest it is possible that antisense AT1B gene transfer as a potential therapeutic approach prevent neointimal hyperplasia.

重组人白介素-10抑制晚期糖基化终产物诱导的大鼠血管平滑肌细胞和血管新生内膜的增殖(英文)

研究观察了重组人白介素 10 (rhIL 10 )对晚期糖基化终产物 (AGE)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖及对SD大鼠血管损伤后新生内膜增殖的影响。体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态 ;应用流式细胞术测定细胞周期 ;利用 p44 / 42磷酸化抗MAPK抗体的蛋白免疫印迹法测定 p44 / 42MAPK磷酸化蛋白表达。利用大鼠颈动脉血管损伤模型 ,观察rhIL 10对新生内膜增殖的影响。结果显示 :( 1)AGE处理组与对照组相比 ,AGE对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用 (P <0 0 5 )。rhIL 10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响 (P >0 0 5 )。在AGE刺激下 ,低至 10 0ng/ml的rhIL 10可抑制血管平滑肌细胞的生长 (P <0 0 5 )。( 2 )流式细胞术测定的结果显示 ,rhIL 10可以使AGE作用下的VSMC大部分处于G0 /G1期 ,与对照组相比有明显差异 (P <0 0 1)。 ( 3 )AGE对 p44 / p42MAPK磷酸化蛋白表达有显著的增强作用 ,此作用可被rhIL 10抑制 (P <0 0 0 1)。( 4)大鼠颈动脉损伤后 ,rhIL 10治疗组的动脉血管新生内膜 /中层面积比低于对照组约45 % (P <0 0 1)。表明抗炎细胞因子rhIL

冠状动脉支架内再狭窄发生机制的研究进展

经皮冠状动脉介入术是目前治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的主要有效的治疗手段,血管支架尤其是药物洗脱支架极大程度上改善了冠心病患者的疗效和预后。与支架相关的病理主要表现为支架内再狭窄引起的进行性心绞痛和支架内血栓导致的急性心肌梗死。支架内再狭窄是由生物、机械、技术及与患者自身相关的复杂相互作用介导形成的病理性新生内膜增生,有关其发病机制的研究正不断深入。本文通过血管内皮损伤、血管平滑肌细胞增殖迁移、血管外基质重构、炎症反应以及新生动脉内膜粥样硬化等方面对其进行综述,深入探讨其形成的影响因素及临床意义。

大鼠自体内瘘模型制备及内瘘狭窄的实验研究

目的吻合口内膜增生可导致自体动静脉内瘘失功,本研究拟在设计大鼠模型研究其进程及机制。方法SPF 级wistar 大鼠,行右颈总动脉-颈内静脉端端吻合,术后14,28 天处死,取近吻合口静脉、动脉组织,行 HE 染色,弹力、胶原纤维的双重组合染色,PCNA、TGF- β 1、NF- κ B 免疫组化。结果内瘘吻合术后 14 天近吻合口静脉端见明显的内膜增生,呈息肉样增生,其中平滑肌细胞增生活跃,大量胶原纤维沉积,28 天管腔明显狭窄。特殊染色见术后 14、28 天近吻合口静脉内弹力层不连续。PCNA、NF- κB在近吻合口静脉壁中膜和外膜高表达,在14 天达到一个高峰,在28 天观察期内仍持续高表达。TGF- β1 在外膜基质高表达。结论大鼠右侧颈总动脉-颈内静脉端端吻合可模拟内瘘局部血流动力学的影响,短期内可见明显内膜增生等病理表现,是一种合适的自体动静脉内瘘动物模型,显示TGF- β1,NF- κB参与了内瘘内膜增生病理过程。

黄芩苷抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖和新生内膜肥厚

目的探讨黄芩苷对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和内皮损伤诱导的新生内膜形成的影响及其机制。方法采用细胞培养、MTT分析、Western blot及免疫组织化学等方法研究黄芩苷的作用机制。结果黄芩苷可呈浓度依赖性地抑制血小板源生长因子(PDGF)诱导的VSMC增殖,降低增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,阻断PDGF受体的激活和MEK/ERK信号通路的活化。整体实验显示,黄芩苷可预防球囊损伤诱导的血管新生内膜肥厚,明显降低内膜/中膜面积(I/M)比值(P<0.01);PCNA、细胞间黏附分子(ICAM-1)和血管黏附分子(VCAM-1)蛋白的表达也明显减少(P<0.01)。结论黄芩苷通过抑制VSMC增殖而阻止球囊损伤诱导的大鼠血管内膜增生。

阿托伐他汀对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的:探讨新型降脂药阿托伐他汀对自体移植静脉内膜增生的影响。方法:将Wistar大鼠颈外静脉移植于腹主动脉,建立大鼠自体静脉移植模型,实验分为3组:假手术组、移植对照组和移植实验组。自术后第1 d起,对移植实验组大鼠经胃管灌注给予阿托伐他汀(5 mg.kg-1.d-1)处理。干预4周后取移植静脉组织标本,制备4μm厚组织切片,行病理组织学观察分析移植静脉内膜增生情况,行免疫组化染色分析新生内膜细胞SMα-actin和PCNA的表达情况。结果:移植对照组和实验组移植静脉内皮下层SMα-actin染色阳性平滑肌细胞大量增生,导致静脉内膜显著增厚,血管管腔明显狭窄。新生内膜定量分析显示移植实验组移植静脉内膜增生受到明显抑制,其新生内膜面积及新生内膜/中膜面积比均显著低于对照组(P<0.01);并且实验组移植静脉新生内膜细胞PCNA标记指数显著低于对照组(P<0.01)。结论:阿托伐他汀通过抑制新生内膜平滑肌细胞的增殖能有效抑制自体移植静脉内膜增生的发生发展,在防治血管重建术后再狭窄方面显示出良好的应用前景。

256层螺旋CT血管造影在颅外脑动脉支架内再狭窄的诊断价值

目的探讨256层螺旋CT血管造影(CT angiography,CTA)在颅外脑动脉支架内再狭窄(ISR)的诊断价值。方法 16例颈内动脉、15例椎动脉及6例锁骨下动脉支架植入手术患者行256层CTA检查,重点评估支架内通畅情况,将再狭窄病变分为4型。结果 16例颈动脉支架中,11例可见ISR,包括ⅠB型病变6例,ⅠC型病变2例,Ⅱ型病变2例,Ⅳ型病变1例;15例椎动脉支架中,10例可见ISR,包括ⅠA型、ⅠB型、ⅠC型病变各1例,Ⅱ病变5例,Ⅲ型病变和Ⅳ型病变各1例;6例锁骨下动脉支架中,5例可见ISR,包括ⅠA型和ⅠC型病变各1例,Ⅱ型病变3例;病变在随访中缓慢进展。结论 256层CTA可以对颅外脑动脉支架术后ISR作出准确诊断并帮助分析其原因,是随访的首选影像学检查方法之一。

Am80通过促进KLF4与维甲酸受体α相互作用抑制血管内膜增生

目的:通过大鼠颈总动脉球囊损伤手术,探讨维甲酸受体α(RARα)激动剂Am80是否通过上调Krüppel样因子4(KLF4)与RARα相互作用而抑制血管新生内膜增生。方法:用球囊损伤大鼠颈总动脉,腹腔注射Am80 14 d后,HE染色观察血管新生内膜增生的情况;通过免疫组化方法检测KLF4和血管壁中cyclin D1的表达;用Western blotting方法检测血管壁中KLF4和RARα的表达,用免疫共沉淀法检测KLF4和RARα的相互作用。结果:与球囊损伤模型组比较,Am80腹腔注射组中,内膜与中膜厚度比率明显降低,KLF4和RARα表达水平升高;而且Am80可以促进损伤血管中KLF4和RARα的相互作用。结论:Am80促进KLF4与RARα的相互作用,从而抑制血管新生内膜的增生。

高同型半胱氨酸血症对大鼠颈动脉损伤后新内膜增生的影响

目的:研究饮食诱导高同型半胱氨酸血症对大鼠颈动脉球囊损伤后新内膜增生的影响。方法:将12周龄健康雄性SD大鼠30只,随机分为对照组(C)10只,给普通饲料;低蛋氨酸饮食组(LM)10只,给予1.2%蛋氨酸饮食;高蛋氨酸组(HM)10只,给2%蛋氨酸饮食。喂养4周后,采用球囊导管损伤左颈总动脉内皮的方法建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,以右侧颈总动脉为对照(不行球囊损伤)。模型成功后继续喂养2周,心脏采血后处死动物;取左右颈总动脉,采用光镜、电镜定性观察和计算机图像分析定量方法来研究高同型半胱氨酸血症对大鼠颈动脉内皮损伤后新内膜增殖的影响。结果:低及高蛋氨酸组血浆同型半胱氨酸浓度(24.55±2.21μmol/L、55.52±4.78μmol/L)明显高于对照组(5.45±1.21μmol/L)(P<0.01),与对照组相比,低蛋氨酸组、高蛋氨酸组的新内膜增生明显,计算机图像定量分析表明血管损伤后14天,低和高蛋氨酸组内膜增生面积和内∕中膜面积比率分别增加87%(P<0.01)、98%(P<0.01)和97%(P<0.01)、109%(P<0.01)与对照组相比,管腔面积在低、高蛋氨酸组比对照组分别减少45%、55%(P<0.05)。结论:饮食诱导的高同型半胱氨酸血症能使球囊损伤后颈动脉新内膜增生恶化,预示高同型半胱氨酸血症可能是血管成形术后再狭窄的一个独立危险因素。

支架置入后局部内膜增生以及血管紧张素IIAT1受体的演变

目的探讨冠脉内支架置入后局部内膜增生的情况和血管紧张素Ⅱ1型受体的演变。方法建立冠状动脉支架置入的微型猪动物模型。分别于支架置入后3、7、28、90和180d截取支架段血管连同临近的近端正常血管段,通过病理组织学分析和PCR技术检测支架局部内膜增生和血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA水平的演变情况。结果正常血管段表达AT1R-mRNA在各个时间段没有显著性差异。支架置入后3d局部血管壁AT1R-mRNA的表达明显增高,并在术后28d达到高峰。术后90dAT1R-mRNA的表达呈现下降的趋势,但仍显著高于正常血管段,且差异一直持续到术后180d。术后第3天支架段血管壁内膜加中膜面积与普通血管段相比没有显著差异。到术后7d支架血管段内膜加中膜面积已显著大于正常血管段,并随时间呈现持续的增生肥厚。在术后180d达到高峰。结论支架置入后局部血管壁AT1R-mRNA呈现持续的高表达状态,在局部内膜持续过度的增生中起重要的作用。

血管损伤对新生内膜增生的影响

目的:研究血管损伤对新生内膜增生及核转录因子κb(NF-κb)、组织因子(TF)、内皮素-1(ET-1)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)的影响。方法:对32只雄性新西兰大耳白兔进行穿刺股动脉,经导丝送入球囊,球囊扩张并拉伤腹主动脉建立血管损伤模型。损伤术后1 min经股动脉鞘管采血,4周后经心脏采血,处死兔子,分离损伤血管,进行固定、包埋,切片行苏木素伊红(HE)染色、碱性品红染色及NF-κb免疫组化染色后光镜下观察。切片经铅、铀染色后透射电镜下观察。使用计算机图像分析软件测量新生内膜厚度,分析确定血管壁损伤积分及NF-κb阳性细胞率,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TF、ET-1和MMP-3含量,利用SPSS统计软件对血管损伤积分与血清TF、ET-1、MMP-3含量及NF-κb阳性细胞率进行相关性分析。结果:血管损伤积分与新生内膜厚度之间的最优拟合曲线是"S"形的三次曲线。NF-κb主要在新生内膜中表达,血管损伤积分与NF-κb阳性细胞百分率呈正相关,Pearson相关系数为0.916(P<0.05)。血管损伤积分与术后1 min TF,术后1 min及4周ET-1,术后1 min及4周MMP-3含量均呈正相关,Pearson相关系数分别为0.925、0.957、0.947、0.914和0.940(P均<0.05)。结论:血管损伤可以通过激活NF-κb途径,促进ET-1和MMP-3表达,从而促使新生内膜不断增生,导致血管负性重构。TF是血管损伤后导致新生内膜增生的始动因子。内弹力膜是反映血管损伤的关键结构,是阻碍新生内膜增生的唯一屏障。

大鼠髂动脉球囊损伤模型的建立及血管组织学观察

目的建立一种高效可靠的大鼠髂动脉球囊损伤血管再狭窄模型,观察损伤血管的组织形态学变化。方法取42只雄性SD大鼠,用2F球囊导管自腹主动脉切口插入,推拉3次造成左侧髂动脉损伤并分别于术后即刻、3、7、14、21、28和56 d,取大鼠左侧髂动脉及右侧正常髂动脉行苏木精-伊红(HE)染色观察损伤后不同时间血管组织形态学变化,测量并计算内膜面积与中膜面积的比值(N/M),评价内膜增生情况。结果 42只大鼠1只死于术后出血,发生并发症3只,建模成功率90%(38/42)。球囊损伤可以使大鼠髂动脉内膜剥脱,平滑肌细胞增殖、迁移、新生内膜增生,导致管腔狭窄。损伤后3 d开始有新生内膜形成,7 d时内膜面积与N/M值与对照组差异有统计学意义(P<0.05),此后内膜面积逐渐增加,28 d达到最大,内膜面积及N/M值14、21、28、56 d与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),7、14、21、28 d组间差别有统计学意义(P<0.05),而28 d与56 d间差异无统计学意义(P>0.05)。结论球囊导管建立大鼠髂动脉损伤模型高效可靠,可以满足血管损伤后再狭窄研究的需要。

脱氢表雄酮抑制血管内膜增生的体内研究

目的:观察脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)对颈动脉结扎诱导的内膜增生和局部血管炎症的抑制作用。方法:采用颈动脉结扎法制备内膜增生模型;30只18~20周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、结扎组和DHEA治疗组[给予DHEA100mg/(kg·d)],每组各10只;对照组小鼠颈动脉不完全结扎,后两组小鼠颈动脉完全结扎。用苏木素-伊红(HE)染色观察内膜增生形态学改变,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹试验检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Krüppel样因子5(KLF5)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的信使RNA(mRNA)和蛋白表达水平。结果:HE染色结果显示,与对照组相比,结扎组颈动脉内膜面积减小,内膜/中膜面积(I/M)比值增高;与结扎组相比,DHEA治疗组颈动脉内膜面积减小,I/M比值降低;以上组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。qRT-PCR和蛋白免疫印迹实验结果显示,与对照组相比,结扎组PCNA、KLF5、TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白表达均显著上调;而与结扎组相比,DHEA治疗组上述基因的mRNA和蛋白水平均明显降低;上述组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:DHEA能抑制颈动脉内膜增生和局部血管炎症,该作用一定程度上可能是通过抑制KLF5的表达来实现的。

舒拉明对兔髂动脉血管成形术后内膜增殖的影响

目的 :观察舒拉明对兔髂动脉血管成形后的内膜增殖的影响。方法 :新西兰大耳白兔高脂饲料喂养 3mo后 ,均行右侧髂动脉球囊成形 ,然后随机分为 2组 ,对照组 (A组 ,n =8) ;治疗组 (B组 ,n =8)。A组每日予生理盐水 2mL ,iv ,B组每日接受舒拉明 15mg·kg-1,iv,共 7d。 2wk后处死兔。取血管成形后的髂动脉行病理学、免疫组化检查。结果 :病理学观察示A组髂动脉内膜显著增生 ,B组髂动脉内膜增生明显受抑制 ;免疫组化检查结果示 :A组的内膜、中膜平滑肌细胞增殖指数 (PI)为(7 83± 0 71)和 (3 4 4± 1 0 4 ) ,而B组动物PI仅为 (1 75± 0 6 8)和 (1 33± 0 91) ,2组间具有显著差异 (P <0 0 5 )。结论

反义人IGF-Ⅰ基因转移预防血管损伤后新生内膜增殖的实验研究

目的：观察人反义IGF－Ⅰ基因转移对抑制血管平滑肌细胞增殖的效果。方法：将反义IGF-Ⅰ基因转导至大鼠球囊损伤的颈动脉再狭窄模型中，21天后观察其对新生内膜形成的影响。结果：与对照组相比，损伤血管新生内膜／中层面积比降低了41％（P＜0．001）。结论：反义人IGF-Ⅰ基因治疗可能对血管成形术后再狭窄有一定的预防作用。

小鼠颈动脉损伤新生内膜增生与局部转录因子Id1的关系

目的研究转录因子Id1在小鼠颈动脉损伤后血管壁的动态表达及在损伤血管新生内膜增生中的作用。方法采用昆明小鼠颈动脉球囊损伤动物模型,随机均分为四组:正常对照组、血管损伤后7天、14天及28天组。HE染色评价血管内膜增生情况。逆转录聚合酶链反应、Western blotting及免疫组织化学染色等方法检测血管壁Id1的表达。结果正常对照组小鼠颈动脉内膜/中膜面积比值很小,损伤7天组颈动脉内膜/中膜面积比值显著高于正常对照组(P<0.05),损伤14天组和28天组颈动脉内膜/中膜面积比值明显高于7天组(P<0.05)。正常对照组小鼠颈动脉血管壁Id1 mRNA和蛋白表达很低,损伤后7天血管壁Id1 mRNA和蛋白表达水平明显增加,损伤14天Id1 mRNA和蛋白表达显著高于7天组(P<0.05),但损伤28天组Id1 mRNA和蛋白表达较14天组有所降低(P<0.05)。免疫组织化学显示正常血管壁Id1表达很弱;随血管损伤时间延长Id1表达逐渐增强,14天达到高峰,28天表达出现减弱。结论颈动脉损伤后局部Id1表达动态改变伴随血管损伤新生内膜增生的变化,提示转录因子Id1可能参与血管损伤后新生内膜增生的调控过程。

辛伐他汀未能改善5/6肾切除大鼠自体动静脉内瘘血管内膜增生

目的:观察辛伐他汀对5/6肾切除大鼠自体移植静脉内膜增生的影响,探讨其防治透析内瘘内膜增生是否有潜在的价值。方法:36只大鼠随机分为3组:假手术组、CRF对照组和CRF他汀组各12只。各组在成模后分别于第7天、28天各处死6只,抽血行肾功能、血脂检测,并取其内瘘内膜组织行组织病理学检查。比较相同时间点各组肾功能,血脂及内膜增生程度。结果:(1)肾功能和血脂:与同一时点假手术组相比,CRF对照组、CRF他汀组造模后第7、28天后的肌酐和尿素氮均显著增高(P<0.05),各组血脂无显著差异。(2)新生内膜面积、厚度测定:术后第7天,已见各组内瘘血管内膜受损、薄层新生内膜形成;第28天病理改变更明显。与假手术组相比,CRF对照组、CRF他汀组两组内膜增生更为明显(P<0.05);CRF对照和CRF他汀两组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。(3)免疫组化α-SMA、PCNA:假手术组与CRF对照组、假手术组与CRF他汀组比较差异均有统计学意义(P<0.05);CRF对照组与CRF他汀组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:辛伐他汀未能改善慢性肾功能不全自体动静脉内瘘大鼠的血管内膜增生。

大鼠颈部自体静脉移植模型两种吻合方法的比较

目的比较间断吻合和连续吻合法建立静脉桥狭窄动物模型的优劣。方法 SD大鼠20只,分成两组(间断吻合组和连续吻合组),取颈外静脉与颈总动脉行端端吻合。术后4周取下静脉桥,观察桥管通畅性,分析新生内膜与中膜的厚度、面积比。结果连续组与间断组相比手术时间更短,出血更少,但桥管通畅率低,两组内膜增生程度没有显著差异。结论连续吻合用时短,出血少,对术者要求更高,较易形成吻合口狭窄。两者造模效果一样。

腺病毒载体介导的大鼠反义血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ_B基因转移对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增殖的影响

目的探讨腺病毒载体介导的大鼠反义血管紧张素Ⅱ受体ⅠＢ（ＡＴ１Ｂ）ＲＮＡ转移对大鼠颈动脉损伤后新生内膜的影响。方法利用重组腺病毒载体将大鼠反义ＡＴ１ＢＲＮＡ转移至大鼠颈动脉球囊损伤模型中，２１天后观察其对新生内膜形成的影响。结果用腺病毒载体转导大鼠反义ＡＴ１ＢＲＮＡ至大鼠球囊损伤的颈动脉，２１天后，与对照组相比，损伤血管新生内膜／中层面积比降低了４７％（Ｐ＜０．００１）。

氟伐他汀对高脂血症模型兔血脂的影响及其与内膜增生的关系

为探讨氟伐他汀对血脂的影响及其与内膜增厚的关系 ,将髂动脉内膜剥脱术后高脂血症模型兔随机分为氟伐他汀组和非用药组 (各组n =2 8) ,并设正常对照组 (n =7)。分别于喂高脂饮食前及动脉剥脱术后 1、2、4、8周 ,观察氟伐他汀组和非用药组动物血清TC、TG及LDL C的变化 ;并观察动脉剥脱术后 1、2、4、8周氟伐他汀组和非用药组兔髂动脉切片的新生内膜、中膜厚度及内膜 /中膜比值 (I/M)。结果 :氟伐他汀组血清TC、TG、LDL C浓度明显低于非用药组 (P <0 .0 5) ;氟伐他汀组的新生内膜厚度和I/M明显低于非用药组 (P <0 .0 1 ) ;动脉内膜厚度与TC、TG、LDL C呈明显的直线相关 (偏相关系数分别为 0 .91 1、0 .892、0 .94 2 ,P <0 .0 1 )。提示 :氟伐他汀可调节血脂 。